米非司酮對(duì)子宮肌瘤組織中表皮生長(zhǎng)因子及Cx43表達(dá)的影響

符吉芬，符澤美，王愛(ài)麗，李麗娟

(?？谑兄嗅t(yī)院婦產(chǎn)科，海南 ?？?570216)

米非司酮對(duì)子宮肌瘤組織中表皮生長(zhǎng)因子及Cx43表達(dá)的影響

符吉芬，符澤美，王愛(ài)麗，李麗娟

(?？谑兄嗅t(yī)院婦產(chǎn)科，海南 海口 570216)

目的探討米非司酮對(duì)子宮肌瘤組織中表皮生長(zhǎng)因子(EGF)及上調(diào)間隙連接蛋白Cx43表達(dá)的影響。方法從海口市中醫(yī)院婦產(chǎn)科2015年1～12月收治的子宮肌瘤患者中選取符合入組條件的子宮肌瘤患者92例，按隨機(jī)數(shù)表法分為對(duì)照組和觀察組，每組46例。另選取同期在我院因卵巢腫瘤行手術(shù)治療的40例正常子宮肌組織作為正常組。觀察組于術(shù)前5 d開(kāi)始予以米非司酮25 mg，2次/d，口服，連續(xù)服用5 d，停藥后立即行手術(shù)治療。正常組與對(duì)照組在確診后立即行全子宮切除術(shù)。治療結(jié)束后，比較三組受檢者子宮肌瘤組織及正常子宮肌組織中EGF及Cx43的表達(dá)情況。結(jié)果①對(duì)照組在增生期子宮肌瘤組織的EGF mRNA為(0.31±0.27)，與正常組增生期的(0.27±0.14)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；②對(duì)照組在分泌期子宮肌瘤組織的EGF mRNA為(1.45±0.43)，與正常組分泌期的(0.53±0.25)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；③觀察組在增生期子宮肌瘤組織的EGF mRNA為(0.26±0.11)，與對(duì)照組增生期的(0.31±0.27)、正常組增生期的(0.27±0.14)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；而觀察組在分泌期子宮肌瘤組織中EGF mRNA為(0.54±0.23)，與對(duì)照組分泌期的(1.45±0.43)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；④對(duì)照組增生期子宮肌瘤內(nèi)Cx43蛋白表達(dá)與分泌期比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；正常組患者增生期子宮肌內(nèi)Cx43蛋白表達(dá)與分泌期比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；⑤觀察組增生期子宮肌瘤Cx43蛋白表達(dá)與對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；而分泌期觀察組子宮肌瘤內(nèi)Cx43蛋白表達(dá)與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論米非司酮能夠明顯抑制子宮肌瘤的生長(zhǎng)，對(duì)臨床診治具有指導(dǎo)意義。

米非司酮；子宮肌瘤；表皮生長(zhǎng)因子；Cx43

子宮肌瘤(uterine myoma)是女性生殖器最常見(jiàn)的良性腫瘤，由平滑肌及結(jié)締組織組成[1]。本病臨床表現(xiàn)為月經(jīng)量增多或者經(jīng)期延長(zhǎng)、下腹部包塊、白帶增多、腫瘤壓迫膀胱或者直腸出現(xiàn)相應(yīng)的壓迫癥狀[2]。本病多發(fā)于中年婦女，據(jù)調(diào)查統(tǒng)計(jì)[3]，我國(guó)子宮肌瘤患者的發(fā)病率從2000年的14%上升至2013年的31%，并有逐年上升的趨勢(shì)。子宮肌瘤與女性性激素有密切關(guān)系，肌瘤組織局部對(duì)雌激素的高敏感性是肌瘤發(fā)生的重要因素。此外相關(guān)研究證實(shí)，孕激素能夠促進(jìn)肌瘤的有絲分裂活動(dòng)，刺激肌瘤的生長(zhǎng)，這也為抗孕激素治療子宮肌瘤奠定了基礎(chǔ)[4]。本文通過(guò)觀察表皮生長(zhǎng)因子(EGF)及上調(diào)間隙連接蛋白Cx43的表達(dá)水平，探究米非司酮治療子宮肌瘤的可能機(jī)理。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2015年1～12月?？谑兄嗅t(yī)院婦產(chǎn)科收治的子宮肌瘤患者92例，按隨機(jī)數(shù)表法分為對(duì)照組和觀察組，每組46例。另選取同期在我院因卵巢腫瘤行手術(shù)治療的40例正常子宮肌組織作為正常組。觀察組患者中增生期和分泌期均23例，平均年齡(40.6±12.4)歲；對(duì)照組患者中增生期和分泌期均23例，平均年齡(41.2±11.7)歲。正常組中增生期和分泌期均為20例，平均年齡(41.1±10.7)歲。患者病程3個(gè)月～3年。三組患者的一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

