探討盆腔淋巴結(jié)HPV—DNA檢出率與早期宮頸癌臨床轉(zhuǎn)移的關(guān)系

潘紅

【摘要】 目的 探討盆腔淋巴結(jié)人類乳頭瘤病毒基因（HPV-DNA）檢出率與早期宮頸癌臨床轉(zhuǎn)移的關(guān)系。方法 對62例宮頸癌患者原發(fā)部位腫瘤組織和盆腔淋巴結(jié)組織的HPV-DNA區(qū)基因序列進行測定， 同時分析其陽性率與早期宮頸癌轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系。結(jié)果 62例盆腔淋巴結(jié)當(dāng)中的HPV-DNA檢出率為51.6%（32/62）， 26例淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的組織當(dāng)中HPV-DNA檢出率為84.6%（22/26）， 36例檢查沒有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的盆腔淋巴結(jié)HPV-DNA檢出率為27.8%（10/36）， 有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者盆腔淋巴結(jié)HPV-DNA檢出率比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。另外， 陽性淋巴結(jié)當(dāng)中的閉孔、髂外以及髂內(nèi)的淋巴結(jié)占90%以上。結(jié)論 盆腔淋巴結(jié)的HPV-DNA檢出陽性屬于一個具有重要意義的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移預(yù)測因子， 其中最為關(guān)鍵的前哨淋巴結(jié)包括有閉孔、髂外以及髂內(nèi)的淋巴結(jié)。

【關(guān)鍵詞】 盆腔淋巴結(jié)；HPV-DNA；早期宮頸癌；臨床轉(zhuǎn)移

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.28.017

根據(jù)研究表明[1]， 盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是影響宮頸癌患者預(yù)后的主要原因之一， 是正確指導(dǎo)手術(shù)以后輔助治療和判斷預(yù)后的重要依據(jù)。HPV感染與宮頸癌的發(fā)病有密切關(guān)系。檢測宮頸癌患者盆腔淋巴結(jié)當(dāng)中的HPV-DNA是否能夠幫助淋巴結(jié)早期隱匿轉(zhuǎn)移還存在一定的爭議， 為此進行相關(guān)研究報告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取2014年8月～2016年8月在本院進行手術(shù)治療的宮頸癌患者62例， 年齡28～59歲， 平均年齡（44.6±3.1）歲。

1. 2 方法 ①石蠟包埋組織當(dāng)中總DNA的提取刮取組織3～4片， 放置在1.5 ml Eppendorf管當(dāng)中， 加入二甲苯1 ml脫蠟， 震蕩搖晃均勻， 在37℃恒溫水浴30 min， 以12000 r/min離心5 min， 將上層溶液去除， 可以反復(fù)1～2次。密切觀察沒有石蠟殘留以后加入無水乙醇1 ml進行清洗， 渦旋搖晃均勻， 以12000 r/min離心5 min， 去除上清液， 反復(fù)1次， 干燥組織。按照說明書提取總DNA。②目的基因片段聚合酶鏈反應(yīng)（GP-PCR）擴增提取的組織DNA作為模板， 采取GP5+、GP6+給予HPV-DNA L1區(qū)基因序列的PCR擴增。反應(yīng)體系為20 μl。反應(yīng)設(shè)陽性和陰性的空白對照， 陽性模板為Hela細(xì)胞株提取的DNA。③瓊脂糖凝膠電泳選取5μl PCR擴增產(chǎn)物給予1.5%瓊脂糖凝膠電泳， 其成像分析系統(tǒng)觀察， 同時進行對照， 以140～150 bp部位發(fā)生明顯條帶作為陽性結(jié)果[2]。④PCR產(chǎn)物的純化根據(jù)其說明書的方法進行操作， 純化的DNA立即應(yīng)用或者保存在零下20℃作為備用。⑤序列測定采取引物GP5+、GP6+將純化的PCR產(chǎn)物在DNA序列自動分析儀上進行測序。

1. 3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS22.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析。計數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

