• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    SAFE 通路介導(dǎo)的炎癥因子在大鼠心肌缺血再灌注致腦損傷中的作用

    2017-11-11 08:17:50趙博馬莉詹麗英冷燕袁泉劉戀
    海南醫(yī)學(xué) 2017年20期
    關(guān)鍵詞:腦損傷腦組織通路

    趙博,馬莉,詹麗英,冷燕,袁泉,劉戀

    (武漢大學(xué)人民醫(yī)院麻醉科,湖北 武漢 430060)

    ·論 著·

    SAFE 通路介導(dǎo)的炎癥因子在大鼠心肌缺血再灌注致腦損傷中的作用

    趙博,馬莉,詹麗英,冷燕,袁泉,劉戀

    (武漢大學(xué)人民醫(yī)院麻醉科,湖北 武漢 430060)

    目的探討生存活化因子增強通路(SAFE)介導(dǎo)的炎癥因子在大鼠心肌缺血再灌注致腦損傷中的作用。方法24只雄性SD大鼠按隨機數(shù)表法分為三組(n=8):假手術(shù)組(Sham)、心肌缺血/再灌注組(IR)、心肌缺血/再灌注+AG490組(IR+AG490)。IR組及IR+AG490組通過結(jié)扎大鼠冠狀動脈左前降支30 min,再灌注120 min建立大鼠心肌缺血/再灌注模型。取大鼠腦組織,Western blot檢測Janus激酶2(Jak2)、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)子和轉(zhuǎn)錄激活子3(STAT3)蛋白表達(dá)及炎癥因子白介素1(IL-1),白介素6(IL-6),白介素8(IL-8),TUNEL法檢測細(xì)胞凋亡,比色法檢測含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase3)活性。結(jié)果與Sham組比較,IR組p-Jak2[(1.8±0.13)vs(1.0±0)]、p-STAT3[(1.6±0.08)vs(1.0±0)]表達(dá)增高,炎癥因子IL-1[(3.3±0.16)vs(1.0±0)]、IL-6[(3.3±0.16)vs(1.0±0)]、IL-8[(2.8±0.28)vs(1.0±0)]表達(dá)增多,TUNEL[(18.8±1.29)%vs(4.2±0.44)%]表達(dá)增多,Caspase3活性[(2.6±0.24)vs(1.0±0)]升高,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);與IR組比較,IR+AG490組p-Jak2[(1.3±0.09)vs(1.8±0.13)],p-STAT3[(1.1±0.11)vs(1.6±0.08)]表達(dá)減少,炎癥因子IL-1[(2.1±0.17)vs(3.3±0.16)]、IL-6[(1.9±0.22)vs(3.3±0.16)]、IL-8[(2.2±0.19)vs(2.8±0.28)表達(dá)降低,TUNEL[(13.2±1.03)%vs(18.8±1.29)%]表達(dá)降低,Caspase3活性 [(2.1±0.21)vs(2.6±0.24)]降低,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論抑制SAFE通路的激活可以降低其下游炎癥因子的級聯(lián)表達(dá),從而減少細(xì)胞凋亡,減輕大鼠心肌缺血再灌注引起的腦損傷。

    生存活化因子增強通路;炎癥因子;心肌缺血再灌注;腦損傷

    生存活化因子增強通路(survivor activating factor enhancement,SAFE)作為新近發(fā)現(xiàn)的保護(hù)性通路,是參與炎癥反應(yīng)的重要信號通路之一,其可被多種炎癥因子激活,并參與炎癥反應(yīng)的級聯(lián)放大[1-2],其中最重要的信號通路為Jak2/STAT3通路[3]。目前Jak2/STAT信號通路在心肌缺血再灌注后致腦損傷的作用報道尚少,本研究擬通過建立大鼠心肌缺血再灌注模型,探討Jak2/STAT3通路介導(dǎo)的炎癥因子在心肌缺血再灌注后腦損傷中的作用。

    1 材料與方法

    1.1 材料 Jak2特異性抑制劑AG490(Selleck公司,美國);單克隆抗體Jak2、STAT3、白細(xì)胞介素1,6,8(CST公司,美國);原位末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記(TUNEL)試劑盒(Roche公司,美國);Caspase-3活性檢測試劑盒(碧云天科技有限公司,中國)。

    1.2 實驗分組 雄性SD大鼠24只(北京華阜康生物科技股份有限公司,中國),體質(zhì)量200~220 g。采用隨機數(shù)字表法分為假手術(shù)組(Sham)、心肌缺血/再灌注組(IR)、心肌缺血/再灌注+AG490組(IR+AG490),每組8只。IR+AG490組在再灌注前20 min靜脈給予Jak2特異性抑制劑AG490。

