肝細(xì)胞肝癌患者血清PF4、VEGF、HIF-1α及Lp（a）的表達(dá)及臨床意義*

唐永華 許海濤 劉小君 劉良田 李陽(yáng)華

肝細(xì)胞肝癌患者血清PF4、VEGF、HIF-1α及Lp（a）的表達(dá)及臨床意義*

唐永華 許海濤 劉小君 劉良田 李陽(yáng)華

目的 探討血小板第4因子（PF4）、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）、乏氧誘導(dǎo)因子-1α（HIF-1α）及脂蛋白（a）[Lp（a）]在肝細(xì)胞肝癌（hepatocellular carcinoma，HCC）患者血清中的表達(dá)及其臨床意義。方法 收集2014年3月～2016年12月年本院確診的慢性乙型肝炎（chronic hepatitis B，CHB）102例、肝硬化（1iver cirrhosis，LC）51例、HCC患者37例及健康對(duì)照組（health control，HC）186例，采用免疫增強(qiáng)比濁法測(cè)定受試者血清中Lp（a）濃度，同時(shí)采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）測(cè)定血清PF4、HIF-la和VEGF含量，并對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果 PF4、VEGF、HIF-1α和Lp（a）濃度在HCC組明顯高于CHB、LC和HC組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=6.185～15.916，P＜0.001～0.05），且III期HCC明顯高于I期和II期，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=7.951～19.086，P＜0.001～0.05），CHB、LC和HC組血清PF4、VEGF及HIF-1α濃度的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=0.371～0.892，P＞0.05）；LC組Lp（a）濃度明顯低于其他組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=6.176～9.452，P＜0.05），且III級(jí)LC明顯低于I級(jí)和II級(jí)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=4.945～6.067，P＜0.05）。結(jié)論 PF4、VEGF、HIF-1α和Lp（a）濃度在HCC血清中明顯增高，且隨臨床分期/級(jí)越大，濃度增幅越高，可作為臨床HCC診斷及分期依據(jù)；Lp（a）濃度LC組明顯降低，可作為L(zhǎng)C診斷及與HCC鑒別診斷依據(jù)。

血小板第4因子 血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子 乏氧誘導(dǎo)因子-1α 脂蛋白a 肝細(xì)胞肝癌

肝細(xì)胞肝癌（hepatocel lularcarcinoma，H C C）占原發(fā)性肝癌的8 5%，是致死率位居第三的惡性腫瘤[1]。由于起病隱匿，僅有10%～15%HCC患者能被早期確診和給予積極的外科切除、肝移植等根治性治療[2]。據(jù)最新統(tǒng)計(jì)，在HCC的新發(fā)和死亡病例中，中國(guó)人均占50%以上，且正處于不斷上升中，5年生存率僅為0～10%[3，4]。因此，不斷探討HCC發(fā)病早期診斷血清標(biāo)志物是提高HCC診斷和治療的重要手段[5]。本研究對(duì)CHB、LC、HCC和HC患者血清中PF4、VEGF、HIF-1α和Lp（a）濃度進(jìn)行分析，探討它們?cè)贖CC診斷和分期中的應(yīng)用價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

材料與方法

1 一般資料 收集2014年3月～2016年12月本院確診的CHB患者102例，其中男57例，女45例，年齡35～71歲，平均43.6±19.37歲；LC患者51例，其中男30例，女21例，年齡32～73歲，平均41.9±20.75歲，按PUgh的改良計(jì)分法將LC患者分為三級(jí)，其中I級(jí)19例、II級(jí)23例和III級(jí)9例；HCC患者37例，其中男23例，女14例，年齡39～78歲，平均52.7±21.85歲，診斷標(biāo)準(zhǔn)符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)2012版《肝癌規(guī)范化診治指南》，所有病例術(shù)后病理檢查證實(shí)為HCC，根據(jù)UICC標(biāo)準(zhǔn)，組織病理分期：I期7例、II期13例、III期17例，所有HCC患者檢測(cè)前均未接受放化療與抗腫瘤藥物治療。同時(shí)選擇同期健康志愿者186例，其中男112例，女74例，年齡32～69歲，平均40.2±18.79歲，均無(wú)重要器官疾病史，谷丙轉(zhuǎn)氨酶均正常。本臨床研究已經(jīng)通過(guò)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，且所有患者均簽署知情同意書(shū)。

2 儀器與試劑 C16000全血?jiǎng)由治鰞x、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品及配套試劑均由美國(guó)雅培公司提供，Lp（a）試劑由浙江寧波美康公司提供；ELX800全自動(dòng)酶免分析儀由美國(guó)BioTek Instruments，Inc公司提供，PF4、HIF-1a和VEGF試劑盒由上海藍(lán)基生物科技有限公司提供。

