病毒核酸與酶聯(lián)免疫檢測(cè)在獻(xiàn)血者中的應(yīng)用價(jià)值比較研究

張美萍 胡秀蘭 盧曉楠

病毒核酸與酶聯(lián)免疫檢測(cè)在獻(xiàn)血者中的應(yīng)用價(jià)值比較研究

張美萍 胡秀蘭 盧曉楠

目的 分析血液核酸檢測(cè)（NAT）與酶聯(lián)免疫法（EILSA）對(duì)血液病毒的篩查結(jié)果，提示血液NAT法對(duì)提高血液安全的意義。方法 2015年11月～2016年11月從本站無(wú)償獻(xiàn)血者中隨機(jī)選取19 464名為研究對(duì)象，集中采集血液樣本，首先采取EILSA法檢測(cè)血樣，篩查抗-HIV、抗-HCV與HBsAg，然后采取PCR熒光法對(duì)無(wú)償獻(xiàn)血者ELISA陰性標(biāo)本進(jìn)行HBV、HCV和HIV進(jìn)行核酸檢測(cè)，從結(jié)果判斷不同檢測(cè)方法在血液檢測(cè)中的效率，進(jìn)而分析提高血液安全的意義。結(jié)果 在HBV檢測(cè)中，NAT檢測(cè)陽(yáng)性率為16.0%，高于ELISA檢測(cè)陽(yáng)性率（11.0%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；在HIV檢測(cè)中，NAT檢測(cè)陽(yáng)性率為1.9%，與ELISA檢測(cè)陽(yáng)性率（1.7%）的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；在HCV檢測(cè)中，NAT檢測(cè)陽(yáng)性率為1.8%，高于ELISA檢測(cè)陽(yáng)性率（0.5%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論 采取先行EILSA法、后經(jīng)NAT法檢測(cè)的篩查方案，可有效避免漏檢或誤檢，靈敏度和準(zhǔn)確度有效提升，進(jìn)一步保證血液質(zhì)量和輸血安全，可在血液篩查中廣泛應(yīng)用。

血液病毒 核酸檢測(cè) 酶聯(lián)免疫

輸血是HIV、HCV與HBV傳播的主要途徑之一，進(jìn)行血液抗原和（或）抗體檢測(cè)成為醫(yī)學(xué)界共同關(guān)注的熱點(diǎn)問(wèn)題[1]。過(guò)去我國(guó)血液篩查主要采取EILSA法，有效控制輸血傳播病毒傳播。然而實(shí)際操作中，ELISA法會(huì)受到試劑特異性、窗口期、手工操作、儀器運(yùn)行程序、病毒變異以及環(huán)境溫度等多種因素影響[2]，出現(xiàn)漏檢或誤檢現(xiàn)象，導(dǎo)致HIV等經(jīng)輸血傳播。隨著病毒核酸檢測(cè)法（NAT）技術(shù)逐步完善，其檢驗(yàn)成效也越來(lái)越得到肯定[3]。本文通過(guò)對(duì)19 464名無(wú)償獻(xiàn)血者的血液樣本先后采用ELISA與NAT法檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)核酸檢測(cè)的靈敏度更高?，F(xiàn)報(bào)告如下。

材料與方法

1 材料 選擇2015年11月～2016年11月本站無(wú)償獻(xiàn)血者血液標(biāo)本19 464份，首先采取EILSA法檢測(cè)，然后對(duì)ELISA陰性標(biāo)本進(jìn)行NAT法檢測(cè)，從結(jié)果判斷和分析核酸檢測(cè)的意義。19 464份血液標(biāo)本均為體檢合格。采血后，將每個(gè)獻(xiàn)血者樣本分別進(jìn)行留樣保存，現(xiàn)場(chǎng)離心分離出血漿，采用5 ml普通抗凝管（上?？迫A公司生產(chǎn)）用于ELISA法檢測(cè)，5 ml核酸促凝膠管（美國(guó)BD公司生產(chǎn)）用于NAT法檢測(cè)，將樣本置于2℃～8℃冰箱中儲(chǔ)存。

