高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定調(diào)味料酒中4種人工合成甜味劑

鄒孝，李根容，黃武平，馬艷，牟瓊，張麗妮，童蘭艷

（重慶市計量質(zhì)量檢測研究院，重慶市食品安全工程技術(shù)研究中心，國家農(nóng)副加工及調(diào)味品質(zhì)量監(jiān)督檢驗中心，重慶 401123）

高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定調(diào)味料酒中4種人工合成甜味劑

鄒孝，李根容，黃武平，馬艷，牟瓊，張麗妮，童蘭艷

（重慶市計量質(zhì)量檢測研究院，重慶市食品安全工程技術(shù)研究中心，國家農(nóng)副加工及調(diào)味品質(zhì)量監(jiān)督檢驗中心，重慶 401123）

建立了測定調(diào)味料酒中安賽蜜、糖精鈉、甜蜜素和紐甜4種人工合成甜味劑的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（HPLC-MS／MS）分析方法。采用ZORBAX SB-C18（4.6 mm×50 mm，1.8μm）色譜柱，以含10 mmol／L乙酸銨水溶液和甲醇為流動相，梯度洗脫，柱溫為30℃條件下，可以在5 min內(nèi)完成4種人工合成甜味劑的基線分離。在ESI負離子模式下，采用多反應(yīng)監(jiān)測模式進行測定時，4種人工合成甜味劑的線性范圍為5～200μg／L，相關(guān)系數(shù)大于0.9991，檢出限（S／N＝3）為0.001～0.005 mg／kg，加標回收率為92.2%～105.4%，相對標準偏差為1.0%～2.7%。該方法快捷準確，靈敏度高，可用于調(diào)味料酒中低劑量人工合成甜味劑的測定。

HPLC-MS／MS；調(diào)味料酒；安賽蜜；糖精鈉；甜蜜素；紐甜

調(diào)味料酒是以發(fā)酵酒、蒸餾酒或食用酒精成分為主體，添加食用鹽（可加入植物香辛料），配制加工而成的液體調(diào)味品［1］，在食品加工和人們?nèi)粘Ｉ钪袕V泛使用。近年來，調(diào)味料酒作為食品安全風險監(jiān)測項目，時常檢測出甜蜜素、糖精鈉、紐甜等人工合成甜味劑。人工合成甜味劑對人沒有直接的害處，但可能會影響人體的代謝，其安全性問題尚無定論［2］。為保證食品安全，GB 2760－2014《食品添加劑使用衛(wèi)生標準》對食品添加劑使用范圍和限量做了明確規(guī)定［3］，其中安賽蜜（安賽蜜鉀，Acesulfame Potassium，AK）、糖精鈉（Saccharin Sodium，SA）、甜蜜素（環(huán)己基氨基磺酸鈉，Sodium N-cyclohexylsulfamate，SC）和紐甜（N-［N-（3，3-二甲基丁基）-L-α-天門冬氨酰］-L-苯丙氨酸-1-甲酯，Neotame，NTM）均不允許添加到調(diào)味料酒中。

目前，SN／T 3538－2013《出口食品中六種合成甜味劑的檢測方法液相色譜-質(zhì)譜／質(zhì)譜法》［4］規(guī)定了甜蜜素、糖精鈉、安賽蜜、阿斯巴甜、阿力甜、紐甜的測定，但適用范圍沒有調(diào)味料酒。其他的國家標準主要是針對單個甜味劑的檢測方法，如GB／T 23495－2009《食品中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的測定高效液相色譜法》、GB／T 5009.28—2003《食品中糖精鈉的測定》、GB 5009.247－2016《食品中紐甜的測定》、GB 5009.97—2016《食品中環(huán)己基氨基磺酸鈉的測定》、GB／T 5009.140－2003《飲料中乙?；前匪徕浀臏y定》等［5－9］。針對安賽蜜AK、糖精鈉SA、甜蜜素SC、紐甜NTM 4種常用人工合成甜味劑，已有的分析方法主要有氣相色譜法、高效液相色譜法、離子色譜法、液相色譜／質(zhì)譜法［10－15］等，且適用范圍均未覆蓋調(diào)味料酒，能達到同時分析多種人工合成甜味劑的分析方法更少，發(fā)展一種快速、靈敏的多種甜味劑分析方法，對保障調(diào)味料酒的食用安全尤為重要。

