復(fù)方中藥治療流行性腹瀉病毒感染豬的消化道黏膜電鏡觀察及相關(guān)酶檢測

楊云喬+鄭建高+姜軍華+黃旭偉+湯里平+尚秋辰+謝鑫峰+張友敏+金文杰+許小琴

摘要：選取12～20日齡感染流行性腹瀉病毒腹瀉豬，采用復(fù)方中藥和西藥抗生素進行臨床治療，治療結(jié)束后取胃底部、十二指腸中段、空腸中段、回腸中段和結(jié)腸中段，通過場發(fā)射掃描電鏡和透射電鏡對比觀察消化道病變；取回腸，通過免疫組化法檢測琥珀酸脫氫酶、單胺氧化酶、5′-核苷酸酶和Na+-K+-ATP酶活性變化。場發(fā)射掃描電鏡觀察結(jié)果表明，中藥治療豬未見異常，西藥治療豬十二指腸黏膜表面見少量黏附的大腸桿菌。透射電鏡觀察結(jié)果表明，中藥治療豬細胞結(jié)構(gòu)接近正常，無嚴重細胞損傷，但細胞微絲管、骨架等結(jié)構(gòu)不如健康豬清晰；西藥治療豬消化道可見內(nèi)質(zhì)網(wǎng)損傷，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體斷裂，核形態(tài)和核染色質(zhì)異常。琥珀酸脫氫酶、單胺氧化酶和Na+-K+-ATP酶檢測結(jié)果均為中藥治療豬酶活性顯著高于西藥治療豬。由結(jié)果可以推測，復(fù)方中藥治療豬流行性腹瀉的良好效果可能與保護線粒體、穩(wěn)定細胞結(jié)構(gòu)、穩(wěn)定膜結(jié)構(gòu)、調(diào)整酶活性和抗繼發(fā)感染有關(guān)。

關(guān)鍵詞：豬流行性腹瀉；復(fù)方中藥；消化道黏膜；電鏡觀察；琥珀酸脫氫酶；單胺氧化酶；Na+-K+-ATP酶

中圖分類號： S858.285.3文獻標志碼： A文章編號：1002-1302（2017）17-0159-05

通信作者，許小琴，博士，教授，主要從事中獸醫(yī)學相關(guān)研究。E-mail：xuxq@yzu.edu.cn。豬流行性腹瀉（porcine epidemic diarrhea，簡稱PED）是豬病毒性腹瀉病，可引起仔豬高死亡率、成年豬掉膘和飼料報酬率降低，給養(yǎng)豬業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟損失。目前對PED的防治主要通過接種疫苗、注射卵黃抗體和應(yīng)用傳統(tǒng)西藥，但效果較差，因此，應(yīng)用中藥治療PED成為熱門的研究方向。筆者所在實驗室之前的研究結(jié)果（未見刊）表明，中藥治療組平均442 d治愈，治愈率達86.67%，復(fù)發(fā)率為0，體質(zhì)量最大下降0.59%，11 d增質(zhì)量22.44%；西藥對照組平均4.91 d治愈，治愈率達84.61%，復(fù)發(fā)率為7.69%，體質(zhì)量最大下降508%，與中藥組相比差異性極顯著（P<0.01），11 d增質(zhì)量20.94%，證實復(fù)方中藥治療可使豬群在PED疫情出現(xiàn)時較西藥療法掉膘少、恢復(fù)快、復(fù)發(fā)率低和增質(zhì)量迅速穩(wěn)定，從而減少養(yǎng)殖損失，本試驗將探究其作用機制。

1材料與方法

1.1試驗材料

1.1.1藥物、試劑和儀器中藥材：80 g白頭翁、80 g黃芩、50 g秦皮、60 g黨參、50 g蒼術(shù)、30 g甘草、40 g當歸、50 g肉桂、50 g厚樸、60 g訶子、50 g山楂，均購自江蘇省溧陽市時珍中醫(yī)藥有限公司。

慶大霉素、環(huán)丙沙星、乙酰甲喹、林可霉素，均購自上海公誼獸藥廠。

抗體試劑：Mouse/Porcine 5′-Nucleotidase/CD73 Affinity Purified PAb（25 μg）、Donkey Anti-Sheep IgG HRP Affinity Purified PAb（1 mL），均購自美國R&D Systems Inc；ANTI-Na+/K+ATPASE，α1 50 μg，購自德國達姆施塔特默克集團；Mouse IHC Kit[免疫組化試劑盒（一抗小鼠來源）]、Rabbit IHC Kit[免疫組化試劑盒（一抗兔來源）]，均購自中國福麥斯生物技術(shù)有限公司；琥珀酸脫氫酶復(fù)合體B亞基抗體（SDHB Antibody）（FL-280）、單胺氧化酶A/B抗體（MAO-A/B Antibody）（H-50），均購自美國Santa Cruz公司。