3 方法

3.1 標(biāo)本采集和保存：所有受試者均于治療前清晨空腹用一次性無(wú)抗凝劑真空采血管采集靜脈血3～4 ml，置室溫30 min后于3 000 r/min離心機(jī)內(nèi)離心15 min，分離血清及時(shí)檢測(cè)，4 h內(nèi)檢測(cè)完畢，不能及時(shí)檢測(cè)的標(biāo)本于–20℃保存，需檢測(cè)時(shí)取出室溫復(fù)溶，等復(fù)溶后30 min后進(jìn)行檢測(cè)。

3.2 檢測(cè)：Lp（a）檢測(cè)前對(duì)C16000全自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行維護(hù)、保養(yǎng)、校準(zhǔn)及室內(nèi)質(zhì)控物檢測(cè)，待質(zhì)控結(jié)果在控后才進(jìn)行受試者標(biāo)本檢測(cè)；PF4、HIF-1a和VEGF檢測(cè)前對(duì)ELX800全自動(dòng)酶免分析儀進(jìn)行維護(hù)和保養(yǎng)，并對(duì)比色靈敏度進(jìn)行校正，且每批均設(shè)置空白、陰性、陽(yáng)性和質(zhì)控檢測(cè)孔，待以上各質(zhì)控孔的OD值均達(dá)試劑盒說(shuō)明書(shū)規(guī)定的有效范圍內(nèi)，才進(jìn)行標(biāo)本結(jié)果判讀，否則重新試驗(yàn)。所有操作均嚴(yán)格按實(shí)驗(yàn)室SOP操作規(guī)程及儀器和試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 所有數(shù)據(jù)采用SPSS20.0軟件包處理，計(jì)量資料以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，P＜O.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 CHB、LC、HCC及HC各組血清標(biāo)記物結(jié)果比較 PF4、VEGF、HIF-1α和Lp（a）濃度在HCC組明顯高于CHB、LC和HC組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=11.685，15.916，12.061，6.176，P＜0.001～0.05），CHB、LC和HC組血清PF4、VEGF及HIF-1α濃度的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=0.371，0.892，0.726，P＞0.05），HB和HC組Lp（a）濃度間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=1.062，P＞0.05），而LC組明顯低于其他組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=6.176，9.452，P＜0.05），結(jié)果見(jiàn)表1。

2 LC不同分級(jí)血清中Lp（a）的結(jié)果比較 I級(jí)和II級(jí)LC血清Lp（a）濃度（mg/L）分別為135.23±51.08和117.64±42.63，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=1.594，P＞0.05），而III級(jí)LC血清中Lp（a）濃度為 71.52±29.14，明顯低于I級(jí)和II級(jí)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=4.945，6.067，P＜0.05）。

3 HCC不同分期血清各標(biāo)記物結(jié)果比較 I期和II期HCC血清中VEGF和 HIF-1α濃度間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=1.094，1.315，P＞0.05），I期HCC血清中PF4和Lp（a）濃度低于II期，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=3.045～3.791，P＜0.05），而III期HCC血清中的PF4、VEGF、HIF-1α和 Lp（a）濃度均明顯高于I期和II期，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=19.086，13.782，12.564，7.951，P＜0.001～0.05），結(jié)果見(jiàn)表2。

表1 CHB、LC、HCC及HC各組血清標(biāo)記物結(jié)果

表2 37例HCC不同分期受試者血清中各標(biāo)記物的結(jié)果

討 論

肝細(xì)胞肝癌（hepatocellular carcinoma，HCC）發(fā)病隱匿，早期癥狀不明顯，大多數(shù)HCC患者發(fā)現(xiàn)時(shí)已處于中晚期，且肝臟血流極為豐富，腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)迅速，極易發(fā)生轉(zhuǎn)移。這些特點(diǎn)給臨床上HCC的早期診斷和治療帶來(lái)極大困難[6]。因此，研究和發(fā)現(xiàn)新的HCC早期血清診斷標(biāo)記物或標(biāo)記物聯(lián)合檢測(cè)，對(duì)HCC早期診斷、治療、提高HCC患者生存率和治愈機(jī)會(huì)具有非常重要的臨床意義[7]。

血小板第4因子（platelet factor-4，PF4）是一種血小板衍生因子，由巨核細(xì)胞生成。有研究證實(shí)，PF4具有抑制腫瘤血管生成的作用，與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移有密切關(guān)系。本研究結(jié)果顯示，HCC組血清中PF4濃度明顯高于CHB、LC及HC組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=6.185～7.356，P＜0.05），而CHB、LC及HC組之間的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=0.371～0.416，P＞0.05），這可能與PF4通過(guò)抑制VEGF的作用來(lái)發(fā)揮其抑制血管生成等有關(guān)。

