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    3種激光輻照對燈盞花抗氧化系統(tǒng)的影響

    2017-10-27 13:02:32林麗飛劉春國熊力軍
    江蘇農(nóng)業(yè)科學 2017年16期
    關(guān)鍵詞:生化指標

    林麗飛 劉春國 熊力軍

    摘要:以燈盞花組織培養(yǎng)苗為材料,研究He-Ne激光、半導體激光、CO2激光對燈盞花幾組抗性指標的影響。使用3種激光對燈盞花組培苗進行不同時間的輻照處理。結(jié)果表明,3種激光中,CO2激光輻照60 s時,過氧化物酶活性是對照組的33倍,過氧化氫酶活性是對照組的48倍,超氧化物歧化酶活性比對照組提高3331 U/g;輻照180 s時,丙二醛含量比對照組降低244 μmol/g,可溶性糖含量急劇下降,為0045%。He-Ne激光輻照60 s、半導體激光輻照30 s時,脯氨酸含量分別為9624、9498 μg/g,是對照組的35倍,CO2激光輻照180 s、半導體激光輻照30 s時,可溶性蛋白含量最高,比對照提高745 mg/g。不同激光對燈盞花組培苗輻照一定時間可提高其抗氧化活性,有利于提高燈盞花抗逆性。

    關(guān)鍵詞:燈盞花;He-Ne激光;半導體激光;CO2激光;生化指標

    中圖分類號: S56723+901文獻標志碼:

    文章編號:1002-1302(2017)16-0135-03

    收稿日期:2016-11-09

    基金項目:國家自然科學基金(編號:61068003);云南省應(yīng)用基礎(chǔ)研究計劃(編號:2009ZC131M);第一批紅河學院中青年學術(shù)帶頭人后備人才項目(編號:2010PY0104)。

    作者簡介:林麗飛(1978—),女,云南建水人,碩士,副教授,主要從事植物保護、植物細胞工程的研究。E-mail:llf_biology2@126 com。

    通信作者:張燦邦,教授,碩士生導師,從事光學物理學研究。E-mail:cbzhanguoh@ gmailcom。

    燈盞花,學名短葶飛蓬[Erigeron breviscapus (Vant) Hand-Mazz],別稱燈盞細辛,為菊科飛蓬屬多年生野生草本植物,主要分布于西藏、四川、云南等省[1-2]。燈盞花生長在海拔1 200~3 500 m的中山、亞高山開闊山坡草地和林緣地帶,是一種重要的藥用植物,其作用主要有活血化瘀、舒筋、止痛、改善微循環(huán),對預(yù)防心血管等疾病具有特殊的療效[3]。目前,藥材市場對燈盞花的需求不斷擴大,而燈盞花自然繁殖率低,發(fā)芽率低,加上過度的挖掘,使得野生燈盞花資源逐漸枯竭[4]。為滿足廣大市場的需求,研究開發(fā)高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)、適應(yīng)能力強、抗逆性好的燈盞花品種已成為當前研究的熱點。近年來,激光應(yīng)用于生物學領(lǐng)域已取得大量研究成果[5-20],特別是激光對生物體產(chǎn)生具有重要意義的生物效應(yīng)更是倍受人們的關(guān)注。本研究運用3種激光不同輻照時間輻照燈盞花組織培養(yǎng)苗,并對輻照后燈盞花抗性指標作了系統(tǒng)的測定,從而找出最佳激光類型和不同激光的最佳處理劑量,以期最終能把激光技術(shù)應(yīng)用于燈盞花的快速繁殖和大量生產(chǎn)。

    1材料與方法

    11材料

    燈盞花無菌培養(yǎng)苗、葉片、 愈傷組織及芽來自于紅河學院組培室,培養(yǎng)條件為溫度(25±2) ℃,光照時間16 h/d,光照度1 500~3 000 lx。

    12方法

    121激光器輻照技術(shù)

    激光器光源與反光鏡相距50 cm,反光鏡反射點與材料放置點相距50 cm,He-Ne激光器電流調(diào)節(jié)為06 mA,CO2激光器電流調(diào)節(jié)為01 mA。He-Ne激光光束到達材料放置點時的功率約為16 mW,半導體激光器光束到達材料放置點的功率約236 mW,CO2激光器功率相對要高,為18~23 mW。3種激光輻照時間為30、60、120、180 s。具體操作見圖1。

    122方法燈盞花組培苗的培養(yǎng)配方參照文獻[19-20]。選取經(jīng)過He-Ne激光、半導體激光、CO2激光輻照30、60、120、180 s后的幼嫩燈盞花葉片,以備測定相關(guān)指標。

    123相關(guān)抗性指標的測量[21-23]超氧化物歧化酶(SOD)活性采用氮藍四唑法測定,過氧化物酶(POD)活性測定采用愈創(chuàng)木酚法,過氧化氫酶(CAT)活性測定采用H2O2反應(yīng)比色法,丙二醛(MDA)含量采用硫代巴比妥酸(TBA)比色法測定,可溶性蛋白質(zhì)質(zhì)量分數(shù)測定采用考馬斯亮藍法,可溶性糖含量的測定采用蒽酮比色法。脯氨酸含量的測定采用磺基水楊酸方法進行。

    2結(jié)果與分析

    21激光輻照對燈盞花過氧化物酶活性的影響

    通過3種激光不同時間輻照后,過氧化物酶活性都有不同程度的變化。在He-Ne激光處理中,過氧化物酶的活性在120 s時達到最大值,為025 U/g,當超過120 s后明顯降低;在半導體激光處理中,120 s也達到最大值,為016 U/g;在CO2激光處理中,60 s時達最大值,為0345 U/g。試驗結(jié)果表明,3種不同類型激光輻照后,經(jīng)過不同輻照時間,以CO2激光效果最好,在較短輻照時間內(nèi)活性達到最大值(圖2)。

