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    不同產(chǎn)地烏藥質(zhì)量研究

    2015-06-06 12:13:04朱發(fā)偉孫乙銘王彬輝王海英沈曉霞王志安俞旭平
    浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志 2015年12期
    關(guān)鍵詞:烏藥波爾去甲

    朱發(fā)偉孫乙銘王彬輝王海英沈曉霞王志安俞旭平

    ·藥學園地·

    不同產(chǎn)地烏藥質(zhì)量研究

    朱發(fā)偉1孫乙銘2王彬輝1王海英1沈曉霞2王志安2俞旭平2

    烏藥;有效成分;產(chǎn)地;含量

    烏藥為樟科植物烏藥Lindera aggregate(Sims)Kosterm.的干燥塊根,具有行氣止痛,溫腎散寒。用于寒凝氣滯,胸腹脹痛,氣逆喘急,膀胱虛冷,遺尿,尿頻,疝氣疼痛,經(jīng)寒腹痛[1]。烏藥在國內(nèi)許多地區(qū)均有分布,其中以浙江天臺所產(chǎn)的品質(zhì)最佳,故稱為臺烏藥,被認為是烏藥的道地產(chǎn)區(qū)。藥理研究表明,烏藥具有廣泛的藥理活性,其主要有效成分為異喹啉類生物堿及呋喃倍半萜。本實驗采用高效液相測定不同產(chǎn)區(qū)烏藥醚內(nèi)酯、異烏藥內(nèi)酯及去甲異波爾定的含量,以探討不同產(chǎn)地烏藥藥效成分的差異,以評價不同產(chǎn)地烏藥質(zhì)量,并為浙產(chǎn)烏藥的開發(fā)利用提供科學依據(jù),也為烏藥的質(zhì)量評價奠定基礎(chǔ)。

    1 儀器與試劑

    1.1 儀 器[2]安捷倫Agilent1100高效液相色譜儀及Agilent化學工作站,DAD檢測器;伊利特公司Hypersil ODS2 Cl8分析柱(4.6mm×250mm×5μm);去離子水。

    1.2 試 藥[3]烏藥醚內(nèi)酯、異烏藥內(nèi)酯、去甲異波爾定標準品(批號分別為:12061303、12061302、12021704,四川成都曼思特生物科技有限公司);烏藥藥材采集于浙江、江西、湖南等地,經(jīng)浙江省中藥研究所藥材室鑒定為樟科植物烏藥 Lindera aggregate(Sims)Kosterm.的干燥塊根;乙腈、甲醇均為色譜純,其余試劑均為分析純,水為純凈水。

    2 方法

    2.1 烏藥醚內(nèi)酯與異烏藥醚內(nèi)酯含量測定

    2.1.1 色譜條件 色譜柱:伊利特公司Hypersil ODS2 C18分析柱(4.6mm×250mm,5μm);流動相:乙腈(A)-水(B);流速:1.0mL/min;檢測波長:235nm;柱溫:25℃;進樣量:10μL。采用梯度洗脫,分時流動相比例A為0~5min:35%(A);25~30min:55~75%(A);30~45min:75~100%(A)。理論板數(shù)按烏藥醚內(nèi)酯和異烏藥醚內(nèi)酯計算不低于3000。烏藥醚內(nèi)酯對照品、異烏藥醚內(nèi)酯對照品和烏藥樣品色譜圖見圖1。

    2.1.2 對照品溶液的制備 分別精密稱定烏藥醚內(nèi)酯和異烏藥醚內(nèi)酯標準樣品適量,用甲醇溶解并稀釋,配成每1mL含0.11mg的烏藥醚內(nèi)酯和異烏藥醚內(nèi)酯的標準品溶液。

    2.1.3 供試品溶液的制備 取本品粉末(過三號篩)約1.5g,精密稱定,置索氏回流提取器中,加入乙醚溶液70mL,加熱回流4h,提取液揮干,殘渣用甲醇分次溶解,轉(zhuǎn)移至10mL量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,濾過,取續(xù)濾液,即得。