血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（Vascular endothelial growth factor，VEGF）是迄今發(fā)現(xiàn)的功能最強(qiáng)、特異性最高的血管生成調(diào)控因子。已有研究表明惡性腫瘤患者血清中VEGF含量與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[8，9]。本研究結(jié)果顯示，HCC組血清中VEGF濃度明顯高于CHB、LC及HC組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=14.625～15.916，P＜0.01），而CHB、LC及HC組之間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=0.401～0.892，P＞0.05），這可能與VEGF與受體結(jié)合刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖，從而促進(jìn)腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞分裂、增殖及誘導(dǎo)血管形成等因素有關(guān)。

乏氧誘導(dǎo)因子-la（hypoxia inducible factor-1a，HIF-1a）是細(xì)胞應(yīng)對(duì)缺氧微環(huán)境狀態(tài)的一種關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子，由HIF-la和HIF-1β兩個(gè)亞基構(gòu)成的異二聚體，其中HIF-la位于細(xì)胞核，對(duì)多種缺氧反應(yīng)具有調(diào)控作用，其中最主要的是PF4。已有研究表明HIF-1a與人體大多數(shù)惡性腫瘤相關(guān)，在維持腫瘤細(xì)胞的新陳代謝、腫瘤血管生成、腫瘤組織的侵襲性和轉(zhuǎn)移增殖等方面具有重要作用[10，11]。本研究結(jié)果顯示，HCC組血清中HIF-la濃度結(jié)果明顯高于CHB、LC及HC組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（tt=6.612～7.913，P＜0.05），而CHB、LC及HC組之間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=0.439～0.702，P＞0.05），這可能與機(jī)體在缺氧微環(huán)境狀態(tài)下，HIF-la與VEGF等缺氧反應(yīng)元件結(jié)合并激活其功能參與血管生成有關(guān)。

脂蛋白（a）[1ipoprotein（a），Lp（a）]是一種與低密度膽固醇相似的特殊脂蛋白，由載脂蛋白A[apo（a）]和載脂蛋白B（apoB）通過(guò)二硫鍵連接而成。有研究證實(shí)，Lp（a）濃度升高與腫瘤的發(fā)生、進(jìn)展和轉(zhuǎn)移有密切關(guān)系[12]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)LC組血清中Lp（a）濃度明顯降低，且隨LC分級(jí)增加而下降，這可能與慢性肝損害引起肝臟合成蛋白及脂質(zhì)功能障礙有關(guān)。但HCC組卻明顯升高，明顯高于LC組，且隨HCC分期增加而升高，這可能與Lp（a）能抑制纖溶酶原活化，導(dǎo)致局部容易形成纖維蛋白網(wǎng)和血栓，有利于惡性腫瘤細(xì)胞黏附于血管相應(yīng)部位，亦可能與激活血小板釋放血小板源性生長(zhǎng)因子，促進(jìn)惡性腫瘤細(xì)胞的增殖及生長(zhǎng)等因素有關(guān)[13]?？梢?jiàn)，Lp（a）測(cè)定有助于LC和HCC的診斷、鑒別及分級(jí)或分期診斷。

綜上所述，PF4、VEGF、HIF-1a及Lp（a）濃度在HCC患者血清中均明顯升高，且隨分期或分級(jí)增加而升高，且Lp（a）在LC患者血清中降低，且隨分級(jí)增加而降低。因此，聯(lián)合檢測(cè)PF4、VEGF、HIF-1a和 Lp（a）濃度，對(duì)HCC疾病的診斷、鑒別及分期診斷具有重要的意義，值得臨床推廣應(yīng)用。

1 楊立新，魏強(qiáng)，馬芝倩，等.超聲造影在肝癌殘存病灶微波消融治療中的應(yīng)用[J].現(xiàn)代醫(yī)學(xué)，2014，42（2）：395-397.

2 LLLOVET J M，SCHWARTZ M，MAZZAFERRO V.Resection and liver transplantation for hepatocellular carcinoma[J].Semin Liver Dis，2005，25（2）：181-200.

3 Song P，Tang W，Tamura S，et a1．The management of hepatocellular carcinoma in Asia：a guide line combining quantitative and qualitative evaluation[J]．Biosci Trends，2010，4（6）：283-287．

4 Jemal A，Bray F，Center MM，et a1．Global cancer statistics[J]．CA Cancer J Clin，2011，61（2）：69-90

5 王芳勝，熊敦勇，寇 輝，等.血清AFP，CEA，CA-199與TAP在肝癌診斷中的應(yīng)用價(jià)值[J].現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2015，3O（5）：148-150.