2 檢測(cè)方法

2.1 酶聯(lián)免疫法：采用STAR加樣儀（煙臺(tái)澳斯邦生物工程有限公司）、FAME酶免檢測(cè)儀（煙臺(tái)澳斯邦生物工程有限公司）和Uranus AE 280酶免檢測(cè)儀（深圳市愛(ài)康生物科技有限公司）實(shí)現(xiàn)加樣檢測(cè)自動(dòng)化操作，將結(jié)果陰性標(biāo)本提交核酸實(shí)驗(yàn)室。

2.2 核酸檢測(cè)法：在LIS系統(tǒng)上首先進(jìn)行核酸標(biāo)本交接，挑出ELISA陽(yáng)性標(biāo)本，對(duì)所有ELISA陰性標(biāo)本，采用AmpliSTAR全自動(dòng)核酸提取純化儀和ABI7500熒光PCR擴(kuò)增儀組成8混樣核酸檢測(cè)系統(tǒng)，實(shí)現(xiàn)標(biāo)本采集、拆分、提取及結(jié)果分析全過(guò)程的自動(dòng)化檢驗(yàn)[4]。核酸提取程序：采用AmpliSTAR全自動(dòng)核酸提取純化儀進(jìn)行三級(jí)核酸提取程序，經(jīng)24孔板與96孔板使用核酸提取儀提取樣本核酸，使用配置的反應(yīng)液擴(kuò)增核酸[5]。核酸擴(kuò)增程序：采用ABI7500熒光PCR擴(kuò)增儀對(duì)樣本核酸進(jìn)行擴(kuò)增，仔細(xì)觀察并記錄檢驗(yàn)結(jié)果。挑選出呈陽(yáng)性的血液樣本進(jìn)行拆分試驗(yàn)。

3 觀察指標(biāo) 分別記錄ELISA與NAT兩種檢測(cè)法對(duì)血液樣本的陽(yáng)性檢出率。

4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS18.0軟件進(jìn)行分析與處理，計(jì)量資料用表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用 檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 HBV的NAT與ELISA法檢測(cè)結(jié)果比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 HBV核酸檢測(cè)與酶聯(lián)免疫檢測(cè)結(jié)果比較（n，%）

2 HIV的NAT與ELISA法檢測(cè)結(jié)果比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表2。

3 HCV的NAT與ELISA法檢測(cè)結(jié)果比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表3。

表2 比較HIV核酸檢測(cè)與酶聯(lián)免疫檢測(cè)結(jié)果（n，%）

表3 HCV核酸檢測(cè)與酶聯(lián)免疫檢測(cè)結(jié)果比較（n，%）

討 論

HIV、HBV與HCV可經(jīng)血液等途徑傳播，因此，加強(qiáng)對(duì)獻(xiàn)血者血液的篩查成為血站工作的重點(diǎn)。ELISA法不能充分地保證血液質(zhì)量，導(dǎo)致經(jīng)輸血傳播疾病的情況時(shí)有發(fā)生。隨著檢驗(yàn)技術(shù)不斷更新與完善，核酸檢測(cè)（NAT）法應(yīng)運(yùn)而生，該法雖發(fā)展較滯后，其檢驗(yàn)優(yōu)勢(shì)卻日漸突出，NAT法檢測(cè)靈敏度和特異性高、窗口期短。有資料統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，采用NAT法檢測(cè)血液樣本，未出現(xiàn)HCV與HIV的漏檢或誤檢[6]，說(shuō)明血站血液檢測(cè)工作應(yīng)向規(guī)范化、高效化發(fā)展，為提升血液檢測(cè)質(zhì)量作好技術(shù)準(zhǔn)備。NAT法對(duì)血液病毒具有較強(qiáng)的特異性與敏感性，檢驗(yàn)準(zhǔn)確性高，且實(shí)際操作中窗口期短，在血液篩查工作應(yīng)用越來(lái)越廣泛[7]。

本文通過(guò)比較HBV、HIV、HCV的檢測(cè)結(jié)果，發(fā)現(xiàn)先行EILSA檢測(cè)、后經(jīng)NAT檢測(cè)的篩查檢驗(yàn)方案值得在血液篩查工作中廣泛應(yīng)用。