儀器：RM2016輪轉(zhuǎn)式切片機、13395H2X顯微鏡和EM CPD300全自動臨界點干燥儀，均購自德國萊卡集團；108Auto高性能離子濺射儀，購自英國Cressington Scientific Instruments Ltd；S-4800II場發(fā)射掃描電鏡，購自日本日立集團；CM100透射電子顯微鏡，購自荷蘭飛利浦集團；101C-2型電熱鼓風干燥箱，購自上海昕儀儀器儀表有限公司；BCD-290 W冰箱，購自中國海爾集團。

1.1.2試驗動物選擇江蘇省溧陽市某豬場仔豬按常規(guī)免疫程序接種疫苗的12～20日齡腹瀉仔豬，取肛門拭子經(jīng)揚州大學微生物實驗室檢測，豬流行性腹瀉病毒檢出率為40%，豬輪狀病毒和豬傳染性胃腸炎病毒均為陰性。

選擇1頭江蘇省儀征市某無腹瀉疾病流行史豬場23日齡健康仔豬，取肛門拭子經(jīng)揚州大學微生物實驗室檢測，豬流行性腹瀉病、豬輪狀病毒、豬傳染性胃腸炎病毒均為陰性，作為健康對照豬。

1.2試驗方法

1.2.1分組和用藥情況從溧陽市該豬場取56頭腹瀉仔豬按同窩，以及質(zhì)量、日齡相近的原則分成2組，其中30頭用中藥治療，26頭用西藥治療。復(fù)方中藥加水煎煮2次合并濾液濃縮到 1 000 mL 后灌服，0.75 mL/kg，2次/d，使用前加熱至25～30 ℃；西藥則肌肉注射0.75 mL/kg慶大霉素、0.75 mL/kg 林可霉素、0.15 mL/kg乙酰甲喹（豬場獸醫(yī)習慣用法）。

1.2.2采樣方法各取1頭經(jīng)過中藥治療和西藥治療5 d后基本痊愈的豬[治療前豬流行性腹瀉病毒（PEDV）檢測呈陽性]，另取1頭治療失敗的豬（治療前PEDV檢測呈陽性，西藥治療5 d后改用中藥治療3 d，病情未出現(xiàn)好轉(zhuǎn)）和1頭健康的豬，放血撲殺解剖。每頭豬各取胃底部、十二指腸中段、空腸中段、回腸中段和結(jié)腸中段，用4 ℃磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗干凈腸道內(nèi)容物和黏膜面上的黏液，隨后用雙面刀片切成1 mm×1 mm大小的樣品，用2.5%戊二醛固定，供電鏡觀察。每頭豬取回腸中段2 cm，用10%中性福爾馬林固定并制成蠟塊，供免疫組化檢測。

1.2.3場發(fā)射掃描電鏡觀察黏膜組織經(jīng)PBS清洗后，乙醇梯度脫水、臨界點干燥、粘樣、噴金，置于S-4800Ⅱ場發(fā)射掃描電鏡上觀察腸道黏膜上皮細胞表面的超微結(jié)構(gòu)。endprint

1.2.4透射電鏡觀察黏膜組織經(jīng)PBS清洗后，經(jīng)鋨酸固定、清洗、脫水、包埋、切片、染色，用透射電鏡CM-100（80 kV）觀察腸道黏膜上皮細胞的細胞器結(jié)構(gòu)損傷變化。

1.2.5免疫組化二氨基聯(lián)苯胺（DAB）顯色檢測消化道酶的含量變化組織制成蠟塊后進行切片、常規(guī)脫蠟、滅活、抗原修復(fù)、加一抗、加二抗、DAB顯色，每張切片設(shè)未加一抗的陰性對照。從每張切片中選取5個典型視野并拍照，用Image-Pro Plus 5.0.1圖像分析系統(tǒng)對指定檢測的酶進行定量分析，結(jié)果以平均光密度值（MOD）表示。

