探討一種防風(fēng)飲片快速質(zhì)量評(píng)價(jià)方法

北京市宣武中醫(yī)醫(yī)院（100050）李長(zhǎng)萍

北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院（100102）姜丹 陳銘陽(yáng) 劉春生

近年來，中藥市場(chǎng)中以次充好的現(xiàn)象呈增加趨勢(shì)，質(zhì)量不合格的中藥如果流入醫(yī)院藥房，不但會(huì)影響病人用藥的有效性，長(zhǎng)此以往還會(huì)影響醫(yī)生對(duì)處方中用藥劑量的判斷。而在醫(yī)院藥房中藥材驗(yàn)收工作中，驗(yàn)收品種多、數(shù)量大，效率較低，因此建立一種快速有效、操作簡(jiǎn)便的評(píng)價(jià)中藥質(zhì)量的方法具有一定的現(xiàn)實(shí)意義。

在《中國(guó)藥典》中，評(píng)價(jià)多數(shù)中藥飲片的質(zhì)量主要依靠浸出物和指標(biāo)性成分含量?jī)蓚€(gè)標(biāo)準(zhǔn)[1]，其中含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)能夠反映中藥中單個(gè)或數(shù)個(gè)指標(biāo)性成分含量是否合格，醇溶性浸出物含量標(biāo)準(zhǔn)則能夠反映中藥中所有醇溶性成分總含量是否達(dá)標(biāo)。目前有文獻(xiàn)報(bào)道的評(píng)價(jià)防風(fēng)質(zhì)量的方法多數(shù)是基于各種指標(biāo)性成分或活性成分如升麻素苷、升麻素、5-0-甲基維斯阿米醇苷、色原酮等，李碩等建立了一種基于灰色關(guān)聯(lián)度法評(píng)價(jià)商品防風(fēng)藥材質(zhì)量的方法，但卻鮮有關(guān)于醇溶性浸出物含量的報(bào)道?！吨袊?guó)藥典》中規(guī)定的測(cè)定醇溶性浸出物及指標(biāo)性成分含量的步驟繁瑣，耗時(shí)較長(zhǎng)，為保證藥品質(zhì)量，確保臨床用藥的安全有效，同時(shí)節(jié)省人力物力，筆者現(xiàn)結(jié)合工作實(shí)踐，將一種快速評(píng)價(jià)防風(fēng)質(zhì)量的方法報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器TU-1901雙光束紫外可見分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）；METTLER AE 240電子分析天平(d=0.1mg 北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)；HH-4數(shù)顯恒溫水浴鍋（金壇市華峰儀器有限公司）；島津LC20A型高效液相色譜儀（LC-20AT高效泵，SPD-20A檢測(cè)器，LC solution工作站，日本島津公司）。

1.2 試劑與飲片乙醇（分析純，北京化工廠），甲醇（色譜純，美國(guó)Fisher公司），升麻素苷和5-0-甲基維斯阿米醇苷標(biāo)準(zhǔn)品（上海將來生化試劑有限公司）。所用防風(fēng)飲片經(jīng)北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定系主任劉春生教授鑒定，基原均為傘形科植物防風(fēng)。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 醇溶性浸出物含量測(cè)定 依《中國(guó)藥典》2015版所述，防風(fēng)采用醇溶性浸出物測(cè)定法下的熱浸法測(cè)定。取供試品2g，精密稱定，置100mL錐形瓶中，精密加醇50mL，密塞，稱定重量，靜置1小時(shí)后，連接回流冷凝管，加熱至沸騰，并保持微沸1小時(shí)。放冷后，取下錐形瓶，密塞，再稱定重量，用醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用干燥濾器濾過，精密量取濾液25mL，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3小時(shí)，置干燥器中冷卻30分鐘，迅速精密稱定重量。以干燥品計(jì)算供試品中醇溶性浸出物的含量(%)[1]。

