Survivin和MMP—11在宮頸鱗癌中的表達(dá)及其相關(guān)性研究

王連云　　張普　　陳文兵　　熊文棟　　淮麗　　耿筱虹

[摘要] 目的 通過檢測生存素（Survivin）、基質(zhì)金屬蛋白酶-11（matrix metalloproteinases-11，MMP-11）在宮頸鱗癌組織中的表達(dá)，探討兩者與宮頸鱗癌的臨床病理特征關(guān)系及兩者的相關(guān)性。 方法 采用免疫組化方法檢測68例宮頸鱗癌組、27例宮頸上皮內(nèi)瘤變（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）組和16例正常宮頸組中Survivin、MMP-11的表達(dá)情況，分析各組宮頸組織中Survivin及MMP-11的陽性表達(dá)與臨床病理之間的關(guān)系。 結(jié)果 Survivin及MMP-11在宮頸鱗癌組中的陽性表達(dá)率（80.88%，69.12%）高于正常宮頸組（6.25%，6.25%）和CIN組（37.04%，40.74%），三組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。Survivin及MMP-11的陽性表達(dá)與宮頸鱗癌的臨床分期、組織病理學(xué)分期及是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P<0.05）。宮頸鱗癌組中Survivin與MMP-11的陽性表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.609，P<0.05）。 結(jié)論 Survivin及MMP-11在宮頸鱗癌組織中呈高表達(dá)，兩者陽性表達(dá)在宮頸鱗癌的發(fā)生、發(fā)展過程中起重要作用；聯(lián)合檢測Survivin及MMP-11的表達(dá)可能對(duì)早期診斷宮頸鱗癌及對(duì)改善宮頸鱗癌的預(yù)后起到重要作用。

[關(guān)鍵詞] 宮頸癌；宮頸上皮內(nèi)瘤變；生存素；基質(zhì)金屬蛋白酶-11

[中圖分類號(hào)] R737.33 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-9701（2017）27-0026-04

Expression of Survivin and MMP-11 in cervical squamous cell carcinoma and correlation study

WANG Lianyun1 ZHANG Pu2 CHEN Wenbing1 XIONG Wendong1 HUAI Li1 GENG Xiaohong1

1.Department of Gynecology and Obstetrics，the Second Affiliated Hospital of Wenzhou Medical University，Wenzhou 325027，China；2.Department of Pathology，the Second Affiliated Hospital of Wenzhou Medical University，Wenzhou 325027，China

[Abstract] Objective To investigate the expression of Survivin and matrix metalloproteinase-11（MMP-11） in the tissues of cervical squamous cell carcinoma， to explore the relationship between the two and the clinicopathological features of cervical squamous cell carcinoma and the correlation between them. Methods The expression of Survivin and MMP-11 in 68 cases of cervical squamous cell carcinoma group， 27 cases of cervical intraepithelial neoplasia（CIN） group and 16 cases of normal cervical group were detected by immunohistochemistry. The relationship between the positive expression of Survivin and MMP-11 in cervical tissues and clinicopathological features was analyzed in each groups. Results The positive expression rate of Survivin and MMP-11 in cervical squamous cell carcinoma group（80.88%，69.12%）was higher than that in normal cervical group（6.25%，6.25%）and CIN group（37.04%，40.74%）. The differences were statistically significant among the three groups（P<0.01）. The positive expression of Survivin and MMP-11 was related to the clinical staging， histopathological staging and lymph node metastasis of cervical squamous cell carcinoma（P<0.05）. There was a positive correlation between the expression of Survivin and MMP-11 in cervical squamous cell carcinoma group（r=0.609， P<0.05）. Conclusion Survivin and MMP-11 are highly expressed in cervical squamous cell carcinoma， and the positive expression of both plays an important role in the development and progression of cervical squamous cell carcinoma. The combined detection of Survivin and MMP-11 expression may play an important role in the early diagnosis of cervical squamous cell carcinoma and the prognosis of cervical squamous cell carcinoma.endprint

[Key words] Cervical cancer；Cervical intraepithelial neoplasia（CIN）；Survivin；Matrix metalloproteinase-11（MMP-11）

宮頸癌是世界上女性惡性腫瘤中發(fā)病率第二位的腫瘤，發(fā)病人數(shù)日益增加，且發(fā)病年齡呈年輕化趨勢。在我國，宮頸癌的發(fā)病通常在35歲以后，高峰年齡在45～50歲之間；每年大約有6萬左右的新發(fā)病例，且發(fā)病率和死亡率仍在不斷上升，已嚴(yán)重威脅到女性的健康和生命[1-3]。宮頸癌中75%～80%為宮頸鱗狀細(xì)胞癌。宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展是細(xì)胞增殖相關(guān)基因、凋亡相關(guān)基因以及轉(zhuǎn)移相關(guān)基因等多基因作用及表達(dá)的結(jié)果，而轉(zhuǎn)移則是導(dǎo)致惡性腫瘤難以治療的重要原因之一，其發(fā)生是多階段的。本研究通過免疫組織化學(xué)方法檢測Survivin及MMP-11在宮頸鱗癌組織、宮頸上皮內(nèi)瘤變組織和正常宮頸組織中的表達(dá)，探討Survivin及MMP-11與宮頸鱗癌發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系及臨床意義，并探討兩者之間的關(guān)系，以期為宮頸鱗癌發(fā)病機(jī)制的研究及尋求新的治療宮頸鱗癌靶點(diǎn)提供理論依據(jù)。現(xiàn)報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1 一般資料