    1.3 大鼠心肌缺血再灌注模型 大鼠腹腔注射3%戊巴比妥鈉50 mg/kg進(jìn)行麻醉,固定后連接心電導(dǎo)聯(lián),行氣管插管,呼吸機機械通氣,分離股靜脈并置管。開胸結(jié)扎冠狀動脈左前降支(LDA),心電圖見到明顯的ST段抬高(>0.12 mV),心前區(qū)變白,則認(rèn)為造模成功。結(jié)扎時間為30 min,松開線結(jié)再灌注120 min后取腦組織。再灌注成功標(biāo)準(zhǔn):ST段回落,心尖恢復(fù)紅潤。

    1.4 觀察指標(biāo)及檢測方法 (1)Western blot法檢測Jak2、STAT3、IL-1、IL-6、I-L8的表達(dá):腦組織用裂解液提取蛋白,并測定蛋白濃度,采用聚丙烯酞胺凝膠電泳分離目的蛋白,冰浴轉(zhuǎn)膜后,脫脂奶粉室溫封閉1~2 h,加入單克隆抗體Jak2、STAT3、IL-1、IL-6、IL-8在4℃下?lián)u床孵育過夜,次日采用熒光二抗孵育1 h后用TBST清洗,應(yīng)用紅外成像系統(tǒng)掃膜,并讀取灰度值,用Odessay軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析;(2)TUNEL法檢測細(xì)胞凋亡水平:制備石蠟切片,H2O2孵育10 min,滴加新鮮稀釋蛋白酶K,消化10 min,加入反應(yīng)混合液,孵育60 min后,加入轉(zhuǎn)化劑,孵育30 min,DAB顯色;(3)比色法檢測Caspase3活性:提取新鮮腦組織蛋白勻漿制成蛋白懸濁液后,設(shè)立標(biāo)準(zhǔn)曲線和空白孔,采用Caspase3活性檢測試劑盒檢測Caspase3活性。

    1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,多組間比較采用單因素方差分析,組間兩兩比較采用S-N-K檢驗,以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 心肌缺血再灌注后腦組織Jak2,STAT3變化 與Sham組比較,IR組腦組織中p-Jak2,p-STAT3的表達(dá)增多,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);與IR組比較,IR+AG490組Jak2,STAT3磷酸化水平降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),見表1。

    表1 心肌缺血再灌注后腦組織Jak2,STAT3的變化(±s)

    表1 心肌缺血再灌注后腦組織Jak2,STAT3的變化(±s)

    注:與Sham組比較,aP<0.05,與IR組比較,bP<0.05。

    ?

    2.2 心肌缺血再灌注后腦組織炎癥因子變化 IR損傷能引起腦組織炎癥因子釋放水平增加,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);而心肌缺血再灌注前通過靜脈給予Jak2抑制劑AG490可減少腦組織IL-1,IL-6,IL-8的表達(dá)和釋放,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),見表2。

    表2 心肌缺血再灌注后腦組織炎癥因子的變化(±s)

    表2 心肌缺血再灌注后腦組織炎癥因子的變化(±s)

    注:與Sham組比較,aP<0.05,與IR組比較,bP<0.05。

    ?

    2.3 心肌缺血再灌注后腦組織凋亡水平 與Sham組比較,IR組TUNEL表達(dá)增多,Caspase3活性升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);與IR組比較,IR+AG490組TUNEL表達(dá)減少低,Caspase3活性降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),見表3。

    表3 心肌缺血再灌注后腦組織TUNEL及Caspase3的變化(±s)

    表3 心肌缺血再灌注后腦組織TUNEL及Caspase3的變化(±s)

    注:與Sham組比較,aP<0.05,與IR組比較,bP<0.05。

    ?

    3 討 論

    再灌注損傷補救激酶通路(reperfusion injury salvage kinases,RISK)與SAFE通路是缺血/再灌注損傷中的重要信號通路[4-5],2009年Lecour[6]首次描述了SAFE促生存信號通路,在該通路中保護(hù)性信號分子在缺血/再灌注過程中被激活從而抑制細(xì)胞凋亡減輕組織損傷。Jak2/STAT3通路作為SAFE通路中重要的信號通路之一,由于介導(dǎo)信號由細(xì)胞膜向細(xì)胞核內(nèi)轉(zhuǎn)導(dǎo),從而調(diào)節(jié)蛋白表達(dá)[7],引起研究者的廣泛關(guān)注。

