原液中鐵殘留檢測(cè)方法研究

趙辰宇（聊城市第二中學(xué)高二七班，山東 聊城 252000）

原液中鐵殘留檢測(cè)方法研究

趙辰宇（聊城市第二中學(xué)高二七班，山東 聊城 252000）

通過(guò)實(shí)驗(yàn)方法的建立，對(duì)含蛋白原液中鐵殘留檢測(cè)方法進(jìn)行摸索，確定出最簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確的檢測(cè)方法。

鐵殘留；檢測(cè)方法

通過(guò)查詢(xún)大量資料，未發(fā)現(xiàn)含蛋白原液的鐵殘留的檢測(cè)方法，有一部分藥用輔料規(guī)定了鐵殘留的檢測(cè)方法。氯化鈉不僅是輔料，更是一種注射劑（醫(yī)用0.9%生理鹽水），同時(shí)也是原液復(fù)溶的溶劑，因此，以氯化鈉的檢測(cè)量及檢測(cè)限為原液的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)較為適宜。

表1 .藥典中部分原輔料鐵殘留檢測(cè)限比較

1 實(shí)驗(yàn)方法的確立

由于氯化鈉是小分子，原液中含有大分子蛋白會(huì)干擾最終的比色。因此，怎樣建立一個(gè)有效地去除蛋白而不影響溶液中鐵元素的前處理方法是原液鐵殘留檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)建立的關(guān)鍵。

1.1 蛋白去除方法的提出及驗(yàn)證

通過(guò)查資料，沉淀除去蛋白的方法有很多，如酚-氯仿法、硫酸銨鹽析法、冰凍乙醇法及丙酮法等。而除蛋白的方法在此應(yīng)符合下面幾個(gè)基本原則：一、不能影響溶液中鐵元素的含量；二、盡量不引入新的雜質(zhì)離子；三、盡量減少有毒、有害物質(zhì)的使用。經(jīng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，其中，酚-氯仿法會(huì)明顯影響鐵離子；硫酸銨鹽析法和冰乙醇法不能完全除干凈蛋白，最終的樣品比色溶液中容易出現(xiàn)乳光，而影響比色；而丙酮需要設(shè)備較復(fù)雜，處理程序較多、時(shí)間較長(zhǎng)，容易殘留影響比色。

根據(jù)以上情況和原則，經(jīng)過(guò)進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)摸索確立了兩種方法：低pH沉淀和高溫?zé)胱瞥恋矸?。這兩種方法的優(yōu)點(diǎn)都不引入新的雜離子，不會(huì)干擾最終的比色判定；其次是方法簡(jiǎn)單易行，易操作、易控制。

1.2 蛋白去除方法的確立

1.2.1 低pH沉淀法：

取兩個(gè)燒杯，分別放入5ml樣品原液；5ml樣品原液和1.5ml標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液，作為樣品陽(yáng)性對(duì)照；兩燒杯靜置半小時(shí)以上，使蛋白充分沉淀。然后離心，把上清倒入比色管，沉淀管小心洗三遍都移入比色管。下面步驟依據(jù)藥典氯化鈉鐵殘留檢測(cè)，不同點(diǎn)是樣品管和陽(yáng)性對(duì)照管都不加4ml稀鹽酸。重復(fù)三次檢測(cè)，一次沉淀去除較好，比色成功，樣品管顏色淺于對(duì)照管，陽(yáng)性對(duì)照管略深于對(duì)照管。另兩次樣品管和陽(yáng)性對(duì)照管都有淡乳光，影響比色。經(jīng)過(guò)多次反復(fù)試驗(yàn)，結(jié)果均不理想。說(shuō)明低pH沉淀蛋白的方法不太穩(wěn)定，重復(fù)性不好。

1.2.2 高溫?zé)胱瞥恋矸ǎ?/p>

取三個(gè)燒杯，分別放入5ml樣品原液；5ml樣品原液和1.5ml標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液，作為樣品陽(yáng)性對(duì)照；1.5ml標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液，作為方法對(duì)照；將以上三組溶液一起進(jìn)行高溫?zé)胱?。把樣品原液和樣品?yáng)性對(duì)照的兩個(gè)燒杯同時(shí)放在約120℃的溫度迅速加熱煮沸使蛋白變性，考慮到除蛋白更保險(xiǎn)、更徹底，第一次兩燒杯都熾灼到炭化，再各加4ml稀鹽酸，用玻璃棒充分?jǐn)嚻鹛蓟?，反?yīng)15分鐘以上，使鐵離子充分溶解。過(guò)濾，把濾液轉(zhuǎn)入納氏比色管后發(fā)現(xiàn)，溶液呈淺黃色，必定影響比色，終止試驗(yàn)，判定不適宜用高溫?zé)胱铺蓟姆椒ㄈコ鞍住?/p>

修正此方法為高溫?zé)胱普舾傻惶蓟?。其它步驟同上述。這樣以來(lái)，樣品和樣品陽(yáng)性對(duì)照濾液的顏色清亮無(wú)色，合乎要求。重復(fù)三次檢測(cè)，樣品等濾液均清亮無(wú)色，證明此法重復(fù)性較好，比色結(jié)果為：方法對(duì)照組與陽(yáng)性對(duì)照組顏色深淺一致，說(shuō)明高溫?zé)胱茖?duì)溶液鐵離子沒(méi)有影響。

表2 .原液樣品蛋白去除主要方法的比較

3 檢測(cè)結(jié)果和結(jié)論

3.1 結(jié)果

重復(fù)次數(shù)第一次第二次第三次樣品管（①）明顯淺于②明顯淺于②明顯淺于②對(duì)照管（②）略淺于③略淺于③略淺于③樣品陽(yáng)性對(duì)照（③）略深于②略深于②略深于②方法對(duì)照（④）與②一致與②一致與②一致

熾灼非碳化去除蛋白法最終比色結(jié)果匯總分析詳見(jiàn)下表：

對(duì)照管顏色明顯深于樣品管，樣品陽(yáng)性管顏色略深于對(duì)照管，證明蛋白沉淀對(duì)鐵離子的回收無(wú)顯著影響。方法對(duì)照組顏色也與對(duì)照組一致，證明高溫?zé)胱茖?duì)鐵離子回收無(wú)顯著影響。

3.2 結(jié)論

熾灼非碳化去除蛋白法，對(duì)溶液鐵離子沒(méi)有明顯影響，而且操作簡(jiǎn)單、易行，所用也是常規(guī)儀器，沒(méi)有新增其它有毒、有害試劑。比色效果穩(wěn)定可靠，是一個(gè)含蛋白的液體制品檢測(cè)鐵殘留的可靠方法。

[1]2015版藥典二部，正文氯化鈉；附錄ⅧG鐵鹽檢查法