不同制劑方式對諾氟沙星在鰻鱺中藥動學(xué)的影響

賈雪卿　范紅照　湛嘉

摘要[目的] 研究不同制劑方式對藥物在水產(chǎn)動物體內(nèi)代謝動力學(xué)的影響。 [方法]用諾氟沙星粉（NP）、諾氟沙星鹽酸小檗堿預(yù)混劑（NB）、煙酸諾氟沙星可溶性粉（NN）和乳酸諾氟沙星可溶性粉（NL）4種諾氟沙星制劑，分別混飼口灌日本鰻鱺，給藥量均按30 mg/kg 的諾氟沙星原粉計算，再利用超高效液相色譜-質(zhì)譜法測定諾氟沙星在血漿中的含量，并進行藥動學(xué)分析。 [結(jié)果] 非房室模型藥動學(xué)參數(shù)表明，NP、NB、NN和NL 4種諾氟沙星制劑單次給藥后均在3 h或4 h達峰，達峰濃度（Cmax）相差較大，分別為1.273、1.073、0.616和0.094 mg/L；消除半衰期（T1/2）分別為15.267、24.887、33.041和25.891 h；NP的AUC最大，為22.670 mg/（L·h），NP∶NB∶NN∶NL=100%∶99%∶63%∶13%。 [結(jié)論] 藥物的不同制劑方式對其在水產(chǎn)動物體內(nèi)的吸收程度和生物利用度有較大的影響。

關(guān)鍵詞諾氟沙星；日本鰻鱺；藥代動力學(xué)；制劑方式

中圖分類號S948文獻標(biāo)識碼

A文章編號0517-6611（2017）22-0075-03

Abstract[Objective] To explore the influences of formulation ways on pharmacokinetics of drugs in aquatic animals.[Method] Four formulations （NP， NB， NN and NL） of norfloxacin （NFX） in Anguilla japonica were studied by a single oral dose of 30 mg/kg NFX.The content of NFX in plasma of eels was determined by UPLCMS and computed by noncompartment model.[Result] Pharmacokinetics parameters of NP， NB， NN and NL showed that Cmax were 1.273， 1.073， 0.616 and 0.094 mg/L after single drug administration 3 or 4 h；T1/2 were 15.267，24.887， 33.041 and 25.891 h respectively； AUC of NP was the maximum，being 22.670 mg/（L·h）.NP∶NB∶NN∶NL=100%∶99%∶63%∶13%.[Conclusion]Different formulation ways of drugs had greater effects on the absorption and bioavailability of medicine in aquatic animals.

Key wordsNorfloxacin；Anguilla japonica；Pharmacokinetics；Sormulation ways

諾氟沙星（Norfloxacin，NFX）為氟喹諾酮類藥物，對大多數(shù)革蘭氏陰性菌和部分革蘭氏陽性菌均有良好的殺菌效果，因此其應(yīng)用較為廣泛[1]。關(guān)于NFX在水產(chǎn)動物中的藥動學(xué)或殘留消除規(guī)律有較多的研究報道，涉及的水產(chǎn)動物包括草魚、鯽、鯉、羅非魚、大黃魚、大菱鲆、海鱸、黑鯛、南美白對蝦和淡水青蝦等[2-10]。2010年農(nóng)業(yè)部發(fā)布的1435號公告曾將諾氟沙星作為水產(chǎn)用藥列入第一批《獸藥試行標(biāo)準(zhǔn)轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)目錄》，包括諾氟沙星粉（Norfloxcin powder，NP）、諾氟沙星鹽酸小檗堿預(yù)混劑（Norfloxcin and berberine hydrochloride premix，NB）、煙酸諾氟沙星可溶性粉（Norfloxcin nicotinic soluble powder，NN）和乳酸諾氟沙星可溶性粉（Norfloxcin lactate soluble powder，NL）等4種制劑[11]，是制劑類型最多的水產(chǎn)藥物。雖然諾氟沙星的各種制劑于2016年以后已被禁止在食品動物中使用[12]，但諾氟沙星制劑類型多樣，因此研究不同制劑方式對水產(chǎn)動物中藥物代謝動力學(xué)的影響具有重要的借鑒意義和參考價值。筆者比較了4種諾氟沙星制劑在日本鰻鱺體內(nèi)的藥代動力學(xué)規(guī)律，旨在為通過改變制劑方式來提高水產(chǎn)藥物的吸收程度和生物利用度提供新思路。

