• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    鄰苯二甲酸酯類雌激素活性聯(lián)合作用模型分析

    2017-10-13 04:01:45何穎張暉甄士琪張麗娟曹馳程章奇
    生態(tài)毒理學(xué)報 2017年3期
    關(guān)鍵詞:鄰苯二甲酸混合物化合物

    何穎,張暉,*,甄士琪,張麗娟,曹馳程,章奇

    1. 東南大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院 環(huán)境醫(yī)學(xué)工程教育部重點實驗室,南京 2100092. 江蘇省疾病預(yù)防控制中心食品安全與評價所,南京 210009

    鄰苯二甲酸酯類雌激素活性聯(lián)合作用模型分析

    何穎1,張暉1,*,甄士琪2,張麗娟1,曹馳程1,章奇1

    1. 東南大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院 環(huán)境醫(yī)學(xué)工程教育部重點實驗室,南京 2100092. 江蘇省疾病預(yù)防控制中心食品安全與評價所,南京 210009

    環(huán)境雌激素對生命健康影響受到廣泛關(guān)注,現(xiàn)行污染物環(huán)境標(biāo)準(zhǔn)制訂和風(fēng)險評價只針對單一化合物而非混合物效應(yīng),不足以保護(hù)生命安全與人類健康。為探討環(huán)境雌激素的混合物效應(yīng),選擇對雌激素敏感的人乳腺癌MCF-7細(xì)胞增殖實驗,檢測雌二醇(E2)、鄰苯二甲酸酯類化合物(DBP和DEHP)的單一及其聯(lián)合雌激素活性;基于單一化合物的濃度-反應(yīng)曲線,運用濃度相加(CA)和獨立作用(IA)模型對混合物的毒性進(jìn)行預(yù)測,并將模型預(yù)測結(jié)果與混合物實驗數(shù)據(jù)進(jìn)行比較分析。結(jié)果表明,E2、DBP、DEHP對MCF-7細(xì)胞的單一作用數(shù)據(jù)可通過Weibull方程擬合,由擬合方程得到的半數(shù)效應(yīng)濃度(EC50)及95%置信區(qū)間分別為3.450×10-6(2.373×10-6~1.675×10-5)、5.138(1.489~1.082×10)、1.186(4.478×10-1~2.24) μmol·L-1;3種化合物的混合物數(shù)據(jù)亦可通過Weibull、Logistic和ExpGro1方程進(jìn)行有效擬合,混合物效應(yīng)與化合物單獨作用產(chǎn)生的效應(yīng)具有顯著性差異;3種化合物表現(xiàn)非相似聯(lián)合作用,利用獨立作用(IA)模型預(yù)測混合物效應(yīng)較為可靠,外源性環(huán)境雌激素與內(nèi)源性雌激素聯(lián)合作用產(chǎn)生的混合效應(yīng)顯著。環(huán)境雌激素混合物毒性可以通過相加作用模型預(yù)測,為環(huán)境復(fù)合污染的風(fēng)險評價和管理提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

    鄰苯二甲酸酯類;MCF-7細(xì)胞;雌激素活性;聯(lián)合作用

    Received22 April 2017accepted31 May 2017

    Abstract: Estrogens in the environment have received extensive concerns due to their potential risks to human health. The present environmental standards and risk assessment procedures have limitation in the protection of human health and safety, because they are on the basis of the single effects of chemical compounds, rather than the combined effects. To investigate the combined effects of estrogens, the single and joint toxicities of three estrogens, including estradiol (E2) and phthalic acid ester compounds (DBP and DEHP), were investigated using the estrogen-sensitive MCF-7 human breast cancer cells proliferation assay. The individual concentration-response curves of the three estrogens were applied to predict the joint toxicity of their mixtures according to the concentration addition (CA) and the independent action (IA) models. The predicted concentration-response curves were further compared with the experimental data. The results showed that the single effects of E2, DBP, and DEHP were well fitted by Weibull equation, and their EC50(95% confidence interval) values were 3.450×10-6(2.373×10-6-1.675×10-5) μmol·L-1, 5.138 (1.489-10.820) μmol·L-1, and 1.186 (0.448-2.240) μmol·L-1, respectively. The effect from the mixtures of the three estrogens were well described by Weibull, Logistic, and ExpGro1 equations, while significant differences were observed between the single effects of the three estrogens and the combined effects of their mixtures. The three compounds showed dissimilar joint actions, and the IA model was more appropriate to predict the combined effects compared to the CA model. The combined effects of exogenous environmental estrogen and endogenous estrogen were significant. Overall, the toxicity of estrogens mixtures can be predicted by the additive model, providing the basic data for the risk assessment and management of combined pollution in the environment.

    Keywords: phthalates; MCF-7 cells; estrogenic activity; combination effects

    鄰苯二甲酸酯類(phthalic acid esters, PAEs)化合物是一種增塑劑,主要包括:鄰苯二甲酸二(2-乙基)己酯(diethylhexyl phthalate, DEHP)、鄰苯二甲酸二丁酯(dibutyl phthalate, DBP)、鄰苯二甲酸二異壬酯(diisononyl phthalate, DINP)等,被廣泛應(yīng)用于塑料容器、食品包裝和個人護(hù)理用品等數(shù)百種產(chǎn)品中[1-2]。研究報道,增塑劑為環(huán)境內(nèi)分泌干擾物,與生殖障礙、出生缺陷、發(fā)育異常和代謝紊亂有關(guān)[3]?,F(xiàn)實生活中,機(jī)體總是同時或相繼暴露于多種環(huán)境污染物,特別是環(huán)境雌激素的濃度-反應(yīng)關(guān)系非線性,往往呈現(xiàn)低劑量效應(yīng),彼此間表現(xiàn)各種聯(lián)合作用[4]。現(xiàn)行只對單一化合物而非混合物效應(yīng)進(jìn)行的評價,可能不足以保護(hù)生物安全和人類健康,需要研究混合物效應(yīng)評價和預(yù)測方法[5-7]。

