• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    全氟辛酸(PFOA)對菲律賓蛤仔體內(nèi)酶活性的影響

    2017-10-13 04:03:00劉芝余翟毓秀姚琳江艷華李風(fēng)鈴王聯(lián)珠尚德榮楊元昊郭萌萌譚志軍
    生態(tài)毒理學(xué)報(bào) 2017年3期
    關(guān)鍵詞:蛤仔活性氧菲律賓

    劉芝余,翟毓秀,姚琳,江艷華,李風(fēng)鈴,*,王聯(lián)珠,尚德榮,楊元昊,郭萌萌,譚志軍

    1. 中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所,農(nóng)業(yè)部水產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測與評價(jià)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,青島 2660712. 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)無錫漁業(yè)學(xué)院,無錫2141823. 陜西省水產(chǎn)研究所,中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黃河水產(chǎn)研究所,西安 710086

    全氟辛酸(PFOA)對菲律賓蛤仔體內(nèi)酶活性的影響

    劉芝余1,2,翟毓秀1,姚琳1,江艷華1,李風(fēng)鈴1,*,王聯(lián)珠1,尚德榮1,楊元昊3,郭萌萌1,譚志軍1

    1. 中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所,農(nóng)業(yè)部水產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測與評價(jià)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,青島 2660712. 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)無錫漁業(yè)學(xué)院,無錫2141823. 陜西省水產(chǎn)研究所,中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黃河水產(chǎn)研究所,西安 710086

    采用半靜態(tài)毒性實(shí)驗(yàn)方法,將菲律賓蛤仔(Ruditapes philippinarum)分別暴露于0.2、2、20 μg·L-1的全氟辛酸(perfluorooctanoic acid, PFOA)中,在處理后第1、3、6、10、15、21天分別取樣,測定整體組織中超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)、過氧化物酶(POD)、谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶(GST)、7-乙氧基異吩噁唑酮脫乙基酶(EROD)活性和過氧化脂質(zhì)(LPO)含量。酶活性分析結(jié)果顯示:PFOA對菲律賓蛤仔組織SOD、CAT和POD活性均呈現(xiàn)先促進(jìn)后抑制的作用;低濃度組SOD活性在暴露第1天達(dá)到最高,顯著高于對照組(P < 0.01);中高濃度組SOD活性在暴露第6天達(dá)到最低;暴露1~15 d,低濃度組CAT活性均顯著高于對照組(P < 0.05);高濃度組CAT活性在暴露第6天得到顯著誘導(dǎo),其余時(shí)間基本處于抑制狀態(tài);中濃度組POD活性在暴露第3天即達(dá)到最高,高濃度組POD活性基本一直處于抑制狀態(tài);隨著PFOA暴露時(shí)間的延長,菲律賓蛤仔組織LPO含量呈現(xiàn)了先降低后升高的趨勢;各濃度組中EROD的活力都顯著被誘導(dǎo)(P < 0.01),與處理濃度呈正相關(guān);中高濃度組的GST活性在脅迫期間變化比較顯著,呈現(xiàn)誘導(dǎo)-抑制的變化規(guī)律。研究表明,PFOA暴露能夠引起菲律賓蛤仔組織抗氧化酶和生物轉(zhuǎn)化酶的變化,可以與其他敏感性指標(biāo)一起作為指示早期海洋PFOA污染的生物標(biāo)志物。

    PFOA;菲律賓蛤仔;毒性效應(yīng);抗氧化酶系;生物轉(zhuǎn)化酶

    Received13 January 2017accepted13 March 2017

    Abstract: A semi-static toxicity experiment under laboratory conditions was carried out to study the effects of different concentrations (low, 0.2 μg·L-1; medium, 2 μg·L-1; and high, 20 μg·L-1) perfluorooctanoic acid (PFOA) on Ruditapes philippinarum. After exposure for 1, 3, 6, 10, 15, 21 days, activities of superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), peroxidase (POD), glutathione-S-transferase (GST), 7-ethoxy-resorufin-o-deethylase (EROD) and lipid peroxide (LPO) content were measured. Under the effects of PFOA, the SOD, CAT, and POD activities decreased after an initial increase. After 1 day exposure to low concentration PFOA, the SOD activity reached the maximum, being significantly higher than the control (P < 0.01). The SOD activity in the medium and high concentration group reached the lowest at 6th day. After exposure to low concentration PFOA for 1-15 days, the CAT activity was significantly higher than the control. However, the CAT activity was basically inhibited when exposed to high concentration PFOA, except for being the highest on the 6th day. The POD activity in the medium concentration group reached the highest on the 3th day, and was basically inhibited in the high concentration group. As the extension of PFOA exposure time, the LPO content increased after an initial decrease. The EROD activity was significantly induced, and was positively correlated with the concentration of PFOA. The GST activity significantly changed when exposed to medium and high concentrations PFOA during the stress period, and changed by the rule of induction-inhibition. The results showed that PFOA exposure could trigger the changes of antioxidant enzymes and biotransformation enzymes in Ruditapes philippinarum, which could be considered as potential biomarkers to warning PFOA pollution in marine.

    Keywords: PFOA; Ruditapes philippinarum; toxic effects; antioxidant enzymes; biotransformation enzymes

    全氟辛酸(perfluorooctanoic acid, PFOA)是人工合成的化學(xué)品,具有獨(dú)特的疏水疏油性,被廣泛應(yīng)用于航空科技、運(yùn)輸、電子行業(yè),以及廚具等民生用品中[1-2]。目前,PFOA的生產(chǎn)和使用已經(jīng)超過50年,環(huán)境中存在大量的PFOA殘留。調(diào)查發(fā)現(xiàn),PFOA在大氣[3]、水體[4-5]、沉積物[6]、野生動物[7]和人體[8-10]中甚至偏遠(yuǎn)地區(qū)均可檢測到。毒理學(xué)研究顯示,PFOA對魚類、禽類、大鼠等動物具有胚胎發(fā)育、生殖、腎臟等多種毒性[11],另外可引起動物基因的異常表達(dá)、細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)損傷或破壞、酶活性降低等多種不良生物學(xué)效應(yīng),并易使機(jī)體感染疾病致使死亡率增加[12]。PFOA污染已引起越來越多科學(xué)家的關(guān)注,探索其致毒機(jī)理,評價(jià)其對生態(tài)環(huán)境及人體健康的影響[13]。

    研究表明,污染物的毒性作用最先體現(xiàn)在機(jī)體的細(xì)胞、生物化學(xué)和分子水平上的變化[14]。當(dāng)PFOA進(jìn)入機(jī)體內(nèi),引起體內(nèi)系統(tǒng)的代謝轉(zhuǎn)化,產(chǎn)生系列活性氧,如·O2-、·OH、H2O2等,造成機(jī)體氧化損傷[15]。脂質(zhì)過氧化物(lipid peroxidation, LPO)是機(jī)體膜脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的主要產(chǎn)物之一,其含量的高低可以直接反應(yīng)生物體內(nèi)脂質(zhì)過氧化的程度,也可間接反映生物體內(nèi)活性氧的累積程度和細(xì)胞的損傷程度[16]。生物體需要開啟防御系統(tǒng)來對抗自由基可能產(chǎn)生的細(xì)胞損傷,抗氧化酶系統(tǒng)及機(jī)體生物轉(zhuǎn)運(yùn)反應(yīng)的啟動,就可以認(rèn)為是生物體抵抗環(huán)境污染和抵御毒性損傷的反應(yīng)[17]。超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、過氧化氫酶(catalase, CAT)和過氧化物酶(peroxidase, POD)是生物體抗氧化酶體系的重要組成部分,在活性氧自由基的清除中發(fā)揮重要作用。SOD能歧化氧自由基變成H2O2,CAT和POD催化分解H2O2為H2O和O2。相關(guān)研究指出,PFOA可以引起生物體內(nèi)SOD和CAT等抗氧化酶活性顯著變化,產(chǎn)生及一系列抗氧化反應(yīng),從而導(dǎo)致氧化損傷[18-20]。當(dāng)活性氧平衡遭到破壞時(shí),機(jī)體通過相Ⅰ、相Ⅱ的生物轉(zhuǎn)運(yùn)反應(yīng)來緩解氧化壓力,參與相Ⅰ、相Ⅱ反應(yīng)的主要酶系為7-乙氧基異吩噁唑酮脫乙基酶(7-ethoxy-resorufin-o-deethylase, EROD)和谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶(glutathione S-transferase, GST),可以將它們作為生物標(biāo)志物來指示特定污染物的污染狀況[21-22]。

    菲律賓蛤仔(Ruditapes philippinarum)是我國沿海地區(qū)重要的灘涂貝類,分布極廣,對污染物具有高蓄積性、高敏感性等特點(diǎn),被廣泛應(yīng)用于污染物檢測和環(huán)境預(yù)警研究中[23-25]。本實(shí)驗(yàn)通過海水直接暴露方式,觀察不同時(shí)間點(diǎn)菲律賓蛤仔的抗氧化酶系統(tǒng)和生物轉(zhuǎn)化酶活性的變化,分析探討PFOA脅迫過程中菲律賓蛤仔SOD、CAT、POD、EROD、GST和LPO含量等一系列生理生化指標(biāo),為PFOA在海洋中污染監(jiān)測和環(huán)境毒理學(xué)研究提供理論依據(jù)。