質(zhì)譜檢測手段以高靈敏度與較強的抗干擾能力，逐漸成為微量或者痕量成分檢測的首選［16，17］。本文建立了調(diào)味料酒中安賽蜜AK、糖精鈉SA、甜蜜素SC、紐甜NTM 4種人工合成甜味劑的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（HPLC-MS／MS）檢測方法，為調(diào)味料酒中甜味劑檢測的準確判定、快速檢測提供科學依據(jù)。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

Quintix224-1CN電子天平 Sartorius公司；三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用儀（質(zhì)譜API 4000、液相Agilent 1290）；Advantage A10超純水機 美國Millipore公司；SB-1500DT超聲儀 寧波新芝生物科技股份有限公司。

甲醇（HPLC級，Tedia公司）、乙酸銨（色譜純，CNW公司）、安賽蜜（Dr.Ehrenstorfer，純度≥99.5%）、糖精鈉（國家標準物質(zhì)GBW（E）100008）、甜蜜素（Dr.Ehrenstorfer，純度≥99.9%）、紐甜標準物質(zhì)（CDAA-240006，純度≥98.0%）、調(diào)味料酒樣品：均購自本地超市、農(nóng)貿(mào)市場。

1.2 標準溶液配制

稱取安賽蜜、糖精鈉、甜蜜素、紐甜標準品各100 mg（準確至0.0001 g）于100 m L容量瓶中，用超純水定容，配制成標準儲備液。用超純水逐級稀釋標準儲備溶液，得到5，10，20，50，100，200μg／L的系列混合標準工作溶液。

1.3 樣品處理

稱的調(diào)味料酒樣品20 m L置于50 m L燒杯中，超聲10 min，以去除多余乙醇，取5 g（精確至0.0001 g）于10 mL容量瓶中，用超純水定容至刻度，混勻，過0.22μm濾膜后供HPLC-MS／MS分析。

1.4 儀器條件

1.4.1 HPLC條件

色譜柱：ZORBAX SB-C18（4.6 mm×50 mm，1.8μm）；柱溫30℃；進樣量5μL；流動相A：10 mmol／L乙酸銨水溶液，流動相B：甲醇；流速：0.6 m L／min。洗脫梯度程序見表1。典型條件下得到的樣品色譜圖見圖1。

表1 4種甜味劑分離洗脫程序

圖1 典型條件下得到的樣品色譜圖

1.4.2 質(zhì)譜條件

電噴霧離子源（ESI）；離子源溫度（TEM）：500℃；電噴霧電壓（IS）：－4500 V；檢測模式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）；霧化器壓力（GS1）：50 psi；氣簾氣壓力（CUR）：25 psi；輔助氣壓力（GS2）：50 psi；碰撞氣（CAD）：6 m L／min。

2 結(jié)果與討論

2.1 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

以100μg／L甜味劑混合標準溶液進樣，通過對離子源模式、碰撞能量等條件進行優(yōu)化，確定各分析化合物的離子對，結(jié)果見表2。獲得的典型MRM圖見圖2。

表2 4種甜味劑的質(zhì)譜檢測條件

圖2 4種甜味劑標準品的MRM色譜圖

2.2 定量限和線性關(guān)系

在最優(yōu)條件下測試不同濃度的甜味劑標準溶液，對其峰面積作圖，繪制標準曲線，得到4種甜味劑的標準曲線線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)，以信噪比（S／N＝3），計算出4種甜味劑的方法檢出限，結(jié)果見表3。

表3 方法線性回歸方程、線性范圍及檢出限

2.3 回收率和精密度測定

向空白樣品中添加低、中、高3個濃度水平，每個水平下進行6次平行實驗，結(jié)果表明：安賽蜜、糖精鈉、甜蜜素、紐甜的加標回收率為92.2%～105.4%，相對標準偏差為1.0%～2.7%，結(jié)果見表4。

表4 調(diào)味料酒中4種甜味劑的回收率和相對標準偏差（n＝3）

續(xù) 表

2.4 實際樣品測定

對重慶各大超市、農(nóng)貿(mào)市場購買的16種調(diào)味料酒進行了測定，結(jié)果表明：16個樣品中有2個添加了人工合成甜味劑，其中1個樣品檢出了甜蜜素和紐甜，其濃度分別為0.20，0.26 mg／L；另外一個樣品檢出了安賽蜜和紐甜，其濃度分別為0.58，0.11 mg／L。

3 結(jié)論

本文建立了高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時測定調(diào)味料酒中4種人工合成甜味劑的方法，整個實驗操作簡單快捷，準確度、靈敏度高，適用于調(diào)味料酒中多組分甜味劑的同時、快速定性、定量分析，其檢出限、回收率及精密度指標均能夠滿足日常食品中人工合成甜味劑的市場監(jiān)管需要。

［1］SB／T 10416－2007，調(diào)味料酒［S］.