1材料與方法

1.1試驗動物和藥品日本鰻鱺體質(zhì)量為（480±59）g，試驗前在室內(nèi)循環(huán)養(yǎng)殖系統(tǒng)中暫養(yǎng)7 d，養(yǎng)殖期間水溫為（28.0±0.5）℃，pH為（7.04±0.31）。試驗前3 d停止喂食，將不健康的日本鰻鱺去除。

諾氟沙星標(biāo)準(zhǔn)品以及各種制劑的具體信息見表1，用標(biāo)準(zhǔn)品進行液相色譜比對，可知各諾氟沙星制劑含量均合格。以諾氟沙星原粉的給藥劑量30 mg/kg為標(biāo)準(zhǔn)，計算各制劑的給藥劑量。

1.2給藥和取樣

試驗采用單次混飼口灌給藥，在給藥0.25、0.5、1、2、3、4、6、9、15、24、36和48 h后靜脈取血，各時間點分別取5尾。采集血液，置于0.1 mg/L肝素鈉潤洗風(fēng)干的離心管中，振蕩混勻后5 000 r/min離心10 min，取上層血漿于-80 ℃下保存。

1.3樣品處理與檢測

1.3.1前處理。

取0.2 mL血漿置于10 mL試管中，加入2 mL 含0.1%甲酸的50%乙腈，振蕩30 s，并超聲波5 min，再10 000 r/min離心5 min；然后，用100%乙腈二次提取沉淀；合并2次提取所得上清液，并加入2 mL正己烷析出脂類；吸取250 μL提取液到新管中，加入750 μL 20%的DMSO混合，最后用一次性針頭濾器過濾到進樣瓶中。

1.3.2檢測方法及條件。

樣品中的藥物濃度采用超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（UPLC-MS）測定，流動相A2為含0.1%甲酸的水；流動相B2為含0.1%甲酸的甲醇。色譜柱溫40 ℃；進樣量10 μL；去溶劑氣溫度450 ℃；去溶劑流速800 L/h；錐孔流速50 L/h；碰撞氣體氬氣為3.2×10-3 hPa；采用流動相梯度洗脫。

1.4分析方法驗證

1.4.1繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

在空白血漿中加入NFX，使其濃度分別為0、0.02、0.20、2.00和20.00 μg/mL，各濃度設(shè)3個平行，混勻振蕩2 min后，按“1.3”中方法處理，得到各濃度響應(yīng)值，利用Mass Lynx 4.0繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并計算相關(guān)系數(shù)。

1.4.2測定精密度和回收率。

在空白血漿中加入NFX標(biāo)準(zhǔn)品，使?jié)舛确謩e為0.02、0.20和2.00 μg/mL，混勻振蕩2 min后按“1.3”中方法處理，檢測并記錄響應(yīng)值。日內(nèi)每隔2 h進行1次，共6次，計算各濃度對應(yīng)響應(yīng)值的日內(nèi)變異系數(shù)。此外，隔天檢測1次上述3種濃度對應(yīng)的響應(yīng)值，共6次，計算日間平均變異系數(shù)。上述樣品的響應(yīng)值根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線進行計算，得到實測濃度。按照以下公式計算回收率：回收率=實測濃度/理論濃度×100%。

1.5數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

利用Mass Lynx 4.0軟件處理液質(zhì)聯(lián)用儀測得的數(shù)據(jù)；藥動學(xué)參數(shù)使用DAS 2.0軟件進行分析獲得。

2結(jié)果與分析

2.1分析方法驗證

在質(zhì)譜檢測條件下，諾氟沙星的4種子離子中，以m/z為302.2時的響應(yīng)值最高，保留時間為3.17 min（圖1），后續(xù)研究中諾氟沙星的檢測用該離子進行定量。

鰻鱺血漿中0.02、0.20和2.00 μg/mL NFX的日內(nèi)變異系數(shù)為4.25%～6.33%，日間變異系數(shù)為4.68%～6.44%，平均相對回收率為96.3%。檢測結(jié)果表明，在2.5～50.0 ng/mL內(nèi)NFX濃度與峰面積呈線性相關(guān)，最低檢測限為2.5 ng/mL。