    1 材料與方法(Materials and methods)

    1.1 儀器與試劑

    儀器:可見分光光度計(jì)(V1800,尤尼柯(上海)儀器有限公司),酶標(biāo)儀(iMark 168-1130,美國Bio-Rad公司),臺式高速冷凍離心機(jī)(Neofuge 15R,上海力康生物醫(yī)療科技控股有限公司),電熱恒溫水浴鍋(HWS-26,上海圣科儀器設(shè)備有限公司),勻漿機(jī)(T18,德國IKA集團(tuán))。

    試劑:全氟辛酸(C8HF15O2),純度為AR級(Sigma公司,美國)。SOD、CAT、GST、LPO、EROD、POD酶活力測試盒和蛋白質(zhì)試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。其他試劑均為分析純,購自中國國藥有限公司。

    1.2 實(shí)驗(yàn)材料

    成體蛤仔殼長(3.5±0.14) cm,殼寬(2.0±0.22) cm,采集于山東省青島市水產(chǎn)品批發(fā)市場,實(shí)驗(yàn)開始前于實(shí)驗(yàn)室馴養(yǎng)1周。實(shí)驗(yàn)中所用到的海水均采集于遠(yuǎn)離工業(yè)和生活區(qū)的近海海域,屬于Ⅰ類海水。

    1.3 實(shí)驗(yàn)方法1.3.1 曝毒實(shí)驗(yàn)

    根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果設(shè)計(jì)PFOA對菲律賓蛤仔的暴露濃度,設(shè)置3個(gè)濃度組:0.2、2、20 μg·L-1,每個(gè)濃度設(shè)置3個(gè)平行組,曝毒水體為3 L。每個(gè)實(shí)驗(yàn)組隨機(jī)投放40只菲律賓蛤仔。飼養(yǎng)期間溫度保持在20~25 ℃,鹽度25‰~30‰,pH 7.7~8.5。連續(xù)充氧,24 h更換1次實(shí)驗(yàn)海水,每日正常投放綠藻粉,投放量占菲律賓蛤仔體重的0.6‰。

    1.3.2 樣品的制備及測定

    實(shí)驗(yàn)分別于第1、3、6、10、15、21天取樣,每組取8個(gè)菲律賓蛤仔整只研磨,稱取這8個(gè)個(gè)體的5 g組織樣,加入預(yù)冷的貝類生理鹽水[26](0.02 mol·L-1HEPES緩沖液,0.4 mol·L-1NaCl,0.1 mol·L-1MgSO4,0.01 mol·L-1KCl,0.01 mol·L-1CaCl2,pH 7.4),勻漿機(jī)勻漿,4 ℃下2 500 r·min-1離心10 min后立即取上清液,凍存于-80 ℃,留待蛋白質(zhì)含量和SOD、CAT、POD等一些酶活力測定。勻漿比例為組織質(zhì)量(g)∶貝類生理鹽水體積(mL)=1∶9。酶的活性測定均按照試劑盒說明書進(jìn)行,蛋白質(zhì)含量采用考馬斯亮藍(lán)比色法測定。

    1.4 數(shù)據(jù)處理

    實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行處理,進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差(X ± SD)表示。采用SPSS 22.0軟件中的單因素方差分析法(One-Way ANOVA)進(jìn)行差異分析,用Turkey法比較組間數(shù)據(jù)的差異。各濃度組與空白對照組差異顯著(P < 0.05)表示為a,差異顯著(P < 0.01)表示為b,未標(biāo)注則表示與空白對照組無顯著性差異(P > 0.05)。

    抑制率和誘導(dǎo)率的計(jì)算公式為:抑制率(%) = (1 - 濃度組酶活性/對照組酶活性)×100%,誘導(dǎo)率(%) =(濃度組酶活性/對照組酶活性)×100%。

    表1 方差齊性檢驗(yàn)Table 1 Homogeneity test of variances

    注:SOD, CAT, POD, LPO, EROD, GST表示超氧化物歧化酶、過氧化氫酶、過氧化物酶、脂質(zhì)過氧化物、7-乙氧基異吩噁唑酮脫乙基酶、谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶。

    Note: SOD, CAT, POD, LPO, EROD, GST stand for superoxide dismutase, catalase, peroxidase, lipid peroxidation, 7-ethoxy-resorufin-o-deethylase, glutathione S-transferase.

    2 結(jié)果(Results)

    2.1 方差齊性分析

    表1為實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)方差齊性分析結(jié)果。P > 0.05說明方差相等,P < 0.05說明為非等方差。方差齊性檢驗(yàn)結(jié)果表明,數(shù)據(jù)方差大部分為等方差,方差齊性較好。

    2.2 PFOA對菲律賓蛤仔組織SOD的影響

    PFOA脅迫下菲律賓蛤仔SOD變化見圖1。在脅迫第1天,0.2和2 μg·L-1濃度組SOD酶活即被誘導(dǎo),且與對照組相比,具有顯著差異(P < 0.01),誘導(dǎo)率分別為128%和115.22%;隨著脅迫時(shí)間的延長,在第6天時(shí),各個(gè)處理組的SOD活性迅速下降,被顯著抑制(P < 0.01),抑制率分別為24.38%、37.94%和33.69%;第10天,除20 μg·L-1濃度組被顯著誘導(dǎo)外(P < 0.01),其余濃度組依然處于抑制狀態(tài);第15天,與對照組相比,除0.2 μg·L-1濃度組SOD酶活性被顯著抑制外,其余濃度組均顯著提高;而0.2 μg·L-1濃度組則在第21天被再次誘導(dǎo),誘導(dǎo)率為113.6%,其余濃度組卻被顯著抑制。

    圖1 全氟辛酸(PFOA)對菲律賓蛤仔SOD活性的影響注:a 顯著差異(P < 0. 05),b 顯著差異(P < 0. 01),下同。Fig. 1 Effects of perfluorooctanoic acid (PFOA) on the SOD activity of R. philippinarumNote: a. significant difference (P < 0. 05); b. significant difference (P < 0. 01). The same case in the following figures.

    2.3 PFOA對菲律賓蛤仔組織CAT的影響

    PFOA脅迫下菲律賓蛤仔CAT變化見圖2。對照組菲律賓蛤仔抗氧化酶活性在所檢測時(shí)間范圍內(nèi)未出現(xiàn)顯著變化(P > 0.05)。CAT活性在PFOA作用下的響應(yīng)特征較為敏感,在0.2和2 μg·L-1PFOA作用下,菲律賓蛤仔CAT活性在脅迫初期始終處于誘導(dǎo)狀態(tài)(P < 0.01),且隨著脅迫天數(shù)的增加,誘導(dǎo)得越明顯。0.2 μg·L-1濃度組的CAT活性在第15天達(dá)到頂峰后,CAT活力開始顯著降低,至21 d時(shí)活力明顯低于對照組;2 μg·L-1濃度組的CAT活性至第6天達(dá)到活力最高峰后逐漸降低,在第21天時(shí)活力又顯著高于對照組。20 μg·L-1濃度組的CAT活性在脅迫期間基本處于抑制狀態(tài),僅在第6天活性得到誘導(dǎo),與脅迫時(shí)間之間并無明顯對應(yīng)關(guān)系。

    2.4 PFOA對菲律賓蛤仔組織POD的影響

    PFOA脅迫下菲律賓蛤仔組織POD變化見圖3。0.2和2 μg·L-1濃度組在脅迫初期一直處于顯著誘導(dǎo)狀態(tài)(P < 0.01),但0.2 μg·L-1濃度組在第6天時(shí)活性開始下降,但仍處于誘導(dǎo)狀態(tài),至第15天后活性又開始上升;而2 μg·L-1濃度組在第6天時(shí)活性得到顯著抑制(P < 0.01),在第15天活性得到再次誘導(dǎo)后,21 d時(shí)重新變?yōu)橐种茽顟B(tài);20 μg·L-1濃度組與其他2組相比,POD活力抑制得更為顯著,基本一直處于抑制狀態(tài)。

    圖2 PFOA對菲律賓蛤仔CAT活性的影響Fig. 2 Effects of PFOA on the CAT activity of R. philippinarum

    圖3 PFOA對菲律賓蛤仔POD活性的影響Fig. 3 Effects of PFOA on the POD activity of R. philippinarum

    2.5 PFOA對菲律賓蛤仔組織LPO的影響

    PFOA脅迫下菲律賓蛤仔組織LPO含量變化見圖4。與對照組相比,各個(gè)濃度組的LPO含量在前15 d一直處于降低狀態(tài),在第10天時(shí)最低;0.2 μg·L-1濃度組的LPO含量在第15天時(shí)開始上升,但仍明顯低于對照組,直至第21天時(shí)LPO含量明顯升高;而2和20 μg·L-1濃度組的LPO含量在第15天顯著增加,與對照組相比差異顯著(P < 0.01);第21天時(shí),20 μg·L-1濃度組的LPO含量與對照組無顯著差異。