    化合物相互作用分為無交互作用和有交互作用2種情況,無交互作用就是我們通常定義的“相加作用”類型,相加作用是聯(lián)合作用定量分析的前提和基礎(chǔ),有Loewe相似作用和Bliss獨立作用[8-10],前者表示聯(lián)用化合物作用機(jī)理相似,有對數(shù)劑量-概率單位平行,聯(lián)用效應(yīng)相當(dāng)于同一物質(zhì)的幾個不同劑量合用,即濃度相加(concentration addition, CA);而后者指聯(lián)用化合物作用機(jī)理不同,即獨立作用或反應(yīng)相加(independent action or response addition, IA)。在藥理學(xué)和數(shù)理統(tǒng)計學(xué)基礎(chǔ)上可推導(dǎo)出二類數(shù)學(xué)模型:濃度相加模型(concentration addition, CA)和反應(yīng)相加模型(independent action or response addition, IA)。濃度相加適用于相似聯(lián)合作用,從“毒性單位”的概念出發(fā);反應(yīng)相加模型適用于獨立聯(lián)合作用,根據(jù)概率論中“獨立事件的概率相加公式”推導(dǎo)而來,適合于作用機(jī)理不同的幾種化合物的相加計算。實際情況下我們往往不能夠準(zhǔn)確判斷相加作用的類型,所以,在評價時,需要同時應(yīng)用2類模型綜合分析評價。如果混合物實際測得的效應(yīng)與模型預(yù)測結(jié)果相一致,則分別為模型所定義的相加作用類型。

    本文通過雌激素依賴型人乳腺癌MCF-7細(xì)胞體外增殖實驗(E-screen assay),對PAEs的聯(lián)合作用進(jìn)行研究,先建立單個化合物雌激素活性效應(yīng)數(shù)據(jù)庫,在對單個化合物濃度-反應(yīng)關(guān)系進(jìn)行非線性回歸分析的基礎(chǔ)上,應(yīng)用2類相加作用數(shù)學(xué)模型,預(yù)測PAEs混合物的生物效應(yīng),并與實際測得的混合物效應(yīng)結(jié)果比較,進(jìn)而有助于判斷該類化合物聯(lián)合作用類型,同時測試了模型的預(yù)測效力和實用性,為化合物聯(lián)合作用的預(yù)測提供理論依據(jù)和實用方法。

    1 材料與方法(Materials and methods)

    1.1 實驗材料

    1.1.1 測試化合物

    3個受試化合物為:17β-雌二醇(17β-estradiol,E2,CAS:50-28-2),純度≥98%,分子式C18H24O2,分子量272.38,購自美國Sigma公司;鄰苯二甲酸二(2-乙基)己酯(diethylhexyl phthalate,DEHP,CAS:117-81-7)分子式C24H38O4,分子量390.56,標(biāo)準(zhǔn)品,購于美國AccuStandard公司;鄰苯二甲酸二丁酯(dibutyl phthalate,DBP,CAS:84-72-2),分子式C16H22O4,分子量278.34,標(biāo)準(zhǔn)品,購于美國AccuStandard公司。

    1.1.2 試劑與儀器

    用于細(xì)胞培養(yǎng)的DMEM高糖培養(yǎng)基、無酚紅DMEM培養(yǎng)基、胰酶和胎牛血清(FBS)購自美國Hyclone公司;噻唑藍(lán)(MTT)和二甲基亞砜(DMSO)購自美國Sigma公司。

    儀器包括超凈工作臺(BSG-1500ⅡA2-X,濟(jì)南鑫貝西生物技術(shù)有限公司)、CO2培養(yǎng)箱(Series 8000WJ, Thermo Scientific, USA),倒置顯微鏡(IX2-ILL30, Olympus, Japan),酶聯(lián)免疫檢測儀(Epoch, BioTek instruments, Tnc., USA)等。

    1.2 MCF-7細(xì)胞增殖實驗(E-screen assay)

    經(jīng)雌激素受體ERα基因表達(dá)實驗證實本實驗選用的MCF-7細(xì)胞為ERα陽性的雌激素依賴型細(xì)胞,這也進(jìn)一步驗證了細(xì)胞增殖實驗結(jié)果的敏感性和可靠性。

    采用MTT作為顯色底物進(jìn)行細(xì)胞增殖實驗[11],MTT全稱3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,化學(xué)名為3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽,又稱噻唑藍(lán),是一種接受氫離子的黃色染料。具體實驗步驟如下:MCF-7細(xì)胞復(fù)蘇后用10% FBS高糖DMEM培養(yǎng)基,于5% CO2、37 ℃條件下正常培養(yǎng)至3代以上。實驗前48 h將原培養(yǎng)基替換為含5% CDT-FBS的無酚紅高糖DMEM培養(yǎng)液。收集細(xì)胞,調(diào)整細(xì)胞懸液濃度,以每孔200 μL約6 000~7 000個細(xì)胞接種于96孔板中。繼續(xù)培養(yǎng)至細(xì)胞貼壁后吸去舊培養(yǎng)液,加入200 μL無酚紅培養(yǎng)基配制的不同濃度梯度的化合物或混合物,每個濃度均設(shè)置5個復(fù)孔。培養(yǎng)48 h后,棄去原有培養(yǎng)基,加入5 mg·mL-1MTT和無血清無酚紅DMEM培養(yǎng)基混合液200 μL,繼續(xù)培養(yǎng)3~4 h。1 mL注射器吸去孔內(nèi)的培養(yǎng)液,每孔加入150 μL DMSO,充分溶解紫色結(jié)晶物。選擇490 nm波長,用酶聯(lián)免疫檢測儀測定各孔的光密度(OD)值。

    以體積分?jǐn)?shù)為0.1%的DMSO為溶劑對照,濃度為1 nmol·L-1的E2作為陽性對照,結(jié)果用校正相對增殖效應(yīng)(relativistic proliferation effect, RPE)表示,RPE=(實驗組OD值-溶劑對照組OD值)/(陽性對照組OD值-溶劑對照組OD值)×100%。

    1.3 混合物效應(yīng)預(yù)測模型

    根據(jù)單一化合物的數(shù)據(jù)擬合濃度-反應(yīng)曲線,運用濃度相加(CA)和獨立作用(IA)模型對混合物的聯(lián)合毒性進(jìn)行預(yù)測[12-13]。

    濃度相加(CA)模型用下式表示:

    式中:pi為混合物中化合物i的濃度占總濃度的分?jǐn)?shù);ECxmix(單位:μmol·L-1)為引起x效應(yīng)的混合物預(yù)測總濃度;其中ECxi(單位:μmol·L-1)可通過單個化合物劑量-反應(yīng)回歸方程的反函數(shù)求得,即:

    獨立作用(IA)模型如下:

    式中:Eci為混合物中各化學(xué)物在ci濃度時所產(chǎn)生的效應(yīng),可通過劑量-反應(yīng)關(guān)系方程或內(nèi)插法計算得到,即:

    式中:Fi為單個化學(xué)物i的劑量-效應(yīng)函數(shù),對于給定混合物效應(yīng)x可通過迭代算法計算。

    1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計學(xué)分析

    采用SPSS19.0軟件和Excel軟件對實驗結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析和計算[14-15]。濃度-反應(yīng)關(guān)系采用origin7.5軟件進(jìn)行非線性曲線擬合,選擇擬合相關(guān)決定系數(shù)R2值最大的方程為最優(yōu)擬合方程,同時繪制濃度與細(xì)胞相對增殖效應(yīng)的關(guān)系曲線。

    2 結(jié)果與分析(Results and analysis)

    2.1 化合物對MCF-7細(xì)胞增殖效應(yīng)影響的實驗結(jié)果

    (1)單個化合物

    在預(yù)試驗基礎(chǔ)上確定了3個化合物作用濃度范圍,實驗結(jié)果經(jīng)計算得出各化合物對MCF-7細(xì)胞的相對增殖效應(yīng)(RPE),表明3個化合物均能促進(jìn)MCF-7細(xì)胞增殖,在設(shè)定濃度范圍內(nèi)呈正相關(guān)關(guān)系。由圖1可知,17β-雌二醇(17β-estradiol, E2)濃度在0.01 pmol·L-1~1 nmol·L-1范圍內(nèi),細(xì)胞相對增殖效應(yīng)逐漸增大;濃度在1 nmol·L-1時達(dá)最大,表明E2在此濃度下雌激素活性最強(qiáng)。鄰苯二甲酸二(2-乙基)己酯(diethylhexyl phthalate, DEHP)、鄰苯二甲酸二丁酯(dibutyl phthalate, DBP)的濃度-反應(yīng)關(guān)系亦是正相關(guān)關(guān)系,隨著濃度的增加,增殖效應(yīng)逐漸增大,DBP在100 μmol·L-1,DEHP在10 μmol·L-1,細(xì)胞增殖效應(yīng)最大。

    運用非線性回歸方法對實驗測得的濃度-反應(yīng)數(shù)據(jù)進(jìn)行非線性曲線擬合,并將多個函數(shù)擬合的曲線進(jìn)行比較,獲取擬合度最優(yōu)的濃度-反應(yīng)方程,見表1。對比多次擬合結(jié)果后發(fā)現(xiàn),E2、DEHP、DBP均是Weibull函數(shù)擬合效果最優(yōu),說明Weibull函數(shù)能夠有效表述這3種化合物對MCF-7細(xì)胞增殖影響的濃度-反應(yīng)關(guān)系。根據(jù)曲線方程及其反函數(shù)方程,計算得出各個化合物單一作用于MCF-7細(xì)胞的效應(yīng)濃度(EC50)值。具體的擬合結(jié)果(各化合物擬合方程及其參數(shù)、決定系數(shù)R2值,以及EC50及其95%置信區(qū)間(95%CI)見表2,擬合的曲線如圖1,將3種化合物的濃度-反應(yīng)曲線整合在同一坐標(biāo)系中,可清楚地展示各化合物作用的濃度范圍。結(jié)合表2和圖1中各曲線的位置分布可知,E2的濃度-反應(yīng)曲線位于最左側(cè),相對增殖效應(yīng)最大,EC50為3.450 pmol·L-1;DEHP(EC50=1.186 μmol·L-1)和DBP(EC50=5.138 μmol·L-1)的促增殖能力比E2低105-106倍。這3種化合物對MCF-7細(xì)胞的增殖效應(yīng)為E2 >DEHP>DBP。

    (2)混合物

    E2、DEHP和DBP等效應(yīng)固定濃度比混合,即初始混合物按照每種化合物的等效應(yīng)濃度(如EC50)比例進(jìn)行混合。構(gòu)成3種二元混合物E2/DEHP、E2/DBP、DEHP/DBP和1個三元混合物E2/DEHP/DBP,將4個混合物當(dāng)作4個新的化合物進(jìn)行實驗。將初始混合物依次稀釋成初始濃度的100%、50%、10%、5%、1%、0.5%、0.1%、0.05%、0.01%倍,混合物中每種化合物所占的組成比例始終保持一致。

    將混合物對MCF-7細(xì)胞增殖影響的實驗結(jié)果進(jìn)行非線性回歸分析,濃度-反應(yīng)關(guān)系擬合模型、參數(shù)及對應(yīng)的R2值見表2,擬合曲線如圖2。四參數(shù)的Logistic模型對DEHP/DBP的濃度-反應(yīng)曲線擬合效果最好,決定系數(shù)R2=0.995;E2/DEHP和E2/DBP擬合度最優(yōu)的模型分別為三參數(shù)的ExpGro1方程,R2分別為0.977和0.949;E2/DEHP/DBP擬合度最優(yōu)的模型為二參數(shù)Weibull方程,R2為0.996,方程參數(shù)及EC50值見表2。從圖2中各條曲線的分布不難看出,等效應(yīng)固定濃度比二元混合物的擬合曲線和95%置信區(qū)間均介于單個化合物之間,混合物的EC50也都介于單個化合物之間;混合物實驗數(shù)據(jù)擬合曲線形狀不同于單獨作用的擬合曲線,化合物單獨作用的效應(yīng)和產(chǎn)生的混合物效應(yīng)顯著不同;外源化合物單獨作用下在較低濃度時產(chǎn)生的效應(yīng)較弱,但聯(lián)合作用下會產(chǎn)生顯著的混合物效應(yīng)。

    圖1 單一化合物濃度-反應(yīng)曲線Fig. 1 Concentration-response fitting curves for each of the individual chemical

    表1 擬合度最優(yōu)模型方程及其反函數(shù)方程Table 1 The best-fit regression models and its inverse function

    圖2 各種混合物聯(lián)合作用濃度-反應(yīng)曲線Fig. 2 Concentration-response fitting curves for each of the mixtures

    表2 單一化合物和混合物濃度-反應(yīng)關(guān)系曲線方程參數(shù)和EC50(95%CI)Table 2 The corresponding best-fit models with estimated parameters, and the estimated EC50 values and the 95% confidence intervals

    圖3 各種混合物實驗結(jié)果與相加作用模型預(yù)測結(jié)果比較Fig. 3 Comparison between the observed and addition models predicted mixture effects