    IL-6作為炎癥反應(yīng)的始動因素及誘導(dǎo)者,具有催化和放大炎癥反應(yīng)的作用,能直接反映損傷的嚴(yán)重程度。而IL-1可以刺激其它炎癥因子的合成,在病理生理進(jìn)展中起著重要的協(xié)同作用[8-9]。本研究結(jié)果顯示大鼠心肌缺血再灌注后腦組織中的Jak2和STAT3磷酸化程度增高,進(jìn)一步研究顯示大鼠腦組織中炎癥因子IL-1,IL-6,IL-8和凋亡相關(guān)蛋白TUNEL,Caspase3的表達(dá)量亦增高。因此推測大鼠Jak2/STAT3信號通路激活加重腦損傷可能與腦組織局部炎癥因子的激活和釋放增加有關(guān)[10]。當(dāng)心肌IR損傷發(fā)生后腦組織的損傷亦明顯增加,其主要表現(xiàn)在組織中凋亡水平和炎性因子的顯著增加[11]。因此推測炎性因子的激活和釋放可能是心腦同病變的病理生理基礎(chǔ)。

    本研究結(jié)果顯示:在術(shù)前靜脈給予JAK2特異性抑制劑AG490后,抑制劑組腦組織中Jak2/STAT3通路磷酸化降低,炎癥因子釋放減少,細(xì)胞凋亡程度較再灌注組降低。推測Jak2/STAT3表達(dá)降低可能對炎癥因子的釋放起到了調(diào)控作用,并通過調(diào)節(jié)目的基因的表達(dá)減少TUNEL和Caspase3的表達(dá),從而在多種病理生理過程中發(fā)揮重要作用[9]。

    有研究發(fā)現(xiàn)Jak2/STAT3作為SAFE通路中的主要信號通路,其與RISK通路之間可能存在“串話”現(xiàn)象[12]。這種現(xiàn)象可能是導(dǎo)致研究者對信號通路傳導(dǎo)研究結(jié)果不一致的可能原因之一。有研究報道稱STAT3可能是連接PI3K和JAK2的適配器蛋白[13-14]。

    綜上所述,在大鼠心肌缺血再灌注引起的腦損傷模型中Jak2/STAT3通路通過調(diào)節(jié)炎癥因子的變化,進(jìn)而對心肌缺血再灌注后腦損傷發(fā)揮作用。Jak2特異性抑制劑AG490通過抑制炎癥因子的釋放,減輕心肌缺血再灌注所致的腦損傷。

    [1]Yu L,Li B,Zhang M,et al.Melatonin reduces PERK-eIF2α-ATF4-mediated endoplasmic reticulum stress during myocardial ischemia-reperfusion injury:role of RISK and SAFE pathways interaction[J].Apoptosis,2016,21(7):809-824.

    [2]Penna C,Settanni F,Tullio F,et al.GH-releasing hormone induces cardioprotection in isolated male rat heart via activation of RISK and SAFE pathways[J].Endocrinology,2013;154(4):b1624-1635.

    [3]Hu GQ,Du X,Li YJ,et al.Inhibition of cerebral ischemia/reperfusion injury-induced apoptosis:nicotiflorin and JAK2/STAT3 pathway[J].Neural Regen Res,2017,12(1):96-102.

    [4]Frias MA,Lecour S,James RW,et al.High density lipoprotein/sphingosine-1-phosphate-induced cardioprotection:Role of STAT3 as part of the SAFE pathway[J].JAKSTAT,2012,ik1(2):92-100.

    [5]Hausenloy DJ,Lecour S,Yellon DM.Reperfusion injury salvage kinase and survivor activating factor enhancement prosurvival signaling pathways in ischemic postconditioning:two sides of the same coin[J].Antioxid Redox Signal.2011,14(5):893-907.

    [6]Lecour S.Activation of the protective Survivor Activating Factor Enhancement(SAFE)pathway against reperfusion injury:Does it go beyond the RISK pathway?[J]J Mol Cell Cardiol,2009,47(1):32-40.

    [7]Luan HF,Zhao ZB,Zhao QH,et al.Hydrogen sulfide postconditioning protects isolated rat hearts against ischemia and reperfusion injury mediated by the JAK2/STAT3 survival pathway[J].Braz J Med Biol Res.2012,45(10):898-905.

    [8]Liu T,Fei Z,Gangavarapu KJ,et al.Interleukin-6 and JAK2/STAT3 signaling mediate the reversion of dexamethasone resistance after dexamethasone withdrawal in 7TD1 multiple myeloma cells[J].Leuk Res,2013,37(10):1322-1328.

    [9]Jo HA,Kim JY,Yang SH,et al.The role of local IL6/JAK2/STAT3 signaling in high glucose-induced podocyte hypertrophy.Kidney Res Clin Pract,2016,35(4):212-218.

