HPLC法測(cè)定民族藥材天仙子中金絲桃苷的含量初探

【摘 要】HPLC是目前醫(yī)學(xué)、化學(xué)、工業(yè)和農(nóng)學(xué)領(lǐng)域十分重要的技術(shù)手段，在分離分析技術(shù)領(lǐng)域具有十分廣泛的應(yīng)用。其技術(shù)手段主要選用高壓輸液系統(tǒng)，通過對(duì)混合溶劑或單一溶劑的不同極性進(jìn)行檢查，從而分析出固定相的色譜柱。本文在對(duì)民族藥材天仙子進(jìn)行測(cè)試的過程中，為了探究天仙子中含有金絲桃苷的含量，選用了HPLC法進(jìn)行測(cè)定，通過嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)步驟，對(duì)天仙子花、葉、莖三部分中金絲桃苷的含量分別進(jìn)行了測(cè)算并得出結(jié)論。

【關(guān)鍵詞】高壓輸液；固定相色譜柱；分離分析技術(shù)；高效液相色譜

在中醫(yī)領(lǐng)域，針對(duì)胃脘攣痛、喘咳等癥狀，通過辯證，一般會(huì)選擇天仙子作為主要的藥材。經(jīng)過現(xiàn)代醫(yī)學(xué)分析，天仙子作為茄科植物，其內(nèi)部含有的莨菪堿、阿托品等成分，具有抑制腺體分泌的作用，能夠使痙攣狀態(tài)平滑肌得到遲緩。不過由于含阿托品藥物在臨床當(dāng)中存在對(duì)心臟的抑制作用，因此被定位為有毒。因此需要對(duì)天仙子中金絲桃苷的含量進(jìn)行測(cè)定，從而使其作為藥材質(zhì)量的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。

一、實(shí)驗(yàn)器材選擇

在HPLC高效液相色譜法的實(shí)驗(yàn)當(dāng)中需要具備高效液相色譜儀、色譜分析平臺(tái)、對(duì)照樣品、色譜純等器材和用具。為了保證實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性。原料本文選用了內(nèi)蒙古地區(qū)生長(zhǎng)的野生天仙子藥材。高效液相色譜儀則選用由美國(guó)著名儀器生產(chǎn)廠家安捷倫公司生產(chǎn)的1100型高效液相色譜儀，該廠家生產(chǎn)的設(shè)備儀器在目前市場(chǎng)當(dāng)中占有率較高，以其系統(tǒng)性能指標(biāo)卓越、組合方式靈活多變著稱。色譜分析平臺(tái)則選用了目前市面上常見的由北京北分天普儀器生產(chǎn)的GC-8600型氣相色譜分析儀，該儀器具有獨(dú)創(chuàng)的圖形化中文界面，同時(shí)通過大屏幕液晶進(jìn)行數(shù)據(jù)顯示，人機(jī)互動(dòng)模式更加先進(jìn)，在實(shí)驗(yàn)分析過程中，效果突出。對(duì)照樣品金絲桃苷由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，保證實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)準(zhǔn)確。色譜純選用甲醇，分析純?cè)噭┌腥野啡芤?、磷酸等，水選用純化水。

二、實(shí)驗(yàn)方法和過程

（一）實(shí)驗(yàn)條件設(shè)定和實(shí)驗(yàn)制備

在實(shí)驗(yàn)開始之前，首先要對(duì)色譜條件進(jìn)行設(shè)定。根據(jù)試驗(yàn)需要，設(shè)定甲醇-三乙胺溶液-磷酸和水的比例為225：1：1：300，同時(shí)色譜條件為5μm的C18柱，規(guī)格為4.6mm*20mm。溶液配比流速設(shè)定為1mL/min，溫度控制在28℃-32℃之間，進(jìn)樣量為10-15μL。利用精密稱對(duì)金絲桃苷對(duì)照樣品進(jìn)行適量稱取，將稱取樣品加入到容量為0.058mg/mL的甲醇制成溶液當(dāng)中，成為對(duì)照樣品溶液。將原料天仙子進(jìn)行粉碎，使用百目篩進(jìn)行過濾，過濾完成之后通過精密稱進(jìn)行稱取，稱取含量根據(jù)溶劑量適當(dāng)增減，本文為0.1g，將稱取后的天仙子粉末放置到預(yù)先準(zhǔn)備的具塞錐形瓶當(dāng)中，并將10mL甲醇倒入，使用超聲儀器進(jìn)行處理，約一個(gè)小時(shí)后，停止超聲處理，進(jìn)行冷卻濾過，并使用量瓶加入甲醇，使其搖勻，獲得原料試品溶劑。