    22不同激光對燈盞花過氧化氫酶活性的影響

    通過3種激光不同時間輻照后,過氧化氫酶活性有不同程度的變化。在He-Ne激光處理中,輻照180 s過氧化氫酶活性最高,為0017 mg/(g·min),其次是60 s處理,不同處理均高于對照;半導體激光處理中,輻照60 s的過氧化氫酶活性較高,為0008 mg/(g·min);在CO2激光處理中,輻照60 s過氧化氫酶活性最高,為0024 mg/(g·min),其余各組酶活性相對要低(圖3)。

    [FK(W11][TPLLF3tif][FK)]

    23激光輻照對燈盞花丙二醛含量的影響

    用3種激光不同時間輻照燈盞花幼嫩葉片后,測定其丙二醛含量。在He-Ne激光處理中,輻照60 s丙二醛含量最低,為4955 μmol/g;半導體激光處理中,120 s的處理丙二醛含量最低,為524 μmol/g,輻照180 s處理組含量最高,為8738 μmol/g;CO2激光處理中,輻照180 s的處理丙二醛含量最低,為4422 μmol/g,輻照120 s丙二醛含量最高,為10133 μmol/g(圖4)。

    24激光輻照對燈盞花超氧化物歧化酶活性的影響

    經(jīng)過3種激光不同時間輻照后,在He-Ne激光處理中,輻照180 s處理超氧化物歧化酶活性高于對照,為 176465 U/g,其他各組則低于對照;在半導體激光處理中,輻照120 s處理SOD活性最高,為196692 U/g;CO2激光處理中,輻照60 s處理SOD活性最高,為20788 U/g,其他各組SOD活性都高于對照。這3種激光中,以CO2激光處理效果最好(圖5)。

    25激光輻照對燈盞花脯氨酸含量的影響

    測定經(jīng)He-Ne激光、半導體激光、CO2激光輻照后的燈盞花幼嫩葉片脯氨酸含量,結(jié)果表明,He-Ne激光輻照60 s脯氨酸含量最高,為9624 μg/g;半導體激光處理中,輻照 30 s 處理脯氨酸含量最高,為9498 μg/g,其次是120 s處理;CO2激光處理中,輻照60 s處理脯氨酸含量最高,為7878 μg/g,其次是輻照180 s的處理。3種激光不同處理時間脯氨酸含量均有所提高,其中He-Ne激光、半導體激光更有利脯氨酸含量的提高(圖6)。

    26激光輻照對燈盞花可溶性糖含量的影響

    測定3種激光不同處理時間后的燈盞花葉片可溶性糖含量,結(jié)果表明,在He-Ne激光輻照中,可溶性糖含量表現(xiàn)為下降趨勢,輻照120 s可溶性糖含量最低,為0091%;在半導體激光中,可溶性糖含量也表現(xiàn)出隨輻照時間延長而下降的趨勢,輻照180 s處理最低,為0108%;CO2激光處理中,短時間內(nèi)可溶性糖含量急劇下降,輻照180 s時最低,為 0045%。這3種激光輻照后的燈盞花葉片可溶性糖含量總體表現(xiàn)出隨著照射時間的延長而降低的趨勢(圖7)。

    27激光輻照對燈盞花可溶性蛋白含量的影響

    測定3種激光輻照不同時間的燈盞花葉片可溶性蛋白含量結(jié)果(圖8)表明,He-Ne激光處理中,輻照120 s處理可溶性蛋白含量最高,為2182 mg/g,輻照180 s處理低于對照組;在半導體激光中,30 s處理可溶性蛋白含量最高,為 2467 mg/g,輻照60 s時最低,隨后有升高趨勢;在CO2激光中,可溶性蛋白質(zhì)含量表現(xiàn)為隨著輻照時間延長而升高的趨勢,輻照120 s時最高,為22 mg/g。3種激光不同時間處理后,可溶性蛋白含量總體均有提高,其中半導體激光作用效果較明顯。

    3討論

    本試驗將燈盞花組織培養(yǎng)技術(shù)與激光輻照相結(jié)合,對激光輻照對燈盞花組織培養(yǎng)的影響進行了系統(tǒng)研究,從而找出不同類型激光處理燈盞花種子的最佳劑量,研究結(jié)果表明,He-Ne激光、半導體激光、CO2激光的輻照均促進燈盞花種子萌發(fā),其中CO2激光、半導體激光以30 s為最佳輻照時間,He-Ne激光則以60 s輻照時間為最佳,3種激光中,CO2激光的作用效果最為明顯。

    激光照射后組織內(nèi)的各種酶活性均有提高現(xiàn)象,特別是He-Ne激光、CO2激光,葉片組織中與抗逆性相關(guān)的有機物成分也相對提高,同時,在測定各種指標的過程中,出現(xiàn)有相矛盾的結(jié)果,如CO2激光處理60 s的酶活性相對較高,但測定丙二醛含量卻高于對照等,原因可能是取材與試驗誤差所致,在測定可溶性糖、可溶性蛋白質(zhì)含量時,可溶性糖含量總體表現(xiàn)為下降趨勢,He-Ne激光處理180 s的可溶性蛋白含量低于對照,這可能是植物種類、取材部位不同,從而導致與相關(guān)研究結(jié)果相反??傊m當劑量的激光輻照對燈盞花各種生理指標有促進作用,提高各種抗氧化酶活性,促進各種滲透調(diào)節(jié)有機物質(zhì)的合成,從而增強燈盞花的抗逆性。而超過一定劑量的處理,對燈盞花生長沒有促進作用,反而會起到抑制作用。

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