乙型肝炎患者T細胞亞群、IL—32水平的變化及其臨床意義分析

熊勛爵

【摘要】 目的：對不同程度乙型肝炎患者血液中的T細胞亞群、IL-32水平進行測定，比較其變化情況并探討其對血清免疫細胞的影響。方法：選取2016年3-12月來本院就診的120例不同程度乙型肝炎患者，同期40例健康體檢的志愿者作為對照組，采用流式細胞儀對T細胞亞群進行檢測，酶聯(lián)免疫吸附試驗測定IL-32細胞因子的水平，分別比較不同組別的變化情況。結(jié)果：乙型肝炎患者血液中CD4+T細胞的百分比及CD4+/CD8+比值均低于對照組，而CD8+T細胞亞群的百分比高于對照健康組，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。不同程度乙型肝炎組血清中IL-32的水平均高于對照組，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。結(jié)論：乙型肝炎患者細胞免疫功能呈現(xiàn)紊亂狀態(tài)，IL-32的水平明顯增高可能是參與免疫應答，T細胞亞群比例異常與肝臟的炎癥損傷程度具有相關(guān)性。

【關(guān)鍵詞】 乙型肝炎； T細胞亞群； IL-32水平

【Abstract】 Objective：To study the changes of T cell subsets and IL-32 levels in blood of different degrees hepatitis B patients，to compare and explore their effect on serum immune cells.Method：From March to December 2016，120 different degrees hepatitis B patients who were treated in our hospital were selected as observation group，40 healthy volunteers were selected as the control group.Test T cells subsets by flow cytometry instrument，and levels of IL-32 cytokines were measured by enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA），and the changes of different groups were compared.Result：The percentage of CD4+T cells and CD4+/CD8+ ratio in the blood of patients with hepatitis B were lower than those of control group，while the percentage of CD8+ T cells in the blood of patiensts with hepatitis B was higher than that of control group，the differences were statistically significant（P<0.05）；the serum IL-32 levels of different degrees hepatitis B patients were higher than those in cases of control group，the differences were statistic significant（P<0.05）.Conclusion：The cellular immune function of hepatitis B virus patients is in a disorder state，the increase of IL-32 levels may be related to the severity of inflammatory response，and the degree of T cell subsets ratio anomalies associated with inflammation damage degree of liver.

【Key words】 Hepatitis B； T-cell subsets； IL-32

First-authors address：Jingshan Renhe Hospital of Hubei Province，Jingmen 431899，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2017.25.031

乙型肝炎主要是由肝炎病毒群的雙螺旋環(huán)狀封閉DNA病毒引起的，是導致死亡最為常見的原因之一。該病具有病程較長久且易復發(fā)性等特點，發(fā)病率逐年呈現(xiàn)出大幅度增長趨勢，患病人群較廣，本病對患者正常生活及身心健康造成較嚴重影響[1]。有報道稱發(fā)揮關(guān)鍵的細胞是活化的Th細胞，目前較新發(fā)現(xiàn)的Th型細胞可能在肝炎發(fā)病進程中扮演重要作用，其被異常活化后釋放出大量的相關(guān)細胞因子主要包括IL-32及IL-23等，有研究報道其患者血清中Th細胞分泌炎癥細胞因子IL-32水平發(fā)生變化是引發(fā)肝炎的重要因素[2-3]。乙型肝炎病患者由于在機體內(nèi)的免疫功能呈現(xiàn)低下狀態(tài)、持續(xù)復制病毒可誘導機體產(chǎn)生各種細胞因子、炎性介質(zhì)及宿主免疫病理反應復雜作用，進一步最終造成大塊肝組織、肝細胞壞死，發(fā)展成重型乙型肝炎甚或肝功及多臟器能衰竭，病亡率較高，有報道稱可達到40%～60%，且預后性較差[4]。但其對肝細胞的損傷并不是直接的，間接性經(jīng)過誘發(fā)機體的免疫反應對肝細胞進行損傷。CD4+及CD8+是近來新發(fā)現(xiàn)的一種調(diào)節(jié)性T細胞?？赡馨庖邔W作用機制，與機體T淋巴細胞介導的異常免疫反應相關(guān)，研究報道肝炎病患者的外周血T淋巴細胞中包含CD4+、CD8+，隨著乙型肝炎嚴重程度不同，細胞水平不斷變化，對外周血中的T細胞亞群及其比例可較佳地反映機體免疫應答的變化，進行研究具有一定價值[5-6]。因此，以T淋巴細胞作用部位作為研究的關(guān)鍵靶點是目前的研究熱點。因此，本文也對患者治療后體內(nèi)血清中T細胞亞群、IL-32水平的變化進行了測定。endprint