抗體條件：琥珀酸脫氫酶復(fù)合體B亞基檢測，一抗選用200倍稀釋的SDHB Antibody（FL-280），二抗和DAB顯色系統(tǒng)選用Rabbit IHC Kit[免疫組化試劑盒（一抗兔來源）]。單胺氧化酶檢測，一抗選用100倍稀釋的MAO-A/B Antibody（H-50），二抗和DAB顯色系統(tǒng)選用Rabbit IHC Kit[免疫組化試劑盒（一抗兔來源）]。5′-核苷酸酶檢測，一抗選用300倍稀釋的Mouse/Porcine 5′-Nucleotidase/CD73 Affinity Purified PAb（25 μg），二抗選用400倍稀釋的Donkey Anti-Sheep IgG HRP Affinity Purified PAb（1 mL），DAB顯色系統(tǒng)選用Rabbit IHC Kit[免疫組化試劑盒（一抗兔來源）]。Na+-K+-ATP酶檢測，一抗選用300倍稀釋的ANTI-NA+/K+ATPASE，α1 50 μg，二抗和DAB顯色系統(tǒng)選用Mouse IHC Kit[免疫組化試劑盒（一抗小鼠來源）]。

1.3數(shù)據(jù)分析

本試驗所有數(shù)據(jù)均采用SPSS 20.0軟件統(tǒng)計，并進行方差分析，統(tǒng)計結(jié)果以“平均值±標準差”表示，P<0.05表示差異性顯著。

2結(jié)果與分析

2.1場發(fā)射掃描電鏡觀察結(jié)果

中藥治療豬：消化道黏膜未見異常損傷，腸黏膜細胞微絨毛長度一致，排列整齊、均勻、致密（圖1-a、圖2-a）。

西藥治療豬：十二指腸黏膜微絨毛頂端出現(xiàn)不同程度的膨大，黏膜面偶見少量大腸桿菌，單個或成團?？漳c黏膜微絨毛略為稀疏，其他未見異常（圖1-b、圖2-b）。

治療失敗豬：胃黏膜上皮細胞短棒狀微絨毛和小隆起消失。十二指腸黏膜微絨毛頂端出現(xiàn)不同程度的膨大?？漳c微絨毛雖沒西藥治療豬空腸微絨毛稀疏，但是微絨毛頂端分叉、膨大，而且黏液較多?；啬c黏膜上覆蓋著大量大腸桿菌（圖1-c）。結(jié)腸黏膜有損傷，隱窩數(shù)量減少，隱窩凹陷加深、直徑增大（圖2-c）。

健康豬：和中藥治療豬類似，消化道黏膜未見異常損傷，腸黏膜細胞微絨毛長度一致，但細節(jié)較多，黏膜表面結(jié)構(gòu)更為清晰（圖1-d、圖2-d）。

2.2透射電鏡觀察結(jié)果

中藥治療豬：胃黏膜細胞無明顯病變，膜結(jié)構(gòu)清晰，核形態(tài)正常。十二指腸黏膜細胞微絨毛排列緊密，結(jié)構(gòu)清晰，長度一致，微絨毛基底清晰完整，胞內(nèi)結(jié)構(gòu)完整，無明顯病變。空腸和回腸黏膜細胞微絨毛結(jié)構(gòu)完整，細胞間結(jié)構(gòu)區(qū)分性良好，細胞核多呈圓形，細胞核多呈圓形，細胞微絲管、骨架等結(jié)構(gòu)清晰度優(yōu)于西藥治療豬，但偶見巨噬細胞，少量線粒體出現(xiàn)損傷。中藥治療豬結(jié)腸出現(xiàn)黑色泡狀物體，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)緊貼細胞核，膜結(jié)構(gòu)清晰完整。

西藥治療豬：胃無明顯病變。十二指腸上皮細胞偶見內(nèi)質(zhì)網(wǎng)破裂。空腸和回腸偶見內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腫脹、間隙增寬，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體出現(xiàn)斷裂，核形態(tài)和核染色質(zhì)異常。結(jié)腸偶見核膜不清晰和染色質(zhì)異常。