    2.2 混合物實驗結(jié)果與相加作用模型預(yù)測結(jié)果的比較

    根據(jù)17β-雌二醇(17β-estradiol, E2)、鄰苯二甲酸二(2-乙基)己酯(diethylhexyl phthalate, DEHP)、鄰苯二甲酸二丁酯(dibutyl phthalate, DBP)單獨作用的濃度-反應(yīng)回歸方程,應(yīng)用濃度相加(CA)和獨立作用(IA)模型對這3種化合物的等毒性固定濃度比例混合物效應(yīng)進(jìn)行預(yù)測,以單個化合物最優(yōu)化非線性回歸方程為基礎(chǔ),分別計算從1%到99%的35個效應(yīng)點在滿足CA和IA模型條件下的混合物效應(yīng)濃度。將混合物實驗數(shù)據(jù)擬合的曲線及95%置信限,與CA和IA模型預(yù)測曲線畫在一張圖中進(jìn)行比較,如圖3,可知:4個混合物應(yīng)用IA模型預(yù)測出的混合物效應(yīng)基本上能夠落在混合物實測效應(yīng)的95%置信區(qū)間內(nèi),CA模型得出的效應(yīng)濃度值偏高,提示此3種化合物聯(lián)合作用應(yīng)用IA模型預(yù)測,CA模型會低估混合物效應(yīng),證明了3種化合物在本實驗中呈現(xiàn)獨立聯(lián)合作用。3種化合物在較低暴露濃度(1/20 EC50)下,單獨存在產(chǎn)生的效應(yīng)以及聯(lián)合存在時產(chǎn)生的混合物效應(yīng)結(jié)果如圖4,表明化合物單獨存在時產(chǎn)生的效應(yīng)可能不顯著,但每個化合物根據(jù)其作用大小都會對總效應(yīng)產(chǎn)生貢獻(xiàn),甚至在低于有效作用濃度下產(chǎn)生顯著的混合物效應(yīng)。

    3 討論(Discussion)

    本研究采用體外人乳腺癌MCF-7細(xì)胞增殖實驗(E-screen assay),檢測環(huán)境化合物的雌激素活性。實驗結(jié)果表明,E2單獨作用對MCF-7細(xì)胞增殖影響具有濃度-反應(yīng)關(guān)系,E2在1 nmol·L-1時,細(xì)胞增殖效應(yīng)最大,但是隨著濃度的增大,在高濃度時,E2抑制細(xì)胞增殖;外源性化合物DEHP和DBP的增殖效應(yīng)與內(nèi)源性雌激素E2的相似,在設(shè)定濃度范圍內(nèi)其濃度-反應(yīng)曲線均呈“S”型,但是產(chǎn)生的雌激素活性相對較弱,DEHP和DBP的半效應(yīng)濃度EC50分別為1.186 μmol·L-1、5.138 μmol·L-1。至今為止大部分的體內(nèi)實驗結(jié)果認(rèn)為DBP無雌激素活性,DEHP可以改變子宮濕重,但是結(jié)果不穩(wěn)定,可重復(fù)性差,猜測體內(nèi)體外實驗的不一致性的原因可能是DBP和DEHP在體內(nèi)被代謝分解,體內(nèi)實驗表現(xiàn)的是代謝產(chǎn)物的雌激素活性[16-17];體外實驗表現(xiàn)的是DBP和DEHP原型的活性。雖然在本研究中DBP和DEHP對MCF-7細(xì)胞增殖的影響均表現(xiàn)出較弱的雌激素活性,但是鄰苯二甲酸酯類化合物對生物有機(jī)體的生殖內(nèi)分泌毒性和胚胎發(fā)育毒性是不容忽視的[1-3,18]。

    環(huán)境雌激素多以混合狀態(tài)存在,且無論在環(huán)境中還是在生物體內(nèi)均是與天然雌激素共同發(fā)揮作用,并且內(nèi)源性雌激素和外源性環(huán)境雌激素污染物聯(lián)合作用,產(chǎn)生的混合效應(yīng)大于單獨作用的結(jié)果[19]。因此,對E2與其他化合物共存時的雌激素活性進(jìn)行研究,符合機(jī)體受環(huán)境雌激素干擾的實際情況[20]。多種化合物混合效應(yīng)相較于單獨作用產(chǎn)生的效應(yīng)更復(fù)雜,這也正是研究環(huán)境雌激素混合物效應(yīng)的意義所在。

    圖4 3種化合物低劑量(1/20 EC50)的混合物效應(yīng)Fig. 4 Mixture effects at low-effect concentrations (one-twentieth of EC50) of three chemicals

    本文在化合物單獨作用的實驗基礎(chǔ)上,探討雌二醇和鄰苯二甲酸酯化合物的聯(lián)合雌激素活性,主要結(jié)論如下:E2、DEHP和DBP濃度-反應(yīng)關(guān)系曲線非線性,均為Weibull模型擬合度最優(yōu);內(nèi)源性雌激素E2對MCF-7細(xì)胞的促增殖能力最強(qiáng),外源性化合物的雌激素活性相對較弱;化合物在較低濃度下可能產(chǎn)生顯著的混合物效應(yīng),外源性環(huán)境雌激素與內(nèi)源性雌激素聯(lián)合作用產(chǎn)生的混合效應(yīng)顯著;3種化合物表現(xiàn)非相似聯(lián)合作用,混合物效應(yīng)利用獨立作用(IA)模型預(yù)測較為可靠。

    [1] 鮑佳沁, 王敏, 高曦, 等. 鄰苯二甲酸酯類暴露風(fēng)險評估研究進(jìn)展[J]. 食品科學(xué), 2014, 35(23): 337-341

    Bao J Q , Wang M, Gao X, et al. Progress in risk assessment of human phthalate ester exposure [J]. Food Science, 2014, 35(23): 337-341 (in Chinese)

    [2] Christen V, Crettaz P, Oberli-Schr?mmli A, et al. Antiandrogenic activity of phthalate mixtures: Validity of concentration addition [J]. Toxicology & Applied Pharmacology, 2012, 259(2): 169-176

    [3] 吳德生, 秦逍云, 譚琴, 等. 鄰苯二甲酸酯類化合物的生殖毒性及其環(huán)境內(nèi)分泌干擾效應(yīng)[J]. 癌變·畸變·突變, 2015, 27(4): 316-318

    [4] Scholze M, Boedeker W, Faust M, et al. A general best-fit method for concentration-response curves and the estimation of low-effect concentrations [J]. Environmental Toxicology and Chemistry, 2001, 20: 448-457

    [5] Evans R M, Scholze M, Kortenkamp A. Additive mixture effects of estrogenic chemicals in human cell-based assays can be influenced by inclusion of chemicals with differing effect profiles [J]. Plos One, 2012, 7(8): 1-16

    [6] Rider C V, LeBlanc G A. An integrated addition and interaction model for assessing toxicity of chemical mixtures [J]. Toxicological Sciences, 2005, 87: 520-528

