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    御風(fēng)膠囊抗腦缺血的藥效學(xué)研究

    2017-11-16 07:36:28許貴軍王文芝胥莉莉張哲源孫忠人
    中醫(yī)藥信息 2017年6期
    關(guān)鍵詞:御風(fēng)腦缺血空白對(duì)照

    許貴軍,王文芝,胥莉莉,張哲源,孫忠人

    (1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院,黑龍江 哈爾濱 150001;2.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué),黑龍江 哈爾濱 150040)

    御風(fēng)膠囊抗腦缺血的藥效學(xué)研究

    許貴軍1,王文芝1,胥莉莉1,張哲源1,孫忠人2*

    (1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院,黑龍江 哈爾濱 150001;2.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué),黑龍江 哈爾濱 150040)

    目的:研究御風(fēng)膠囊對(duì)實(shí)驗(yàn)性腦缺血大鼠的治療作用。方法:造模成功Wistar大鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、模型組、陽(yáng)性藥對(duì)照組、御風(fēng)膠囊組4組,觀察御風(fēng)膠囊對(duì)模型大鼠腦組織含水量、腦組織病理形態(tài)學(xué)、血小板聚集率、頸動(dòng)脈體內(nèi)血栓、凝血時(shí)間等指標(biāo)的影響。結(jié)果:御風(fēng)膠囊組與模型組比較,能明顯降低腦缺血模型大鼠腦組織含水量,改善腦織病理形態(tài)學(xué),使血小板聚集率降低,降低頸動(dòng)脈體內(nèi)血栓重,延長(zhǎng)凝血時(shí)間。結(jié)論:御風(fēng)膠囊對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠的腦缺血具有很好的治療作用。

    御風(fēng)膠囊;腦缺血;藥效學(xué)研究

    腦缺血是一種常見(jiàn)的急性腦血管病,類似腦出血或腦梗塞,可反復(fù)發(fā)作,極易導(dǎo)致老年癡呆癥和腦中風(fēng)的發(fā)生,嚴(yán)重危害患者的生命健康和生存質(zhì)量。御風(fēng)膠囊是黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院自主研發(fā)的制劑品種(黑藥制字Z20170013),由黃芪、川芎、天麻、丹參、當(dāng)歸、赤芍、制遠(yuǎn)志7味藥材經(jīng)提取、粉碎等工序制成的中藥復(fù)方膠囊劑,益氣活血、祛痰通絡(luò),用于氣虛血瘀之中風(fēng)先兆。本實(shí)驗(yàn)采用結(jié)扎大鼠右側(cè)頸總動(dòng)脈的腦缺血模型,對(duì)御風(fēng)膠囊治療實(shí)驗(yàn)性腦缺血的藥效學(xué)進(jìn)行研究。

    1 實(shí)驗(yàn)材料

    1.1 藥品與試劑

    御風(fēng)膠囊(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院制劑室);銀杏葉片(批號(hào)120704,石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司);水合氯醛(批號(hào)20120420,天津市瑞金特化學(xué)品有限公司)。

    1.2 動(dòng)物

    Wistar大鼠,由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,動(dòng)物許可證號(hào):SYXK黑2011001,雌雄各半,體質(zhì)量(200±20)g。

    1.3 儀器

    KDC-160HR高速冷凍離心機(jī)(科大創(chuàng)新股份有限公司);BL-420F生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)(成都泰盟科技有限公司);LBY-NJ2血小板聚集儀(北京普利生儀器有限公司);AL204電子天平(梅特勒-托利多儀器上海有限公司)。

    2 實(shí)驗(yàn)方法

    2.1 造模、分組與給藥[1-3]

    Wistar大鼠喂養(yǎng)適應(yīng)環(huán)境1周后,用3.5%水合氯醛腹腔注射麻醉(35 mg/100 g),分離并結(jié)扎右側(cè)頸總動(dòng)脈。假手術(shù)組只手術(shù)不結(jié)扎頸總動(dòng)脈,手術(shù)后傷口縫合后回籠飼養(yǎng)。以神經(jīng)學(xué)評(píng)分測(cè)定結(jié)果評(píng)定,造模成功的大鼠按體質(zhì)量隨機(jī)分組,分別為空白對(duì)照組(假手術(shù)組)、模型組、陽(yáng)性藥對(duì)照組(銀杏葉片組)、御風(fēng)膠囊組,保證每組造模成功的動(dòng)物數(shù)為8只。造模后第2天開(kāi)始灌胃給藥治療14天,御風(fēng)膠囊組按4.86 g/kg灌胃給藥,陽(yáng)性藥對(duì)照組按0.54片/kg灌胃給予銀杏葉片,空白對(duì)照組和模型組給予等量生理鹽水。

    2.2 方法與觀察指標(biāo)

    2.2.1 腦組織病理形態(tài)學(xué)觀察

    末次給藥1 h,各組大鼠斷頭取腦,每只取半腦用10%福爾馬林固定,石蠟切片進(jìn)行常規(guī)HE染色,光學(xué)顯微鏡下觀察各組大鼠腦組織結(jié)構(gòu)變化。