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇本院在2016年3-12月住院的乙型肝炎攜帶患者120例，其中男66例，女54例，平均年齡（53.5±5.7）歲，經(jīng)臨床診斷及病理報告顯示均符合《病毒性肝炎防治方案》及2010年《乙型肝炎防治指南》診斷的相關(guān)診斷標準[7-8]。被入選患者在近幾個月內(nèi)曾未接受過抗病毒、保肝及免疫調(diào)節(jié)劑的相關(guān)治療，排除亞型肝炎病毒性感染，脂肪肝炎，酒精性肝炎及心血管類、自身免疫性疾病。在所有病例中28例急性乙型肝炎，92例慢性乙型肝炎（輕度型35例，中度型33例，重度型24例）。同時選取40例健康體檢志愿者為對照組，其中男22例，女18例，平均年齡（54.6±4.9）歲。兩組患者的一般資料比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準，所有入選者知情同意。

1.2 方法 對入選患者在空腹狀態(tài)下，用加入乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝劑的真空管抽取靜脈抽血10 mL，混勻防止凝結(jié)，進行血清分離，-80 ℃冷凍保存，待用。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗方法（試劑盒用上海聯(lián)碩生產(chǎn)的試劑盒）SEAC全自動酶標儀進行檢測，操作時參照其相關(guān)說明書。采用PAS流式細胞儀（德國Partec 公司生產(chǎn)）檢測T細胞亞群（檢測盒用上海億欣生物科技有限公司），采用CellQuest軟件進行分析測定免疫細胞CD4+、CD8+、CD4+/CD8+的水平并觀察比較其變化情況[9-11]，并檢測所有入選者乙型肝炎病毒標志物血清中IL-32、T細胞亞群相關(guān)指標。。

1.3 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 14.0軟件進行統(tǒng)計學分析，計量資料用（x±s）表示，比較采用t檢驗；計數(shù)資料以率（%）表示，比較采用 字2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 不同程度乙型肝炎病毒患者T細胞亞群水平與健康人群比較 急性乙型肝炎病毒患者及慢性乙型肝炎病毒患者血液中T細胞亞群血液中的CD4+的細胞百分比低于健康對照組，比較差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；且伴隨肝臟病變程度的加重，CD4+細胞的比例呈下降趨勢。感染乙型肝炎后患者的CD8+T細胞百分比高于健康對照組，比較差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05），且升高程度與肝臟的嚴重程度呈現(xiàn)正相關(guān)。慢性肝炎患者CD4+/CD8+比值均低于健康對照組，比較差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05），見表1。

2.2 不同程度乙型肝炎病毒患者與健康人群IL-32水平比較 酶聯(lián)免疫檢測細胞因子水平后結(jié)果顯示，急性乙型肝炎病毒患者IL-32為（528.1±102.7）pg/mL，慢性乙型肝炎病毒患者輕、中、重度分別為（159.0±53.1）、（330.5±43.2）、（491.9±89.7）pg/mL均高于健康對照組（86.3±52.4）pg/mL，比較差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。在急性乙肝組IL-32水平最高，慢性重度乙肝組其次，且隨病情嚴重度升高，比較差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。

