• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    氧化石墨烯對大型溞的生物毒性效應(yīng)研究

    2017-10-13 04:02:32石柳王棟張瑛曹迪孟甜甜郭溪周集體
    生態(tài)毒理學報 2017年3期
    關(guān)鍵詞:頭胎納米材料毒性

    石柳,王棟,張瑛,曹迪,孟甜甜,郭溪,周集體

    大連理工大學化工與環(huán)境生命學部環(huán)境學院,工業(yè)生態(tài)與環(huán)境工程教育部重點實驗室,大連 116024

    氧化石墨烯對大型溞的生物毒性效應(yīng)研究

    石柳,王棟,張瑛*,曹迪,孟甜甜,郭溪,周集體

    大連理工大學化工與環(huán)境生命學部環(huán)境學院,工業(yè)生態(tài)與環(huán)境工程教育部重點實驗室,大連 116024

    氧化石墨烯(graphene oxide, GO)因其優(yōu)良的電性能、機械性能,而成為新興的碳納米應(yīng)用材料,但是其制造或應(yīng)用后排放進入環(huán)境水體的潛在生態(tài)風險缺少足夠的研究,尤其是關(guān)于GO生態(tài)毒性的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。研究以水生甲殼類動物大型溞(Daphnia magna, D. magna)為受試生物,從急性毒性和慢性毒性兩方面考察了GO的生物毒性效應(yīng),并結(jié)合溞類的光學顯微鏡觀察和體內(nèi)超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)活力以及丙二醛(MDA)含量的測定對GO對大型溞的致毒機理進行了初步探究。研究結(jié)果表明GO對大型溞急性毒性的48 h半數(shù)致死濃度(48 h-LC50)為84.2 mg·L-1;慢性毒性的21 d半數(shù)致死濃度(21 d-LC50)為3.3 mg·L-1。關(guān)于GO對大型溞的繁殖毒性,當GO濃度達到1 mg·L-1時能夠顯著推遲母溞的頭胎出生時間,抑制母溞頭胎幼溞數(shù)、單胎最高產(chǎn)溞數(shù)和總產(chǎn)溞數(shù)。關(guān)于GO對大型溞的致毒機理,研究結(jié)果表明消化道堵塞和氧化損傷可能是GO對大型溞的主要致毒途徑。上述研究結(jié)果為GO在水環(huán)境中的毒性效應(yīng)研究奠定了基礎(chǔ),為GO的工業(yè)化應(yīng)用前景提供了基礎(chǔ)的生態(tài)毒性數(shù)據(jù)。

    氧化石墨烯;大型溞;急性毒性;慢性毒性;氧化損傷

    Received14 January 2017accepted30 March 2017

    Abstract: Graphene oxide (GO) has been extensively explored as a promising carbon-based nanomaterial because of its unique electrical and mechanical properties. The versatile manufacture and application of GO made it inevitably release into the aqueous environment. However, limit is known about the potential risk of GO in aquatic environment. To evaluate the bio-toxicity of GO, the acute toxicity and semi-chronic toxicity using Daphnia magna (D. magna) were conducted. The toxicity mechanism of GO to D. magna was investigated preliminarily by the light microscopy, the measurement of SOD and CAT activities and MDA content. The results showed that the 48 h-LC50of GO in acute toxicity tests was 84.2 mg·L-1. The 21 d-LC50in semi-chronic toxicity tests was 3.3 mg·L-1. As to the reproduction of D. magna, the significant delay in the production time of the first brood was found when the concentration of GO reached 1 mg·L-1, as well as the significant inhibition in the offspring number of the first brood, the offspring number of the most productive brood and the total number of offspring. With respect to the toxicity mechanism of GO, the results revealed that gut clogging and oxidative stress might be the main toxicity pathway of GO to D. magna. This study gave an example of the toxicity research for novel chemicals, and provided the basic toxicity information of GO in respect of its industrial application.

    Keywords: graphene oxide; Daphnia magna; acute toxicity; chronic toxicity; oxidative stress

    氧化石墨烯(GO)是石墨烯經(jīng)氧化處理后的衍生物,除了具備石墨烯的片層結(jié)構(gòu)的特殊性質(zhì)外,表面含有大量的羧基、羥基、烷氧基等親水基團[1]。GO具有優(yōu)異的物理化學性質(zhì),例如較高的比表面能、良好的親水性、吸附性和機械性能等,被廣泛應(yīng)用于能源、材料學和生物醫(yī)學等方面[2]。因此,隨著GO的大規(guī)模應(yīng)用,其進入水體后造成的生態(tài)效應(yīng)與安全問題不容忽視。

    目前關(guān)于GO生物毒性的報道中,主要考察了GO對哺乳動物[3]、人體或動物細胞[4-5]的毒性效應(yīng),而對水生生物的毒性效應(yīng)還缺少足夠的研究。

    關(guān)于GO對水生生物的毒性效應(yīng)研究報道中,所用的受試生物主要有菌類(如大腸桿菌[6]、惡臭假單胞菌[7])、藻類(如月牙藻[1]、銅綠微囊藻[8]及普通小球藻[9-10])、原生動物類(如小眼蟲[11])、浮游動物類(如紋藤壺[12]及豐年蝦[13])以及魚類(斑馬魚胚胎[14]及成魚[15])。然而,GO對通用水生模式生物大型溞的毒理學數(shù)據(jù)還未見報道。

