舒木消郁湯對慢性肝損傷合抑郁大鼠下丘腦神經(jīng)遞質(zhì)的影響*

郭英君，王海燕，郭 英，王 偉，魏海梁，李京濤，常占杰

1.寧夏回族自治區(qū)人民醫(yī)院 (銀川 750001)，2.陜西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院 (咸陽712000)

舒木消郁湯對慢性肝損傷合抑郁大鼠下丘腦神經(jīng)遞質(zhì)的影響*

郭英君1，王海燕1，郭 英1，王 偉1，魏海梁2△，李京濤2，常占杰2

1.寧夏回族自治區(qū)人民醫(yī)院 (銀川 750001)，2.陜西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院 (咸陽712000)

目的： 研究舒木消郁湯對慢性肝損傷合并抑郁大鼠下丘腦神經(jīng)遞質(zhì)的影響。方法：將SPF級大鼠隨機分為空白組、模型組、中藥1、2、3組、對照組，每組12只， CCL4腹腔注射和慢性溫和不可預(yù)見性刺激造模，中藥1、2、3組分別給予舒木消郁湯濃度為0.5 g/ml、1.0 g/ml、2.0 g/ml藥液灌胃，對照組給予鹽酸氟西汀灌胃，觀察大鼠體重變化和刺激前后行為學(xué)和糖水消耗量、檢測肝功能和神經(jīng)遞質(zhì)去甲腎上腺素(NE)、多巴胺(DA)、五羥色胺(5-HT)水平。結(jié)果： 舒木消郁湯可明顯的增加慢性肝損傷合并抑郁大鼠的行為學(xué)指標(biāo)水平和垂直運動、理毛次數(shù)和糖水消耗總量，減少中央?yún)^(qū)停留時間，降低ALT和AST、增加NE、DA、5-HT的表達。結(jié)論： 舒木消郁湯對緩解慢性肝損傷合并抑郁的治療具有顯著效果。

慢性肝炎患者常合并抑郁障礙，主要表現(xiàn)為心情低沉、對事物興趣降低、自我懷疑和否定、焦慮、記憶力和認知能力下降，甚者有自殺傾向等。長期抑郁狀態(tài)可影響患者免疫功能、激素和解毒代謝水平等，加重肝損傷[1-2]。我們長期以舒木消郁湯治療慢性肝病伴有抑郁障礙的患者，療效較好。本研究旨在探討舒木消郁湯對慢性肝損傷合并抑郁大鼠模型下丘腦神經(jīng)遞質(zhì)去甲腎上腺素(NE)、多巴胺(DA)、五羥色胺(5-HT)的干預(yù)效果，結(jié)果如下。

材料和方法

1 藥品制備與主要試劑 舒木消郁湯(黃芪、當(dāng)歸、柴胡、香附)，均由寧夏自治區(qū)人民醫(yī)院藥劑科統(tǒng)一購買和制備凍干粉，每克含生藥5 g，密封保存于4 ℃冰箱，使用時100 ℃水溶解，配制0.5 g/ml、1.0 g/ml、2.0 g/ml低、中、高劑量溶液。鹽酸氟西汀膠囊(批號：H20093454，江蘇俞氏藥業(yè)有限公司)，5-HT、DA和NE試劑盒購于武漢博士德生物工程有限公司。

2 模型制備 慢性肝損傷合并抑郁障礙大鼠模型：SPF級雄性大鼠，體重(180～200)g，常規(guī)飼養(yǎng)3 d進入實驗，以40%濃度CCl4腹腔注射(1 ml/kg，2次/周)，連續(xù)進行12周；在第13 周將大鼠孤養(yǎng)，自由進飲食，予規(guī)律光照/黑暗時間，分別為12 h(光照為8∶00～20∶00)、背景噪音 (40± 10) db、溫度(20 ± 3) ℃條件下飼養(yǎng)1周；第14周開始，連續(xù)28 d給予隨機刺激，冰水( 4 ℃，5 min ) 、熱水( 45 ℃，5 min) 、足底電擊(電流10 mA，1次/min, 每次持續(xù)10 s，共30 次)、搖晃(1 次/s，15 min) 、夾尾1 min、禁食48 h 和晝夜顛倒，為避免產(chǎn)生適應(yīng)性，每日刺激種類不同。