選取我院2014年1月～2016年10月存檔的石蠟包埋宮頸鱗癌組織68例為研究對(duì)象，設(shè)為宮頸鱗癌組，并選擇同期在門診行宮頸活檢或LEEP刀診斷為CIN的患者27例（其中CIN Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ各9例）為CIN組及住院患者中因子宮肌瘤或子宮腺肌癥等非宮頸疾病行全子宮切除術(shù)的正常宮頸組織16例為正常宮頸組；所有組織標(biāo)本均經(jīng)病理組織學(xué)確診。患者年齡33～72歲，平均48歲。所有鱗癌患者術(shù)前均未行放、化療等治療。所有病理切片由兩位經(jīng)驗(yàn)豐富的病理科醫(yī)師共同確認(rèn)。

1.2 方法

全部標(biāo)本使用10%甲醛固定，石蠟包埋，4 μm連續(xù)切片，行HE染色，采用免疫組織化學(xué)SP法檢測所有標(biāo)本，按免疫組化試劑盒說明進(jìn)行操作（試劑盒為福建邁新生物開發(fā)有限公司產(chǎn)品）。試劑Survivin購自福建邁新生物開發(fā)有限公司；試劑MMP-11購自北京博奧森生物技術(shù)有限公司。

1.3 觀察指標(biāo)及判定標(biāo)準(zhǔn)

Survivin及MMP-11的陽性表達(dá)均以細(xì)胞漿為主，Survivin也可見于細(xì)胞核的表達(dá)，而MMP-11細(xì)胞核不表達(dá)。兩者的表達(dá)結(jié)果均表現(xiàn)為黃色、棕黃色或棕褐色顆粒。判定標(biāo)準(zhǔn)：細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)黃色顆粒視為陽性，隨機(jī)觀察5個(gè)高倍視野。①0分：陽性細(xì)胞數(shù)≤5%；②1分：陽性細(xì)胞數(shù)在6%～25%之間；③2分：陽性細(xì)胞數(shù)在26%～50%之間；④3分：陽性細(xì)胞數(shù)在51%～75%之間；⑤4分：陽性細(xì)胞數(shù)>75%。陽性強(qiáng)度：①1分：黃色；②2分：棕黃色；③3分：棕褐色。兩項(xiàng)積分相乘，0分為陰性（-），1～4分為弱陽性（+）；5～8分為中等陽性（++）；9～12分為強(qiáng)陽性（+++）。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

運(yùn)用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用χ2 檢驗(yàn)或Fisher精確概率法；Survivin和MMP-11兩者之間相關(guān)性采用Spearman 等級(jí)相關(guān)分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Survivin及MMP-11在不同宮頸組織中的表達(dá)

本研究顯示Survivin及MMP-11均在宮頸鱗癌組中的陽性表達(dá)率最高，在CIN組中次之，在正常宮頸組中表達(dá)率最低，三組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。

2.2 Survivin及MMP-11在宮頸鱗癌組織中表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

Survivin的陽性表達(dá)與宮頸鱗癌患者的臨床分期、組織病理學(xué)分級(jí)及是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），而與年齡、是否有脈管浸潤無相關(guān)性（P>0.05）。MMP-11的陽性表達(dá)僅與臨床分期和是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有相關(guān)性（P<0.05），而與年齡、組織病理學(xué)分級(jí)及是否有脈管浸潤無相關(guān)性（P>0.05）。

2.3 宮頸鱗癌組中Survivin和MMP-11表達(dá)的相關(guān)分析

分析Survivin和MMP-11在宮頸鱗癌組中陽性表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)宮頸癌組中Survivin及MMP-11陽性表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.609，P<0.05）。