治療失敗豬：胃黏膜細胞表面凸起脫落，黏膜損傷嚴重。胞內(nèi)可見凋亡小體，線粒體形態(tài)不規(guī)則、崩解，核糖體從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)脫落，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腫脹，核呈多形性，出現(xiàn)巨核、雙核、多核或奇異形的核，核膜完整性降低。十二指腸黏膜細胞微絨毛偶見損傷，胞內(nèi)膜結(jié)構(gòu)模糊，底部可見大量線粒體聚集，部分線粒體出現(xiàn)破裂，下層胞內(nèi)可見凋亡小體，膜結(jié)構(gòu)完整性降低，胞間出現(xiàn)融合現(xiàn)象。空腸黏膜細胞胞漿內(nèi)可見典型冠狀病毒顆粒，直徑120 nm（圖3-a，箭頭所示），呈圓形、橢圓形或梭形，纖突長而稀疏，有1個電子透明中心，同時可見未組裝成熟的病毒粒子，微絨毛變短、散亂、脫落，基底完整性差（圖3-b），細胞膜出現(xiàn)斷裂，胞內(nèi)出現(xiàn)多量空泡，偶見大量黑色顆粒聚集，圍繞細胞核或在核旁一側(cè)，組織深層可見大量炎癥細胞浸潤，以淋巴細胞為主，并有大量漿細胞和少量嗜酸粒細胞?；啬c細胞出現(xiàn)核濃縮、核碎裂（圖4-a），微絨毛上黏附大量大腸桿菌（圖4-b），黏膜面可見吞噬細胞。結(jié)腸黏膜細胞線粒體損傷、破碎，胞內(nèi)可見凋亡小體，微絨毛稀疏、變短，并出現(xiàn)分泌腺泡損傷。

健康豬：胃黏膜細胞結(jié)構(gòu)完好，細胞內(nèi)微絲管、細胞骨架比其他3頭豬多，核多呈圓形、橢圓形或梭形。十二指腸黏膜細胞下層線粒體數(shù)量較多，細胞內(nèi)微絲管、細胞骨架等結(jié)構(gòu)較其他3頭豬明顯。空腸和回腸黏膜細胞線粒體大小相近，無線粒體腫脹現(xiàn)象，細胞內(nèi)多種膜結(jié)構(gòu)清晰可見，核膜完整，核大小相近，微絨毛排列緊密一致，基底部完整性良好。結(jié)腸未見異常。

2.3免疫組化DAB顯色檢測回腸多種酶含量的變化

由表1可知，各組4種酶活性均有不同程度的變化，且所有陰性對照無陽性信號。琥珀酸脫氫酶（succinate dehydrogenase，簡稱SDH）主要表達在黏膜下層基底部，細胞漿內(nèi)偶見陽性信號（圖5），健康豬的琥珀酸脫氫酶活性高于中藥治療豬，兩者差異不顯著，中藥治療豬、西藥治療豬和治療失敗豬的琥珀酸脫氫酶活性依次遞減，且健康豬、中藥治療豬與西藥治療豬、治療失敗豬之間的酶活性差異顯著（P<005）。單胺氧化酶主要表達在黏膜下層基底部，細胞漿內(nèi)偶見陽性信號，健康豬的單胺氧化酶活性高于中藥治療豬，兩者差異不顯著，中藥治療豬、西藥治療豬和治療失敗豬的單胺氧化酶活性依次遞減，且健康豬、中藥治療豬與西藥治療豬、治療失敗豬之間的酶活性差異極顯著（P<0.01）。5′-核苷酸酶主要表達在細胞漿內(nèi)，健康豬、中藥治療豬、西藥治療豬和治療失敗豬的5′-核苷酸酶活性依次遞減，組間差異不顯著。Na+-K+-ATP酶主要表達在細胞漿內(nèi)， 細胞膜表達量表1復(fù)方中藥和西藥治療流行性腹瀉病毒感染豬的回腸多種酶活性（MOD）變化情況endprint

較少。健康豬、中藥治療豬、西藥治療豬和治療失敗豬的 Na+-K+-ATP酶活性依次遞減，且健康豬、中藥治療豬與西藥治療豬、治療失敗豬之間的酶活性差異極顯著（P<0.01）。