3 分組及給藥方法 將72只SPF級大鼠分為六組：空白組，模型組，中藥1、2、3組(舒木消郁湯低、中、高劑量組)，對照組，每組為12只。實驗周期為18周?？瞻捉M：于實驗第5 周以生理鹽水灌胃(10 ml/kg，1次/d)；模型組：以40%濃度CCl4腹腔注射(1 ml/kg，2次/周)，連續(xù)12周；第 14 周開始隨機給予不同刺激；中藥組：各組肝損傷模型及隨機應(yīng)激及操作同模型組，中藥1、2和3組分別給予0.5 g/ml、1.0 g/ml、2.0 g/ml濃度的舒木消郁湯灌胃(1次/d)直到實驗結(jié)束；對照組：以鹽酸氟西汀藥液1.8 mg /(kg·d)灌胃。

4 觀察項目

4.1體重監(jiān)測:分別在4個時間點稱量并記錄大鼠實驗開始前、刺激前1 d、刺激后14 d、28 d體重變化。

4.2敞箱實驗和糖水消耗實驗:以長、寬、高分別為100 cm、100 cm、50 cm木質(zhì)敞箱，將其劃分為100個格子(10 cm×10 cm)，中央上方安置攝像頭，木箱里層刷黑。實驗時，將大鼠放置箱子中央格，記錄3 min內(nèi)停留時間，水平運動(穿越格數(shù))、垂直運動(雙前肢離地次數(shù))、理毛次數(shù)。打掃后再進行下次實驗；實驗后給予1% 蔗糖水、純水各150 ml，觀察并記錄24 h飲用量。

4.3肝功能及下丘腦神經(jīng)遞質(zhì)檢測:10%水合氯醛(0.3 ml/100g)腹腔注射麻醉，心臟取血，全自動生化儀檢測血清ALT、AST水平；大鼠斷頭并于冰上快速分離下丘腦，ELISA法檢測下丘腦組織中5-HT、DA和NE的水平，嚴格按照說明書進行操作。

5 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析。計量資料采用均數(shù)±標(biāo)準差表示；組間比較采用單因素方差分析；計數(shù)資料采用2檢驗，P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié) 果

1 大鼠體重和行為學(xué)改變 大鼠的體重變化：與空白組比較，模型組、中藥1、2組體重增加幅度慢(P<0.05)，而中藥3組和對照組差異不明顯(P>0.05)；與模型組比較，中藥3組和對照組體重增長明顯(P<0.05)；大鼠行為學(xué)、糖水消耗量：與空白組比較，模型組在刺激后7 d、14 d、28 d中央格停留時間增加，水平、垂直運動，理毛次數(shù)、糖水消耗量均明顯減低(P<0.05)；與模型組比較，中藥2組大鼠水平和垂直運動、理毛次數(shù)增加，中央?yún)^(qū)停留時間減少，糖水消耗量增加(P<0.05)，中藥3組在刺激7 d、14 d、28 d后各項監(jiān)測指標(biāo)改善更明顯(P<0.01)；與中藥3組比較，對照組在刺激7 d、14 d、28 d后行為學(xué)各項指標(biāo)及糖水消耗總量均有所改善且存在顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

2 肝功能 見表1，與模型組比較，中藥各組和對照組ALT和AST水平不同程度下降，且中藥各組隨著藥物濃度的增加ALT、AST含量下降作用更明顯(P<0.05，P<0.01)；與對照組比較，中藥3組ALT和AST差異不顯著(P>0.05)。

表1 舒木消郁湯藥對大鼠肝功能的影響(U/L)

注：與空白組比較，▲P<0.05，＊P<0.01；與模型組比較，P<0.05，P<0.01；與對照組比較，#P<0.05，▼P<0.01

3 下丘腦神經(jīng)遞質(zhì) 見表2，與模型組比較，中藥2、3組和對照組的5-HT水平有顯著差異(P<0.01)；中藥3組和對照組的DA和NE水平有顯著差異(P<0.01)；與對照組比較，中藥3組的5-HT和DA水平差異不明顯(P>0.05)。

表2 舒木消郁湯藥對大鼠5-HT、DA和NE水平的影響

注：與空白組比較，▲P<0.05，＊P<0.01；與模型組比較，P<0.01；與對照組比較，#P<0.05，▼P<0.01

討 論

抑郁障礙是指患者心境持續(xù)處于低落狀態(tài)，并且多伴有睡眠障礙、身體不適、記憶減退、焦慮等癥狀，該病常常呈現(xiàn)隱性發(fā)病，不易被識別和發(fā)覺[3]。慢性肝炎患者，常因其病程長、治愈難、花費高、病情進展易形成肝硬化或肝癌的風(fēng)險，故大多患者均存在多種包括抑郁、焦慮等復(fù)雜心理狀態(tài)，且有時可相伴發(fā)生，但其以抑郁障礙表現(xiàn)最為突出[4]。