    [7] 楊蓉, 李娜, 饒凱鋒, 等. 環(huán)境混合物的聯(lián)合毒性研究方法[J]. 生態(tài)毒理學(xué)報, 2016, 11(1): 1-13

    Yang R, Li N, Rao K F, et al. Review on methodology for environmental mixture toxicity study [J]. Asian Journal of Ecotoxicology, 2016, 11(1): 1-13 (in Chinese)

    [8] Altenburger R, Backhaus T, Boedeker W, et al. Predictability of the toxicity of multiple chemical mixtures to Vibrio fischeri: Mixtures composed of similarly acting chemicals [J]. Environmental Toxicology and Chemistry, 2000, 19(9): 2341-2347

    [9] Backhaus T, Altenburger R, Boedeker W, et al. Predictability of the toxicity of a multiple mixtures of dissimilarly acting chemicals to Vibrio fischeri [J]. Environmental Toxicology and Chemistry, 2000, 19(9): 2348-2356

    [10] Junghans M, Backhaus T, Faust M, et al. Application and validation of approaches for the predictive hazard assessment of realistic pesticide mixtures [J]. Aquatic Toxicology, 2006, 76(2): 93-110

    [11] Wang C, Jiang G. The in vitro estrogenic activities of polyfluorinated iodine alkanes [J]. Environmental Health Perspectives, 2012, 120(1): 119-125

    [12] Backhaus T, Faust M. Predictive environmental risk assessment of chemical mixtures: A conceptual framework [J]. Environmental Science & Technology, 2012, 46(5): 2564-2573

    [13] 劉樹深, 劉玲, 陳浮. 濃度加和模型在化學(xué)混合物毒性評估中的應(yīng)用[J]. 化學(xué)學(xué)報, 2013, 71(10): 1335-1340

    Liu S S, Liu L, Chen F. Application of the concentration addition model in the assessment of chemical mixture toxicity [J]. Acta Chimica Sinica, 2013, 71(10): 1335-1340 (in Chinese)

    [14] 張亞輝, 曹瑩, 王一喆, 等. 3種氯酚化合物對大型溞的聯(lián)合毒性[J]. 生態(tài)毒理學(xué)報, 2011, 6(4): 403-409

    Zhang Y H, Cao Y, Wang Y Z, et al. Joint toxicity of three chlorophenols to Daphnia magna [J]. Asian Journal of Ecotoxicology, 2011, 6(4): 403-409 (in Chinese)

    [15] 吳宗凡, 劉興國, 王高學(xué). 重金屬與有機(jī)磷農(nóng)藥二元混合物對鹵蟲聯(lián)合毒性的評價及預(yù)測[J]. 生態(tài)毒理學(xué)報, 2013, 8(4): 602-608

    Wu Z F, Liu X G, Wang G X, et al. Evaluating and modeling the toxicity of binary mixtures of heavy metals and organophosphate pesticides to Artemia salina [J]. Asian Journal of Ecotoxicology, 2013, 8(4): 602-608 (in Chinese)

    [16] 解瑋, 蔣頌輝, 屈衛(wèi)東, 等. DEHP、DBP內(nèi)分泌干擾活性的實驗研究[J]. 中國環(huán)境科學(xué), 2004, 24(1): 45-48

    Xie W, Jiang S H, Qu W D, et al. Experimental studies on the endocrine disrupting activity of DEHP and DBP [J]. China Environmental Science, 2004, 24(1): 45-48 (in Chinese)

    [17] 張?zhí)N暉, 陳秉衡, 丁訓(xùn)誠, 等. DBP、DEHP及其代謝物MBP、MEHP的體內(nèi)雌激素樣活性分析[J]. 環(huán)境與職業(yè)醫(yī)學(xué), 2005, 22(1): 11-13

    Zhang Y H, Chen B H, Ding X C, et al. Potential estrogenic activities of DBP, DEHP and their metabolites in immature rats using the uterotrophic assay [J]. Journal of Labour Medicine, 2005, 22(1): 11-13 (in Chinese)

    [18] 曾燕, 胡紅. 內(nèi)分泌干擾物雙酚A和鄰苯二甲酸二乙酯與嬰幼兒女童乳房早發(fā)育的相關(guān)性[J]. 第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報, 2015, 36(9): 1021-1024

    Zeng Y, Hu H. Relationship of endocrine disruptors (bisphenol A and diethyl phthalate) with premature the larche in infant girls [J]. Academic Journal of Second Military Medical University, 2015, 36(9): 1021-1024 (in Chinese)

    [19] 張暉. 環(huán)境雌激素聯(lián)合作用的分析和預(yù)測[D]. 南京: 東南大學(xué), 2008: 35-40

    Zhang H. Analysis approaches for the predictive hazard assessment of combination effects of environmental estrogens [D]. Nanjing: Southeast University, 2008: 35-40 (in Chinese)

    [20] 郎朗. 水中典型環(huán)境雌激素共存對內(nèi)分泌系統(tǒng)的影響及機(jī)制研究[D]. 哈爾濱: 哈爾濱工業(yè)大學(xué), 2011: 37-70

    Lang L. Study of endocrine disrupting activity and mechanism for typical environmental estrogens coexisting in water [D]. Harbin: Harbin Institute of Technology, 2011: 37-70 (in Chinese)

    ModelAssessingfortheCombinationEffectsofEstrogenicActivityofPhthalates

    He Ying1, Zhang Hui1,*, Zhen Shiqi2, Zhang Lijuan1, Cao Chicheng1, Zhang Qi1

    1. Key Laboratory of Environmental Medicine and Engineering of Ministry of Education, School of Public Health, Southeast University, Nanjing 210009, China2. Institute of Food Safety and Evaluation, Jiangsu Provincial Center for Disease Control and Prevention, Nanjing 210009, China

    10.7524/AJE.1673-5897.20170422001

    2017-04-22錄用日期2017-05-31

    1673-5897(2017)3-739-08

    X171.5

    A

    張暉(1968-),女,副教授,碩士生導(dǎo)師,研究方向為環(huán)境醫(yī)學(xué),發(fā)表學(xué)術(shù)論文20余篇。

    中央高?;究蒲袠I(yè)務(wù)費(2242017K40041);東南大學(xué)研討通選課程項目(1125000131;1125001508)

    何穎(1993-),女,碩士,研究方向為環(huán)境衛(wèi)生學(xué),E-mail: molahe@163.com;