［2］Suez Jotham，Korem Tal，Zeevi David，et al.Artificial sweeteners induce glucose intolerance by altering the gut microbiota［J］.Nature，2014，514（7521）：181-186.

［3］GB 2760－2014，食品添加劑使用標準［S］.

［4］SN／T 3538－2013，出口食品中六種合成甜味劑的檢測方法液相色譜-質(zhì)譜／質(zhì)譜法［S］.

［5］GB／T 23495－2009，食品中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的測定高效液相色譜法［S］.

［6］GB／T 5009.28－2003，食品中糖精鈉的測定［S］.

［7］GB 5009.247－2016，食品中紐甜的測定［S］.

［8］GB 5009.97－2016，食品中環(huán)己基氨基磺酸鈉的測定［S］.

［9］GB／T 5009.140－2003，飲料中乙酰磺胺酸鉀的測定［S］.

［10］Yu Shengbing，Zhu Binghui，Lv Fen，et al.Rapid analysis of cyclamate in foods and beverages by gas chromatographyelectron capture detector（GC-ECD）［J］.Food Chemistry，2012，134（4）：2424-2429.

［11］蔣曉彤，陳國松，姜玲玲，等.高效液相色譜法同時檢測6種甜味劑［J］.食品科學，2011，32（6）：165-168.

［12］劉麗敏，彭敬東.5種甜味添加劑的反相高效液相色譜法同時測定［J］.分析測試學報，2008，27（5）：549-552.

［13］Zhu Yan，Guo Yingying，Ye Mingli，et al.Separation and simultaneous determination of four artificial sweeteners in food and beverages by ion chromatography［J］.Journal of Chromatography A，2005，1085（1）：143-146.

［14］劉佟，楊悠悠，王浩，等.超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定飲品中7種人工合成甜味劑［J］.分析測試技術(shù)與儀器，2015（4）：218-224.

［15］柯潤輝，王麗娟，安紅梅，等.超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時測定白酒中氨基甲酸乙酯和8種甜味劑［J］.食品與發(fā)酵工業(yè)，2016，42（4）：174-178.

［16］李錦清，綦艷，酈明浩，等.固相萃取-高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定醬油中4-甲基咪唑［J］.中國調(diào)味品，2016，41（1）：132-135.

［17］李磊，李海暢，周貽兵，等.超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時測定調(diào)味品中10種工業(yè)染料［J］.中國調(diào)味品，2016，41（3）：135-138.

Determination of Four Artificial Sweeteners in Seasoning Wine by HPLC-MS／MS

ZOU Xiao，LI Gen-rong，HUANG Wu-ping，MA Yan，MU Qiong，ZHANG Li-ni，TONG Lan-yan
（Chongqing Academy of Metrology and Quality Inspection，Chongqing Engineering Technology Research Center for Food Safety，National Center of Quality Supervision＆Inspection for Agricultural Processed Products and Condiments，Chongqing 401123，China）

A HPLC-MS／MS method for determination of acesulfame potassium，sodium saccharin，sodium cyclamate and neotame in seasoning wine has been developed.The HPLC separation is carried out on a ZORBAX SB-C18column（4.6 mm×50 mm，1.8μm），use 10 mmol／L ammonium acetate and methanol as the mobile phase，gradient elute，the column temperature is kept under 30℃，the baseline separation of four kinds of artificial sweeteners can be completed within 5 min.When the analytes are detected by ESI negative ion mode under multiple reaction monitoring mode，the calibration curves show good linearity in the concentration range of 5～200μg／L for four kinds of artificial sweeteners，the correlation coefficient is more than 0.9991，the detection limits（S／N＝3）are 0.001～0.005 mg／kg，the addingstandard recoveries are 92.2%～105.4%，and the relative standard deviations are 1.0%～2.7%.This method is rapid，accurate，highly sensitive and suitable for the quality control of low-concentration artificial sweeteners in seasoning wine.

HPLC-MS／MS；seasoning wine；acesulfame potassium；sodium saccharin；sodium cyclamate；neotame

TS264.24

A

10.3969／j.issn.1000-9973.2017.10.032

1000-9973（2017）10-0147-03

2017－05－05

鄒孝（1987－），女，工程師，碩士，研究方向：食品、化工色譜分析。