3 討論

3.1 Survivin與宮頸鱗癌

Survivin是到目前為止發(fā)現(xiàn)的分子量最小但作用最強(qiáng)的凋亡抑制因子，其基因定位于人類17號(hào)染色體，其生物學(xué)功能主要表現(xiàn)為對(duì)細(xì)胞凋亡的抑制、參與細(xì)胞周期的調(diào)控及參與血管的生成等[4-7]，其與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移及預(yù)后有著密切的關(guān)系。在胚胎時(shí)期、胎兒發(fā)育過程中及在未分化的成熟組織中有表達(dá)，在正常成人組織及成人終末分化的成熟組織（除胸腺、生殖腺）中不表達(dá)或極低表達(dá)，而在多種腫瘤組織中有著較高表達(dá)[8-10]。本實(shí)驗(yàn)檢測了Survivin蛋白在正常宮頸組織、CIN組織及宮頸鱗癌組織中的表達(dá)情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，Survivin蛋白在正常宮頸表達(dá)極少，僅1例，且為弱陽性表達(dá)，而在CIN Ⅰ～Ⅲ級(jí)和宮頸鱗癌中的陽性表達(dá)逐漸增高，三者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與有些研究[11-13]結(jié)果一致。說明Survivin在正常宮頸演變至CIN，以及最終發(fā)展為宮頸癌的過程中，表現(xiàn)出一種漸進(jìn)的表達(dá)過程，可能與Survivin在宮頸鱗癌發(fā)生、發(fā)展過程中抑制腫瘤細(xì)胞凋亡作用減弱導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的失控性生長有關(guān)，表明Survivin對(duì)宮頸鱗癌的發(fā)生、發(fā)展有著重要作用。同時(shí)本研究結(jié)果還顯示，伴隨著宮頸鱗癌臨床分期的進(jìn)展、腫瘤細(xì)胞惡性程度的升高及腫瘤轉(zhuǎn)移的發(fā)生，Survivin的表達(dá)率及陽性程度亦明顯增高，該結(jié)果與丁玉梅等[14]的研究結(jié)果相似。說明Survivin的陽性表達(dá)與宮頸鱗癌的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移有著密切的關(guān)系，其高表達(dá)預(yù)示著宮頸鱗癌惡性程度的升高及轉(zhuǎn)移的發(fā)生，使腫瘤的預(yù)后更加不良。上述結(jié)果表明Survivin有可能成為協(xié)助宮頸鱗癌早期診斷及判斷患者預(yù)后的一項(xiàng)重要指標(biāo)，檢測Survivin的表達(dá)可幫助臨床早期診斷宮頸鱗癌，從而改善患者的預(yù)后。endprint

3.2 MMP-11與宮頸鱗癌

基質(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMP）是一類鋅離子依賴的參與細(xì)胞外基質(zhì)降解的內(nèi)切酶家族，其包含多個(gè)成員，有著不同的結(jié)構(gòu)和功能[15]。MMP-11 是由Basset P等[16]于1999年首先發(fā)現(xiàn)，由于其和先前發(fā)現(xiàn)的基質(zhì)分解素有著相似的結(jié)構(gòu)，被命名為基質(zhì)分解素-3。目前的研究表明，MMP-11表達(dá)的上調(diào)與胃癌、乳腺癌、喉癌等多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移有著密切的關(guān)系[17-19]。本研究通過檢測MMP-11在正常宮頸組織、CIN組織及宮頸鱗癌組織中的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)隨著宮頸病變的進(jìn)展，MMP-11的表達(dá)明顯上升，宮頸鱗癌組織中MMP-11陽性率（69.12%）顯著高于CIN（40.74%）及正常子宮頸組織（6.25%），其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），與李本英等[20]的研究結(jié)果一致，同時(shí)對(duì)MMP-11 的表達(dá)與宮頸鱗癌臨床特征相關(guān)性的分析可以看出，MMP-11 的表達(dá)與臨床分期及是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有相關(guān)性（P<0.05），而與患者年齡、組織病理學(xué)分級(jí)及是否有脈管浸潤無關(guān)（P>0.05）。這表明MMP-11的高表達(dá)與宮頸鱗癌的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移有一定的相關(guān)性，其可能促進(jìn)了宮頸鱗癌的進(jìn)展及轉(zhuǎn)移，因此檢測MMP-11為判斷腫瘤的惡性程度、預(yù)測子宮頸癌的分期或轉(zhuǎn)移提供了參考依據(jù)。

3.3 Survivin和MMP-11表達(dá)的相關(guān)性

本研究結(jié)果還顯示了Survivin和MMP-11在宮頸鱗癌組織中的表達(dá)呈正相關(guān)（P<0.05），提示Survivin和MMP-11兩者在引起宮頸鱗癌細(xì)胞的惡性增殖的同時(shí)抑制了腫瘤細(xì)胞的凋亡，二者對(duì)宮頸鱗癌細(xì)胞惡性增殖及抑制其凋亡方面有協(xié)同作用，因此聯(lián)合檢測Survivin和MMP-11的表達(dá)，對(duì)早期發(fā)現(xiàn)、早期處理宮頸鱗癌，改善宮頸鱗癌的預(yù)后有著重要的意義。

綜上所述，Survivin和MMP-11在正常宮頸、CIN及宮頸鱗癌組織中的表達(dá)逐漸升高，兩者可能參與了宮頸鱗癌的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移。二者的過度表達(dá)與宮頸鱗癌的惡性程度及浸潤程度密切相關(guān)，可作為早期診斷宮頸鱗癌的標(biāo)記物，對(duì)早期診斷及改善宮頸鱗癌的預(yù)后有著積極的意義。

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（收稿日期：2017-07-16）endprint