62例盆腔淋巴結(jié)當(dāng)中的HPV-DNA檢出率為51.6%

（32/62）， 26例淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的組織當(dāng)中HPV-DNA檢出率為84.6%（22/26）， 36例檢查沒有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的盆腔淋巴結(jié)HPV-DNA檢出率為27.8%（10/36）， 有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者盆腔淋巴結(jié)HPV-DNA檢出率比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。另外， 陽性淋巴結(jié)當(dāng)中的閉孔、髂外以及髂內(nèi)的淋巴結(jié)占90%以上。

3 討論

根據(jù)研究表明[3]， 宮頸癌早期患者的手術(shù)后生存率與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、腫瘤類型、體積、子宮旁邊浸潤程度、深度以及臨床主治醫(yī)師的操作水平等有密切關(guān)系， 當(dāng)中淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移非常關(guān)鍵。對比5年的生存率， 盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈現(xiàn)陰性的患者能夠達到85%以上， 然而如果區(qū)域出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移， 則會呈現(xiàn)下降趨勢[4]。然而在實踐中發(fā)現(xiàn)一些臨床分期相對比較早和組織學(xué)沒有淋巴結(jié)一個切面， 而無法發(fā)現(xiàn)的微小病灶[5]。目前， 對一系列實體瘤的研究當(dāng)中微轉(zhuǎn)移的檢出率與患者預(yù)后有直接關(guān)系。宮頸癌在整個發(fā)展期間HPV-DNA整合進入到宿主細(xì)胞DNA， 進而能夠充分發(fā)揮致癌的作用[6]。隨著腫瘤的進一步擴散， 整合到宿主細(xì)胞當(dāng)中的HPV-DNA片斷在轉(zhuǎn)移病灶中也可以檢測出來。所以， 可以通過HPV-DNA對淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移進行診斷， 可以為制定手術(shù)后的輔助治療提供重要依據(jù)， 使預(yù)后得到明顯改善。淋巴結(jié)中的HPV-DNA與轉(zhuǎn)移分布情況也大致相同。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移主要伴有HPV-DNA呈現(xiàn)陽性、陰道切緣浸潤以及宮體侵犯， 因此， 可以表明其陽性與轉(zhuǎn)移具有密切的關(guān)系[7]。根據(jù)研究表明[8]， 組織病理學(xué)沒有癌轉(zhuǎn)移的淋巴結(jié)當(dāng)中檢查出來HPV-DNA的存在顯示沒有可以發(fā)現(xiàn)的腫瘤擴散。然而組織病理學(xué)檢查呈現(xiàn)陰性的淋巴結(jié)當(dāng)中的HPV-DNA陽性檢出率有密切關(guān)系如下[9]：組織病理學(xué)沒有能夠及時的發(fā)現(xiàn)微轉(zhuǎn)移， 經(jīng)過淋巴道通過擴散的游離HPV病毒顆粒以及免疫活性細(xì)胞吞噬消化的微轉(zhuǎn)移灶。所以， 也有部分相關(guān)研究人員認(rèn)為其無法當(dāng)作有效判斷復(fù)發(fā)的預(yù)測因子， 根據(jù)研究表明， 組織病理學(xué)檢查呈現(xiàn)陰性的淋巴結(jié)HPV-DNA的檢出率在10%以上[10]。對宮頸癌原發(fā)部位的腫瘤以及淋巴結(jié)的HPV-DNA檢測全部呈現(xiàn)陽性的患者。常規(guī)清掃術(shù)經(jīng)常給宮頸癌患者帶來一系列并發(fā)癥。現(xiàn)如今， 利用確定前哨淋巴結(jié)， 對其清掃范圍給予一定的限制， 可降低手術(shù)所帶來的創(chuàng)傷。根據(jù)研究表明， 前哨淋巴結(jié)大部分包括閉孔、髂外以及髂內(nèi)。

綜上所述， 盆腔淋巴結(jié)的HPV-DNA檢出陽性屬于一個具有重要意義的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移預(yù)測因子， 其中最為關(guān)鍵的前哨淋巴結(jié)包括有閉孔、髂外以及髂內(nèi)的淋巴結(jié)。

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[收稿日期：2017-06-02]endprint