楊梅莖段不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)研究

付維++包嘉順++賀金立++劉清波

摘要 以楊梅的莖段為外植體在WPM培養(yǎng)基上進(jìn)行不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)，研究外植體消毒滅菌方法及不同植物生長調(diào)節(jié)劑的含量及組合對莖段不定芽誘導(dǎo)的影響。結(jié)果表明，用70%酒精消毒1 min，再用0.1%氯化汞溶液消毒15 min，消毒滅菌效果好。在WPM+6-BA 1 mg/L+IBA 0.1 mg/L培養(yǎng)基上出芽率和莖伸長效果最好。

關(guān)鍵詞 楊梅；不定芽；消毒時(shí)間；出芽率

中圖分類號(hào) S662.4 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-5739（2017）19-0062-02

楊梅（Myrica rubra）產(chǎn)自我國東南部以及云貴高原，是楊梅科楊梅屬植物。全球98%以上的楊梅產(chǎn)自中國[1]。楊梅果實(shí)味道鮮美，營養(yǎng)豐富，具有很高的食用和藥用價(jià)值。除此之外，楊梅還具有生態(tài)效益和經(jīng)濟(jì)效益，是生態(tài)林的優(yōu)良品種，具有生物防火的作用[2]。利用不定芽的組織培養(yǎng)方式，能使楊梅的生長繁殖速度加快，成活率增加。在一定程度上，解決了常規(guī)育苗技術(shù)所不能滿足的生產(chǎn)上大規(guī)模的需求[3-4]?，F(xiàn)以楊梅的莖段為外植體在WPM培養(yǎng)基上進(jìn)行不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)，研究外植體消毒滅菌方法及不同植物生長調(diào)節(jié)劑的含量及組合對莖段不定芽誘導(dǎo)的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

楊梅的試驗(yàn)材料取自于湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)，分別于2015年3—5月和2016年3—5月進(jìn)行取材。此時(shí)采用楊梅樹新梢作試驗(yàn)材料，其內(nèi)生菌較少，更利于減少不定芽的培養(yǎng)過程中由內(nèi)生菌引起的污染。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 外植體滅菌與接種。將試驗(yàn)材料去除葉片后切成3～4 cm莖段，先用洗衣粉或84消毒液清洗15～20 min，再用自來水沖洗10 min。在超凈工作臺(tái)上進(jìn)行不同方法滅菌消毒試驗(yàn)，先用70%酒精滅菌，無菌水沖洗3次后再用0.1%氯化汞進(jìn)行滅菌，之后無菌水再清洗3次。分別將70%酒精消毒時(shí)間設(shè)置為1、2、4 min，0.1%氯化汞消毒時(shí)間設(shè)置為10、15 min進(jìn)行組合（表1），比較不同消毒試劑與消毒時(shí)間對材料的影響。滅菌后將材料置于無菌吸水紙上，用解剖刀切除兩端，制成3 cm左右的莖段外植體，接種于培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。

1.2.2 培養(yǎng)基的選擇。根據(jù)廖雪竹[5]的研究方法，本試驗(yàn)選擇采用WPM培養(yǎng)基作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，WPM培養(yǎng)基較常用的MS培養(yǎng)基更利于莖段的不定芽誘導(dǎo)。將制備好的外植體先置于WPM+7.5 g/L瓊脂+30%蔗糖的基礎(chǔ)培養(yǎng)基上（pH值5.8）培養(yǎng)7 d，統(tǒng)計(jì)其污染率，然后再將無菌材料移入含有不同激素組合的誘導(dǎo)生芽培養(yǎng)基中進(jìn)行生長，觀察統(tǒng)計(jì)外植體出芽率。

設(shè)計(jì)5組不同的激素含量與配比組成的培養(yǎng)基，比較研究其對楊梅不定芽誘導(dǎo)的影響。培養(yǎng)基激素配比如下：WPM+6-BA 0.5 mg/L+IBA 0.05 mg/L；WPM+6-BA 1 mg/L+IBA 0.05 mg/L；WPM+6-BA 1 mg/L+IBA 0.1 mg/L；WPM+6-BA 1.5 mg/L+IBA 0.15 mg/L；WPM+6-BA 2 mg/L+IBA 0.1 mg/L。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同外植體滅菌方法效果比較

木本植物莖段因多年生且木質(zhì)化程度高，因此存在難以消毒的情況，楊梅更是如此。本試驗(yàn)小組為研究其有效的消毒方法，歷時(shí)整整1年。結(jié)果表明，先用洗衣粉或84消毒液清洗后，再用70%乙醇處理1 min，0.1%氯化汞消毒15 min的情況下，可達(dá)到比較理想的消毒效果。70%乙醇滲透力較強(qiáng)，若處理時(shí)間過長，會(huì)導(dǎo)致外植體褐化率增高。而0.1%氯化汞處理時(shí)間過短，會(huì)導(dǎo)致消毒不徹底，污染率高（表1）。