    [10]Zhao L,Wu D,Sang M,et al.Stachydrine ameliorates isoproterenol-induced cardiac hypertrophy and fibrosis by suppressing inflammation and oxidative stress through inhibiting NF-κ B and JAK/STAT signaling pathways in rats[J].Int Immunopharmacol,2017,48:102-109.

    [11]Harima M,Arumugam S,Wen J,et al.Effect of carvedilol against myocardial injury due to ischemia-reperfusion of the brain in rats[J].Exp Mol Pathol,2015,98(3):558-562.

    [12]Marchant DJ,Boyd JH,Lin DC,et al.Inflammation in myocardial diseases[J].Circ Res,2012,110(1):126-144.

    [13]Li Y,Shan Z,Liu C,et al.MicroRNA-294 Promotes Cellular Proliferation and Motility through the PI3K/AKT and JAK/STAT Pathways by Upregulation of NRAS in Bladder Cancer[J].Biochemistry(Mosc),2017,82(4):474-482.

    [14]Kim MS,Lee WS,Jeong J,et al.Induction of metastatic potential by TrkB via activation of IL6/JAK2/STAT3 and PI3K/AKT signaling in breast cancer[J].Oncotarget,2015,6(37):40158-40171.

    Role of inflammatory factor in SAFE pathway on brain injury in rats induced by myocardial ischemia reperfusion.

    Z HAO Bo,MA Li,ZHAN Li-ying,LENG Yan,YUAN Quan,LIU Lian.Department of Anesthesiology,Renmin Hospital of Wuhan University,Wuhan 430060,Hubei,CHINA

    ObjectiveTo evaluate the role of inflammatory factor in survivor activating factor enhancement(SAFE)pathway on brain injury rats induced by myocardial ischemia reperfusion(IR).MethodsTwenty-four male Sprague-Dawley rats were divided into 3 groups by random number table(8 cases in each group):Sham group,IR group,IR+AG490 group.Myocardial IR was induced by occlusion of the anterior descending branch of the left coronary artery for 30 min in IR group and IR+AG490 group.The rats were sacrificed after 120 min of reperfusion and the brain were removed for the check of Janus Kinase 2/Signal Transducer and Activator of Transcription 3(JAK2/STAT3),interleukin-1(IL-1),interleukin-6(IL-6),interleukin-8(IL-8).Apoptosis was detected by TUNEL assay and cysteine-containing aspartic proteolytic enzyme 3(Caspase3)activity was detected by colorimetric assay.ResultsCompared with sham group,p-Jak2[(1.8±0.13)vs(1.0±0)],p-STAT3[(1.6±0.08)vs(1.0±0)],IL-1[(3.3±0.16)vs(1.0±0)],IL-6[(3.3±0.16)vs(1.0±0)],IL-8[(2.8±0.28)vs(1.0±0)],TUNEL[(18.8±1.29)%vs(4.2±0.44)%],Caspase3[(2.6±0.24)vs(1.0±0)]were significantly increased in IR group(P<0.05);compared with IR group,p-Jak2[(1.3±0.09)vs(1.8±0.13)],p-STAT3[(1.1±0.11)vs(1.6±0.08)],IL-1[(2.1±0.17)vs(3.3±0.16)],IL-6[(1.9±0.22)vs(3.3±0.16)],IL-8[(2.2±0.19)vs(2.8±0.28)],TUNEL[(13.2±1.03)%vs(18.8±1.29)%],Caspase3[(2.1±0.21)vs(2.6±0.24)]were significantly decreased in IR+AG490 group(P<0.05).ConclusionInhibiting the activation of SAFE pathway can reduce brain injury induced by myocardial IR in rats though decreasing the inflammatory factor of downstream.

    Survivor activating factor enhancement(SAFE)pathway;Inflammatory factor;Myocardial ischemia reperfusion;Brain injury

    R-332

    A

    1003—6350(2017)20—3269—03

    10.3969/j.issn.1003-6350.2017.20.001

    湖北省自然科學(xué)基金(編號:2016CFB167,2017CFB267);中央高?;究蒲袠I(yè)務(wù)費專項基金(編號:2042017kf0147)

    趙博。E-mail:zb14526@163.com

    2017-04-03)

