膠體金三線定量法,革新的霉菌毒素檢測方法

□ 卜慶婧 中檢柏泰生物技術(shù)（北京）有限公司

膠體金三線定量法,革新的霉菌毒素檢測方法

□ 卜慶婧 中檢柏泰生物技術(shù)（北京）有限公司

膠體金技術(shù)又稱側(cè)流向免疫層析技術(shù)，是以膠體金作為示蹤標(biāo)記物應(yīng)用于樣品中待測物檢測的一種免疫檢測技術(shù)，可用于樣品中待測物質(zhì)的快速定性或定量檢測，是一種穩(wěn)定、靈敏的檢測方法。該方法操作簡單，無需專業(yè)培訓(xùn)，幾分鐘即可完成檢測，非常適用于現(xiàn)場快速檢測。目前，膠體金免疫層析技術(shù)在霉菌毒素檢測中的應(yīng)用已經(jīng)非常廣泛，但由于只有一條檢測線和一條質(zhì)控線，通常只能進(jìn)行定性檢測，無法準(zhǔn)確定量。針對這一情況，美國Charm公司的科學(xué)家對定性霉菌毒素檢測條進(jìn)行了改進(jìn)，增加了一條檢測線，首創(chuàng)三線定量檢測條，即包括兩條檢測線和一條質(zhì)控線，同時結(jié)合讀數(shù)儀，可實現(xiàn)準(zhǔn)確定量。Charm Rosa霉菌毒素定量檢測系統(tǒng)采用的就是三線定量法。

圖1 嘔吐毒素流程圖

Charm Rosa霉菌毒素定量檢測系統(tǒng)能夠在5分鐘內(nèi)快速定量測定糧食及其制品中的多種霉菌毒素，包括黃曲霉毒素、嘔吐毒素、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素A、伏馬菌素和T2/HT2毒素。

Charm Rosa霉菌毒素檢測系統(tǒng)組成

Charm Rosa（Rapid One Step Assay）霉菌毒素檢測系統(tǒng)由檢測條、孵育器和讀數(shù)儀三部分組成。其中檢測條采用3線設(shè)計，包括2條檢測線（T線）和1條質(zhì)控線（C線），這樣便于準(zhǔn)確定量，并增加了動態(tài)檢測范圍，因此檢測范圍較其它膠體金檢測條更寬。另外，檢測條采用封閉包裝，即可防潮，又可防止檢測條因暴露在空氣中而被污染，并且不同檢測項目的檢測條顏色不同，因此非常便于區(qū)分。孵育器為保溫裝置，能夠促進(jìn)樣品流動并確保反應(yīng)溫度在合適范圍內(nèi)，該孵育器可自動倒計時，孵育結(jié)束后發(fā)出“嗶嗶”聲。讀數(shù)儀中有內(nèi)置標(biāo)準(zhǔn)曲線，可讀取定量檢測結(jié)果。三線定量檢測條及讀數(shù)儀中內(nèi)置的標(biāo)準(zhǔn)曲線矩陣是準(zhǔn)確定量的保證。

Charm Rosa霉菌毒素檢測系統(tǒng)的檢測原理

試樣提取液中的霉菌毒素與檢測條中的膠體金微粒發(fā)生反應(yīng)，霉菌毒素與膠體金微粒的結(jié)合物及膠體金微粒在側(cè)流作用下移動，當(dāng)?shù)竭_(dá)檢測線時，包被的抗原與膠體金微粒結(jié)合發(fā)生呈色反應(yīng)，其顏色深淺與試樣中霉菌毒素的含量相關(guān)。用讀數(shù)儀測定檢測條上檢測線和質(zhì)控線顏色深淺，根據(jù)顏色深淺和讀數(shù)儀內(nèi)置的標(biāo)準(zhǔn)曲線即可計算出試樣中霉菌毒素含量。

Charm Rosa霉菌毒素檢測系統(tǒng)的優(yōu)點

樣品處理簡單快速：以嘔吐毒素為例，準(zhǔn)確稱取10.00g試樣于提取容器中，加入20.0mL蒸餾水或去離子水，密閉，振蕩提取1～2min，靜置后用濾紙過濾，或取1～1.5mL混合液于離心管中，離心1min。取濾液或離心后上清液100μL于另一離心管中，加入1.0mL稀釋緩沖液，充分混勻，待測。

檢測步驟一步化：將檢測條平放于45℃孵育器凹槽中，打開加樣槽，移取300μL待測溶液至檢測條加樣孔中，關(guān)閉孵育器。孵育5min后，從孵育器中取出檢測條，放入讀數(shù)儀中進(jìn)行測定，即可得出定量檢測結(jié)果。