    2.6 PFOA對菲律賓蛤仔組織EROD的影響

    PFOA脅迫下菲律賓蛤仔組織EROD變化見圖5。在整個(gè)PFOA暴露階段,不同濃度組EROD活性均顯著高于對照組。EROD活力在整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間與濃度組的暴露濃度成正比,濃度越高,EROD的活力越高。2、20 μg·L-1濃度組的EROD活力分別從第10天開始緩慢降低,但與對照組相比仍然處于誘導(dǎo)狀態(tài)。

    圖4 PFOA對菲律賓蛤仔LPO含量的影響Fig. 4 Effects of PFOA on the LPO content of R. philippinarum

    圖5 PFOA對菲律賓蛤仔EROD活性的影響Fig. 5 Effects of PFOA on the EROD activity in the tissues of R. philippinarum

    2.7 PFOA對菲律賓蛤仔組織GST的影響

    PFOA脅迫下菲律賓蛤仔組織GST變化見圖6。與對照組相比,0.2 μg·L-1濃度組在脅迫前期GST的活性變化不大,直至第15天時(shí)活性才被顯著誘導(dǎo),后又開始下降被抑制;2和20 μg·L-1濃度組的GST活性在脅迫初期被顯著誘導(dǎo)(P < 0.01),隨著脅迫時(shí)間的延長,在第6天時(shí)活性開始下降,至第15天時(shí)跌至谷底。

    圖6 PFOA對菲律賓蛤仔GST酶活性的影響Fig. 6 Effects of PFOA on the GST activity of R. philippinarum

    3 討論(Discussion)

    3.1 PFOA脅迫下菲律賓蛤仔體內(nèi)抗氧化酶活性及LPO含量的變化

    生物體通過不斷產(chǎn)生和清除自由基來保持動態(tài)平衡,其中SOD、CAT和POD是典型的清除氧自由基的抗氧化酶,LPO是脂質(zhì)自由基的產(chǎn)物之一,它們已被廣泛用于指示生物遭受污損的程度。本次研究發(fā)現(xiàn),菲律賓蛤仔在PFOA脅迫后,各指標(biāo)與對照組相比均有受誘導(dǎo)或抑制的顯著變化。SOD通過催化·O2-產(chǎn)生歧化反應(yīng)生成H2O2,是唯一一種以自由基為底物的抗氧化酶,它的活性決定了清除·O2-的能力。有研究表明,生物體的SOD活性往往會在受到輕度污染或者短時(shí)間脅迫時(shí)升高;而受到重度污染或者長時(shí)間脅迫時(shí)又會降低,致使活性氧自由基大量積累在生物體內(nèi),使其受到氧化損傷[27],Stebbing[28]把這種現(xiàn)象定義為生物的“毒物興奮效應(yīng)”。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),在0.2 μg·L-1PFOA濃度組脅迫下,SOD活性首先被顯著誘導(dǎo),隨著脅迫時(shí)間的延長,所有濃度組的SOD活性顯著被抑制。王賀威等[29]研究了PFOS脅迫對翡翠貽貝抗氧化酶的影響,結(jié)果顯示,PFOS能夠在短時(shí)間內(nèi)誘導(dǎo)抗氧化酶的活性,但隨著脅迫時(shí)間的推移,抗氧化酶的活性表現(xiàn)出明顯的被抑制趨勢;于慶云等[30]研究了鎘和鉛對菲律賓蛤仔脂質(zhì)過氧化及抗氧化酶活性的影響,也證實(shí)了以上觀點(diǎn)。同時(shí)有研究表明,SOD活性在脅迫初期的提高可能是一種對外界環(huán)境的應(yīng)激反應(yīng),是為了平衡活性氧的水平從而更好地適應(yīng)環(huán)境[31]。不過,20 μg·L-1PFOA濃度組在脅迫初期時(shí)被顯著抑制,到第10天時(shí)活性顯著升高,這表明了活性氧物質(zhì)對機(jī)體造成的損傷尚未對細(xì)胞造成嚴(yán)重傷害,而脅迫15 d之后SOD活性再次下降,表明未被及時(shí)清除的活性氧物種對抗氧化酶系統(tǒng)已經(jīng)造成了破壞,這與楊濤等[15]在研究苯并(b)熒蒽對翡翠貽貝內(nèi)臟團(tuán)抗氧化酶活性及脂質(zhì)過氧化物含量脅迫時(shí)所得的結(jié)果相似。

    POD也是一種抗氧化酶,廣泛分布于生物體內(nèi)的過氧物酶體中,是一類含鐵的金屬酶類,通過降解污染物在代謝等過程中形成的過氧化物(如酚、胺等)來減輕其毒性,防止膜脂過氧化或脫酯反應(yīng)被活性氧自由基啟動,保護(hù)生物體細(xì)胞生物膜[36]。由于POD和CAT具有相同的輔基鐵卟啉及相似的催化機(jī)制,因此也可使H2O2分解,與CAT、SOD共同組成了生物體內(nèi)的活性氧防御系統(tǒng),可以清除超氧自由基、H2O2和過氧化物,以及阻止或減少·OH的形成[37]。已有研究表明,POD活性維持在一定的水平,可以將機(jī)體內(nèi)產(chǎn)生的過多自由基去除,維持機(jī)體的自由基處于一個(gè)平衡的狀態(tài),防止自由基對機(jī)體產(chǎn)生傷害,維持一個(gè)正常的生理活動[38-40]。在本研究中,POD與CAT在脅迫前期活力變化幾近相同,這可能因?yàn)镻OD和CAT具有相似的作用機(jī)理;但在脅迫6 d后POD與CAT的活性變化出現(xiàn)差異,2 μg·L-1PFOA濃度組的POD活性一直處于抑制狀態(tài),在第15天又得到顯著抑制,而CAT的活性卻由誘導(dǎo)變?yōu)橐种茽顟B(tài)。究其原因可能是它們催化H2O2的方式不同,POD通過催化H2O2分解其他底物來消耗H2O2,而CAT是直接催化分解H2O2[41],因此可以看出經(jīng)過長時(shí)間的PFOA脅迫后,中、高濃度組的POD活性遠(yuǎn)低于低濃度組。孫云之等[19]研究了PFOS對無齒蚌鰓的保護(hù)酶系的影響,發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組的SOD、CAT活性明顯高于對照組,且隨著暴露時(shí)間的延長逐漸升高,而POD的活性變化則比較復(fù)雜,這也可以證明POD雖然與CAT具有相似的作用機(jī)理,但是作用方式未必相同。

    一旦生物體內(nèi)不斷產(chǎn)生和蓄積的自由基超過了機(jī)體可以清除的范圍,則會產(chǎn)生氧化壓力[42-44],因此過多的自由基攻擊生物膜生成LPO,它可以通過改變生物膜的結(jié)構(gòu),減少細(xì)胞膜的流動性,細(xì)胞膜由此產(chǎn)生脂質(zhì)過氧化損傷。因此,不僅機(jī)體脂質(zhì)過氧化程度可用LPO的含量判定,同時(shí)自由基的產(chǎn)生、生物活性及其抗氧化能力的強(qiáng)弱也可間接由LPO反映[45]。本研究中,在短時(shí)間或低濃度PFOA脅迫下,SOD、CAT和POD活性均表現(xiàn)為升高,LPO含量顯著減少,說明在該條件下,·O2-能有效被SOD歧化,同時(shí)H2O2被CAT和POD有效分解,這3種酶協(xié)同作用,不僅消除了活性氧物種,同時(shí)使脂質(zhì)過氧化作用明顯降低[19]。隨著時(shí)間的推移,抗氧化酶活性伴隨著生物受到高濃度或長時(shí)間污染物的脅迫時(shí),通常會降低,20 μg·L-1濃度組的SOD活性在第6天達(dá)到最低點(diǎn),CAT活性在脅迫期間基本處于抑制狀態(tài),POD的活力也在逐漸遞減,在第21天降到最低。這說明PFOA的積累導(dǎo)致了一些組織的氧化損傷,未被及時(shí)清除的活性氧物種對抗氧化酶系統(tǒng)造成了破壞,造成細(xì)胞內(nèi)膜系統(tǒng)的破裂,活性氧含量大量積聚,此時(shí)各濃度組LPO含量均達(dá)到峰值,生物體處在較嚴(yán)重的中毒狀態(tài)。楊濤等[15]研究了苯并(b)熒蒽對翡翠貽貝內(nèi)臟團(tuán)抗氧化酶活性及脂質(zhì)過氧化物含量的變化,結(jié)果顯示,高濃度組的苯并(b)熒蒽實(shí)驗(yàn)組LPO含量在暴露15 d后顯著升高,與本研究結(jié)果基本一致,即由于抗氧化酶的活性被PFOA抑制,因此引起生物體脂質(zhì)過氧化,造成了機(jī)體組織和細(xì)胞的氧化損傷[44]。