    猜你喜歡
    腦損傷腦組織通路
    腦損傷 與其逃避不如面對
    幸福(2019年21期)2019-08-20 05:39:10
    小腦組織壓片快速制作在組織學(xué)實驗教學(xué)中的應(yīng)用
    芒果苷對自發(fā)性高血壓大鼠腦組織炎癥損傷的保護(hù)作用
    中成藥(2017年6期)2017-06-13 07:30:35
    Kisspeptin/GPR54信號通路促使性早熟形成的作用觀察
    DNA雙加氧酶TET2在老年癡呆動物模型腦組織中的表達(dá)及其對氧化應(yīng)激中神經(jīng)元的保護(hù)作用
    proBDNF-p75NTR通路抑制C6細(xì)胞增殖
    認(rèn)知行為療法治療創(chuàng)傷性腦損傷后抑郁
    通路快建林翰:對重模式應(yīng)有再認(rèn)識
    2,4-二氯苯氧乙酸對子代大鼠發(fā)育及腦組織的氧化損傷作用
    Hippo/YAP和Wnt/β-catenin通路的對話
    遺傳(2014年2期)2014-02-28 20:58:11
    亚洲男人的天堂狠狠| 久久久久免费精品人妻一区二区 | 久久国产乱子伦精品免费另类| 久久久久久久久久黄片| 亚洲五月天丁香| 老司机午夜福利在线观看视频| 国产99久久九九免费精品| 日本成人三级电影网站| 国产一区在线观看成人免费| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 久久九九热精品免费| 午夜成年电影在线免费观看| 岛国在线观看网站| 精品久久久久久,| 91麻豆精品激情在线观看国产| 国产av不卡久久| 香蕉丝袜av| 香蕉丝袜av| 精品久久久久久久末码| 久久九九热精品免费| 亚洲免费av在线视频| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 日韩欧美在线二视频| 91老司机精品| 日本熟妇午夜| 日韩中文字幕欧美一区二区| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 国产av一区二区精品久久| 免费av毛片视频| 日韩三级视频一区二区三区| 男女视频在线观看网站免费 | 桃红色精品国产亚洲av| 久久香蕉激情| 国产视频内射| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 国产激情欧美一区二区| 欧美精品啪啪一区二区三区| 一级a爱视频在线免费观看| 国产视频一区二区在线看| 色婷婷久久久亚洲欧美| 又黄又粗又硬又大视频| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 亚洲成人免费电影在线观看| 精品人妻1区二区| 在线观看一区二区三区| 国产精品一区二区三区四区久久 | 人人妻人人澡人人看| 特大巨黑吊av在线直播 | 亚洲第一青青草原| 美女高潮到喷水免费观看| av视频在线观看入口| 两性夫妻黄色片| 国产精品亚洲av一区麻豆| 免费在线观看日本一区| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 日韩三级视频一区二区三区| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 中文字幕av电影在线播放| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 黑丝袜美女国产一区| 午夜激情福利司机影院| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 村上凉子中文字幕在线| 欧美在线一区亚洲| 午夜久久久在线观看| 国产黄片美女视频| 在线永久观看黄色视频| 国产精品久久视频播放| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 波多野结衣高清作品| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 欧美一级a爱片免费观看看 | 黑丝袜美女国产一区| 桃色一区二区三区在线观看| 少妇熟女aⅴ在线视频| www日本黄色视频网| 两个人视频免费观看高清| 老司机福利观看| 成人国产综合亚洲| 亚洲国产欧洲综合997久久, | 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 亚洲国产精品成人综合色| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 婷婷六月久久综合丁香| 黄片大片在线免费观看| 亚洲中文日韩欧美视频| 亚洲精品一区av在线观看| 免费观看人在逋| 性欧美人与动物交配| 超碰成人久久| 国产私拍福利视频在线观看| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 亚洲国产欧美网| 国产野战对白在线观看| 欧美成人一区二区免费高清观看 | 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 女同久久另类99精品国产91| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 日韩精品中文字幕看吧| 国产精品二区激情视频| 国产亚洲欧美98| 欧美精品啪啪一区二区三区| 国产成年人精品一区二区| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 久久精品91蜜桃| 在线视频色国产色| 国产精品 国内视频| 久久午夜综合久久蜜桃| 亚洲精品在线观看二区| 亚洲av熟女| 色尼玛亚洲综合影院| 少妇 在线观看| 深夜精品福利| 黄色片一级片一级黄色片| 搡老熟女国产l中国老女人| 搡老岳熟女国产| 日本 欧美在线| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 一进一出抽搐gif免费好疼| 亚洲中文av在线| 可以在线观看的亚洲视频| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 