    *通訊作者(Corresponding author), E-mail: 13851553232@163.com

    何穎, 張暉, 甄士琪, 等. 鄰苯二甲酸酯類雌激素活性聯(lián)合作用模型分析[J]. 生態(tài)毒理學(xué)報,2017, 12(3): 739-746

    He Y, Zhang H, Zhen S Q, et al. Model assessing for the combination effects of estrogenic activity of phthalates [J]. Asian Journal of Ecotoxicology, 2017, 12(3): 739-746 (in Chinese)

    猜你喜歡
    鄰苯二甲酸混合物化合物
    多組分纖維混合物定量分析通用計算模型研制
    正丁醇和松節(jié)油混合物對組織脫水不良的補(bǔ)救應(yīng)用
    碳及其化合物題型點擊
    碳及其化合物題型點擊
    QuEChERS-氣相色譜-質(zhì)譜法測定植物油中16種鄰苯二甲酸酯
    例析高考中的鐵及其化合物
    青菜對鄰苯二甲酸酯類物質(zhì)的積累和代謝初探
    混合物按照歐盟CLP進(jìn)行分類標(biāo)簽
    鄰苯二甲酸二丁酯的收縮血管作用及其機(jī)制
    鄰苯二甲酸二甲酯-D6的合成
    同位素(2014年2期)2014-04-16 04:57:13
    在线天堂最新版资源| 成人毛片a级毛片在线播放| 亚洲天堂av无毛| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 精品卡一卡二卡四卡免费| 性色av一级| 成人综合一区亚洲| 黄色日韩在线| 国产一区二区在线观看日韩| 精品少妇久久久久久888优播| 最近2019中文字幕mv第一页| a级一级毛片免费在线观看| 亚洲电影在线观看av| 搡女人真爽免费视频火全软件| 久久ye,这里只有精品| 精品一区二区三区视频在线| 亚洲三级黄色毛片| 交换朋友夫妻互换小说| 亚洲欧洲日产国产| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 日本欧美视频一区| 成人毛片60女人毛片免费| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 免费观看性生交大片5| 久久久久精品性色| a级一级毛片免费在线观看| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 久久久久久久久大av| 久久 成人 亚洲| 国产精品久久久久久精品古装| 国产成人午夜福利电影在线观看| 久久免费观看电影| 97在线视频观看| 女性被躁到高潮视频| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 黄色配什么色好看| 草草在线视频免费看| 久久97久久精品| 成人二区视频| 看免费成人av毛片| 搡女人真爽免费视频火全软件| 黄色毛片三级朝国网站 | 亚洲激情五月婷婷啪啪| 国国产精品蜜臀av免费| 麻豆乱淫一区二区| 蜜桃在线观看..| 22中文网久久字幕| 精品一区在线观看国产| 午夜激情福利司机影院| 午夜福利,免费看| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 国产亚洲最大av| 熟女人妻精品中文字幕| 日韩一区二区视频免费看| 天堂中文最新版在线下载| 日韩制服骚丝袜av| av不卡在线播放| 精品亚洲成国产av| 尾随美女入室| 麻豆成人av视频| 丝袜脚勾引网站| 99久久人妻综合| 亚洲不卡免费看| 久久婷婷青草| 国产午夜精品一二区理论片| 日韩精品免费视频一区二区三区 | 精品国产一区二区久久| 久久综合国产亚洲精品| 亚洲天堂av无毛| 69精品国产乱码久久久| 日韩强制内射视频| 免费观看的影片在线观看| 成年av动漫网址| 成人午夜精彩视频在线观看| 欧美激情极品国产一区二区三区 | 99热这里只有精品一区| 青春草视频在线免费观看| 女人久久www免费人成看片| 制服丝袜香蕉在线| 国产真实伦视频高清在线观看| 少妇人妻一区二区三区视频| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 欧美国产精品一级二级三级 | 欧美xxⅹ黑人| av福利片在线| 有码 亚洲区| 国产成人免费无遮挡视频| 国产精品99久久99久久久不卡 | 嫩草影院入口| 欧美精品亚洲一区二区| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 人人妻人人看人人澡| 亚洲av二区三区四区| 亚洲欧美一区二区三区国产| 简卡轻食公司| 国内精品宾馆在线| 超碰97精品在线观看| 丝袜喷水一区| 内射极品少妇av片p| 国产免费福利视频在线观看| 哪个播放器可以免费观看大片| 在线观看三级黄色| 亚洲精品久久午夜乱码| 国产片特级美女逼逼视频| 嘟嘟电影网在线观看| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 欧美+日韩+精品| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 午夜日本视频在线| 欧美性感艳星| 国产乱人偷精品视频| 波野结衣二区三区在线| 一边亲一边摸免费视频| 亚洲精品成人av观看孕妇| 国产伦理片在线播放av一区| 亚洲综合色惰| 97精品久久久久久久久久精品| kizo精华| 草草在线视频免费看| 久久国内精品自在自线图片| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 亚洲真实伦在线观看| 一级毛片久久久久久久久女| 极品教师在线视频| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 99久久精品热视频| 亚洲va在线va天堂va国产| 国产色爽女视频免费观看| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 国产精品一区二区在线不卡| 晚上一个人看的免费电影| 女人久久www免费人成看片| av免费在线看不卡| 人妻系列 视频| 在线精品无人区一区二区三| 日韩精品有码人妻一区| 简卡轻食公司| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 十分钟在线观看高清视频www | 秋霞伦理黄片| 国产精品福利在线免费观看| 亚洲va在线va天堂va国产| 欧美97在线视频| 久久久亚洲精品成人影院| 国产日韩一区二区三区精品不卡 | 涩涩av久久男人的天堂| 久久热精品热| 搡老乐熟女国产| 国产精品久久久久久久久免| 国产免费福利视频在线观看| 成人漫画全彩无遮挡| 亚洲精品国产av蜜桃| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 久久ye,这里只有精品| 亚洲av不卡在线观看| av.