結(jié)果準(zhǔn)確：2012年，國家糧食局標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)量中心組織多家省級糧食質(zhì)量監(jiān)測中心對4種Charm Rosa霉菌毒素（黃曲霉毒素B1、嘔吐毒素、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素A）檢測條進(jìn)行了測試。測試過程中分別采用ROSA測試條與高效液相色譜標(biāo)準(zhǔn)方法對9組陽性樣品進(jìn)行檢測，采用配對T檢驗法比較兩種方法的檢測結(jié)果是否存在顯著性差異。經(jīng)計算，4個項目的液相色譜參考值與ROSA測定值之間均無顯著差異。

以高效液相色譜法的測定結(jié)果作為認(rèn)定值，將ROSA快速測試條的測定結(jié)果與之比較，按正確度（%）=檢測值/認(rèn)定值×100%計算，黃曲霉毒素B1、嘔吐毒素、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素A的平均準(zhǔn)確度分別為99%、106%、117%和95%，均在糧油檢測行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的范圍內(nèi)。

總結(jié)而言，Charm Rosa霉菌毒素檢測系統(tǒng)具有以下特點。首先前處理簡單，制備樣品過程所需時間短，檢測速度快，5分鐘即可完成對真菌毒素的定量測定，這也是其他手段無可比擬的，此系統(tǒng)是業(yè)內(nèi)最齊全、最完整的霉菌毒素檢測項目之一。此外，本系統(tǒng)率先推出霉菌毒素水提取技術(shù)（WET），無需使用有機(jī)溶劑和霉菌毒素標(biāo)準(zhǔn)品，減少了實驗對工作人員健康的傷害。最重要的一點是此系統(tǒng)檢測結(jié)果與國標(biāo)方法具有較高的一致性，為國家糧食局糧油檢測行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)LS/T 6111-2015《糧油檢驗 糧食中黃曲霉毒素B1測定 膠體金快速定量法》、LS/T 6112-2015《糧油檢驗 糧食中玉米赤霉烯酮測定 膠體金快速定量法》、LS/T 6113-2015《糧油檢驗：糧食中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇測定：膠體金快速定量法》、LS/T 6114-2015《糧油檢驗 糧食中赭曲霉毒素A測定：膠體金快速定量法》中所采用的方法。該產(chǎn)品經(jīng)過USDA-GIPSA（美國農(nóng)業(yè)部-美國谷物檢驗、批發(fā)及畜牧場管理局）和FG IS（聯(lián)邦谷物檢測局）認(rèn)證，可廣泛用于實驗室、糧倉、農(nóng)產(chǎn)品收購站等各種場合真菌毒素的檢測。

圖2 charm霉菌毒素系統(tǒng)圖片

Charm Rosa霉菌毒素5分鐘快速定量檢測系統(tǒng)小巧便攜。為了滿足現(xiàn)場快速檢測的需求，中檢柏泰生物技術(shù)（北京）有限公司還可提供霉菌毒素檢測整體箱，整體箱中包括從樣品制備到完成檢測所需的所有儀器設(shè)備，真正實現(xiàn)現(xiàn)場快速檢測。該系統(tǒng)在全球應(yīng)用非常廣泛，被譽(yù)為全球四大糧倉的ADM、邦吉（Bunge）、嘉吉（Cargill）、路易達(dá)孚（Louis Dreyfus）均采用Charm Rosa霉菌毒素檢測系統(tǒng)進(jìn)行霉菌毒素的檢測。在國內(nèi)，該系統(tǒng)被廣泛應(yīng)用于糧油收儲單位、檢測機(jī)構(gòu)及糧油飼料生產(chǎn)企業(yè)，如中儲糧、糧油質(zhì)量檢測中心、中糧、大北農(nóng)、新希望六和等都是Charm Rosa霉菌毒素檢測系統(tǒng)的用戶。

Charm公司簡介

Charm公司成立于1978年，總部位于美國馬薩諸塞州，其創(chuàng)始人Stanley E.Charm博士是牛奶中抗生素快速檢測試劑的發(fā)明者，公司研發(fā)人員多畢業(yè)于麻省理工大學(xué)。公司自成立以來一直致力于食品安全、水質(zhì)和環(huán)境快速檢測產(chǎn)品的開發(fā)，其產(chǎn)品包括霉菌毒素、獸藥殘留、農(nóng)藥殘留、微生物、堿性磷酸酶、商業(yè)無菌等快速檢測產(chǎn)品，其中Charm Rosa/EZ抗生素殘留檢測系統(tǒng)、Charm Rosa霉菌毒素檢測系統(tǒng)、EPIC商業(yè)無菌檢測系統(tǒng)在國內(nèi)外應(yīng)用非常廣泛。