6 呂秀芳，趙奉波，鞏秀，等.血清神經(jīng)肽Y和骨橋蛋白在肝細(xì)胞肝癌診斷中的應(yīng)用研究[J].交通醫(yī)學(xué)，2015，29（5）：425-428.

7 李芒會(huì)，張利俠，李亞娥.腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)對(duì)原發(fā)性肝癌早期診斷的分析[J].現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2014，29（3）：149-151.

8 GUBA M，von BREITENBUCH P，STEINBAUER M，et al.Rapamycin inhibits primary and metastatic tumor growth by anti-angiogenesis：involvement of vascular endothelial growth factor[J].Nat Med，2002，8（2）：128-135.

9 Peifer M．Fernandez-Cuesta L，Sos ML，et a1．Integrative genome analyses identify key somatic driver mutations of small cell lung cancer[J]．NatGenet，2012，44（10）：1104-1110．

10 DAI F，ZHANG X M，SHEN W R，et a1.Liposomal curcumin inhibits hypoxia-induced angiogenesis after transcatheter arterial embolization in VX2 rabbit liver tumors [J].Onco Targets Ther，2015，15（8）：2601-2611.

11 戴峰，張秀明，陳駿，等.肝細(xì)胞肝癌TAE前后血清HIF-la、VEGF表達(dá)與療效的相關(guān)性研究[J].東南大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2016，35（4）：537-540.

12 Lippi G，Targher G，F(xiàn)ranchini M，et a1．Biochemical correlates of lipoprotein（a） in a general adult population．Possible implications for cardiovascular risk assessment[J].J Thromb Thrombolysis，2009，27（1）：44-47．

13 曹純，馬代遠(yuǎn)，杜小波，等．肺癌患者血清脂蛋白a表達(dá)水平及其臨床意義[J].實(shí)用醫(yī)院臨床雜志，2014，l1（5）：175-176．

O bjective To investigate the levels and clinical significance of platelet factor 4 （PF4），vascular endothelial growth factor（VEGF），hypoxia inducible factor-1α（HIF-1α） and lipoprotein α（Lp α） in hepatocellular carcinoma （HCC）. Method The investigation included 102 inpatients of chronic hepatitis B（HCB），51 of liver cirrhosis，37 of HCC，and 186 subjects of healthy controls（HC） between 2014 and 2016. All samples were detected with immune enhanced turbidimetric method for serum concentration of Lpα and with ELISA for seral PF4，HIF -la and VEGF. Results The PF4，VEGF，HIF-1a and Lpα concentrations in HCC patients were obviously higher than those of CHB and LC patients，and HC as well （P＜0.001～0.05），showing a stage-dependent increase of the markers tested（t=7.951-19.086，P＜0.001-0.05）. No remarkable variation was noted of PF4，VEGF，and HIF-1α in the three groups（P＞0.05）. Lpαlevel，however，was found to be higher in LC group than in the other groups（P＜0.05），reversely showing a stage-dependent decrease（P＜0.05）. Conclusions PF4，VEGF，HIF-1α and Lpαlevels are significantly elevated in the sera of HCC patients，based on which a differential diagnosis between LC and HCC can be made.

Platelet factor-4 Vascular endothelial growth factor Hypoxia inducible factor-1α Lipoprotein（a） Hepatocellular carcinoma

R446.11 R735.7

A

1671-2587（2017）05-0478-04

Clinical Significance of PF4，VEGF，HIF-1a and Lpα in Sera of Patients with Hepatocellular Carcinoma TANG Yong-hua，XU Hai-tao，LIU Xiao-jun et al. Clinical Laboratory and Department of Internal Medicine of Shenzhen Guangming New District Hospital，Guangdong province，Shenzhen 518108

10.3969/j.issn.1671-2587.2017.05.021

*本課題受廣東省深圳市寶安區(qū)科技創(chuàng)新項(xiàng)目（No.2016CX106）資助

518106 廣東省深圳市光明新區(qū)人民醫(yī)院（唐永華，許海濤，劉小君，李陽(yáng)華）；寶安區(qū)石巖人民醫(yī)院輸血科（劉良田）

唐永華（1977–），男，主管技師，學(xué)士，主要從事臨檢及生化免疫工作，（Tel）18126081835（E-mail）tangyonghua1977@163.com。

2017-06-02）

（本文編輯：潘健）