在线天堂| av一本久久久久| 美女视频免费永久观看网站| 日本-黄色视频高清免费观看| 有码 亚洲区| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 嫩草影院新地址| av黄色大香蕉| 男的添女的下面高潮视频| 一级二级三级毛片免费看| 久久久久久人妻| 日本-黄色视频高清免费观看| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 大码成人一级视频| 久久精品夜色国产| 亚洲国产日韩一区二区| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 欧美日韩av久久| 国产探花极品一区二区| 久久人人爽人人爽人人片va| 成年av动漫网址| 久久99一区二区三区| 国产日韩一区二区三区精品不卡 | 久热这里只有精品99| 日本午夜av视频| 一本久久精品| 久久毛片免费看一区二区三区| 精华霜和精华液先用哪个| 2021少妇久久久久久久久久久| 赤兔流量卡办理| 99热国产这里只有精品6| 男人和女人高潮做爰伦理| 久久久久久久久久成人| 少妇被粗大的猛进出69影院 | 亚洲欧美成人精品一区二区| 日韩伦理黄色片| 亚洲四区av| 久久av网站| 草草在线视频免费看| 亚洲欧美一区二区三区国产| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 一级毛片电影观看| 欧美精品高潮呻吟av久久| 免费人妻精品一区二区三区视频| 99九九在线精品视频 | 高清不卡的av网站| 少妇被粗大的猛进出69影院 | 亚洲成人av在线免费| 午夜久久久在线观看| 亚洲国产欧美日韩在线播放 | 建设人人有责人人尽责人人享有的| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 国产男女内射视频| 国产乱人偷精品视频| 亚洲精品视频女| 亚洲,一卡二卡三卡| 精品久久久噜噜| 哪个播放器可以免费观看大片| 久久6这里有精品| 极品教师在线视频| 男女无遮挡免费网站观看| 少妇高潮的动态图| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 精品久久国产蜜桃| 久久久久网色| 国产日韩欧美在线精品| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 国产精品国产三级国产av玫瑰| av卡一久久| 熟妇人妻不卡中文字幕| 亚洲经典国产精华液单| 26uuu在线亚洲综合色| 久久6这里有精品| 99热这里只有精品一区| 黄色日韩在线| 亚洲国产精品专区欧美| 春色校园在线视频观看| 免费黄频网站在线观看国产| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 美女cb高潮喷水在线观看| 国产伦理片在线播放av一区| 多毛熟女@视频| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 成年人午夜在线观看视频| 久久鲁丝午夜福利片| 男女边吃奶边做爰视频| 欧美一级a爱片免费观看看| 亚洲精品日韩av片在线观看| 亚洲精品第二区| 国产高清不卡午夜福利| 日本av手机在线免费观看| 亚洲第一av免费看| 亚洲怡红院男人天堂| 一级黄片播放器| 欧美三级亚洲精品| 嫩草影院入口| 午夜福利,免费看| 国产亚洲欧美精品永久| 久久久久久人妻| 国产精品国产三级专区第一集| 日韩免费高清中文字幕av| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 国产男女内射视频| av在线老鸭窝| 日韩精品有码人妻一区| 晚上一个人看的免费电影| 久久久亚洲精品成人影院| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 亚洲久久久国产精品| 久久人人爽人人爽人人片va| 伊人久久国产一区二区| 人人妻人人澡人人看| 少妇熟女欧美另类| 男女免费视频国产| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 91精品一卡2卡3卡4卡| 亚州av有码| 久久久久久久国产电影| 久久99精品国语久久久| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 亚洲电影在线观看av| 一二三四中文在线观看免费高清| 国产伦在线观看视频一区| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 丝瓜视频免费看黄片| 日本与韩国留学比较| av女优亚洲男人天堂| 老司机影院毛片| 青青草视频在线视频观看| 日韩欧美一区视频在线观看 | 男人添女人高潮全过程视频| 色吧在线观看| 精品人妻一区二区三区麻豆| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 色视频www国产| 亚洲精品aⅴ在线观看| 性色avwww在线观看| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 丰满乱子伦码专区| 精品一品国产午夜福利视频| 在线观看三级黄色| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 欧美日韩在线观看h| 国产片特级美女逼逼视频| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 免费观看无遮挡的男女| www.av在线官网国产| 免费大片18禁| 另类亚洲欧美激情| 亚洲国产欧美在线一区| 丝袜喷水一区| 爱豆传媒免费全集在线观看| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 日本wwww免费看| 啦啦啦啦在线视频资源| 亚洲真实伦在线观看| 国产成人aa在线观看| 亚洲国产精品一区二区三区在线| videossex国产| 少妇高潮的动态图| 91精品伊人久久大香线蕉| 国产精品99久久久久久久久| 亚洲国产精品一区三区| 国产毛片在线视频| 一级毛片久久久久久久久女| 亚洲性久久影院| 国产视频首页在线观看| 赤兔流量卡办理| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 一级爰片在线观看| 欧美精品国产亚洲| 欧美一级a爱片免费观看看| 一级毛片 在线播放| 99久久人妻综合| 国产欧美日韩综合在线一区二区 | 精品人妻偷拍中文字幕| 国产黄色视频一区二区在线观看| 日韩av在线免费看完整版不卡| 在现免费观看毛片| 中文天堂在线官网| 下体分泌物呈黄色| 欧美精品一区二区大全| 曰老女人黄片| 伊人亚洲综合成人网| 久久久久网色| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 国产精品嫩草影院av在线观看| 高清午夜精品一区二区三区| 国内精品宾馆在线| 中国国产av一级| 久久久久久久久久久丰满| 欧美日韩精品成人综合77777| 国产69精品久久久久777片| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 国产永久视频网站| 一级黄片播放器| 男女啪啪激烈高潮av片| 国产精品国产三级国产专区5o| 亚洲av欧美aⅴ国产| 下体分泌物呈黄色| 亚洲一区二区三区欧美精品| 国产精品一二三区在线看| 久久免费观看电影| 亚洲精品成人av观看孕妇| 亚洲精品自拍成人| 久久99热6这里只有精品| 免费高清在线观看视频在线观看| 天堂俺去俺来也www色官网| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 国产视频内射| 国产 一区精品| 久久精品久久久久久久性| 亚洲真实伦在线观看| 日韩一区二区三区影片| 国产精品偷伦视频观看了| 韩国av在线不卡| 男女免费视频国产| 国产黄色视频一区二区在线观看| 国产精品国产三级专区第一集| 韩国av在线不卡| 国产亚洲5aaaaa淫片| 国产精品国产三级国产专区5o| 国产亚洲5aaaaa淫片| 麻豆乱淫一区二区| 国产熟女午夜一区二区三区 | www.av在线官网国产| 一级a做视频免费观看| 高清毛片免费看| 