2.2 不同激素組合培養(yǎng)基對不定芽誘導(dǎo)的影響

細(xì)胞分裂素與生長素的含量及比例對外植體不定芽的誘導(dǎo)有很大的影響。本試驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)細(xì)胞分裂素為生長素10倍比例時(shí)培養(yǎng)基對不定芽誘導(dǎo)的效果比細(xì)胞分裂素為生長素20倍時(shí)效果更佳。1、3、4號(hào)培養(yǎng)基細(xì)胞分裂素為生長素10倍，2、5號(hào)培養(yǎng)基細(xì)胞分裂素為生長素20倍。而培養(yǎng)結(jié)果1、3、4號(hào)培養(yǎng)基誘導(dǎo)出芽率明顯高于2、5號(hào)培養(yǎng)基。此外，不同激素組合培養(yǎng)基對不定芽展葉情況也有一定的影響。本試驗(yàn)中最佳的培養(yǎng)基激素成分及含量為WPM+6-BA 1 mg/L+IBA 0.1 mg/L，該培養(yǎng)基不定芽誘導(dǎo)效果最好，且展葉率效果也達(dá)到最佳（圖1）。

3 結(jié)論與討論

楊梅莖段不定芽的誘導(dǎo)受多種因素的影響，如取材的時(shí)間、外植體消毒的方法、培養(yǎng)基的選擇、不同植物生長調(diào)節(jié)劑使用等，都對不定芽的誘導(dǎo)及生長影響顯著。本試驗(yàn)選擇在3—5月晴天取材，在初步清洗后，用70%乙醇處理1 min，再用0.1%氯化汞消毒15 min，達(dá)到了良好的滅菌效果。選擇WPM培養(yǎng)基，在激素為6-BA 1 mg/L+IBA 0.1 mg/L時(shí)培養(yǎng)基誘導(dǎo)楊梅產(chǎn)生不定芽效果良好。李曉強(qiáng)等[6]研究表明，為了防止污染與褐化，可在培養(yǎng)基中加入一定量的活性炭、PVP作為吸附劑，從而吸附木本植物易產(chǎn)生的酚類氧化物和有毒物質(zhì)，降低污染率和褐化率，但考慮到活性炭吸附能力過強(qiáng)，影響外植體對培養(yǎng)基營養(yǎng)成分的吸收，故本試驗(yàn)未采納此方法。曹 昆等[7]、姚紹嫦等[8]、楊正修等[9]研究表明，植物外植體誘導(dǎo)生不定芽的能力取決于培養(yǎng)基的激素種類和含量，特別是細(xì)胞分裂素和生長素的比例，細(xì)胞分裂素較生長素的比值大則效果明顯。這與本試驗(yàn)結(jié)果一致，但本試驗(yàn)表明，二者比例過大效果反而下降。潘 梅等[10]研究表明，在后期的培養(yǎng)過程中，應(yīng)給予適宜的溫度和光照強(qiáng)度，以便于外植體生長。

4 參考文獻(xiàn)

[1] 陳方永.中國楊梅產(chǎn)業(yè)現(xiàn)狀產(chǎn)業(yè)發(fā)展現(xiàn)狀、問題與對策淺析[J].中國果業(yè)信息，2012，29（7）：20-22.

[2] 孔梅，藍(lán)增全.云南野生楊梅快繁體系的建立[J].浙江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2015，56（10）：1557-1560.

[3] 付維，包嘉順，賀金立，等.楊梅快繁再生體系的建立綜述[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2017（5）：75-76.

[4] 倪照君，廖雪竹.楊梅地方品種“浪蕩子”組培快繁體系建立[J].中國南方果樹，2015，44（5）：59-62.

[5] 廖雪竹，倪昭君，高志紅.楊梅組織培養(yǎng)研究進(jìn)展[J].中國南方果樹，2015，44（2）：140-150.

[6] 李曉強(qiáng).楊梅組織培養(yǎng)技術(shù)研究[D].南寧：廣西大學(xué)，2010.

[7] 曹昆，李霞.木本植物組織培養(yǎng)不定芽誘導(dǎo)研究進(jìn)展[J].江蘇林業(yè)科技，2008，35（5）：43-48.

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[9] 楊正修，張學(xué)文，羅莎，等.黃花蒿離體再生體系優(yōu)化研究[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2017，56（6）：1161-1164.

[10] 潘梅，付瑞侃，戚華沙，等.黃花馬鈴苣苔不定芽高頻再生研究[J].種子，2017，36（1）：86-89.endprint