丁香欧美五月| 制服诱惑二区| 又黄又粗又硬又大视频| 亚洲av美国av| 狂野欧美激情性xxxx| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 99热只有精品国产| 美女 人体艺术 gogo| 国产精品乱码一区二三区的特点| 久久中文看片网| 欧美乱妇无乱码| 日韩大尺度精品在线看网址| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 国产野战对白在线观看| 欧美午夜高清在线| 一夜夜www| 热99re8久久精品国产| 国产麻豆成人av免费视频| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 黑人操中国人逼视频| 亚洲熟女毛片儿| 成人国产一区最新在线观看| 国产免费av片在线观看野外av| 90打野战视频偷拍视频| 国产欧美日韩一区二区精品| 亚洲第一电影网av| 国产精品亚洲美女久久久| 好男人电影高清在线观看| 国产免费av片在线观看野外av| 免费av毛片视频| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 久久香蕉激情| 中文在线观看免费www的网站 | 婷婷亚洲欧美| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 老汉色av国产亚洲站长工具| 久久精品91无色码中文字幕| 狂野欧美激情性xxxx| 色播在线永久视频| 免费在线观看影片大全网站| 久久中文看片网| 色精品久久人妻99蜜桃| 久久久久国产一级毛片高清牌| 国产熟女xx| 久久久国产精品麻豆| 日本三级黄在线观看| 老司机午夜福利在线观看视频| 国产精品一区二区免费欧美| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 精品人妻1区二区| 国产亚洲欧美在线一区二区| 午夜精品久久久久久毛片777| 国产高清videossex| 国产乱人伦免费视频| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 久久中文字幕一级| 一进一出抽搐动态| 高潮久久久久久久久久久不卡| 一级黄色大片毛片| 免费av毛片视频| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 少妇粗大呻吟视频| 最近最新免费中文字幕在线| 亚洲一区二区三区不卡视频| 亚洲国产欧洲综合997久久, | 18禁国产床啪视频网站| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 在线观看免费视频日本深夜| 亚洲无线在线观看| 正在播放国产对白刺激| 2021天堂中文幕一二区在线观 | 伊人久久大香线蕉亚洲五| 满18在线观看网站| 看免费av毛片| 妹子高潮喷水视频| 亚洲一区中文字幕在线| 亚洲一区中文字幕在线| 两个人免费观看高清视频| 国产黄a三级三级三级人| 嫩草影院精品99| 两人在一起打扑克的视频| 精品国产国语对白av| 久久婷婷成人综合色麻豆| 国产成年人精品一区二区| a级毛片在线看网站| 亚洲男人的天堂狠狠| 婷婷亚洲欧美| 国产野战对白在线观看| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 欧美中文综合在线视频| 91九色精品人成在线观看| 97碰自拍视频| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 久久久久久久精品吃奶| 中文字幕精品亚洲无线码一区 | 欧美一区二区精品小视频在线| 久久天堂一区二区三区四区| 亚洲黑人精品在线| 欧美另类亚洲清纯唯美| 日本熟妇午夜| www日本黄色视频网| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 欧美久久黑人一区二区| 黄色成人免费大全| 午夜福利一区二区在线看| 精品免费久久久久久久清纯| 精品午夜福利视频在线观看一区| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 亚洲第一av免费看| 国产成人精品久久二区二区91| 婷婷丁香在线五月| 免费无遮挡裸体视频| 一区二区日韩欧美中文字幕| 一边摸一边抽搐一进一小说| 国产高清videossex| 熟女电影av网| 在线天堂中文资源库| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 久热爱精品视频在线9| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 午夜激情福利司机影院| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 99久久综合精品五月天人人| 美女国产高潮福利片在线看| 一区福利在线观看| 母亲3免费完整高清在线观看| 美女扒开内裤让男人捅视频| 麻豆成人av在线观看| 亚洲,欧美精品.| 国产亚洲av嫩草精品影院| 亚洲 欧美一区二区三区| 波多野结衣高清无吗| 丰满的人妻完整版| 国产一区在线观看成人免费| 亚洲五月天丁香| 欧美大码av| 丝袜在线中文字幕| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 一级作爱视频免费观看| 免费观看精品视频网站| 久久久国产欧美日韩av| 男女之事视频高清在线观看| 91麻豆av在线| 亚洲国产精品合色在线| 男女下面进入的视频免费午夜 | xxxwww97欧美| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 啦啦啦免费观看视频1| 日日干狠狠操夜夜爽| 91麻豆av在线| 一二三四在线观看免费中文在| 18禁国产床啪视频网站| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 精品高清国产在线一区| 国产精品久久久av美女十八| 成人午夜高清在线视频 | 黄色女人牲交| 午夜免费激情av| 国产激情偷乱视频一区二区| 淫妇啪啪啪对白视频| 中文字幕高清在线视频| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 免费在线观看亚洲国产| 中文字幕高清在线视频| 精品人妻1区二区| av在线天堂中文字幕| 色av中文字幕| 国产视频一区二区在线看| 岛国视频午夜一区免费看| 久99久视频精品免费| 国产熟女xx| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 桃红色精品国产亚洲av| 国产精品电影一区二区三区| 精品人妻1区二区| 人成视频在线观看免费观看| 精品久久久久久久久久久久久 | 91成人精品电影| 日本 欧美在线| 成人永久免费在线观看视频| 精品国产乱码久久久久久男人| 免费一级毛片在线播放高清视频| 美女高潮到喷水免费观看| 91老司机精品| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 国产精品,欧美在线| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 国产男靠女视频免费网站| 国产麻豆成人av免费视频| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 国产熟女午夜一区二区三区| 久久久久久人人人人人| 一级作爱视频免费观看| 老司机靠b影院| 国产精华一区二区三区| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 禁无遮挡网站| 身体一侧抽搐| 欧美日韩一级在线毛片| 国产高清视频在线播放一区| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 熟女电影av网| 给我免费播放毛片高清在线观看| 一区二区三区激情视频| 婷婷六月久久综合丁香| 午夜亚洲福利在线播放| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 激情在线观看视频在线高清| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 狠狠狠狠99中文字幕| 久久精品国产清高在天天线| а√天堂www在线а√下载| 黄色片一级片一级黄色片| netflix在线观看网站| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 搡老妇女老女人老熟妇| 国产单亲对白刺激| 少妇熟女aⅴ在线视频| 宅男免费午夜| 亚洲欧美激情综合另类| 欧美精品啪啪一区二区三区| 少妇被粗大的猛进出69影院| 成人手机av| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| netflix在线观看网站| 黄色女人牲交| 无人区码免费观看不卡| 精品福利观看| 亚洲,欧美精品.| 夜夜夜夜夜久久久久| 亚洲av五月六月丁香网| 亚洲国产欧洲综合997久久, | 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 男男h啪啪无遮挡| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 国产精品电影一区二区三区| 国产精品爽爽va在线观看网站 | 深夜精品福利| 久久青草综合色| 亚洲精品美女久久av网站| 中文字幕久久专区| 久久久久久大精品| 国产伦一二天堂av在线观看| 精品免费久久久久久久清纯| 国语自产精品视频在线第100页| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 亚洲国产精品合色在线| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 黄色成人免费大全| 国产色视频综合| 久久婷婷成人综合色麻豆| 午夜精品久久久久久毛片777| 麻豆久久精品国产亚洲av| 久久久国产成人免费| 老司机靠b影院| 欧美日韩福利视频一区二区| 国产精品影院久久| 狂野欧美激情性xxxx| 美女午夜性视频免费| 午夜久久久在线观看| 一区福利在线观看| 91大片在线观看| 亚洲第一青青草原| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 日韩精品青青久久久久久| 国产麻豆成人av免费视频| 国产精品综合久久久久久久免费| 免费搜索国产男女视频| 色婷婷久久久亚洲欧美| 国产精品 国内视频| 一级a爱视频在线免费观看| 久久精品成人免费网站| 老司机靠b影院| 黄色片一级片一级黄色片| 日本五十路高清| 免费看日本二区| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 日韩欧美一区视频在线观看| 精品久久久久久久久久免费视频| 亚洲中文av在线| 在线国产一区二区在线| 久久精品国产亚洲av高清一级| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 一区二区三区精品91| 亚洲精品中文字幕在线视频| 很黄的视频免费| 欧美av亚洲av综合av国产av| www.