    2.2 方法學考察

    2.2.1 線性關(guān)系的考察 精密吸取該對照品溶液2、4、6、8、10、12μL,按上述色譜條件測定峰面積,分別以峰面積為縱座標(Y),對照品進樣量為橫座標(X)。繪制標準曲線,并計算回歸方程,烏藥醚內(nèi)酯的回歸方程為:Y=122.87X+7.33,r=0.9999,線性范圍:0.11~1.32μg。異烏藥醚內(nèi)酯回歸方程為Y=84.969X+ 4.22,r=1.0,線性范圍:0.11~1.32g。

    圖1 HPLC圖譜(a烏藥醚內(nèi)酯對照品色譜圖;b異烏藥醚內(nèi)酯對照品色譜圖;c烏藥樣品的HPLC色譜圖,1峰為烏藥醚內(nèi)酯,2峰為異烏藥醚內(nèi)酯)

    2.2.2 精密度試驗 精密吸取含烏藥醚內(nèi)酯和異烏藥醚內(nèi)酯的標準品溶液,重復(fù)進樣5次,每次10μL,考察測定的精密度,烏藥醚內(nèi)酯面積相對標準偏差為0.97%,烏藥醚內(nèi)酯面積相對標準偏差為0.59%。2.2.3 穩(wěn)定性試驗 取同一標準品溶液,室溫下放置,分別在0、4、8、12、24h進樣10μL測定,烏藥醚內(nèi)酯峰面積RSD為0.58%,異烏藥醚內(nèi)酯峰面積相對標準偏差為0.73%,表明標準品溶液在室溫下比較穩(wěn)定。

    2.2.4 重復(fù)性試驗 取同一烏藥樣品6份,依“2.1.1.1 色譜條件”條件測定烏藥醚內(nèi)酯和異烏藥醚內(nèi)酯含量,樣品烏藥醚內(nèi)酯含量,相對標準偏差RSD為2.95%;異烏藥醚內(nèi)酯含量相對標準偏差RSD為3.35%,表明該方法的重復(fù)性較好。

    2.2.5 加樣回收率試驗 取已知含量的烏藥樣品,分別添加烏藥醚內(nèi)酯和異烏藥醚內(nèi)酯對照品后,同上述條件,進行測定,見表1~2。

    表1 烏藥醚內(nèi)酯加樣回收率

    表2 異烏藥醚內(nèi)酯加樣回收率

    2.3 去甲異波爾定的含量測定 取烏藥粉末0.5g,精密稱定,按照2010年版《中國藥典》一部[1]烏藥含量測定項下進行含量測定。去甲異波爾定對照品、烏藥樣品色譜圖見圖2。

    3 結(jié)果

    圖2 HPLC圖譜(a.去甲異波爾定對照品色譜圖;b.烏藥樣品的HPLC色譜圖,3峰為去甲異波爾定)

    天臺烏藥中烏藥醚內(nèi)酯、異烏藥醚內(nèi)脂、去甲異波爾定3種成分含量均較高,質(zhì)量最好,作為烏藥的道地產(chǎn)區(qū)具有一定的科學性。見表3,圖3。

    表3 不同產(chǎn)地烏藥樣品檢測結(jié)果(mg/g)

    圖3 不同產(chǎn)地烏藥三種有效成分含量比較圖

    4 結(jié) 語

    不同產(chǎn)地烏藥的烏藥醚內(nèi)酯、異烏藥醚內(nèi)脂、去甲異波爾定含量差異較大,說明市場上烏藥藥材內(nèi)在質(zhì)量參差不齊,因此應(yīng)盡快制定或完善烏藥飲片的質(zhì)量控制標準,同時還需對不同產(chǎn)地的栽培條件進行考察,建立烏藥的GAP基地,從源頭上保證烏藥的質(zhì)量。

    [1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].一部.北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:71-72.

    [2]徐建中,俞旭平,孫乙銘,等.元胡飲片初加工實驗研究[J].中藥材,2011,34(7):1040-1043.

    [3]康立,徐建中,俞旭平,等.鮮白術(shù)一體化加工與炮制工藝研究初探[J].浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志,2014,24(4):361-363.

    (收稿:2015-06-29 修回:2015-07-23)

    1臺州學院醫(yī)學院附屬市立醫(yī)院中藥房(臺州318000);2浙江省中藥研究所有限公司(杭州 310000)

    朱發(fā)偉,Tel:13626666266;E-mail:zhufawei88@126.com

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