    3.2 PFOA脅迫下菲律賓蛤仔體內(nèi)生物轉(zhuǎn)化酶活性的變化

    EROD是存在于細(xì)胞膜上依賴細(xì)胞色素P450的重要生物轉(zhuǎn)化酶,它的活性與污染物的毒性效應(yīng)呈顯著正相關(guān),可以作為監(jiān)測一些有機(jī)污染物的指標(biāo),以探討污染物對機(jī)體的損害程度[46]。有研究表明,在一些有機(jī)污染物的影響下,雙殼貝類、對蝦和魚類通過大幅度的提高其自身組織的EROD活性進(jìn)行代謝解毒[34-35,38-39]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出,與對照組相比,其他各濃度組的EROD活力都被明顯激活,并且激活程度和PFOA的濃度呈正比關(guān)系,與先前的研究相似。這表明菲律賓蛤仔在PFOA的脅迫下受到較為顯著的影響,應(yīng)激反應(yīng)比較明顯,同時(shí)也說明機(jī)體通過提升EROD的活性來應(yīng)對污染物帶來的影響。而中高濃度組的EROD活力在脅迫后期略有下降,這可能是由于PFOA的積累導(dǎo)致生物體產(chǎn)生耐受效應(yīng),使EROD的活性提升有限。

    GST是II相代謝酶家族的一員,當(dāng)污染物進(jìn)入生物體內(nèi),經(jīng)過I相代謝形成中間產(chǎn)物,同時(shí)大量的活性氧物質(zhì)由此產(chǎn)生[17],而GST可催化GSH與這些活性氧物質(zhì)結(jié)合,使之變成親水性的物質(zhì)排出機(jī)體外,從而達(dá)到解毒的效果,因此在污染物的影響下也會呈現(xiàn)激活的現(xiàn)象[47-49]。但是也有研究發(fā)現(xiàn),GST的活性會隨著污染物濃度的升高或者種類的不同呈現(xiàn)被抑制的情況[50-51],其解毒功能也會下降。本實(shí)驗(yàn)中,2和20 μg·L-1PFOA濃度組GST活性出現(xiàn)明顯激活現(xiàn)象,說明在PFOA脅迫下,機(jī)體短期可以提升GST的活性來進(jìn)行防御性解毒,以代謝相Ⅰ過程中產(chǎn)生的一級代謝物,而隨著脅迫時(shí)間的延長,GST的活性逐漸被抑制。這可能是由于生物體無法及時(shí)代謝在組織內(nèi)不斷積累的代謝物,從而導(dǎo)致GST酶受到傷害,機(jī)體則處于致毒損傷狀態(tài),有研究認(rèn)為這也與污染物的代謝受到其他抗氧化系統(tǒng)的酶活性變化的影響有一定關(guān)系[52-53]。

    本實(shí)驗(yàn)中菲律賓蛤仔組織抗氧化酶和生物轉(zhuǎn)化酶的活性發(fā)生變化,說明菲律賓蛤仔對PFOA不同脅迫階段產(chǎn)生響應(yīng)。隨著PFOA濃度的升高,菲律賓蛤仔組織的SOD、CAT、POD活性均呈現(xiàn)先促后抑的特點(diǎn),LPO含量在脅迫期間先減少再增加,而EROD和GST活性則逐漸升高或降低,PFOA對菲律賓蛤仔已顯示出較明顯的毒性效應(yīng),表明其對PFOA具有高敏感性,在濃度為0.2 μg·L-1時(shí)機(jī)體即可受到顯著的損傷。然而酶活性的變化受到多種因素制約,是一個(gè)動態(tài)的過程,這些因素可以是污染物種類和濃度,也可以是實(shí)驗(yàn)生物、環(huán)境條件等;LPO含量也可能隨著時(shí)間升高[29]。因此,在考慮利用生理生化指標(biāo)監(jiān)測環(huán)境中的PFOA時(shí)需要考慮多方面的條件和因素,不能僅依據(jù)某一種酶的活性,而是應(yīng)該將幾種酶甚至其他的生物標(biāo)志物結(jié)合起來分析,篩選出最合理最具指示性的生物和指標(biāo)[54]。本研究結(jié)果顯示,SOD、CAT、POD、EROD、GST活性和LPO含量非常敏感,雖然它們的變化規(guī)律并不一致,但均可在一定程度上反映出PFOA帶來的氧化脅迫的影響,因此可以將抗氧化酶系統(tǒng)(SOD、CAT、POD)與生物轉(zhuǎn)化酶(EROD、GST)、LPO含量結(jié)合起來一起指示早期海洋PFOA污染。

    [1] Prevedouros K, Cousins I T, Buck R C, et al. Sources, fate and transport of perfluorocarboxylates [J]. Environmental Science & Technology, 2006, 40(1): 32-44

    [2] Paul A G, Jones K C, Sweetman A J. A first global production, emission, and environmental inventory for perfluorooctane sulfonate [J]. Environmental Science & Technology, 2009, 43(2): 386-392

    [3] Shoeib M, Harner T,Webster G M, et al. Indoor sources of poly- and perfluorinated compounds (PFCS) in Vancouver, Canada: Implications for human exposure [J]. Environmental Science & Technology, 2011, 45(19): 7999-8005

    [4] Boulanger B, Vargo J, Schnoor J L, et al. Detection of perfluorooctane surfactants in great lakes water [J]. Environmental Science & Technology, 2004, 38(15): 4064-4070

    [5] Post G B, Louis J B, Lippincott R L, et al. Occurrence of perfluorinated compounds in raw water from New Jersey public drinking water systems [J]. Environmental Science & Technology, 2013, 47(23): 13266-13275

    [6] Lam N H, Cho C R, Lee J S, et al. Perfluorinated alkyl substances in water, sediment, plankton and fish from Korean rivers and lakes: A nationwide survey [J]. Science of the Total Environment, 2014, 491-492: 154-162

    [7] Route W T, Russell R E, Lindstrom A B, et al. Spatial and temporal patterns in concentrations of perfluorinated compounds in bald eagle nestlings in the upper Midwestern United States [J]. Environmental Science & Technology, 2014, 48(12): 6653-6560

    [8] Zhou Z, Shi Y, Vestergren R, et al. Highly elevated serum concentrations of perfluoroalkyl substances in fishery employees from Tangxun Lake, China [J]. Environmental Science & Technology, 2014, 48(7): 3864-3874

    [9] Zhang Y, Beesoon S, Zhu L, et al. Biomonitoring of perfluoroalkyl acids in human urine and estimates of biological half-life [J]. Environmental Science & Technology, 2013, 47(18): 10619-10627

    [10] Olsen G W, Burris J M, Ehresman D J, et al. Half-life of serum elimination of perfluorooctanesulfonate, perfluorohexanesulfonate, and perfluorooctanoate in retired fluorochemical production workers [J]. Environmental Health Perspectives, 2007, 115(9): 1298-1305

    [11] 胡存麗, 仲來福. 全氟辛烷磺酸和全氟辛酸毒理學(xué)研究進(jìn)展[J]. 中國工業(yè)醫(yī)學(xué)雜志, 2006, 19(6): 354-358

    Hu C L, Zhong L F. Progress of toxicological study on PFOS and PFOA [J]. Chinese Journal of Industrial Medicine, 2006, 19(6): 354-358 (in Chinese)

    [12] 周啟星, 胡獻(xiàn)剛. PFOS/PFOA環(huán)境污染行為與毒性效應(yīng)及機(jī)理研究進(jìn)展[J]. 環(huán)境科學(xué), 2007, 28(10): 2153-2162

    Zhou Q X, Hu X G. Researching progresses in environmental pollution behavior, toxic effects and mechanisms of PFOS/PFOA [J]. Environmental Science, 2007, 28(10): 2153-2162 (in Chinese)

    [13] 金一和, 湯先偉, 曹秀娟, 等. 全球性全氟辛烷磺酰基化合物環(huán)境污染及其生物效應(yīng)[J]. 自然雜志, 2002, 24(6): 344-348

    Jin Y H, Tang X W, Cao X J, et al. Global environmental pollution and biological effects of perfluorooctane sulfonate [J]. Chinese Journal of Nature, 2002, 24(6): 344-348 (in Chinese)

    [14] 肖國強(qiáng), 張炯明, 邵艷卿, 等. 苯并芘B[a]P對泥蚶組織EROD、GST酶活力和MDA含量的影響[J]. 海洋科學(xué), 2013, 37(8): 28-34

    Xiao G Q, Zhang J M, Shao Y Q, et al. Effect of benzo[a]pyrene on two enzymes activity and lipid peroxidation MAD in Tegillarca granosa [J]. Marine Sciences, 2013, 37(8): 28-34 (in Chinese)

    [15] 楊濤, 陳海剛, 蔡文貴, 等. 翡翠貽貝內(nèi)臟團(tuán)抗氧化酶活性及脂質(zhì)過氧化物含量對苯并(b)熒蒽脅迫的生物響應(yīng)研究[J]. 生態(tài)毒理學(xué)報(bào), 2011, 6(5): 539-545