    2.2.2 腦組織含水量測(cè)定

    末次給藥1 h,各組大鼠斷頭取腦,迅速取出腦組織,每只取半腦用千分之一電子天平稱重后置烘箱中70℃烘24 h,冷卻后稱干腦組織重量,分別計(jì)算腦組織含水量。

    2.2.3 血小板聚集功能的影響

    末次給藥1 h,各組大鼠以3.5%水合氯醛腹腔注射麻醉(35 mg/100 g),打開(kāi)腹腔,從下腔靜脈取血2.5 ml放入加3.8%枸椽酸鈉的試管內(nèi),將已抗凝的全血以1 000 r/min離心8 min,制備富血小板血漿(PRP),放置在0.5 ml的Eppedorf管中閉蓋保存,置恒溫孔備用;余下抗凝血以3 000 r/min離心10 min所得上清為貧血小板血漿(PPP)。采用LBY-NJ2血小板聚集儀測(cè)定血小板聚集率。

    2.2.4 頸動(dòng)脈體內(nèi)血栓形成的影響

    末次給藥1 h,各組大鼠用3.5%水合氯醛腹腔注射麻醉(35 mg/100 g),測(cè)左頸總動(dòng)脈與右頸外靜脈導(dǎo)管中絲線血栓濕重。

    2.2.5 凝血時(shí)間

    末次給藥0.5 h,各組大鼠以毛細(xì)管于眼眶內(nèi)取一管血,記錄凝血時(shí)間。

    2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

    3.1 腦組織病理形態(tài)學(xué)觀察

    結(jié)果見(jiàn)圖1~4。

    空白對(duì)照組:腦組織神經(jīng)元細(xì)胞形態(tài)尚規(guī)整,無(wú)炎細(xì)胞浸潤(rùn)和少量充血。

    模型組:缺血區(qū)可見(jiàn)出血周圍區(qū)神經(jīng)元固縮、水腫,大量炎細(xì)胞出現(xiàn),中心區(qū)可見(jiàn)神經(jīng)纖維呈現(xiàn)網(wǎng)格狀結(jié)構(gòu),大量神經(jīng)細(xì)胞凋亡,消失。

    御風(fēng)膠囊組:與模型組比較,神經(jīng)元細(xì)胞形態(tài)較規(guī)整,凋亡數(shù)量明顯減少,中心區(qū)少見(jiàn)神經(jīng)纖維網(wǎng)格狀結(jié)構(gòu),炎細(xì)胞明顯減少,水腫程度明顯減輕,稍優(yōu)于陽(yáng)性藥對(duì)照組,與空白對(duì)照組比較無(wú)明顯差別。

    圖1 空白對(duì)照組腦組織病理圖

    圖2 模型組腦組織病理圖

    圖3 陽(yáng)性藥對(duì)照組腦組織病理圖

    圖4 御風(fēng)膠囊組腦組織病理圖

    3.2 腦組織含水量測(cè)定

    模型組腦組織含水量明顯增加,與空白組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),御風(fēng)膠囊組腦組織含水量明顯減少,與模型組比較有統(tǒng)計(jì)意義(P<0.05)。結(jié)果見(jiàn)表1。

    腦組織含水量(%)=(濕重-干重)/濕重×100%

    表1 御風(fēng)膠囊對(duì)大鼠腦組織含水量的影響

    注:與空白對(duì)照組比較,*P<0.05;與模型組比較,#P<0.05。

    3.3 御風(fēng)膠囊對(duì)血小板聚集功能的影響

    模型組血小板聚集率升高,與空白組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),御風(fēng)膠囊對(duì)血小板聚集率有顯著下調(diào),與模型組比較有統(tǒng)計(jì)意義(P<0.05)。結(jié)果見(jiàn)表2。

    表2 御風(fēng)膠囊對(duì)血小板聚集率的影響

    注:與空白對(duì)照組比較,*P<0.05;與模型組比較,#P<0.05。

    3.4 御風(fēng)膠囊對(duì)頸動(dòng)脈體內(nèi)血栓形成的影響

    模型組的血栓重明顯增加,與空白對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),御風(fēng)膠囊組的血栓重顯著下調(diào),與模型組比較有統(tǒng)計(jì)意義(P<0.05)。結(jié)果見(jiàn)表3。

    表3 御風(fēng)膠囊對(duì)血栓的影響

    注:與空白對(duì)照組比較,*P<0.05;與模型組比較,#P<0.05。

    3.5 御風(fēng)膠囊對(duì)凝血時(shí)間的影響

    模型組的凝血時(shí)間明顯縮短,與空白組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),御風(fēng)膠囊組的凝血時(shí)間延長(zhǎng),與模型組比較有統(tǒng)計(jì)意義(P<0.05)。結(jié)果見(jiàn)表4。