3討論

PEDV感染細胞后，利用宿主細胞的物質(zhì)基礎(chǔ)進行復(fù)制活動，細胞出現(xiàn)應(yīng)激反應(yīng)：核染色質(zhì)增多、細胞質(zhì)內(nèi)核蛋白顆粒和核糖體數(shù)量增加、細胞活力和功能增強，以維護自身系統(tǒng)代謝所需。隨著疾病發(fā)展，病毒對宿主細胞結(jié)構(gòu)造成損傷，出現(xiàn)核濃縮、核碎裂等病理形態(tài)，導(dǎo)致細胞凋亡，呈現(xiàn)腸黏膜損傷，微絨毛變短、斷裂、散亂，基底完整性降低，線粒體腫脹、溶解、崩解、破裂、脊結(jié)構(gòu)模糊或消失。遇秀玲等的研究結(jié)果表明，PEDV病毒粒子存在于胞漿內(nèi)而不是核內(nèi)[1]。趙珊珊的研究表明，豬傳染性胃腸炎病毒（TGEV）強毒株導(dǎo)致IPEC-J2細胞發(fā)生嚴重病變，廣泛引起細胞微絨毛散亂、脫落、部分膨大形成蘑菇化，細胞微結(jié)構(gòu)和骨架散亂、消失，細胞內(nèi)部線粒體、高爾基體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等雙層膜結(jié)構(gòu)消失而出現(xiàn)空泡狀或“U”形的單層膜結(jié)構(gòu)，細胞核體積變大、內(nèi)外核膜分離、核固縮[2]。高君愷的研究表明，PEDV感染豬小腸上皮細胞后可影響微絲管等細胞骨架，影響相鄰細胞的緊密連接[3]。本試驗結(jié)果與上述研究的結(jié)果一致。

根據(jù)筆者實驗室此前的研究結(jié)果（尚未發(fā)表），取經(jīng)腹腔注射大腸桿菌O101株后急性死亡的小鼠小腸組織進行掃描電鏡觀察，可見小腸絨毛上皮細胞嚴重剝落，基底部暴露，損傷嚴重；取自然感染犬細小病毒后急性死亡的幼犬小腸進行掃描電鏡觀察，同樣可見上述類似病理變化。本試驗未出現(xiàn)類似病變，而且腸微絨毛也有較為完整的區(qū)域，掃描電鏡下可見微絨毛頂端雖有損傷但長度和其他組相比無明顯縮短，推測可能是由于治療失敗組的豬解剖時已經(jīng)是出現(xiàn)腹瀉癥狀的第8天，屬于轉(zhuǎn)歸期，而且經(jīng)過中藥治療，方劑的君藥白頭翁具有一定的黏膜修復(fù)作用[4]，因此腸黏膜損傷情況可以得到減緩，或損傷的黏膜細胞已經(jīng)重新長出。另外，一般來說豬流行性腹瀉引起仔豬病變僅限于小腸[5]，且沒有直接證據(jù)證明PEDV亞洲株病毒可以在結(jié)腸中復(fù)制[6]。但本試驗中，治療失敗豬的結(jié)腸中同樣存在著嚴重的病變。這可能是因為治療失敗豬病程較長，消化酶活性的降低和脫落的黏膜細胞及內(nèi)容物腐敗發(fā)酵，腸腔內(nèi)pH值和濃度發(fā)生改變，當變質(zhì)的內(nèi)容物流經(jīng)并持續(xù)刺激結(jié)腸時，即引起結(jié)腸黏膜損傷。中藥治療豬的腸黏膜細胞器病理損傷情況以及細胞微絲管、骨架等結(jié)構(gòu)清晰度優(yōu)于西藥治療豬，但不如健康豬，可推測中藥治療豬預(yù)后良好，完全康復(fù)還需一段時間，而西藥治療豬有復(fù)發(fā)的可能。

琥珀酸脫氫酶在真核生物中結(jié)合于線粒體內(nèi)膜，可為真核細胞線粒體需氧和產(chǎn)能的呼吸鏈提供電子，其比活性可以反映細胞氧化磷酸化供能情況，是三羧酸循環(huán)運行的評價指標，即SDH活性越高，線粒體產(chǎn)生三磷酸腺苷（ATP）的能力越強[7-10]。消化道是機體重要的器官，體積大，血管網(wǎng)絡(luò)豐富，集分泌、肌肉運動、消化、吸收等物質(zhì)交換活動和免疫功能于一體，所需能量要求較高。本試驗結(jié)果顯示，琥珀酸脫氫酶復(fù)合體B亞基蛋白主要表達在黏膜下層基底部，細胞漿內(nèi)偶見陽性信號，健康豬的酶活性高于中藥治療豬，兩者差異不顯著，中藥治療豬、西藥治療豬和治療失敗豬的琥珀酸脫氫酶活性依次遞減，且健康豬、中藥治療豬與西藥治療豬、治療失敗豬之間的酶活性差異顯著（P<0.05）。可知，仔豬感染PEDV后回腸ATP產(chǎn)能降低，治療后有所好轉(zhuǎn)。中藥治療豬回腸SDH活性比西藥治療豬高，這可能與復(fù)方中藥具有線粒體保護作用有關(guān)。