3 討論

乙型肝炎簡稱乙肝作為人體一種常見肝臟病，均因感染乙型肝炎病毒HBV后引發(fā)，在我國該病的發(fā)病率高，是導致原發(fā)性肝癌最主要發(fā)病因素。據(jù)統(tǒng)計，中國感染乙型肝炎病毒約占全球乙肝患者總數(shù)的1/3，全球乙肝病毒感染病患有（3.5～4.0）億人，我國乙型肝炎感染率高達60%，目前每年有近50萬人死于肝炎引發(fā)的肝臟損害和肝癌，嚴重威脅人類健康及生活質(zhì)量[12-13]。發(fā)病率的逐漸上升，目前廣泛應用細胞毒性化療藥物治療此類病癥，但乙肝病毒感染的患者接受化療藥物、糖皮質(zhì)激素及免疫抑制劑時乙肝病毒再激活已成為臨床上較常見問題[14]。有報道稱乙型肝炎病可能是一種由細胞介導的免疫性疾病，是一種多種炎癥因子參與的炎癥反應并且與機體的免疫反應密切相關(guān)，淋巴細胞的介導作用作為細胞免疫功能紊亂造成乙型肝炎病變發(fā)展及預后的重要因素，其免疫細胞的調(diào)節(jié)作用在這一病理損傷過程中扮演重要作用[15-16]。研究顯示人體感染乙型肝炎病毒后機體免疫系統(tǒng)主要經(jīng)細胞免疫反應對其進行消除病變部位，但在細胞免疫清除病毒的同時將對肝細胞產(chǎn)生炎癥，進一步導致肝功能的損傷，甚至病變?yōu)楦斡不案伟?。當乙型肝炎病毒感染人體后將對機體免疫器官尤其針對特異性細胞免疫造成不同程度的威脅，可能也是因乙型肝炎病毒感染造成不同臨床轉(zhuǎn)歸的主要因素[13]。因此乙型肝炎及其發(fā)病率高和隱性感染強的特征逐步成為研究的熱點之一，其發(fā)病因素主要包括遺傳因素、免疫功能、炎癥感染、代謝紊亂及內(nèi)分泌障礙等。其病因發(fā)生復雜，發(fā)病機制及乙型肝炎病毒在感染后不同轉(zhuǎn)歸的機制不完全清晰，但已知在感染乙型肝炎病毒后，其轉(zhuǎn)歸受到病毒強弱及宿主免疫應答強弱兩方的共同影響。目前研究表明其發(fā)病與免疫功能的異常可能有關(guān)，如T淋巴免疫性細胞因子及炎性遞質(zhì)[17-18]。因人體感染HBV后將引起一系列防御功能機制，主要包括體液和細胞免疫應答，將病毒消除，在機體內(nèi)激活特異性T細胞將乙型肝炎病毒消除，在HBV中具有重要性。機體免疫功能發(fā)生改變將對T細胞各亞群的絕對數(shù)值產(chǎn)生影響。T細胞作為一類淋巴細胞，依據(jù)功能和標志物不同，將其分為多種類型如CD8+細胞毒性T細胞，CD4+輔助性細胞，CD25+調(diào)節(jié)性細胞及記憶性T細胞等。有研究稱在感染HBV后機體內(nèi)CD4+T細胞比例呈明顯下降趨勢，且隨病情嚴重度增加，比例逐漸降低，而CD8+T細胞呈顯著增長，且隨病情進展呈現(xiàn)出不斷增長，進而致CD4+/CD8+比值降低，而HBV-DNA高復制性進一步加重了T細胞亞群的失衡[19]。在免疫應答中不同類型的T細胞共同發(fā)揮清除機體外來感染病毒。針對人體因感染HBV后發(fā)生慢性感染和長期攜帶，目前認為可能因機體HBV特異性T細胞免疫功能低下如反應缺陷、免疫耐受等所致。因此將T細胞亞群比例作為反映細胞免疫狀態(tài)的重要指標。

研究結(jié)果顯示，與健康對照組相比，對急性乙型肝炎病毒患者及慢性乙型肝炎病毒患者血液中T細胞亞群血液中的CD4+的細胞百分比明顯降低（P<0.05），且伴隨肝臟病變程度的加重CD4+細胞的比例呈下降趨勢。而感染乙型肝炎后患者的CD8+T細胞百分比明顯增高（P<0.05），且升高程度與肝臟的嚴重程度呈現(xiàn)正相關(guān)。而CD4+/CD8+比值在乙型病毒攜帶患者中大幅度降低（P<0.05）；酶聯(lián)免疫檢測細胞因子水平后結(jié)果顯示，與健康對照組相比，急性乙型肝炎病毒患者及慢性乙型肝炎病毒患者IL-32水平均較高，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），各病例組中急性乙肝以及輕、中、重度型慢性乙肝間IL-32差異較大，在急性乙肝組IL-32水平最高，慢性重度乙肝組其次，且隨病情嚴重度依次明顯升高。表明患者T細胞亞群、IL-32水平的變化與乙型肝炎的嚴重程度密切相關(guān)。endprint

綜上所述，細胞因子可以作為乙型肝炎患者治療療效的預測因子，并且其對于評價治療療效可能具有更大的意義。炎癥感染后將會加重擾亂機體免疫功能，特別針對T細胞介導的具有特異性的免疫細胞。因此，對感染HBV患者進行監(jiān)測，加強對T細胞亞群動態(tài)檢測力度，有助于全面加深患者免疫功能，也為判斷患者的病情及預后提供有利依據(jù)。防止出現(xiàn)肝功能損害甚至肝衰竭以及乙肝病毒激活的發(fā)生，在使用藥物或化療等手段抗病毒治療，抑制乙肝病毒DNA大量復制，減輕乙肝病毒對肝臟進一步造成的損害，為臨床上制定評價乙肝病毒治療效果指標提供實驗依據(jù)，及時把握患者的治療時機，減少患者死亡率，在臨床治療中具有一定臨床指導價值。

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（收稿日期：2017-03-17） （本文編輯：康玥）endprint