    Yang T, Chen H G, Cai W G, et al. Response of antioxidant enzymes activities and lipid peroxidation levels in visceral mass of green-lipped mussel (Perna viridis) to benzo[b]fluoranthene stress [J]. Asian Journal of Ecotoxicology, 2011, 6(5): 539-545 (in Chinese)

    [16] 郭勤單, 王有基, 呂為群. 溫度和鹽度對褐牙鲆幼魚滲透生理及抗氧化水平的影響[J]. 水生生物學(xué)報(bào), 2014, 38(1): 58-67

    Guo Q D, Wang Y G, Lv W Q. Combined effects of temperature and salinity on the physiological osmotic induction and antioxidant responses in the juvenile Japanse flounder (Paralichthys olivaceus) [J]. Acta Hydrobiologica Sinica, 2014, 38(1): 58-67 (in Chinese)

    [17] Winston G W, Giulio R T D. Prooxidant and antioxidant mechanisms in aquatic organisms [J]. Aquatic Toxicology, 1991, 19(2): 137-161

    [18] 于紅瑤, 劉利, 劉薇, 等. PFOS致大鼠肝臟氧化損傷及對脂褐質(zhì)含量影響[J]. 中國公共衛(wèi)生, 2009, 25(5): 578-579

    Yu H Y, Liu L, Liu W, et al. Oxidative damage of perfluorooctane sulfonate on lipofuscin levels in rat livers [J]. Chinese Journal of Public Health, 2009, 25(5): 578-579 (in Chinese)

    [19] 孫云之, 劉纏民. 全氟辛烷磺酰基化合物對無齒蚌鰓保護(hù)酶系的影響[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué), 2010, 38(21): 11150-11151

    SunY Z, Liu C M. Effect of perfloorooctane sulfonate on the protective enzyme activities in the gill of Anodonta woodiana [J]. Journal of Anhui Agricultural Sciences, 2010, 38(21): 11150-11151 (in Chinese)

    [20] 方雪梅, 王建設(shè), 戴家銀. 全氟類有機(jī)污染物的污染狀況及其生態(tài)毒理研究進(jìn)展[J]. 地球科學(xué)進(jìn)展, 2010, 25(5): 543-551

    Fang X M, Wang J S, Dai J Y. The progress in environmental distributions and toxicological effects of perfluoroalkyl acids [J]. Advance in Earth Science, 2010, 25(5): 543-551 (in Chinese)

    [21] Beyer J, Sandvik M, Hylland K, et al. Contaminant accumulation and biomarker responses in flounder (Platichthys flesus L.) and Atlantic cod (Gadus morhua L.) exposed by caging to polluted sediments in S?rfjorden, Norway [J]. Aquatic Toxicology, 1996, 36(1-2): 75-98

    [22] Kopecka-Pilarczyk J, Correia A D. Biochemical response in gilthead seabream (Sparus aurata) to in vivo exposure to a mix of selected PAHs [J]. Journal of Experimental Marine Biology & Ecology, 2009, 72(4): 1296-1302

    [23] 王淑紅, 王新紅, 陳榮, 等. 熒蒽、菲、芘對菲律賓蛤仔(Ruditapes philippinarum)超氧化物歧化酶的影響[J]. 廈門大學(xué)學(xué)報(bào): 自然科學(xué)版, 2000, 39(4): 504-508

    Wang S H, Wang X H, Chen R, et al. The Effects of fluoranthene, phenaphthene and pyrene on superoxide dismutase (SOD) of Ruditapes philippinarum [J]. Journal of Xiamen University: Natural Science, 2000, 39(4): 504-508 (in Chinese)

    [24] 胡瑩瑩, 李愛, 葉賽, 等. 氯霉素對菲律賓蛤仔的急性和亞急性毒性作用[J]. 中國環(huán)境科學(xué), 2006, 26(z1): 125-128

    Hu Y Y, Li A, Ye S, et al. The acute and subacute toxicity action of chloramphenicol on Ruditapes philippinarum [J]. China Environmental Science, 2006, 26(z1): 125-128 (in Chinese)

    [25] 王琳, 潘魯青, 許超群, 等. Cd2+-B[α]P復(fù)合污染對菲律賓蛤仔急性毒性和解毒代謝酶活力的影響[J]. 水生生物學(xué)報(bào), 2011, 35(1): 37-44

    Wang L, Pan L Q, Xu C Q, et al. Combination effects of cadmium and benzo[α]pyrene on acute toxicity and metabolic enzymes activities of Ruditapes philippinarum [J]. Acta Hydrobiologica Sinica, 2011, 35(1): 37-44 (in Chinese)

    [26] Hannam M L, Bamber S D, Moody J A, et al. Immune function in the Arctic Scallop, Chlamys islandica, following dispersed oil exposure [J]. Aquatic Toxicology, 2009, 92(3): 187-194

    [27] 唐學(xué)璽, 張培玉. 蒽對黑鮶超氧化物歧化酶活性的影響[J]. 水產(chǎn)學(xué)報(bào), 2000, 24(3): 217-220

    Tang X X, Zhang P Y. Effects of anthracene on activity of superoxide dismutase in Sebastodes fuscescens [J]. Journal of Fisheries of China, 2000, 24(3): 217-220 (in Chinese)

    [28] Stebbing A R. Hormesis--The stimulation of growth by low levels of inhibitors [J]. Science of the Total Environment, 1982, 22(3): 213-234

    [29] 王賀威, 馬勝偉, 張喆, 等. 全氟辛烷磺酸鹽(PFOS)脅迫對翡翠貽貝抗氧化酶的影響[J]. 生態(tài)毒理學(xué)報(bào), 2012, 7(5): 508-516

    Wang H W, Ma S W, Zhang Z, et al. Effects of perfluorooctanesulfonate (PFOS) exposure on antioxidant enzymes of Perna viridis [J]. Asian Journal of Ecotoxicology, 2012, 7(5): 508-516 (in Chinese)

    [30] 于慶云, 王悠, 徐彥, 等. 鎘和鉛對菲律賓蛤仔脂質(zhì)過氧化及抗氧化酶活性的影響[J]. 生態(tài)毒理學(xué)報(bào), 2013, 8(4): 504-512

    Yu Q Y, Wang Y, Xu Y, et al. Effects of cadmium and lead on the lipid peroxidation and levels of antioxidant enzymes in Ruditapes philippinarum [J]. Asian Journal of Ecotoxicology, 2013, 8(4): 504-512 (in Chinese)

    [31] 秦潔芳, 陳海剛, 蔡文貴, 等. 鄰苯二甲酸二乙基己酯(DEHP)脅迫下紅鰭笛鯛不同組織生化指標(biāo)的變化[J]. 農(nóng)業(yè)環(huán)境科學(xué)學(xué)報(bào), 2011, 30(3): 409-415

    Qin J F, Chen H G, Cai W G, et al. The change of biochemical indexes in different tissue of crimson snapper (Lutjanus erythropterus) exposed to di-(2-ethylhexyl) phthalate (DEHP) [J]. Journal of Agro-Environment Science, 2011, 30(3): 409-415 (in Chinese)

    [32] Porte C, Solé M, Albaigés J, et al. Responses of mixed-function oxygenase and antioxidant enzyme system of Mytilus sp. to organic pollution [J]. Comparative Biochemistry & Physiology Part C: Comparative Pharmacology & Toxicology, 1991, 100(1-2): 183-186

    [33] Richardson B J, Mak E, De Luca-Abbott S B, et al. Antioxidant responses to polycyclic aromatic hydrocarbons and organochlorine pesticides in green-lipped mussels (Perna viridis): Do mussels "integrate" biomarker responses? [J]. Marine Pollution Bulletin, 2008, 57(6-12): 503-514

    [34] Habig W H, Pabst M J, Jakoby W B. Glutathione S-transferases. The first enzymatic step in mercapturic acid formation [J]. Journal of Biological Chemistry, 1974, 249(22): 7130-7139

    [35] Bradford M M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding [J]. Analytical Biochemistry, 1976, 72(1-2): 248-254

    [36] 賈守菊, 應(yīng)雪萍, 陳艷樂, 等. 中華絨蟹不同發(fā)育階段腹肢粘液腺同工酶的比較[J]. 海洋湖沼通報(bào), 2004(4): 52-60

    Jia S J, Ying X P, Chen Y L, et al. A study on isozymes changes during veriant development periods of Eriocheir sinensis [J]. Transaction of Oceanology & Limnology, 2004(4): 52-60 (in Chinese)

    [37] 張喆, 馬勝偉, 王賀威. 十溴聯(lián)苯醚(BDE-209)對菲律賓蛤仔外套膜抗氧化酶活性的影響[J]. 生態(tài)學(xué)雜志, 2013, 32(1): 122-128

    Zhang Z, Ma S W, Wang H W. Effects of decabromodiphenyl ether (BDE-209) on the antioxidant enzyme activities of Lutjanus argentimaculatus mantle membrane [J]. Chinese Journal of Ecology, 2013, 32(1): 122-128 (in Chinese)

