半枝蓮乙醇提取物對(duì)順鉑抗肝癌的增效作用研究

孫敘秋 魯朔焱 張羽豐

（貴州省松桃縣人民醫(yī)院消化內(nèi)科 松桃554100）

半枝蓮乙醇提取物對(duì)順鉑抗肝癌的增效作用研究

孫敘秋 魯朔焱 張羽豐

（貴州省松桃縣人民醫(yī)院消化內(nèi)科 松桃554100）

目的：探討半枝蓮乙醇提取物對(duì)順鉑抗肝癌的增效作用。方法：采用MTS/PMS法檢測(cè)半枝蓮乙醇提取物與順鉑單獨(dú)及聯(lián)合用藥時(shí)對(duì)肝癌細(xì)胞增殖的影響，金正均法計(jì)算Q值判斷兩藥相互作用關(guān)系。結(jié)果：半枝蓮乙醇提取物與順鉑單獨(dú)用藥時(shí)可呈時(shí)間和濃度依賴性地抑制肝癌細(xì)胞增殖率；半枝蓮乙醇提取物與低劑量順鉑聯(lián)合應(yīng)用后對(duì)兩種肝癌細(xì)胞的抑制作用大于單獨(dú)用藥（P＜0.05），且可產(chǎn)生協(xié)同抗癌作用（Q＞1.15）。結(jié)論：半枝蓮乙醇提取物與低劑量的順鉑聯(lián)合應(yīng)用時(shí)可顯著增強(qiáng)順鉑對(duì)肝癌細(xì)胞增殖的抑制作用，產(chǎn)生協(xié)同抗肝癌作用。

肝癌；半枝蓮乙醇提取物；順鉑

肝癌是臨床常見、多發(fā)惡性腫瘤，發(fā)病初期隱匿性較強(qiáng)，且病程進(jìn)展快，病死率極高，嚴(yán)重威脅人類生命健康。目前臨床治療主要根據(jù)肝癌的不同階段進(jìn)行個(gè)體化綜合，主要包括手術(shù)、放化療等[1]。順鉑是臨床應(yīng)用較廣泛的抗腫瘤藥物，但由于其毒性，臨床治療效果并不十分理想。隨著現(xiàn)代中醫(yī)學(xué)對(duì)腫瘤研究的深入，中藥聯(lián)合化療藥物抗腫瘤的優(yōu)勢(shì)日益凸顯，不僅能夠提高化療藥物的療效，還可通過降低化療藥物的劑量減輕不良反應(yīng)。半枝蓮是臨床常用的抗腫瘤組方藥物，具有清熱解毒、散瘀止血、利尿消腫的作用[2]。本研究探討半枝蓮乙醇提取物對(duì)順鉑抗肝癌的增效作用?，F(xiàn)報(bào)告如下：

1 方法

1.1 試驗(yàn)方法 （1）HepG2和Bel7402細(xì)胞由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院國家藥物篩選中心購買。HepG2細(xì)胞采用含10%滅活小牛血清DMEM完全培養(yǎng)基，于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中傳代培養(yǎng)。Bel7402細(xì)胞采用含10%滅活小牛血清的RPMI1640完全培養(yǎng)基，于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中傳代培養(yǎng)，收集對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞待用。（2）采用MTS/PMS法檢測(cè)單獨(dú)及聯(lián)用藥對(duì)細(xì)胞增殖的影響，將對(duì)數(shù)生長期的HepG2和Bel7402細(xì)胞接種于96孔培養(yǎng)板，每孔濃度100 μL，約含3 000個(gè)細(xì)胞，分別加入陰性對(duì)照（正常細(xì)胞）、不同濃度的順鉑（10、5、2.5、1.25、0.5 μg/ml），半枝蓮乙醇提取物（100、75、50、25、5 μg/ml） 單藥作用 24 h、48 h 及聯(lián)合（0.5 μg/ml順鉑 +100、50、25 μg/ml的半枝蓮乙醇提取物）作用48 h。培養(yǎng)結(jié)束后，按20∶1比例將MTS和PMS混合加入至稀釋培養(yǎng)基。繼續(xù)培養(yǎng)3 h后用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀檢測(cè)各孔吸光度（OD）值，波長490 nm，抑制率 =（1－OD實(shí)驗(yàn)組/OD對(duì)照組）[3～4]。（3）采用金正均法計(jì)算可知兩種藥物相互作用時(shí)Q值，Q＞1.15為協(xié)同作用。

1.2 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)處理采用SPSS 14.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，計(jì)量資料以（±s）表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用%表示，采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 半枝蓮乙醇提取物與順鉑單獨(dú)用藥對(duì)肝癌細(xì)胞的影響 半枝蓮乙醇提取物在0～100 μg/ml濃度范圍內(nèi)呈濃度和時(shí)間依賴性地抑制HepG2、Bel7402細(xì)胞增殖；順鉑在0～10 μg/ml定的濃度范圍內(nèi)亦呈濃度范圍內(nèi)濃度和時(shí)間依賴性地抑制HepG2、Bel7402細(xì)胞增殖。見表1。

表1 半枝蓮乙醇提取物與順鉑單獨(dú)用藥對(duì)肝癌細(xì)胞的影響（±s）

表1 半枝蓮乙醇提取物與順鉑單獨(dú)用藥對(duì)肝癌細(xì)胞的影響（±s）

?