1.2 子宮肌瘤診斷標(biāo)準(zhǔn) 月經(jīng)量增多或者經(jīng)期延長(zhǎng)、下腹部包塊、白帶增多、腫瘤壓迫膀胱或者直腸出現(xiàn)相應(yīng)的壓迫癥狀等為臨床癥狀；婦科檢查可捫及明顯包塊；彩超、宮腔鏡、腹腔鏡、影像等檢查可明確診斷[5]。

1.3 納入與排除標(biāo)準(zhǔn) (1)納入標(biāo)準(zhǔn)：符合子宮肌瘤的診斷標(biāo)準(zhǔn)；年齡23～66歲；患者自愿參與本實(shí)驗(yàn)，并簽署知情同意書(shū)；經(jīng)所在單位倫理學(xué)相關(guān)機(jī)構(gòu)的批準(zhǔn)。(2)排除標(biāo)準(zhǔn)：心、肝、腎嚴(yán)重疾?。黄渌麗盒阅[瘤；患有艾滋病、肺結(jié)核病毒性肝炎等傳染病患者；血液性疾病，神志異常以及近3個(gè)月來(lái)服用激素藥物治療的患者。

1.4 治療方法 正常組與對(duì)照組診斷明確后，在全麻下行全子宮切除術(shù)；觀察組于術(shù)前5 d開(kāi)始予以米非司酮25 mg，2次/d，口服，連續(xù)服用5 d，停藥后，在全麻下行全子宮切除術(shù)。術(shù)中子宮標(biāo)本離體15 min內(nèi)選取肌瘤組織，所有標(biāo)本采集后立即保存在-70℃低溫冰箱中。

1.5 觀察指標(biāo)及檢測(cè)方法

1.5.1 EGF表達(dá) 采用RT-PCR法測(cè)定子宮肌瘤和正常子宮肌組織內(nèi)EGF mRNA含量。一步法提取子宮肌瘤及子宮肌組織內(nèi)總RNA，并以RNA為模板反轉(zhuǎn)錄合成cDNA，以cDNA為模板行體外擴(kuò)增，以2.0%凝膠電泳一個(gè)小時(shí)后，于紫外線(xiàn)照射下觀察，并用激光密度掃描儀計(jì)算吸光度值。并與β-action條帶光密度值比較。目的基因引物序列如表1所示。

表1 目的基因的實(shí)時(shí)定量RT-PCR引物序列

1.5.2 Cx43表達(dá) 標(biāo)本甲醛固定后，石蠟包埋制片，采用免疫組化法測(cè)定Cx43表達(dá)含量，試劑盒由賽馳生物公司提供，并且嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)操作。以濃度為2.5 μg/mL的兔抗Cx43(美國(guó)Zymed公司產(chǎn))為一抗，切片使用蘇木素復(fù)染色?？瞻讓?duì)照用磷酸鹽緩沖液(PBS)替代一抗。陽(yáng)性細(xì)胞判定標(biāo)準(zhǔn)：陽(yáng)性細(xì)胞＜5%時(shí)為陰性(-)；當(dāng)陽(yáng)性細(xì)胞5%～50%時(shí)為陽(yáng)性(+)；當(dāng)陽(yáng)性細(xì)胞＞50%時(shí)為強(qiáng)陽(yáng)性(++)。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，等級(jí)資料比較采用秩和檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 三組患者不同月經(jīng)周期EGF mRNA含量比較 對(duì)照組在增殖期子宮肌瘤組織與正常組子宮肌中EGF mRNA的含量比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；分泌期對(duì)照組子宮肌瘤組織中EGF mRNA較正常組明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；觀察組增生期子宮肌瘤組織中EGF mRNA與對(duì)照組、正常組EGF mRNA含量比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；而分泌期觀察組子宮肌瘤組織中EGF mRNA含量明顯低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見(jiàn)表2。

表2 三組患者不同月經(jīng)周期EGF mRNA含量比較(±s)

表2 三組患者不同月經(jīng)周期EGF mRNA含量比較(±s)

注：治療后，與正常組同時(shí)間段比較，aP＜0.05(P=0.042，t=2.203)；治療后，與對(duì)照組同時(shí)間段比較，bP＜0.05(P=0.038，t=2.213)。

?