（二）關(guān)系考察

關(guān)系考察實(shí)驗(yàn)分為專屬性關(guān)系實(shí)驗(yàn)考察和線性關(guān)系實(shí)驗(yàn)考察。其中，專屬性關(guān)系實(shí)驗(yàn)考察首先要使用精密儀器對(duì)甲醇金絲桃苷溶液進(jìn)行吸取，以及甲醇金絲桃苷陰性溶劑、原料試品溶劑等溶劑，各10μL，將其注入到液相色譜儀當(dāng)中。通過色譜儀進(jìn)行測(cè)試，并由氣相色譜分析儀對(duì)分析結(jié)果進(jìn)行顯示。顯示過程中發(fā)現(xiàn)，金絲桃苷對(duì)照品試劑的色譜峰峰純度極佳，而原料試品溶劑的色譜峰峰值的保留時(shí)間與金絲桃苷對(duì)照品試劑的時(shí)間相同，表明純度優(yōu)秀。與此同時(shí)，甲醇陰性溶劑并未出現(xiàn)吸收現(xiàn)象，證明該方法專屬性較強(qiáng)，不會(huì)受到陰性溶劑的干擾。

線性關(guān)系實(shí)驗(yàn)中，首先要選用10mL量瓶，通過精密儀器對(duì)金絲桃苷對(duì)照品溶劑進(jìn)行1mL的吸取，將其放置入量瓶當(dāng)中，并通過甲醇進(jìn)行稀釋，稀釋至量瓶刻度后，將其命名為甲溶液。在甲溶液中進(jìn)行三次不同量的吸取，分別為1μL、2μL、4μL，同時(shí)在原金絲桃苷對(duì)照品溶劑中進(jìn)行四次不同量的吸取，前三次與甲溶液吸取量相同，最后一次吸取8μL，并將溶液注入到高效液相色譜儀中，對(duì)峰面積進(jìn)行測(cè)定。并將峰面積和進(jìn)樣量作為變量進(jìn)行線性回歸坐標(biāo)分析，通過線性回歸方程的分析和計(jì)算，可以發(fā)現(xiàn)，金絲桃苷在0.46μg以內(nèi)具有十分良好的線性關(guān)系。

（三）重復(fù)性和回收率實(shí)驗(yàn)

在原料天仙子溶劑的制備過程中，依照本文的實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊?，需要根?jù)天仙子的不同部位分別進(jìn)行含量測(cè)定。因此在制備過程之處，本文就優(yōu)先將制備粉末分為葉粉末溶劑、花粉末溶劑和莖粉末溶劑等不同溶劑。在實(shí)驗(yàn)過程中，優(yōu)先選用葉粉末溶劑進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，其他部分實(shí)驗(yàn)步驟與之相同。重復(fù)性實(shí)驗(yàn)要將同一批次的原料溶劑制備多份樣品溶劑，利用前文中的線性回歸方法進(jìn)行含量分析。經(jīng)測(cè)算，在葉粉末溶劑當(dāng)中，金絲桃苷平均含量約為0.172%。而回收率實(shí)驗(yàn)則需要在多份樣品制備的溶劑當(dāng)中，分別取用50mg，并利用線性關(guān)系實(shí)驗(yàn)相同的方法進(jìn)行甲溶液制備，通過高效液相色譜儀進(jìn)行含量測(cè)算，同時(shí)計(jì)算平均回收律。

三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析

本文在對(duì)葉粉末溶劑進(jìn)行實(shí)驗(yàn)測(cè)量，結(jié)果顯示，多份試劑樣品的回收率平均為103.51%，RSD約為1.71%。在使用同樣的實(shí)驗(yàn)方法對(duì)天仙子原料溶劑進(jìn)行分別測(cè)試后可以得出數(shù)據(jù)結(jié)論。其中，天仙子花中金絲桃苷含量約為0.193%，天仙子葉中金絲桃苷含量約為0.172%，天仙子莖中金絲桃苷含量約為0.057%，平均含量約為0.129%。鑒于金絲桃苷屬于黃酮類化合物，是多種生物活性的代表，金絲桃苷在天仙子中不同部位的富集，可以作為藥材質(zhì)量評(píng)判的主要依據(jù)。

四、結(jié)論

綜上所述，本文通過HPLC法對(duì)天仙子藥材中的金絲桃苷含量進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果表明，金絲桃苷主要富集于天仙子的花葉莖部，而根部和種子當(dāng)中，金絲桃苷含量極低，這表明天仙子是一種具有深度開發(fā)價(jià)值的天然藥材，而其是否具有毒性則主要取決于生物堿的含量和富集部位。

作者簡(jiǎn)介：張羽歐（1997-），女，黑龍江省佳木斯市人，本科，研究方向：制藥方向。

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