    [38] Lewis D F, Ioannides C, Parke D V. Cytochromes P450 and species differences in xenobiotic metabolism and activation of carcinogen [J]. Environmental Health Perspectives, 1998, 106(10): 633-641

    [39] Shirani M, Mirvaghefi A, Farahmand H, et al. Biomarker responses in mudskipper (Periophthalmus waltoni) from the coastal areas of the Persian Gulf with oil pollution [J]. Environmental Toxicology and Pharmacology, 2012, 34(3): 705-713

    [40] 孫虎山, 李光友. 櫛孔扇貝血淋巴中超氧化物歧化酶和過氧化氫酶活性及其性質(zhì)的研究[J]. 海洋與湖沼, 2000, 31(3): 259-265

    Sun H S, Li G Y. Activities and properties of superoxide dismutase and catalase in the haemolymph of Chlamys farreri [J]. Oceanologia et Limnologia Sinica, 2000, 31(3): 259-265 (in Chinese)

    [41] 王賀威, 馬勝偉, 張喆, 等. 全氟辛烷磺酸對真鯛鰓抗氧化酶和組織損傷的影響[J]. 生態(tài)與農(nóng)村環(huán)境學(xué)報(bào), 2013, 29(1): 98-105

    Wang H W, Ma S W, Zhang Z, et al. Effects of perfluorooctane sulfonate (PFOS) on antioxidant enzyme in the gill of Pagrosomus major and damage to its tissues [J]. Journal of Ecology and Rural Environment, 2013, 29(1): 98-105 (in Chinese)

    [42] 洪美玲, 陳立僑, 顧順樟, 等. 不同溫度脅迫方式對中華絨蟹免疫化學(xué)指標(biāo)的影響[J]. 應(yīng)用與環(huán)境生物學(xué)報(bào), 2007, 13(6): 818-822

    Hong M L, Chen L Q, Gu S Z, et al. Effect of temperature change on immunochemical indexes of Eriocheir sinensis [J]. Chinese Journal of Applied & Environmental Biology, 2007, 13(6): 818-822 (in Chinese)

    [44] Shin H S, Yoo J H, Min T S, et al. The effects of quercetin on physiological characteristics and oxidative stress resistance in olive flounder, Paralichthys olivaceus [J]. Asian-Australasian Journal of Animal Sciences, 2010, 23(5): 588-597

    [45] Viarengo A, Canesi L, Martinez P G, et al. Pro-oxidant processes and antioxidant defence systems in the tissues of the Antarctic scallop (Adamussium colbecki ) compared with the Mediterranean scallop (Pecten jacobaeus) [J]. Comparative Biochemistry & Physiology Part B: Biochemistry & Molecular Biology, 1995, 111(1): 119-126

    [46] 任加云, 苗晶晶, 李學(xué)平, 等. 石油烴暴露對櫛孔扇貝(Chlamys farreri)組織生物轉(zhuǎn)化酶及DNA損傷的影響[J]. 海洋湖沼通報(bào), 2016(3): 46-54

    Ren J Y, Miao J J, Li X P, et al. Effects of petroleum hydrocarbon exposure on biotransformation enzymes activities and DNA damage of scallop Chlamys farreri [J]. Transaction of Oceanology & Limnology, 2016(3): 46-54 (in Chinese)

    [47] 丁秀蓉, 李正炎, 王波, 等. 壬基酚對牙鲆肝臟EROD和GST酶活性的影響[J]. 中國海洋大學(xué)學(xué)報(bào): 自然科學(xué)版, 2007(s1): 101-104

    Ding X R, Li Z Y, Wang B, et al. Effects of nonylphenol on EROD and GST activity in the liver of Paralichthys olivaceus [J]. Periodical of Ocean University of China, 2007(s1): 101-104 (in Chinese)

    [48] 王靜, 潘魯青, 苗晶晶. 多環(huán)芳烴化合物對櫛孔扇貝組織芳烴羥化酶活力的影響[J]. 海洋科學(xué), 2007, 31(12): 19-23

    Wang J, Pan L Q, Miao J J. Effects of polycyclic aromatic hydrocarbons on aryl hydrocarbon hydroxylase activities of marine scallop Chlamys farreri [J]. Marine Sciences, 2007, 31(12): 19-23 (in Chinese)

    [49] 費(fèi)來華, 邵雁群, 李赟. 櫛孔扇貝不同組織SOD、CAT和MPO活力的比較分析[J]. 海洋湖沼通報(bào), 2008(3): 128-132

    Fei L H, Shao Y Q, Li Y. Comparitive analysis of the activity of SOD, CAT and MPO in different tissues of the scallop Chlamys farreri [J]. Transactions of Oceanology & Limnology, 2008(3): 128-132 (in Chinese)

    [50] 苗晶晶, 潘魯青, 王靜. 苯并[a]芘對櫛孔扇貝(Chlamys farreri)組織顯微和超微結(jié)構(gòu)的影響[J]. 環(huán)境科學(xué)學(xué)報(bào), 2007, 27(9): 1497-1503

    Miao J J, Pan L Q, Wang J. Effects of B[a]P on micro and ultrastructure of gill and digestive gland of Chlamys farreri [J]. Acta Scientiae Circumstantiae, 2007, 27(9): 1497-1503 (in Chinese)

    [51] Fitzpatrick P J, Sheehan D, Livingstone D R. Studies on isoenzymes of glutathione S-transferase in the digestive gland of Mytilus galloprovincialis with exposure to pollution [J]. Marine Environmental Research, 1995, 39(1-4): 241-244

    [52] Wang C, Zhao Y, Zheng R, et al. Effects of tributyltin, benzo[a]pyrene, and their mixture on antioxidant defense systems in Sebastiscus marmoratus [J]. Ecotoxicology and Environmental Safety, 2006, 65(3): 381-387

    [53] 穆景利, 王新紅, 林建清, 等. 苯并[a]芘對黑鯛肝臟GST活性的影響及其與肝臟代謝酶和膽汁代謝產(chǎn)物之間的變化關(guān)系[J]. 生態(tài)毒理學(xué)報(bào), 2009, 4(4): 516-523

    Mu J L, Wang X H, Lin J Q, et al. Effects of benzoapyrene exposure on hepatic GST activity in black porgy (Sparus macrocephalus) and variation relationships with hepatic metabolic enzymes and biliary metabolites [J]. Asian Journal of Ecotoxicology, 2009, 4(4): 516-523 (in Chinese)

    [54] 王重剛, 鄭微云, 余群, 等. 苯并(a)芘和芘的混合物暴露對梭魚肝臟抗氧化酶活性的影響[J]. 環(huán)境科學(xué)學(xué)報(bào), 2002, 22(4): 529-533

    Wang C G, Zheng W Y, Yu Q, et al. Effects of mixture of benzo(a)pyrene and pyrene exposure on hepatic antioxidant enzymes activities in Mugil soiuy [J]. Acta Scientiae Circumstantiae, 2002, 22(4): 529-533 (in Chinese)

    TheEffectsofPerfluorooctanoicAcid(PFOA)onEnzymeActivitiesinRuditapesphilippinarum

    Liu Zhiyu1,2, Zhai Yuxiu1, Yao Lin1, Jiang Yanhua1, Li Fengling1,*,Wang Lianzhu1, Shang Derong1, Yang Yuanhao3, Guo Mengmeng1, Tan Zhijun1

    1. Key Laboratory of Testing and Evaluation for Aquatic Product Safety and Quality, Ministry of Agriculture, Yellow Sea Fishery Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences, Qingdao 266071, China2. Wuxi Fisheries College, Nanjing Agricultural University, Wuxi 214182, China3. Shanxi Fisheries Institute, Yellow River Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences, Xi’an 710086, China

    10.7524/AJE.1673-5897.20170113001

    2017-01-13錄用日期2017-03-13

    1673-5897(2017)3-695-10

    X171.5

    A

    李風(fēng)鈴(1980—),女,海洋生物學(xué)博士,助理研究員,主要研究方向?yàn)楹Q笊锒纠韺W(xué)。

    山東省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(ZR2014DQ025);國家科技基礎(chǔ)性工作專項(xiàng)(2014FY230100);陜西省水利科技計(jì)劃項(xiàng)目(2015SLKJ-22)

    劉芝余(1991-),女,碩士研究生,研究方向?yàn)楹Q笊锒纠韺W(xué),E-mail: 15195986641@163.com

    *通訊作者(Corresponding author), E-mail: lifl@ysfri.ac.cn

    劉芝余, 翟毓秀, 姚琳, 等. 全氟辛酸(PFOA)對菲律賓蛤仔體內(nèi)酶活性的影響[J]. 生態(tài)毒理學(xué)報(bào),2017, 12(3): 695-704

    Liu Z Y, Zhai Y X, Yao L, et al. The effects of perfluorooctanoic acid (PFOA) on enzyme activities in Ruditapes philippinarum [J]. Asian Journal of Ecotoxicology, 2017, 12(3): 695-704 (in Chinese)

