高濃度蛋白穿刺液直接涂片法與離心集菌涂片法鏡檢效果的研究*

楊劍鋒 鐘清蘭 熊熙

高濃度蛋白穿刺液直接涂片法與離心集菌涂片法鏡檢效果的研究*

楊劍鋒 鐘清蘭 熊熙

目的 應(yīng)用含高濃度蛋白穿刺液洗滌處理前后檢菌效果的對(duì)比觀察。方法 對(duì)2015年7月1日～2016年12月31日所有粘稠膿性穿刺液標(biāo)本118例進(jìn)行細(xì)菌學(xué)的常規(guī)涂片和培養(yǎng)，同時(shí)對(duì)118例標(biāo)本進(jìn)行洗滌、離心集菌后涂片鏡檢，并平行進(jìn)行常規(guī)細(xì)菌培養(yǎng)。結(jié)果 118例粘稠膿性穿刺液標(biāo)本直接涂片革蘭染色檢出細(xì)菌36例，抗酸染色鏡檢無1例陽性。118例標(biāo)本經(jīng)洗滌、離心后涂片，革蘭染色鏡檢檢出細(xì)菌82例，檢出抗酸桿菌2例。洗滌、離心集菌涂片法鏡檢還發(fā)現(xiàn)漏檢了G-桿菌8例和G+球菌4例。洗滌、離心集菌涂片法的鏡檢陽性率與細(xì)菌培養(yǎng)具有高度的符合率。結(jié)論 洗滌、離心集菌涂片法可提高細(xì)菌檢出率，并避免漏檢，可為臨床醫(yī)生的診斷與治療提供極有價(jià)值的參考信息。

穿刺液 直接涂片法 離心聚菌涂片法 鏡檢

穿刺液是細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)最常采用的標(biāo)本，此類標(biāo)本只要檢測(cè)到細(xì)菌，臨床醫(yī)生就可確立感染的存在。然而，受多種因素的影響，無論是細(xì)菌培養(yǎng)還是涂片鏡檢都有較高的假陰性率。直接涂片法染色時(shí)涂膜容易被沖掉，且脫色不好，顯微鏡鏡檢背景太深，白細(xì)胞邊界不清，細(xì)胞著色太深，細(xì)胞內(nèi)細(xì)菌乃至胞外細(xì)菌易被掩蓋，因而鏡檢陽性率不高，嚴(yán)重影響臨床診斷的確立與后續(xù)治療。通過比較直接涂片法和洗滌、離心集菌涂片法染色鏡檢的檢菌效果，認(rèn)為洗滌、離心集菌涂片法的鏡檢效果理想，現(xiàn)報(bào)道如下。

材料與方法

1 材料 2015年7月1日～2016年12月31日所有粘稠的膿性穿刺液標(biāo)本118例，標(biāo)本由臨床醫(yī)生按無菌操作技術(shù)采集后立即送檢，分別為膿液71例，分泌物13例，膽汁11例，引流液8例，腹水6例，切口分泌物6例，胸水2例，膿尿1例，分別以直接涂片和洗滌、離心集菌涂片法染色鏡檢，同時(shí)進(jìn)行常規(guī)細(xì)菌學(xué)培養(yǎng)。兩種方法各涂片3張，1張革蘭染色，1張抗酸染色，第3張備用。

2 方法

2.1 直接涂片與檢菌：對(duì)臨床送檢的所有粘稠的膿性穿刺液標(biāo)本直接涂片，火焰固定，革蘭染色和抗酸染色鏡檢至少300個(gè)視野。

2.2 集菌涂片法與檢菌

2.2.1 集菌方法：①將穿刺液5 ml置于無菌試管，3 000 r/min離心10 min；用無菌吸管吸去上清液，留下細(xì)胞沉渣。②細(xì)胞沉渣加入0.9%氯化鈉注射液5 ml，顛倒混勻；第2次3 000 r/min離心10min；取出試管，吸去上清液，留下細(xì)胞沉渣。③細(xì)胞沉渣再加0.9%氯化鈉注射液5 ml，顛倒混勻，第3次3 000 r/min離心10 min；吸去上清液，留下細(xì)胞沉渣，震蕩混勻。