熟女人妻精品国产| 天堂√8在线中文| 国产1区2区3区精品| 一个人免费在线观看的高清视频| 少妇熟女aⅴ在线视频| 母亲3免费完整高清在线观看| 熟女电影av网| bbb黄色大片| 久久久国产欧美日韩av| 成人18禁在线播放| 日本精品一区二区三区蜜桃| 精品高清国产在线一区| 国产高清有码在线观看视频 | 91字幕亚洲| 最新在线观看一区二区三区| 久热这里只有精品99| xxx96com| 国产三级黄色录像| 欧美性长视频在线观看| 亚洲国产精品999在线| 精品欧美一区二区三区在线| 国内揄拍国产精品人妻在线 | 国产又色又爽无遮挡免费看| 最近最新中文字幕大全电影3 | 精品第一国产精品| 久久久国产精品麻豆| 欧美 亚洲 国产 日韩一| av超薄肉色丝袜交足视频| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 99久久国产精品久久久| 精品国产一区二区三区四区第35| xxx96com| 黑丝袜美女国产一区| 757午夜福利合集在线观看| 亚洲精品久久国产高清桃花| 18禁观看日本| 狂野欧美激情性xxxx| 黄色女人牲交| 久久 成人 亚洲| 国产伦人伦偷精品视频| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 欧美色视频一区免费| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 国产精品 欧美亚洲| 亚洲av成人av| 无限看片的www在线观看| 精品久久久久久久末码| 亚洲成人久久性| 两人在一起打扑克的视频| 日本 av在线| 高潮久久久久久久久久久不卡| 久久久精品欧美日韩精品| 亚洲一区中文字幕在线| 后天国语完整版免费观看| 最好的美女福利视频网| 国产片内射在线| 国产一区二区在线av高清观看| 国产亚洲精品一区二区www| 久久亚洲真实| 老司机靠b影院| 在线av久久热| 亚洲成人国产一区在线观看| 波多野结衣巨乳人妻| 满18在线观看网站| 身体一侧抽搐| 狂野欧美激情性xxxx| 免费电影在线观看免费观看| 精品卡一卡二卡四卡免费| 久久亚洲真实| 日本免费一区二区三区高清不卡| 精品久久蜜臀av无| 亚洲精品色激情综合| 在线观看舔阴道视频| 亚洲黑人精品在线| 国产爱豆传媒在线观看 | 天天一区二区日本电影三级| 一边摸一边抽搐一进一小说| 男人舔奶头视频| 老司机福利观看| 99热只有精品国产| 搡老熟女国产l中国老女人| 亚洲国产欧美一区二区综合| 亚洲全国av大片| 91麻豆av在线| 老汉色av国产亚洲站长工具| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 青草久久国产| 2021天堂中文幕一二区在线观 | 91成年电影在线观看| 成人国产综合亚洲| 麻豆成人午夜福利视频| 国产在线观看jvid| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 日韩欧美免费精品| 欧美三级亚洲精品| 久久久国产成人精品二区| 18禁国产床啪视频网站| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 日韩大码丰满熟妇| 嫩草影院精品99| 男女视频在线观看网站免费 | 国产在线精品亚洲第一网站| 国产视频一区二区在线看| 欧美激情 高清一区二区三区| 少妇的丰满在线观看| 国产精品久久久av美女十八| 夜夜夜夜夜久久久久| 大型黄色视频在线免费观看| 99riav亚洲国产免费| 国产精品1区2区在线观看.| 国产成人精品久久二区二区91| 老司机深夜福利视频在线观看| 男女之事视频高清在线观看| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 国产亚洲精品久久久久5区| 一本综合久久免费| 男女之事视频高清在线观看| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 狠狠狠狠99中文字幕| 色老头精品视频在线观看| 成人午夜高清在线视频 | 国产黄a三级三级三级人| 看片在线看免费视频| 女性生殖器流出的白浆| 国产成人av激情在线播放| 国产精品一区二区三区四区久久 | 免费看a级黄色片| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 叶爱在线成人免费视频播放| 在线观看www视频免费| 欧美丝袜亚洲另类 | 中文字幕人成人乱码亚洲影| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 满18在线观看网站| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 99riav亚洲国产免费| 一区二区三区高清视频在线| 女人被狂操c到高潮| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 免费高清在线观看日韩| 欧美国产精品va在线观看不卡| 最近最新免费中文字幕在线| 国产成人欧美| xxxwww97欧美| 草草在线视频免费看| 国产在线精品亚洲第一网站| 亚洲人成77777在线视频| 成人国产综合亚洲| 久久性视频一级片| 中文亚洲av片在线观看爽| 国产欧美日韩一区二区精品| 国产av在哪里看| 国产激情久久老熟女| www.999成人在线观看| 国产伦在线观看视频一区| 亚洲精华国产精华精| 日韩欧美 国产精品| 久久久久国产一级毛片高清牌| 久久亚洲精品不卡| 91老司机精品| 黑丝袜美女国产一区| 国产伦在线观看视频一区| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 精品国产亚洲在线| 国产国语露脸激情在线看| 国产野战对白在线观看| 亚洲国产精品久久男人天堂| 日本 av在线| 人人妻人人澡人人看| 久久久久久人人人人人| 无人区码免费观看不卡| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站 | 国产人伦9x9x在线观看| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 亚洲男人的天堂狠狠| 丰满的人妻完整版| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 黄片小视频在线播放| 国产精品一区二区免费欧美| 日本 av在线| 久久国产精品人妻蜜桃| 深夜精品福利| 久久青草综合色| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 9191精品国产免费久久| 欧美激情高清一区二区三区| 又黄又爽又免费观看的视频| 日韩三级视频一区二区三区| 午夜日韩欧美国产| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 国产成人精品久久二区二区免费| 亚洲中文av在线| 黑人操中国人逼视频| 亚洲性夜色夜夜综合|