生物體內(nèi)的單胺系含有苯乙胺結(jié)構(gòu)的化合物。主要有多巴胺、5-羥色胺、去甲腎上腺素、β-苯乙胺、腎上腺素和酪氨酸等，它們許多都具有較強的生理活性。單胺氧化酶可使多種胺類氧化脫氨，從而具有調(diào)節(jié)生物體內(nèi)胺濃度的功能。MAO廣布于體內(nèi)多種組織器官，尤以肝、腎、胃和小腸中含量最多[11-15]。本試驗結(jié)果顯示，健康豬的MAO活性高于中藥治療豬，兩者差異不顯著，中藥治療豬、西藥治療豬和治療失敗豬的MAO活性依次遞減，且健康豬、中藥治療豬與西藥治療豬、治療失敗豬之間的酶活性差異極顯著（P<0.01）。治療失敗豬和西藥治療豬回腸MAO活性極顯著低于健康豬，導(dǎo)致單胺類物質(zhì)體內(nèi)聚集過多，出現(xiàn)精神和生理的異常，如狂躁、精神緊張、呼吸系統(tǒng)和消化系統(tǒng)紊亂等現(xiàn)象[16-17]，造成耗能過多，影響治療。

Na+-K+-ATP酶是存在于細胞及細胞器生物膜上的一種蛋白酶，它能夠水解ATP為二磷酸腺苷（ADP），釋放磷酸基而產(chǎn)生能量。Na+-K+-ATP酶在物質(zhì)運送、能量轉(zhuǎn)換、信息傳遞、維持細胞膜的完整及組織代謝等方面具有重要作用，可作為代謝紊亂和損傷組織恢復(fù)能力評價的可靠指標。腸黏膜屏障結(jié)構(gòu)和功能的完整很大程度上依賴Na+-K+-ATP酶來維持，因此，腸黏膜細胞Na+-K+-ATP酶活性亦能間接反映腸黏膜的屏障功能。仝鋼等用TGEV感染豬小腸黏膜上皮細胞，發(fā)現(xiàn)攻毒組Na+-K+-ATP酶活性與對照組相比顯著降低[18]。張貴海發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌細胞Na+-K+-ATP酶活性下降從而提高侵襲力[19]。范穎等認為，黃芪、黃芪黃酮及含黃芪黃酮的有效部位能夠降低糖尿病大鼠的血糖，其機制可能與改善Na+-K+-ATP酶活性、上調(diào)一磷酸腺苷依賴的蛋白激酶（AMPK）水平及蛋白表達有關(guān)[20]。本試驗檢測結(jié)果顯示，Na+-K+-ATP酶α1亞蛋白主要在細胞漿內(nèi)表達，細胞膜表達量較少，健康豬、中藥治療豬、西藥治療豬和治療失敗豬的Na+-K+-ATP酶活性依次遞減，且健康豬、中藥治療豬與西藥治療豬、治療失敗豬之間的酶活性差異極顯著（P<0.01），結(jié)合場發(fā)射掃描電鏡結(jié)果，表明中藥治療PEDV感染豬可通過調(diào)整Na+-K+-ATP酶活性、穩(wěn)定膜結(jié)構(gòu)以發(fā)揮作用。因此，中藥治療豬出現(xiàn)良好的抗繼發(fā)感染效果，西藥治療豬則無此作用，復(fù)發(fā)和繼發(fā)感染的概率較大。

5′-核苷酸酶有多種類型，目前發(fā)現(xiàn)的有6種，即膜結(jié)合性5′-核苷酸酶、胞漿-5′-核苷酸酶Ⅰ型、胞漿-5′-核苷酸酶Ⅱ型、胞漿-5′（3′）脫氧核糖核苷酸酶、線粒體-5′-核苷酸酶和僅存在于紅細胞中的嘧啶核苷酸酶[21-23]。5′-核苷酸酶不僅具有水解酶的活性，而且具有重要的非水解酶活性，在細胞生長發(fā)育、運動、纖維蛋白合成、神經(jīng)傳遞、提高表皮或內(nèi)皮屏障功能及淋巴細胞的黏附、再循環(huán)、免疫應(yīng)答等方面均發(fā)揮重要的作用[24]。本試驗結(jié)果顯示，5′-核苷酸酶主要在細胞漿內(nèi)表達，健康豬、中藥治療豬、西藥治療豬和治療失敗豬的5′-核苷酸酶活性依次遞減，組間無顯著性差異，說明PEDV雖然對細胞結(jié)構(gòu)和細胞連接有明顯的損傷，但可能與5′-核苷酸酶的關(guān)聯(lián)性不高，需要進一步研究。endprint

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