2.2 指標(biāo)性成分含量測(cè)定

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 取升麻素苷對(duì)照品及5-0-甲基維斯阿米醇苷對(duì)照品適量，精密稱定，分別加甲醇制成每1mL各含60mg的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備取防風(fēng)細(xì)粉約0.25g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇10mL，稱定重量，水浴回流2小時(shí)，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 HPLC分析條件 色譜柱：Agilent ZORBAXEclipse XDB C18色譜柱（25cm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇-水(40:60)，流速1 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)254nm。

2.2.4 測(cè)定方法 分別精密吸取對(duì)照品溶液各3μL與供試品溶液2μL，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。

2.3 制備醇浸液供試品的方法學(xué)考察 影響供試品溶液的因素有藥材飲片的粉碎度，浸泡時(shí)的溫度和浸泡時(shí)間，基于此，設(shè)計(jì)如附表1所示正交試驗(yàn)確定獲得供試品溶液的最佳方法。

根據(jù)《中國(guó)藥典》中規(guī)定的飲片和醇的比例，取防風(fēng)飲片（粉末）1g，精密稱定，置100mL錐形瓶中，精密加入無水乙醇25mL，置室溫下浸泡（水浴鍋中加熱）指定時(shí)間后過濾，測(cè)定濾液在特定波長(zhǎng)下的吸光度。

2.4 供試品溶液吸光度測(cè)定

2.4.1 最大吸收波長(zhǎng)的測(cè)定 取2.1項(xiàng)下獲得的濾液在190～700nm做紫外可見全波長(zhǎng)掃描，確定其最大吸收波長(zhǎng)。

2.4.2 吸光度測(cè)定 取2.3項(xiàng)下的濾液，稀釋10倍后在2.3.1項(xiàng)得到的最大吸收波長(zhǎng)下分別測(cè)定吸光度。

3 結(jié)果與分析

3.1 制備供試品溶液方法學(xué)考察結(jié)果 紫外-可見全波長(zhǎng)掃描顯示防風(fēng)醇浸液的最大吸收波長(zhǎng)在228nm。依據(jù)附表1設(shè)計(jì)的正交試驗(yàn)結(jié)果如附表2所示。根據(jù)附表2得到的結(jié)果繪制不同條件下防風(fēng)醇浸液的吸光度隨浸泡時(shí)間的變化曲線，如下面附圖1～4所示。

附表1 防風(fēng)醇溶性浸出物正交試驗(yàn)因素水平表

附表2 防風(fēng)醇浸液正交試驗(yàn)結(jié)果表

附表3 22批防風(fēng)的醇浸液吸光度及各組分含量測(cè)定結(jié)果

從4個(gè)附圖中可以看出防風(fēng)飲片無論是在室溫還是在50℃水浴加熱下浸泡，醇浸液的吸光度均難以在1h內(nèi)達(dá)到一個(gè)穩(wěn)定的值；而防風(fēng)粉末在室溫和50℃水浴加熱下浸泡，醇浸液的吸光度均能在20min以內(nèi)時(shí)達(dá)到一個(gè)穩(wěn)定的值。故此選用室溫浸泡防風(fēng)粉末20min的條件獲取醇浸液。

3.2 防風(fēng)醇浸液吸光度與各組分含量相關(guān)性分析 按上述方法獲得的22批防風(fēng)的醇浸液吸光度及其醇溶性浸出物含量測(cè)定結(jié)果如附表3所示。

附圖1 室溫下浸泡防風(fēng)飲片醇浸液吸光度隨浸泡時(shí)間變化圖

附圖2 水浴加熱下浸泡防風(fēng)飲片醇液吸光度隨浸泡時(shí)間變化圖

附圖3 室溫下浸泡防風(fēng)粉末醇浸液吸光度隨浸泡時(shí)間變化圖

附圖4 水浴加熱下浸泡防風(fēng)粉末醇液吸光度隨浸泡時(shí)間變化圖

使用SAS8.2軟件分析三組變量?jī)蓛芍g的相關(guān)性，各組數(shù)據(jù)服從正態(tài)分布，因此選用pearson相關(guān)系數(shù)。