    猜你喜歡
    蛤仔活性氧菲律賓
    菲律賓蛤仔清洗分級整機(jī)設(shè)計(jì)及參數(shù)優(yōu)化
    2022年上半年菲律賓大米進(jìn)口增加近30%
    7.0級強(qiáng)震襲擊菲律賓
    遼寧蛤仔產(chǎn)業(yè)發(fā)展初探
    菲律賓?邦板牙省
    TLR3活化對正常人表皮黑素細(xì)胞內(nèi)活性氧簇表達(dá)的影響
    菲律賓獨(dú)特的“綁架產(chǎn)業(yè)”
    世界博覽(2014年24期)2015-01-12 20:45:38
    不同海藻餌料對菲律賓蛤仔生長的影響
    硅酸鈉處理對杏果實(shí)活性氧和苯丙烷代謝的影響
    O2聯(lián)合CO2氣調(diào)對西蘭花活性氧代謝及保鮮效果的影響
    天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 各种免费的搞黄视频| 丝袜在线中文字幕| 黑人欧美特级aaaaaa片| 成人黄色视频免费在线看| 成在线人永久免费视频| 搡老岳熟女国产| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡 | 久久国产亚洲av麻豆专区| 成人国语在线视频| 人成视频在线观看免费观看| 欧美黑人欧美精品刺激| 韩国精品一区二区三区| 日韩免费高清中文字幕av| 不卡av一区二区三区| 91九色精品人成在线观看| 操出白浆在线播放| 黄片小视频在线播放| av天堂在线播放| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 亚洲伊人色综图| 亚洲成人免费电影在线观看| 精品少妇久久久久久888优播| 各种免费的搞黄视频| 免费看十八禁软件| 电影成人av| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 欧美激情高清一区二区三区| 欧美黄色片欧美黄色片| 美女中出高潮动态图| 欧美在线黄色| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 久久精品国产a三级三级三级| 老司机影院成人| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 久久天堂一区二区三区四区| 男人添女人高潮全过程视频| 免费少妇av软件| 一区二区日韩欧美中文字幕| 热re99久久精品国产66热6| 脱女人内裤的视频| 少妇的丰满在线观看| 亚洲人成电影观看| 香蕉丝袜av| 亚洲av国产av综合av卡| 波多野结衣一区麻豆| 日本av免费视频播放| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 亚洲性夜色夜夜综合| 国产伦人伦偷精品视频| 大陆偷拍与自拍| 国产一卡二卡三卡精品| h视频一区二区三区| 日韩欧美一区二区三区在线观看 | 亚洲五月色婷婷综合| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 淫妇啪啪啪对白视频 | 精品福利观看| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 亚洲久久久国产精品| 成年动漫av网址| 久久精品国产a三级三级三级| 另类精品久久| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 男女高潮啪啪啪动态图| 欧美另类亚洲清纯唯美| 国产精品成人在线| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 日韩欧美一区视频在线观看| 嫩草影视91久久| 丝袜脚勾引网站| 午夜日韩欧美国产| 亚洲国产精品一区三区| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区 | 免费少妇av软件| 妹子高潮喷水视频| 黄色视频在线播放观看不卡| 咕卡用的链子| 高潮久久久久久久久久久不卡| 婷婷丁香在线五月| 国产成人一区二区三区免费视频网站| a在线观看视频网站| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 国产亚洲欧美在线一区二区| 深夜精品福利| 18禁国产床啪视频网站| 另类亚洲欧美激情| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 91九色精品人成在线观看| 黄色怎么调成土黄色| 9191精品国产免费久久| 国产精品久久久久成人av| 国产精品久久久久久精品电影小说| 精品久久久精品久久久| 男女高潮啪啪啪动态图| 99热网站在线观看| 国产精品偷伦视频观看了| 成人手机av| 午夜福利在线观看吧| 一二三四社区在线视频社区8| 久久毛片免费看一区二区三区| 久久精品国产亚洲av香蕉五月 | 老司机亚洲免费影院| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 悠悠久久av| 9热在线视频观看99| 看免费av毛片| 法律面前人人平等表现在哪些方面 | 成年人免费黄色播放视频| 黄色视频不卡| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 中亚洲国语对白在线视频| 性色av乱码一区二区三区2| 丝袜美腿诱惑在线| 亚洲精品中文字幕一二三四区 | 精品一品国产午夜福利视频| 欧美日本中文国产一区发布| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 香蕉国产在线看| 波多野结衣一区麻豆| 黄色视频,在线免费观看| 亚洲成人免费av在线播放| 欧美av亚洲av综合av国产av| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 婷婷成人精品国产| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡 | 国产野战对白在线观看| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 久久久久久久大尺度免费视频| 少妇粗大呻吟视频| 久久人人爽人人片av| 五月天丁香电影| 国产一级毛片在线| 国产老妇伦熟女老妇高清| 国产成人免费无遮挡视频| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 国产男女内射视频| 亚洲成国产人片在线观看| 国产成人免费观看mmmm| 精品一区二区三区四区五区乱码| bbb黄色大片| 一区二区av电影网| 国产极品粉嫩免费观看在线| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 一区在线观看完整版| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 91国产中文字幕| 两性夫妻黄色片| 成年人黄色毛片网站| 欧美精品一区二区免费开放| 成年人黄色毛片网站| 国产av又大| 久久香蕉激情| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 亚洲人成电影观看| 国产欧美日韩精品亚洲av| 色94色欧美一区二区| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 少妇人妻久久综合中文| 色精品久久人妻99蜜桃| 久久人妻熟女aⅴ| 亚洲av国产av综合av卡| 少妇的丰满在线观看| 中文字幕最新亚洲高清| 国产精品免费大片| av福利片在线| 日本a在线网址| 大陆偷拍与自拍| 成年美女黄网站色视频大全免费| av超薄肉色丝袜交足视频| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 久久国产精品大桥未久av| 他把我摸到了高潮在线观看 | 国产日韩一区二区三区精品不卡| 国产97色在线日韩免费| 国产欧美日韩一区二区精品| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 婷婷丁香在线五月| 一本色道久久久久久精品综合| 久久久国产一区二区| 人妻人人澡人人爽人人| 国产精品一二三区在线看| 国产精品免费视频内射| 一边摸一边做爽爽视频免费| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 51午夜福利影视在线观看| 午夜福利在线免费观看网站| 欧美日韩成人在线一区二区| 欧美另类亚洲清纯唯美| 嫩草影视91久久| 丝瓜视频免费看黄片| 99国产极品粉嫩在线观看| 亚洲国产看品久久| 黄片小视频在线播放| 久久女婷五月综合色啪小说| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 男女边摸边吃奶| 91国产中文字幕| 中文欧美无线码| 国产熟女午夜一区二区三区| 国产成人av教育| 国产精品亚洲av一区麻豆| 午夜久久久在线观看| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 午夜免费鲁丝| 黑人操中国人逼视频| 高清欧美精品videossex| 日韩 亚洲 欧美在线| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 悠悠久久av| 欧美av亚洲av综合av国产av| 男人舔女人的私密视频| 老熟妇仑乱视频hdxx| 涩涩av久久男人的天堂| 欧美在线黄色| 亚洲第一青青草原| 日韩三级视频一区二区三区| 在线观看免费视频网站a站| 欧美激情 高清一区二区三区| 天堂中文最新版在线下载| 国产熟女午夜一区二区三区| 色婷婷av一区二区三区视频| 精品一区二区三区四区五区乱码| 亚洲avbb在线观看| 国产免费一区二区三区四区乱码| 韩国高清视频一区二区三区| 亚洲精品国产av蜜桃| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 日韩欧美国产一区二区入口| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 超碰成人久久| 国产成+人综合+亚洲专区| 9191精品国产免费久久| 水蜜桃什么品种好| 亚洲少妇的诱惑av| 人妻 亚洲 视频| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 国产男女内射视频| 岛国在线观看网站| 波多野结衣av一区二区av| 啦啦啦免费观看视频1| 精品少妇黑人巨大在线播放| 日韩大码丰满熟妇| 亚洲国产欧美在线一区| 丰满少妇做爰视频| 18禁观看日本| 考比视频在线观看| www.999成人在线观看| 深夜精品福利| 国产亚洲精品久久久久5区| 99精品久久久久人妻精品| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 老熟妇乱子伦视频在线观看 | av在线老鸭窝| 国产伦理片在线播放av一区| 成人亚洲精品一区在线观看| 免费高清在线观看视频在线观看| 少妇人妻久久综合中文| 青青草视频在线视频观看| 成年人午夜在线观看视频| 久久久久久久国产电影| 亚洲成人免费av在线播放| 亚洲国产精品999| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| svipshipincom国产片| 在线观看免费高清a一片| www日本在线高清视频| 悠悠久久av| 一区福利在线观看| 久久精品人人爽人人爽视色| 一级,二级,三级黄色视频| 热99re8久久精品国产| 91麻豆av在线| 午夜91福利影院| 亚洲精品成人av观看孕妇| videos熟女内射| 久久久国产精品麻豆| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 精品高清国产在线一区| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 亚洲av成人不卡在线观看播放网 | 两个人看的免费小视频| 午夜精品久久久久久毛片777| 