2.2 不同月經(jīng)周期中子宮肌瘤與正常子宮肌Cx43蛋白表達(dá)比較 對(duì)照組增生期子宮肌瘤內(nèi)Cx43蛋白表達(dá)明顯高于分泌期，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；正常組患者增生期子宮肌內(nèi)Cx43蛋白表達(dá)與分泌期比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，對(duì)照組和正常組的增生期子宮肌瘤內(nèi)Cx43蛋白表達(dá)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，且兩組分泌期的差異亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見(jiàn)表3。

表3 不同月經(jīng)周期中子宮肌瘤與正常子宮肌Cx43蛋白表達(dá)比較(例)

2.3 觀察組與對(duì)照組患者子宮肌瘤內(nèi)Cx43蛋白表達(dá)比較 經(jīng)過(guò)米非司酮治療后，觀察組增生期子宮肌瘤Cx43蛋白表達(dá)與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；而分泌期，經(jīng)米非司酮治療后的觀察組子宮肌瘤內(nèi)Cx43蛋白表達(dá)明顯高于未用藥物治療的對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見(jiàn)表4。

表4 觀察組與對(duì)照組患者子宮肌瘤內(nèi)Cx43蛋白表達(dá)比較(例)

3 討 論

子宮肌瘤是最常見(jiàn)的一種生殖器激素依賴(lài)性良性腫瘤,主要發(fā)生于30～50歲中年婦女。據(jù)統(tǒng)計(jì)，至少有20%的育齡婦女有子宮肌瘤[6]。子宮肌瘤早期無(wú)明顯癥狀，當(dāng)肌瘤逐漸增大時(shí)可有腫瘤壓迫癥狀、或月經(jīng)、白帶異常等臨床表現(xiàn)。子宮肌瘤生長(zhǎng)的主要原因是雌激素受體和孕激素受體的增多和過(guò)度表達(dá)[7]。相關(guān)研究證實(shí)，孕激素在子宮肌瘤發(fā)生的機(jī)制中起著重要的作用[8]。

本研究顯示，對(duì)照組在增殖期子宮肌瘤組織與正常組子宮肌中EGF mRNA的含量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；分泌期對(duì)照組子宮肌瘤組織中EGF mRNA較正常組明顯增高(P＜0.05))；觀察組增生期子宮肌瘤組織中EGF mRNA與對(duì)照組、正常組EGF mRNA含量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；而分泌期觀察組子宮肌瘤組織中EGF mRNA含量明顯低于對(duì)照組(P＜0.05)。月經(jīng)周期增生期中主要是雌激素起主導(dǎo)作用，進(jìn)入分泌期時(shí)，雌激素和孕激素共同發(fā)揮作用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果中，處于增生期的子宮肌瘤患者中的EGF mRNA含量無(wú)明顯差異，而處于分泌期的子宮肌瘤組織中的EGF mRNA含量對(duì)照組明顯高于正常組，推斷在EGF表達(dá)中孕激素具有主要的調(diào)控作用。米非司酮是孕激素受體拮抗劑，能夠抑制孕激素受體基因的表達(dá)，使轉(zhuǎn)錄活化因子不能被激活，基因不能表達(dá)，無(wú)法發(fā)揮孕酮作用，從而抑制EGF表達(dá)，因此米非司酮治療后分泌期患者子宮肌瘤組織中EGF mRNA含量明顯低于未使用藥物治療的對(duì)照組[10-12]。