醇浸液吸光度（x）與醇溶性浸出物（y）的相關(guān)性計(jì)算結(jié)果如下：rs=0.449 P=0.036＜0.05證明防風(fēng)醇浸液吸光度與醇溶性浸出物含量之間有顯著正相關(guān)關(guān)系。

醇浸液吸光度（x）升麻素苷和5-0-甲基維斯阿米醇苷總含量（z）的相關(guān)性計(jì)算結(jié)果如下：rs=0.288 P=0.194＞0.05證明防風(fēng)醇浸液吸光度與其指標(biāo)性成分總含量之間無顯著相關(guān)關(guān)系。

由此可知，根據(jù)3.1中確定的方法獲得的防風(fēng)醇浸液的吸光度與其醇溶性浸出物含量具有顯著正相關(guān)關(guān)系（P＜0.05），但與《中國(guó)藥典》中規(guī)定的指標(biāo)性成分總含量并無顯著相關(guān)關(guān)系。因此，通過該方法獲得的醇浸液的吸光度雖然可反映防風(fēng)醇溶性浸出物含量，但并不能體現(xiàn)藥典中的指標(biāo)性成分總含量。

4 討論

本研究建立了一種快速、簡(jiǎn)便且較為準(zhǔn)確地檢測(cè)防風(fēng)飲片醇溶性浸出物含量是否合格的方法。利用本法，可快速篩選出醇溶性浸出物含量不合格的防風(fēng)，它們的醇浸液吸光度值顯著低于其他大多數(shù)合格產(chǎn)品。

在方法學(xué)考察中，防風(fēng)飲片在不打粉的情況下，醇浸液的吸光度在1 h 內(nèi)不能達(dá)到一個(gè)穩(wěn)定的值，究其原因是因?yàn)榉里L(fēng)飲片與醇的接觸面積遠(yuǎn)小于粉末與醇的接觸面積，如果方法中改用飲片進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，無法達(dá)到快速檢測(cè)的預(yù)期，并且防風(fēng)飲片大小不一，很難找到吸光度穩(wěn)定的極值點(diǎn)。在是否水浴加熱的選擇中我們發(fā)現(xiàn)，無論是在室溫下還是在5 0 ℃水浴加熱，醇浸液的吸光度均在10min左右到達(dá)極限，為了在檢測(cè)過程中節(jié)省成本，簡(jiǎn)化步驟，故此選擇在室溫下浸泡防風(fēng)粉末的方法。

《中國(guó)藥典》中規(guī)定防風(fēng)飲片醇溶性浸出物含量低于13%或升麻素苷和5-0-甲基維斯阿米醇苷總含量低于0.24%均為不合格[1]，這22批防風(fēng)中醇溶性浸出物含量低于合格限有16批，而升麻素苷和5-0-甲基維斯阿米醇苷總含量全部合格，可見市場(chǎng)上防風(fēng)飲片的指標(biāo)性成分大多數(shù)高于合格限，而另一指標(biāo)醇溶性浸出物含量則大多不合格，因此對(duì)市場(chǎng)上防風(fēng)醇溶性浸出物含量的檢測(cè)和控制是十分必要的。本研究中報(bào)道的方法所獲得的醇浸液吸光度值雖然不能反映防風(fēng)飲片中升麻素苷和5-0-甲基維斯阿米醇苷的總含量，但可以一定程度上反映飲片中的醇溶性浸出物含量，具有一定實(shí)際意義。

綜上所述，本方法能為藥房工作人員節(jié)省下大量的檢測(cè)時(shí)間，且能將此法擴(kuò)展到其它中藥飲片的快速質(zhì)量評(píng)價(jià)中，具有較高的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值，能為中藥飲片的快速質(zhì)量評(píng)價(jià)提供有力的技術(shù)支持。