一级,二级,三级黄色视频| 一二三四中文在线观看免费高清| 精品久久久噜噜| 这个男人来自地球电影免费观看 | 日韩伦理黄色片| 日韩 亚洲 欧美在线| 国产精品一区二区在线观看99| 成人漫画全彩无遮挡| 国产爽快片一区二区三区| 高清在线视频一区二区三区| 国产一区二区三区av在线| 亚洲va在线va天堂va国产| 国产探花极品一区二区| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 另类精品久久| 亚洲,欧美,日韩| 日韩av免费高清视频| 自线自在国产av| 久久久午夜欧美精品| 乱系列少妇在线播放| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 亚洲综合精品二区| 久久精品国产亚洲av涩爱| 五月玫瑰六月丁香| 高清在线视频一区二区三区| 国产熟女午夜一区二区三区 | 日韩免费高清中文字幕av| 国产在线视频一区二区| 午夜久久久在线观看| 国产在线一区二区三区精| 国产黄频视频在线观看| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 人体艺术视频欧美日本| 天美传媒精品一区二区| 久久狼人影院| 成人国产av品久久久| 国产熟女午夜一区二区三区 | 国产爽快片一区二区三区| 国产黄色免费在线视频| 大香蕉97超碰在线| 成年人免费黄色播放视频 | 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 成人影院久久| 亚洲av.av天堂| 丝袜脚勾引网站| 人体艺术视频欧美日本| 久久青草综合色| 国产高清三级在线| 精品一品国产午夜福利视频| 国产欧美日韩综合在线一区二区 | 简卡轻食公司| 九草在线视频观看| 久久久精品94久久精品| 观看免费一级毛片| 人人妻人人澡人人看| 超碰97精品在线观看| 国产av码专区亚洲av| 18禁在线播放成人免费| 久久久久久久亚洲中文字幕| 国产真实伦视频高清在线观看| 国产美女午夜福利| 欧美xxⅹ黑人| 一区二区三区免费毛片| 国产毛片在线视频| 男女国产视频网站| 亚洲精品一区蜜桃| 欧美日韩视频精品一区| 国产 精品1| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 日本爱情动作片www.在线观看| 久久精品国产亚洲av涩爱| 六月丁香七月| 人妻夜夜爽99麻豆av| 人妻系列 视频| 少妇被粗大猛烈的视频| 一级爰片在线观看| 我要看日韩黄色一级片| 黄色一级大片看看| 在现免费观看毛片| 22中文网久久字幕| 特大巨黑吊av在线直播| 99re6热这里在线精品视频| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 午夜老司机福利剧场| 高清黄色对白视频在线免费看 | 少妇人妻久久综合中文| 久久这里有精品视频免费| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 国产一区二区三区综合在线观看 | 中文字幕av电影在线播放| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 国产中年淑女户外野战色| 午夜av观看不卡| 涩涩av久久男人的天堂| 国产视频首页在线观看| 久久久国产精品麻豆| 亚洲精品日本国产第一区| 日本与韩国留学比较| av线在线观看网站| 国国产精品蜜臀av免费| 岛国毛片在线播放| 国产片特级美女逼逼视频| h日本视频在线播放| 男人和女人高潮做爰伦理| 亚洲真实伦在线观看| 丝瓜视频免费看黄片| 日韩av免费高清视频| 亚洲久久久国产精品| 一本久久精品| 国产极品天堂在线| 自线自在国产av| 国产亚洲欧美精品永久| 日本黄色日本黄色录像| 高清欧美精品videossex| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 热re99久久精品国产66热6| 人人妻人人澡人人看| 国产淫语在线视频| 一区二区三区四区激情视频| 天堂中文最新版在线下载| 天堂俺去俺来也www色官网| 国产成人91sexporn| av视频免费观看在线观看| 日韩成人av中文字幕在线观看| 欧美日本中文国产一区发布| 人妻人人澡人人爽人人| 午夜日本视频在线| 亚洲精品一区蜜桃| 国产视频首页在线观看| 欧美最新免费一区二区三区| 免费黄色在线免费观看| 成人黄色视频免费在线看| 在线观看人妻少妇| 久久久久人妻精品一区果冻| 亚洲成色77777| 国产精品99久久99久久久不卡 | 午夜福利视频精品| 亚洲av欧美aⅴ国产| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 2018国产大陆天天弄谢| 精品酒店卫生间| av国产久精品久网站免费入址| 老司机影院毛片| 午夜福利影视在线免费观看| 99热这里只有是精品在线观看| 欧美日韩综合久久久久久| 美女内射精品一级片tv| 成人免费观看视频高清| 91久久精品国产一区二区成人| 女人久久www免费人成看片| 在线观看免费高清a一片| 国产黄片美女视频| 久久精品久久精品一区二区三区| 国产成人freesex在线| 成人影院久久| 国产毛片在线视频| 日本av手机在线免费观看| 久久av网站| 免费观看性生交大片5| 岛国毛片在线播放| 久久6这里有精品| 色94色欧美一区二区| 日韩欧美精品免费久久| 国产精品久久久久久久电影| 一本一本综合久久| 高清黄色对白视频在线免费看 | 伊人久久精品亚洲午夜| 中文字幕av电影在线播放| 成人亚洲精品一区在线观看| 精品久久久精品久久久| 日本-黄色视频高清免费观看| 久久久久网色| 欧美日韩视频精品一区| 久久狼人影院| 男男h啪啪无遮挡| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 亚洲图色成人| 伦理电影免费视频| 最近中文字幕2019免费版| 性色av一级| 亚洲国产av新网站| 国产一区有黄有色的免费视频| 在线观看av片永久免费下载| 一级毛片电影观看| 蜜桃在线观看..| 黑人猛操日本美女一级片| 伊人久久精品亚洲午夜| 99久久综合免费| 亚洲第一区二区三区不卡| 国产精品久久久久久精品电影小说| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 51国产日韩欧美| 日韩一本色道免费dvd| 免费在线观看成人毛片| 久久国产乱子免费精品| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 各种免费的搞黄视频| 人妻 亚洲 视频| 国产精品女同一区二区软件| 看十八女毛片水多多多| 最后的刺客免费高清国语| 边亲边吃奶的免费视频| 丰满饥渴人妻一区二区三| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 少妇精品久久久久久久| a级毛片免费高清观看在线播放| 欧美人与善性xxx| 99久久综合免费| 欧美精品一区二区大全| 久久精品久久久久久久性| 精品国产一区二区久久| 成人综合一区亚洲| 国产日韩一区二区三区精品不卡 | 丰满饥渴人妻一区二区三| 亚洲欧洲国产日韩| 国产色婷婷99| 国产日韩一区二区三区精品不卡 | 午夜影院在线不卡| 久久国产亚洲av麻豆专区| 蜜臀久久99精品久久宅男| 极品少妇高潮喷水抽搐| 天堂8中文在线网| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 老女人水多毛片| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 国产在线一区二区三区精|