本研究還顯示，對(duì)照組增生期子宮肌瘤內(nèi)治療Cx43蛋白表達(dá)與分泌期比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；正常組患者增生期子宮肌內(nèi)Cx43蛋白表達(dá)與分泌期比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；觀察組經(jīng)過(guò)米非司酮治療后，觀察組增生期子宮肌瘤Cx43蛋白表達(dá)與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；而分泌期，觀察組子宮肌瘤內(nèi)Cx43蛋白表達(dá)與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。子宮的協(xié)調(diào)收縮需要間隙連接蛋白的表達(dá)，Cx43是間隙連接蛋白的最重要的成員，對(duì)細(xì)胞的代謝、增殖、分化和凋亡起到重要的調(diào)控作用。雌激素是促進(jìn)肌瘤生長(zhǎng)的主要因素，高雌激素狀態(tài)可通過(guò)雌激素受體上調(diào)子宮肌瘤組織中的Cx43 mRNA和蛋白的表達(dá)，形成間隙連接。增生期Cx43蛋白表達(dá)增強(qiáng)，能夠有效的抑制細(xì)胞有絲分裂，組織細(xì)胞惡化[13]。孕激素能夠通過(guò)孕激素受體直接抑制Cx43蛋白表達(dá)，分泌期一定水平孕激素亦能抑制雌激素受體的表達(dá)，間接抑制Cx43蛋白表達(dá)下調(diào)，導(dǎo)致肌瘤有絲分裂增強(qiáng)，促進(jìn)肌瘤增長(zhǎng)[14]。米非司酮能夠直接抑制孕激素受體基因表達(dá)或者對(duì)抗孕酮活性，削弱孕激素對(duì)Cx43蛋白表達(dá)影響，增強(qiáng)間隙連接蛋白的表達(dá)[15]。

綜上所述，米非司酮能夠抑制分泌期孕激素受體基因的表達(dá)，抑制孕酮活性，從而下調(diào)子宮肌瘤組織中表皮生長(zhǎng)因子的表達(dá)；并能夠通過(guò)上調(diào)間隙連接蛋白Cx43表達(dá)，增強(qiáng)細(xì)胞間接接觸的生長(zhǎng)作用，抑制肌瘤細(xì)胞的有絲分裂活動(dòng)，最終抑制子宮肌瘤的生長(zhǎng)。

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Effect of mifepristone on expression of epidermal growth factor and Cx43 in uterine fibroids.

FU Ji-fen,FU
Ze-mei,WANG Ai-li,LI Li-juan.Department of Obstetrics and Gynecology,Haikou Hospital of Traditional Chinese Medicine,Haikou 570216,Hainan,CHINA

ObjectiveTo investigate the effect of mifepristone on epidermal growth factor(EGF)and up-regulation of connexin43(Cx43)in uterine fibroids.MethodsNinety-two patients with uterine fibroids in Department of Obstetrics and Gynecology in our hospital from January 2015 to December 2015 were randomly divided into control group and observation group,with 46 cases in each group.Forty patients undergoing surgical treatment for ovarian tumor were selected as the normal group.The observation group

mifepristone 25 mg for 5 consecutive days before surgery,two times per day.The control group and the normal group received hysterectomy immediately after confirmed diagnosis.After treatment,the expression of EGF and Cx43 in uterine fibroids and normal uterine muscle were compared between the three groups.Results①There was no significant difference in the level of EGF mRNA in the proliferative phase between the control group and the normal group,(0.31±0.27)vs(0.27±0.14),P＞0.05.② The EGF mRNA level in progestational stage was(1.45±0.43)in the control group,versus(0.53±0.25)in normal group(P＜0.05).③ The level of EGF mRNA in proliferative stage in the observation group was(0.26±0.11),versus(0.31±0.27)in the control group and(0.27±0.14)in normal group(P＞0.05);the EGF mRNA level in progestational stage was(0.54±0.23)in the observation group,significantly lower than(1.45±0.43)in the control group(P＜0.05).④ The difference in Cx43 between in proliferative stage and in progestational stage was significant in the control group(P＜0.05),but not significant in normal group(P＞0.05).⑤ The level of Cx43 protein in proliferative stage in the observation group showed no significant difference with that in the control group(P＞0.05),but the level in progestational stage showed statistically significant difference between the two groups(P＜0.05).ConclusionMifepristone can significantly inhibit the growth of uterine fibroids.

Mifepristone;Uterine fibroids;Epidermal growth factor;Connexin43(Cx43)

R737.33

A

1003—6350（2017）20—3297—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2017.20.010

符澤美。E-mail：hainan007004@126.com

2017-02-20)