但是也應(yīng)注意到，血液核酸檢測(cè)雖然提高了血液檢出率和檢測(cè)方法的靈敏度，鑒于對(duì)核酸檢測(cè)陽(yáng)性結(jié)果沒(méi)有做進(jìn)一步確證試驗(yàn)，檢測(cè)出的HIV、HCV和HBV病毒核酸陽(yáng)性是否為真陽(yáng)性？還有待于在今后工作中進(jìn)一步論證，同時(shí)對(duì)核酸檢測(cè)為假陽(yáng)性結(jié)果的獻(xiàn)血者回歸獻(xiàn)血隊(duì)伍的工作也應(yīng)同步開(kāi)展，保證獻(xiàn)血者的合法權(quán)益得到保護(hù)。

1 鐘萬(wàn)芬，唐小勇.HBSAG和抗-HCV 酶聯(lián)免疫檢測(cè)與血液病毒核酸篩查技術(shù)之間的相關(guān)性分析[J].肝臟，2015，20（11）：877-878.

2 周麗君，姚華，王麗鴻，等.核酸檢測(cè)技術(shù)在血液病毒篩查中的應(yīng)用進(jìn)展[J].新疆醫(yī)學(xué)，2013，11（43）：2-3.

3 鄭顯良，吳嬌嬋，趙靜.血液病毒核酸檢測(cè)在集中化檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的應(yīng)用[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2013，10（18）：2458-2459.

4 于志軍，鄧雪蓮，高慧卉，等．血清學(xué)檢測(cè)與核酸檢測(cè)在獻(xiàn)血者血液篩查中的相關(guān)性研究[J]．實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué)，2014，15（21）：533-534.

5 劉俊才.核酸檢驗(yàn)與酶聯(lián)免疫檢測(cè)血液病毒的應(yīng)用及檢驗(yàn)準(zhǔn)確率對(duì)比研究[J].中國(guó)保健營(yíng)養(yǎng)，2016，15（07）：12-13.

6 郭振秀，李凌云.采用核酸檢驗(yàn)與酶聯(lián)免疫檢測(cè)血液病毒的應(yīng)用及準(zhǔn)確率對(duì)比分析[J].世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘，2016，16（12）：9-10.

7 吳寶軍.核酸檢測(cè)與酶聯(lián)免疫檢測(cè)血液病毒的對(duì)比分析[J].中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥，2015，10（07）：116.

Objective To analyze the results of blood virus screening by both nucleic acid test （NAT） and ELISA to evaluate the significance of NAT in improving blood safety. Methods We randomly collected 19 464 blood samples from volunteers between 2015 and 2016. The blood samples were detected by ELISA for screening of anti-HIV，anti-HCV and HBsAg，followed by PCR fluorescence detection for nucleic acids of HBV，HCV and HIV in the samples which had showed negative reactions in ELISA. The comparative results were evaluated for the efficiency and significance in laboratory diagnoses and blood safety ensurance. Result The positive rate of HBV was 16.0% by NAT compared with 11.0% by ELISA （P＜0.05）. HCV detected by NAT revealed a positivity of 1.8% ，which is obviously higher than 0.5%by ELISA （P＜0.05）. The positive rate of HIV，however，was 1.9% by NAT whereas 1.7% by ELISA，no significant difference was noted between the two methods （P＞0.05）. Conclusion Pre-examination of blood samples with ELISA followed by NAT verification is recommended for blood screening which may help avoid missing or misdetection of samples in ELISA and help improve sensitivity and accuracy in the safety of blood transfusion.

Blood virus screening Nucleic acid detection Enzyme-linked immunosorbent assay

R392.11 R446.61

A

1671-2587（2017）05-0503-03

A Comparative Study on the Applicalion of Nucleic Acid Test and ELISA in Blood Donors ZHANG Mei-ping，HU

Xiu-lan，LU Xiao-nan. Puyang Red Cross Blood Conter，Puyang 457000

10.3969/j.issn.1671-2587.2017.05.028

457000 河南省濮陽(yáng)市紅十字中心血站

張美萍（1969–），女，河南濮陽(yáng)人，副主任技師，學(xué)士，主要從事臨床輸血及血液成分制備，（Tel）18939366595（E-mail）396451292@qq.com。

2017-01-12）

（本文編輯：王敏）