    表4 御風(fēng)膠囊對(duì)凝血時(shí)間的影響

    注:與空白對(duì)照組比較,*P<0.05;與模型組比較,#P<0.05。

    4 討論

    中風(fēng)病(腦卒中)從2009年來(lái)已成為我國(guó)第一位死因,嚴(yán)重威脅著人們的生命健康。具有高發(fā)病率、高死亡率和高致殘率等特點(diǎn),在存活下來(lái)的患者中,僅有10%左右能完全恢復(fù)正常功能,絕大多數(shù)患者都遺留有偏癱、失語(yǔ)等后遺癥,中風(fēng)的康復(fù)研究是當(dāng)今醫(yī)學(xué)界矚目的重大課題[4]。中風(fēng)的病機(jī)特點(diǎn)為陰陽(yáng)失調(diào)、氣機(jī)紊亂、痰瘀阻滯。氣血虧虛是中風(fēng)先兆發(fā)病基礎(chǔ)之一。御風(fēng)膠囊是以補(bǔ)陽(yáng)還五湯[5]為基礎(chǔ)加減而成,由黃芪、當(dāng)歸、 川芎、 天麻、 赤芍、丹參、制遠(yuǎn)志7味中藥組成,諸藥相互配伍,具有補(bǔ)氣養(yǎng)血、通脈活絡(luò)之功效,用于中風(fēng)病中經(jīng)絡(luò)癥。同時(shí)藥效學(xué)證實(shí)“御風(fēng)膠囊”具有抑制血小板聚集和血栓形成、降低血液黏度、降低血清總膽固醇和低密度脂蛋白、抗脂質(zhì)過(guò)氧化等作用。

    本實(shí)驗(yàn)研究所選擇的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物造模方法為國(guó)內(nèi)外所認(rèn)可的經(jīng)典造模方法,所選取的實(shí)驗(yàn)指標(biāo)腦組織含水量、腦組織病理形態(tài)學(xué)、血小板聚集率、頸動(dòng)脈體內(nèi)血栓、凝血時(shí)間均為抗腦缺血?jiǎng)游飳?shí)驗(yàn)的經(jīng)典方法,而且也是臨床上常用的針對(duì)腦缺血中風(fēng)患者的檢查指標(biāo)。

    實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,御風(fēng)膠囊對(duì)模型實(shí)驗(yàn)大鼠具有顯著的抗腦缺血作用,對(duì)中風(fēng)病有一定的預(yù)防和保護(hù)作用。

    [1] 李儀奎.中藥藥理試驗(yàn)方法學(xué)[M].上海:上海科學(xué)技術(shù)出版社,2006:10.

    [2] 徐叔云.藥理試驗(yàn)方法學(xué)[M].北京:北京人民衛(wèi)生出版社,2002:1.

    [3] 陳奇.中藥藥理研究方法學(xué)[M].北京:北京人民衛(wèi)生出版社,2006:1.

    [4] 王晶,廖曉凌,王伊龍,等.2014年美國(guó)國(guó)際卒中大會(huì)熱點(diǎn)回顧[J].中國(guó)卒中雜志,2014,9(4):269-271.

    [5] 楊佳昕,海英.王清任補(bǔ)陽(yáng)還五湯治療中風(fēng)病文獻(xiàn)研究[J].實(shí)用中醫(yī)內(nèi)科雜志,2014,6(11):10-11.

    PharmacodynamicsStudyofYufengCapsuleintheTreatmentofCerebralIschemia

    XU Gui-jun1, WANG Wen-zhi1, XU Li-li1, ZHANG Zhe-yuan1, SUN Zhong-ren2*

    (1.TheSecondAffiliatedHospitalofHeilongjiangUniversityofChineseMedicine,Harbin150001,China;2.HeilongjiangUniversityofChineseMedicine,Harbin150040,China)

    Objective: To explore the therapeutic effect of Yufeng capsule in the treatment of cerebral ischemia in rats. Methods: The successful models were randomly divided into the blank control group, the model group, the positive control group, and Yufeng capsule group. Water content and pathomorphology of the brain tissue, platelet aggregation rate, carotid thrombosis, and blood clotting time were observed to evaluate the effect of Yufeng capsule. Results: The therapy of Yufeng capsule can obviously improve the above indicators when compared to those of the model group. Conclusion: Yufeng capsule has a very good therapeutic effect on cerebral ischemia in rats.

    Yufeng capsule; Cerebral ischemia; Pharmacodynamics study

    R285.5

    A

    1002-2406(2017)06-0045-03

    全國(guó)中藥特色技術(shù)傳承人才培訓(xùn)項(xiàng)目(2015)

    許貴軍(1975-),男,博士,副主任藥師,碩士研究生導(dǎo)師,黑龍江省中藥特色技術(shù)傳承人才,主要研究方向:新制劑新劑型研究。

    孫忠人*(1960-),男,教授,博士研究生導(dǎo)師,博士后合作指導(dǎo)教師,主要研究方向:針灸防治中風(fēng)病的研究;經(jīng)穴療效客觀化的神經(jīng)生物學(xué)基礎(chǔ)研究;針?lè)ň姆ㄑ芯浚簧窠?jīng)功能障礙的針康法治療。

    2016-09-01

    修回日期:2016-09-10

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