2.2.2 涂片：用接種環(huán)沾取一環(huán)細(xì)胞沉渣，點(diǎn)至載玻片上，推片或壓片（注意：力度不可太大），干燥，分別進(jìn)行革蘭染色和抗酸染色與檢菌。

3 細(xì)菌培養(yǎng) 標(biāo)本接種至血、巧克力、中國蘭和沙保弱瓊脂平板。血、巧克力瓊脂平板于35℃、5%CO2環(huán)境中培養(yǎng)；中國蘭和沙保弱瓊脂平板于35℃、空氣環(huán)境培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

結(jié) 果

1 118例粘稠的膿性穿刺液標(biāo)本采用直接涂片革蘭染色鏡檢僅檢出細(xì)菌36例（陽性率30.51%，36/118），陰性率69.49%（82/118）；抗酸染色鏡檢陽性率0。除直接涂片法革蘭染色36例使用洗滌、離心聚菌涂片法仍為陽性外，82例直接涂片鏡檢陰性者經(jīng)洗滌、離心集菌后涂片，革蘭染色鏡檢檢出細(xì)菌46例，即洗滌、離心聚菌涂片法革蘭染色的陽性率為69.49%（82/118），陰性率30.51%（36/118）。兩種涂片法鏡檢與細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果見表1。

表1 直接涂片法和洗滌離心集菌涂片法鏡檢與細(xì)菌培養(yǎng)檢測(cè)結(jié)果

2 洗滌、離心聚菌涂片法革蘭染色發(fā)現(xiàn)不穩(wěn)定L型細(xì)菌5例，酵母樣孢子1例；抗酸染色鏡檢檢出抗酸桿菌2例。直接涂片法36例陽性標(biāo)本在洗滌、離心集菌涂片法鏡檢后發(fā)現(xiàn)了白細(xì)胞內(nèi)的G-桿菌8例，G+球菌4例，疑似放線菌1例。可見，直接涂片鏡檢法存在漏檢現(xiàn)象。

3 82例洗滌、離心集菌涂片法革蘭染色鏡檢陽性者經(jīng)普通細(xì)菌培養(yǎng)陽性（有細(xì)菌生長）的有46例，其余36例普通細(xì)菌培養(yǎng)陰性者中22例為厭氧菌（耳鼻喉膿腫與普外科腹腔膿液標(biāo)本），14例可能與取標(biāo)本前已使用抗菌藥物等有關(guān)。

討 論

標(biāo)本直接涂片的固定與蛋白含量有很大關(guān)系，過高或過低都不易固定。此時(shí)采用細(xì)胞沉渣涂片，標(biāo)本更容易被固定，更多標(biāo)本中的目的檢出物被涂在單位面積載玻片上，故能獲得很好的效果。洗滌、離心集菌涂片法可提高革蘭染色陽性率，可使直接涂片法革蘭染色的陽性率30.50%提高到69.49%，提高陽性率約39%。顯然，洗滌、離心聚菌涂片法用于含高蛋白體液標(biāo)本的鏡檢，相比直接涂片有助于避免醫(yī)生的誤診誤治，使患者得到及時(shí)而正確的治療，無疑具有重要的臨床實(shí)用價(jià)值。

直接涂片法抗酸染色陽性率為0，而洗滌、離心聚菌涂片法不但可檢出抗酸桿菌（1.69%），還可檢出白細(xì)胞內(nèi)的G-桿菌、G+球菌和放線菌等，從而避免直接涂片法的漏檢現(xiàn)象，為臨床醫(yī)生診斷細(xì)菌感染及后續(xù)進(jìn)行正確的抗感染治療提供了極有價(jià)值的參考依據(jù)。

本文36例直接涂片法革蘭染色陽性的標(biāo)本使用洗滌、離心聚菌涂片法也是陽性。因此，在平常的標(biāo)本檢測(cè)工作中，只需對(duì)直接涂片法陰性的標(biāo)本進(jìn)行洗滌、離心聚菌涂片法補(bǔ)充即可，這樣可達(dá)到快速（提高工作效率）、準(zhǔn)確（避免誤診誤治）的目的。