嫁个100分男人电影在线观看| 精品久久蜜臀av无| 色老头精品视频在线观看| 国产真人三级小视频在线观看| 99国产综合亚洲精品| e午夜精品久久久久久久| 国产精品一区二区在线不卡| 国产精品久久久久成人av| 亚洲欧美色中文字幕在线| 日本a在线网址| 国产男人的电影天堂91| 欧美日韩av久久| 91精品三级在线观看| 亚洲熟女精品中文字幕| 国产精品一区二区在线观看99| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 亚洲精品第二区| 一个人免费在线观看的高清视频 | 精品国产国语对白av| 日本欧美视频一区| 黑丝袜美女国产一区| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 欧美成狂野欧美在线观看| 国产精品一区二区免费欧美 | 亚洲 国产 在线| 欧美午夜高清在线| 日韩大码丰满熟妇| 一级毛片精品| 无遮挡黄片免费观看| 高清黄色对白视频在线免费看| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 好男人电影高清在线观看| 国产av精品麻豆| 亚洲成国产人片在线观看| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 女警被强在线播放| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 国产三级黄色录像| 一本色道久久久久久精品综合| 欧美日韩av久久| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 国产一区二区在线观看av| 老司机影院成人| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 最黄视频免费看| 搡老乐熟女国产| 亚洲成人免费电影在线观看| 99国产精品免费福利视频| 国产麻豆69| 精品国产国语对白av| 自线自在国产av| 午夜福利在线免费观看网站| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区 | 老司机福利观看| 亚洲三区欧美一区| 在线精品无人区一区二区三| 久9热在线精品视频| 青青草视频在线视频观看| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 永久免费av网站大全| 高清在线国产一区| 欧美日韩黄片免| 视频区欧美日本亚洲| 久久免费观看电影| 99久久国产精品久久久| 脱女人内裤的视频| 丝袜在线中文字幕| 成年人免费黄色播放视频| 亚洲人成电影免费在线| 久久 成人 亚洲| www.自偷自拍.com| 成在线人永久免费视频| 桃花免费在线播放| 国产精品久久久久成人av| 精品人妻一区二区三区麻豆| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 夫妻午夜视频| 午夜视频精品福利| 国产一区二区三区在线臀色熟女 | 午夜福利在线观看吧| 国产精品 欧美亚洲| 少妇 在线观看| 另类亚洲欧美激情| 中文字幕人妻丝袜制服| 成人三级做爰电影| 日韩一区二区三区影片| av有码第一页| 高清av免费在线| 午夜福利影视在线免费观看| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 国产97色在线日韩免费| 欧美激情久久久久久爽电影 | 99久久综合免费| 成年av动漫网址| 最近中文字幕2019免费版| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 色播在线永久视频| 亚洲伊人色综图| 亚洲性夜色夜夜综合| 人人妻人人澡人人看| 久久久久久久精品精品| 悠悠久久av| 亚洲欧美精品自产自拍| 久久影院123| 午夜精品国产一区二区电影| 天堂中文最新版在线下载| 人妻久久中文字幕网| 真人做人爱边吃奶动态| 亚洲精品国产区一区二| 国产精品.久久久| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 一个人免费看片子| cao死你这个sao货| 亚洲 国产 在线| 色94色欧美一区二区| 亚洲熟女精品中文字幕| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 日本av免费视频播放| 一本大道久久a久久精品| 国产一区有黄有色的免费视频| 老鸭窝网址在线观看| 久久久久久久精品精品| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 人成视频在线观看免费观看| 亚洲国产精品一区三区| 韩国精品一区二区三区| 国产成人精品久久二区二区91| 脱女人内裤的视频| 亚洲少妇的诱惑av| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 无限看片的www在线观看| 国产精品国产av在线观看| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频 | 亚洲少妇的诱惑av| 精品国产乱码久久久久久男人| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 久久人人爽人人片av| 国产91精品成人一区二区三区 | 老鸭窝网址在线观看| 国产精品一区二区免费欧美 | tocl精华| 午夜福利影视在线免费观看| 国产精品久久久人人做人人爽| av欧美777| 成年美女黄网站色视频大全免费| 久久久久久久精品精品| 国产主播在线观看一区二区| 国产熟女午夜一区二区三区| 人妻人人澡人人爽人人| 国产主播在线观看一区二区| 后天国语完整版免费观看| 国产老妇伦熟女老妇高清| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 欧美中文综合在线视频| 韩国精品一区二区三区| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 亚洲久久久国产精品| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 亚洲国产成人一精品久久久| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 国产人伦9x9x在线观看| 国产在线一区二区三区精| 这个男人来自地球电影免费观看| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 免费在线观看完整版高清| 午夜激情久久久久久久| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 亚洲欧美精品自产自拍| 久久国产精品人妻蜜桃| 乱人伦中国视频| 男女边摸边吃奶| av国产精品久久久久影院| 日韩精品免费视频一区二区三区| 欧美成狂野欧美在线观看| 又紧又爽又黄一区二区| 欧美激情高清一区二区三区| 国产99久久九九免费精品| 欧美黑人精品巨大| 大码成人一级视频| 成人国产一区最新在线观看| 国产精品 国内视频| 99国产精品99久久久久| 男女无遮挡免费网站观看| 99香蕉大伊视频| 欧美国产精品va在线观看不卡| 精品少妇黑人巨大在线播放| www.精华液| 飞空精品影院首页| 亚洲精华国产精华精| 欧美 亚洲 国产 日韩一| www.av在线官网国产| 中文字幕最新亚洲高清| 国产真人三级小视频在线观看| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 色94色欧美一区二区| 国产精品一区二区在线不卡| 欧美97在线视频| 国产97色在线日韩免费| 久久人人97超碰香蕉20202| 久久免费观看电影| 9191精品国产免费久久| 在线永久观看黄色视频| 最新在线观看一区二区三区| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| av不卡在线播放| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 9色porny在线观看| 午夜福利视频在线观看免费| 最新的欧美精品一区二区| 久久精品国产综合久久久| 久久av网站| 色综合欧美亚洲国产小说| 男女午夜视频在线观看| 欧美日韩福利视频一区二区| 亚洲五月色婷婷综合| 中文字幕人妻丝袜制服| 国产精品一区二区在线不卡| 97在线人人人人妻| 国产av又大| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 亚洲 欧美一区二区三区| 亚洲视频免费观看视频| 狂野欧美激情性xxxx| 老熟妇仑乱视频hdxx| 嫁个100分男人电影在线观看| 女性被躁到高潮视频| 国产男女超爽视频在线观看| 脱女人内裤的视频| 国产一卡二卡三卡精品| 成人三级做爰电影| 日韩欧美国产一区二区入口| 欧美成狂野欧美在线观看| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 天天操日日干夜夜撸| 岛国在线观看网站| 永久免费av网站大全| 午夜福利影视在线免费观看| 一二三四社区在线视频社区8| 男女高潮啪啪啪动态图| 午夜影院在线不卡| 亚洲精品粉嫩美女一区| 午夜激情久久久久久久| av天堂在线播放| 精品熟女少妇八av免费久了| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 51午夜福利影视在线观看| 99久久99久久久精品蜜桃| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 成人影院久久| 欧美在线黄色| 在线av久久热| 亚洲精品一区蜜桃| 99热国产这里只有精品6| 动漫黄色视频在线观看| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 在线 av 中文字幕| 亚洲欧美精品自产自拍| 亚洲精品国产av成人精品| 久久久国产精品麻豆| 日日夜夜操网爽| www.av在线官网国产| 久久久久久久精品精品| 十八禁网站免费在线| 国精品久久久久久国模美| 99国产精品免费福利视频| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 捣出白浆h1v1| 91精品伊人久久大香线蕉| 十八禁网站免费在线| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 国产主播在线观看一区二区| 午夜激情久久久久久久| 日本欧美视频一区| 首页视频小说图片口味搜索| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 婷婷丁香在线五月| 男女无遮挡免费网站观看| 高清在线国产一区| 国产不卡av网站在线观看| 亚洲国产精品一区三区| 十八禁网站免费在线| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 久久中文看片网| 久久影院123| 亚洲,欧美精品.| 91老司机精品| 欧美日本中文国产一区发布| 国产1区2区3区精品| 国产成人精品在线电影| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 最近中文字幕2019免费版| 亚洲欧美一区二区三区久久| 91成年电影在线观看| 精品高清国产在线一区| videosex国产| 国产成人免费无遮挡视频| www.av在线官网国产| 亚洲色图综合在线观看| 99re6热这里在线精品视频| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 精品少妇黑人巨大在线播放| 国产av国产精品国产| 成人亚洲精品一区在线观看| 久久精品国产综合久久久| 日韩欧美免费精品| 免费日韩欧美在线观看| 69av精品久久久久久 | 久久人人爽av亚洲精品天堂| 亚洲精品美女久久av网站| 精品高清国产在线一区| 久久国产精品大桥未久av| 一本大道久久a久久精品| 亚洲七黄色美女视频| 手机成人av网站| 又大又爽又粗| 亚洲国产欧美日韩在线播放|