2.2藥物-時間曲線與藥動學(xué)特征

諾氟沙星粉（NP）、諾氟沙星鹽酸小檗堿預(yù)混劑（NB）、煙酸諾氟沙星可溶性粉（NN）和乳酸諾氟沙星可溶性粉（NL）等4種諾氟沙星制劑，按相當(dāng)于諾氟沙星原粉30 mg/kg的劑量，單次混飼口灌日本鰻鱺后，采集血樣數(shù)據(jù)，繪制藥物-時間曲線。從圖2可以看出， NP、NB、NN和NL給藥后達峰時間（Tmax）為3～4 h，但其達峰濃度（Cmax）相差較大，分別為1.273、1.073、0.616和 0.094 mg/L，這表明NP和NB有較好的吸收效果，而NL的吸收效果較差。

非房室模型計算結(jié)果表明，NP、NB、NN和NL的藥動學(xué)參數(shù)也有較大的差異（表2）。NL的表觀分布容積（Vd）最大，表明NL在組織中有較大分布，而血液中相對較少。NP的清除率（CL）和消除半衰期（T1/2）最小，表明NP的消除速率最快。NP、NB、NN和NL的藥時曲線下面積（AUC）也有較大差異，NP的AUC最大，為22.670 mg/（L·h），NP∶NB∶NN∶NL=100%∶99%∶63%∶13%，這表明制劑方式對生物利用度有較大的影響。

3討論與結(jié)論

諾氟沙星粉（NP）、諾氟沙星鹽酸小檗堿預(yù)混劑（NB）、煙酸諾氟沙星可溶性粉（NN）和乳酸諾氟沙星可溶性粉（NL）4種諾氟沙星制劑在日本鰻鱺體內(nèi)的吸收速度較為接近，除NL的達峰時間（Tmax）為4 h，其余3種制劑在鰻鱺中的Tmax均為3 h。與諾氟沙星在草魚（0.4 h）[2]、鯽（1.13 h）[3]、

鯉大菱鲆（2 h）[7] 等動物相比，Tmax相對較長，吸收較慢。這4種制劑在鰻鱺體內(nèi)的達峰濃度（Cmax）有較大的差異，NP、NB、NN、NL的Cmax分別為1.273、1.073、0.616和0.094 mg/L，這表明NP和NB制劑在鰻鱺腸道內(nèi)的吸收程度較高，而NL的吸收較差。諾氟沙星原料藥在其他動物中的藥動學(xué)研究表明，大菱鲆的吸收度最高，其

Cmax為8.37 mg/L [7]，而草魚（1.11 mg/L）[2] 和鯉（1.72 mg/L）[4] 也有較好吸收。諾氟沙星4種制劑的藥時曲線下面積（AUC）也有較大差異，NP∶NB∶NN∶NL=100%∶99%∶63%∶13%，這表明不同制劑方式對生物利用度有較大影響，NP和NB的生物利用度較高，而NL則較低。

Walker[13]研究表明，氟喹諾酮類藥物治療細菌性疾病時是否能夠起效取決于該劑量下的Cmax/MIC能否達到10，而劉艷輝等[14]測得諾氟沙星對常見水產(chǎn)動物致病菌蘇伯利產(chǎn)氣單胞菌、點狀產(chǎn)氣單胞菌、熒光假單胞菌的MIC值分別為0.02、0.04和0.04 μg/mL。對于大多數(shù)非耐藥性細菌而言，諾氟沙星在體內(nèi)的Cmax須大于0.4 μg/mL，才能產(chǎn)生一定范圍的治療窗。由此可見，諾氟沙星的乳酸鹽制劑（NL）的治療效果遠不如NP和NL。

該研究結(jié)果表明，不同制劑對藥物在水產(chǎn)動物中的吸收程度和生物利用度有較大的影響。根據(jù)經(jīng)典藥動學(xué)和跨膜轉(zhuǎn)運理論，藥物在腸道中的吸收與藥物的解離度和脂溶性有較大的相關(guān)性，水溶性的諾氟沙星煙酸鹽或乳酸鹽雖然溶解性好，對于配制注射劑是必需的，但口服時反而不利于腸道黏膜的吸收。因此，對于口服或其他用藥途徑，應(yīng)當(dāng)在藥動學(xué)研究的基礎(chǔ)上，進行針對性的制劑研發(fā)和選用，才能更有效地吸收和利用藥物。

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