本文118例細(xì)菌培養(yǎng)陽性率只有38.98%，而洗滌、離心聚菌涂片法的陽性率則有69.49%，說明取樣前就可能在本院或他院進(jìn)行了抗菌藥物的經(jīng)驗(yàn)性治療。本文結(jié)果說明兩點(diǎn)：抗菌藥物經(jīng)驗(yàn)治療前正確取樣非常必要，洗滌、離心聚菌涂片法可避免細(xì)菌培養(yǎng)的假陰性率，兩法形成互補(bǔ)。

雖然有學(xué)者[1]推薦差速離心集菌法，雖然陽性率提高了，但僅是集菌，細(xì)胞卻被丟棄了。本文采用的洗滌、離心集菌涂片法可將細(xì)胞和細(xì)菌更真實(shí)的保留下來，標(biāo)本更易被固定，能更真實(shí)的反映細(xì)菌與細(xì)胞之間的關(guān)系，有助于提高細(xì)菌檢出率，為臨床醫(yī)生的診斷與治療提供極有價(jià)值的參考信息。

由于胸水、腹水、淋巴液、關(guān)節(jié)液、前列腺液、膽汁等穿刺液蛋白質(zhì)含量較高。存在既不好固定，染色時(shí)涂膜又容易沖掉，且脫色不好、背景太深等問題。我科細(xì)菌室以前均采用直接涂片法鏡檢，雖然耗時(shí)少、操作簡單，但陽性率低。臨床檢驗(yàn)實(shí)踐中經(jīng)常出現(xiàn)直接涂片找到大量G+球菌，培養(yǎng)后卻無細(xì)菌生長或只有G-桿菌生長；有時(shí)則發(fā)生直接涂片未找到細(xì)菌，但細(xì)菌培養(yǎng)又有細(xì)菌生長的現(xiàn)象；有時(shí)遇到需要數(shù)日才長出慢生長細(xì)菌時(shí)，還容易漏檢（如漏檢分枝桿菌、放線菌等）。

對(duì)無菌部位采集的穿刺液標(biāo)本進(jìn)行細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)是臨床細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)十分重要的項(xiàng)目，檢驗(yàn)中任何陽性結(jié)果對(duì)臨床診治都有重要的參考價(jià)值。由于直接涂片檢菌用時(shí)短，故條件較好的細(xì)菌室都會(huì)采用直接涂片檢菌陽性的結(jié)果作為危急值報(bào)告給臨床醫(yī)生[2-5]。由于此類標(biāo)本的細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)結(jié)果十分重要，因此探討適合細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)的新方法，以提高細(xì)菌檢出陽性顯得十分重要。本文結(jié)果表明，與直接涂片法比較，洗滌、離心聚菌涂片法鏡檢高蛋白穿刺液具有陽性率高，可與直接涂片法和細(xì)菌培養(yǎng)形成有效的互補(bǔ)，提高細(xì)菌檢出率，為臨床醫(yī)生的診斷和抗感染治療提供極有價(jià)值的參考信息，值得在各級(jí)醫(yī)療機(jī)構(gòu)推廣應(yīng)用。

1 蔡靜清，張敏，張迎春.穿刺液差速離心抗酸茵涂片檢查效果觀察[J].河北醫(yī)學(xué)，2010，16（10）：1278-1280.

2 張敏，王寧，張迎春，等.穿刺液標(biāo)本差速離心與甩片方法檢菌效果觀察[J].河北醫(yī)學(xué)，2012，18（1）：71-73.

3 王輝，任健康，王明貴.臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)[M].北京，人民衛(wèi)生出版社，2015：6.

4 陳東科，孫長貴.實(shí)用臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)與圖譜[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2010：5.

5 齊桂娟，張敏.膿性穿刺液集菌涂片方法檢菌效果觀察[J].河北醫(yī)學(xué)，2013，19（1）：160-161.

R446.5

A

1671-2587（2017）05-0454-03

10.3969/j.issn.1671-2587.2017.05.013

*本課題受宜春市科技局2016年市科技計(jì)劃項(xiàng)目（No.JXYC2016KSC043）資助

331100 江西省豐城市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科

楊劍鋒（1979–），男，江西豐城人，主管技師，學(xué)士，主要從事臨床檢驗(yàn)工作，（E-mail）fcslzb@163.com。

2017-03-20）

（本文編輯：王虹）