抑郁障礙可歸屬于中醫(yī)“郁證”范疇?！鹅`樞·本神》有“肝藏血，血舍魂”、“隨神往來者謂之魂”之說；意指人體氣血充盈，肝臟血液儲存功能正常，人體的精神活動就有了充足的物質(zhì)保障，則神魂有所主，精神乃佳。因此，我們自擬舒木消郁湯治療慢性肝炎合并抑郁患者取得了較好療效，其中柴胡為疏肝解郁之要藥，當(dāng)歸以補血虛之本，可充養(yǎng)肝血，為肝所用；黃芪補脾胃之氣而不滯氣，后天得養(yǎng)，氣血得充，氣機升降自如，故而氣調(diào)血充，郁證得解[5]；有報道[6]黃芪制劑還具有抗肝纖維化的作用；柴胡、黃芪、香附三者配合共奏調(diào)理肝氣，黃芪和當(dāng)歸則可養(yǎng)血活血，從而四味藥相互配伍養(yǎng)血疏肝，使郁證得解。

現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)抑郁障礙的發(fā)生主要歸因于神經(jīng)遞質(zhì)的水平的變化，其認為5-HT、DA、NE含量的減低或者功能的不足是導(dǎo)致抑郁障礙發(fā)生的直接原因。本實驗所采用的不可預(yù)知刺激制造抑郁模型，廣泛地應(yīng)用于抑郁癥治療的研究，能夠更好的模擬臨床抑郁癥的發(fā)生[7-8]；大鼠行為學(xué)評價和糖水偏好實驗顯示，模型組大鼠在給予刺激后，其水平和垂直運動、理毛次數(shù)和糖水消耗量均明顯減少，而在中央格停留的時間變長，大鼠的肝功能下降、神經(jīng)遞質(zhì)5-HT、DA、NE量逐漸減少；當(dāng)給予舒木消郁湯后大鼠的抑郁樣行為、肝功能、神經(jīng)遞質(zhì)的水平均明顯好轉(zhuǎn)，較氟西汀效果相當(dāng)，且表現(xiàn)出一定的濃度依賴性。綜上所述，舒木消郁湯對于慢性肝損傷伴抑郁患者具有一定的緩解或者逆轉(zhuǎn)作用。

[1] 許 萌. 住院乙型肝炎肝硬化患者發(fā)生抑郁的危險因素及心理護理干預(yù)的效果研究[J]. 中華全科醫(yī)學(xué), 2017, 15(4):715-717.

[2] 劉寶咸, 張燕萍, 李宏燕,等. 干擾素治療慢性丙型肝炎患者致抑郁障礙的特點及干預(yù)[J]. 陜西醫(yī)學(xué)雜志, 2014，43(10)：1396-1398.

[3] 宋 瀟, 谷陟欣, 李 偉,等. 中成藥治療抑郁的現(xiàn)代研究近況[J]. 云南中醫(yī)中藥雜志, 2016, 37(4):63-65.

[4] 李京濤, 郭 師, 席 奇,等. 益脾養(yǎng)肝方聯(lián)合肝動脈化療栓塞術(shù)治療原發(fā)性肝癌的療效觀察[J]. 陜西中醫(yī), 2015，36(8):944-945.

[5] 黃世敬, 張永超, 張 穎. 黃芪治療抑郁癥應(yīng)用與研究[J]. 世界中醫(yī)藥, 2014，(5): 665-668.

[6] 郭麗英. 柔肝化纖方聯(lián)合馬洛替酯對慢性乙肝纖維化患者的治療效果分析[J]. 陜西中醫(yī), 2015，36(10):1340-1341.

[7] 傅錦華, 劉 勇. 舒肝解郁膠囊對抑郁模型大鼠腦內(nèi)5-HT、DA及其代謝產(chǎn)物水平的影響[J]. 湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報, 2016, 36(6):47-51.

[8] 劉 碩, 張趁麗, 林方瑜,等. 疏肝解郁植物提取物抗抑郁作用的實驗研究[J]. 中國中醫(yī)藥科技, 2016, 23(4):410-412.

*陜西省教育廳課題(2013JK0837) 咸陽市科技局課題 (2015K04-16)

△通訊作者

抑郁癥/中醫(yī)藥療法 肝疾病 @舒木消郁湯 動物實驗 大鼠

R749.41

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2017.11.060

(收稿：2017-16-11)