2.2 半枝蓮乙醇提取物與低劑量順鉑聯(lián)用對(duì)肝癌細(xì)胞增殖的影響 100、50、25 μg/ml濃度的半枝蓮乙醇提取物與低劑量順鉑聯(lián)合應(yīng)用后對(duì)兩種肝癌細(xì)胞的抑制作用大于單獨(dú)用藥，P＜0.05，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表2。

表2 半枝蓮乙醇提取物與低劑量順鉑聯(lián)用對(duì)肝癌細(xì)胞增殖的影響（%）

2.3 不同濃度半枝蓮乙醇提取物與低劑量順鉑相互作用分析 HepG2細(xì)胞在50 μg/ml半枝蓮乙醇提取物與低劑量順鉑（0.5 μg/ml）聯(lián)用時(shí)可產(chǎn)生協(xié)同抗腫瘤效果 （Q＞1.15）；Bel7402 細(xì)胞在 50、100 μg/ml半枝蓮乙醇提取物與低劑量順鉑（0.5 μg/ml）聯(lián)用時(shí)可產(chǎn)生協(xié)同抗腫瘤作用（Q＞1.15）。見表3。

表3 不同濃度半枝蓮乙醇提取物與低劑量順鉑相互作用分析（±s）

表3 不同濃度半枝蓮乙醇提取物與低劑量順鉑相互作用分析（±s）

?

3 討論

化學(xué)治療是目前腫瘤綜合治療的重要手段，但化療引起的不良反應(yīng)會(huì)對(duì)患者身心健康帶來嚴(yán)重影響，從而抵觸化療，甚至放棄生命。因此，選擇合適的化療藥物，制定完善的治療方案，最大程度減輕化療過程中的不良反應(yīng)是腫瘤患者治療的關(guān)鍵。順鉑屬于細(xì)胞周期的非特異性藥物，具有細(xì)胞毒性，可抑制癌細(xì)胞DNA復(fù)制，損傷其細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)，具有較強(qiáng)的廣譜抗癌作用，是目前臨床常用的抗腫瘤藥之一[5]。隨著但該藥具有細(xì)胞毒性，副作用較多。研究發(fā)現(xiàn)[6]，順鉑與中藥聯(lián)合應(yīng)用可緩解其副作用，效果顯著。因此，以中藥類聯(lián)合鉑類為主化療成為現(xiàn)階段抗癌的主要手段。

本研究結(jié)果顯示，半枝蓮乙醇提取物與順鉑單獨(dú)用藥時(shí)均可呈時(shí)間和濃度依賴性地抑制肝癌細(xì)胞增殖率；半枝蓮乙醇提取物與低劑量順鉑聯(lián)合應(yīng)用后對(duì)兩種肝癌細(xì)胞的抑制作用大于單獨(dú)用藥（P＜0.05），且可產(chǎn)生協(xié)同抗癌作用（Q＞1.15）。說明半枝蓮乙醇提取物與低劑量的順鉑聯(lián)合應(yīng)用時(shí)可顯著增強(qiáng)順鉑對(duì)肝癌細(xì)胞增殖的抑制作用，產(chǎn)生協(xié)同抗肝癌作用，具有較高的臨床應(yīng)用價(jià)值。

[1]張燕,王琪鴻,牛素生,等.片仔癀與阿霉素聯(lián)用對(duì)骨肉瘤耐藥細(xì)胞增殖和凋亡的影響[J].中華中醫(yī)藥雜志,2015,32(3):705-708

[2]譚建福,趙云,周軍.半枝蓮在治療腫瘤中的臨床應(yīng)用及研究進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)綜述,2013,19(24):4442-4444

[3]林敬明,劉煜,羅榮城.半枝蓮提取物抗人肝癌Hep-G2細(xì)胞增殖及其機(jī)制研究[J].南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2006,26(7):975-977

[4]牟衛(wèi)偉,許煥麗.半枝蓮乙醇提取物對(duì)順鉑抗肝癌的增效作用研究[J].中華中醫(yī)藥雜志,2017,32(1):306-309

[5]劉一,楊玉飛,白玉,等.鉑類抗癌藥物及其作用機(jī)理的分析技術(shù)進(jìn)展[J].化學(xué)通報(bào),2013,76(10):867-869

[6]代志軍,王西京,紀(jì)宗正,等.半枝蓮提取物對(duì)H22肝癌荷瘤小鼠化療的增效減毒作用[J].中西醫(yī)結(jié)合學(xué)報(bào),2008,6(7):720-724

R735.7

B

10.13638/j.issn.1671-4040.2017.10.102

2017-09-11）