    另外,已有研究中,對于GO的毒性效應(yīng),主要關(guān)注的是GO短期暴露后的生物毒性效應(yīng)。如,GO對菌類的毒性作用表現(xiàn)在GO具有一定的抗菌性,造成膜損傷和氧化損傷[6-7]。GO對藻類的毒性作用主要表現(xiàn)在GO能抑制藻類的生長、葉綠素a合成以及使藻細胞內(nèi)活性氧物種(ROS)含量增加[1,8-10]。GO對原生動物小眼蟲的毒性作用主要體現(xiàn)在其會抑制小眼蟲生長及使SOD、CAT活力升高[11]。GO對浮游動物(如紋藤壺[12]和豐年蝦[13])的毒性研究表明GO達到一定濃度時會使幼蟲游動速度降低,死亡率升高。GO對斑馬魚胚胎的毒性作用主要表現(xiàn)在胚胎孵化延遲、心臟水腫等方面[14]。GO對斑馬魚成魚表現(xiàn)出氧化損傷和免疫毒性[15]。然而,關(guān)于長期暴露后GO對水生生物的毒性效應(yīng),特別是對水生生物繁殖的毒性效應(yīng)研究還較少。

    為了考察GO在制造或應(yīng)用后排放進入環(huán)境水體所造成的潛在生態(tài)風險,本研究以水生甲殼類動物大型溞為受試生物,考察了GO對大型溞的48 h急性毒性和21 d慢性毒性,并通過暴露后溞類的光學顯微鏡觀察及其體內(nèi)抗氧化酶(SOD和CAT)活力以及丙二醛(MDA)含量的測定來探究GO對大型溞的致毒機理。本研究旨在為在水環(huán)境中GO的毒性效應(yīng)提供研究基礎(chǔ),為GO的工業(yè)化應(yīng)用前景提供生態(tài)毒性數(shù)據(jù)。

    1 材料與方法(Materials and methods)

    1.1 實驗材料

    本研究采用的是單層GO粉末,購于南京先豐納米材料科技有限公司,純度>99 wt%,直徑500 nm~5 μm,厚度0.8~1.2 nm。GO儲備液(2 g·L-1)用超純水配制,超聲分散30 min后常溫儲存?zhèn)溆茫瑑湟壕鶆蚍稚?。其余化學試劑均為國產(chǎn)分析純試劑,購于中國國藥有限公司。

    大型溞(Daphnia magna, D. magna )由大連海洋大學水生生物學重點實驗室提供,為本實驗室連續(xù)培養(yǎng)3代以上的單克隆品系。大型溞在曝氣(>24 h)自來水中養(yǎng)殖,飼以斜生柵藻。培養(yǎng)條件:溫度為(20±1) ℃,明暗時間比為16 h∶8 h,溶解氧DO>3 mg·L-1,pH為6~9。定期用重鉻酸鉀作為參考物檢驗實驗用溞的敏感性,當大型溞的24 h-EC50(24 h內(nèi)50%的受試溞運動受到抑制時被測物質(zhì)的濃度)在0.6~2.1 mg·L-1時,表明該大型溞符合實驗要求,可用于毒性實驗。暴露前2 h將實驗用溞置于充氧飽和的人工稀釋水中培養(yǎng),以適應(yīng)新的實驗條件。采用人工稀釋水的原因是為控制實驗條件的穩(wěn)定,避免自來水中的雜質(zhì)對GO毒性的干擾。

    1.2 實驗方法

    毒性實驗用暴露溶液的配制:將GO儲備液超聲分散30 min后,用充氧飽和的人工稀釋水(配制比例如表1所示[16],用氫氧化鈉或鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH至7.8左右)將儲備液稀釋成不同濃度的暴露液??紤]到GO會團聚沉淀,暴露液均為當天暴露前新鮮配制。

    GO在超純水中的粒徑表征:粒徑表征參照Nogueira等[1]的研究方法進行,用超純水配制濃度為0.01 mg·L-1(實驗中設(shè)定最低濃度)的GO分散液,超聲分散30 min(與毒性實驗中暴露液配制的超聲時間相同),然后用納米粒度儀(Malvern, Nano-ZS90, England)進行測定。

    大型溞的急性毒性實驗:實驗采用24 h內(nèi)新生的幼溞,實驗方法參照經(jīng)濟合作與發(fā)展組織(OECD)化學品測試導則No.202 (2004)《溞類急性活動抑制試驗》進行[17]。正式實驗根據(jù)預實驗確定的GO濃度范圍進行設(shè)置,共設(shè)置6個等梯度的實驗濃度組和1個空白對照組,每個濃度設(shè)置4個平行樣。暴露時間為48 h,實驗期間不喂食。實驗結(jié)束后,空白對照組中大型溞的死亡率低于10%,則表明實驗結(jié)果有效。毒性表征采用48 h-LC50(48 h內(nèi)50%的受試溞死亡時被測物質(zhì)的濃度)表示。

    大型溞的慢性毒性實驗:實驗采用24 h內(nèi)新生的幼溞,實驗方法參照經(jīng)濟合作與發(fā)展組織(OECD)化學品測試導則No.211 (1998):《大型溞繁殖試驗》進行[18]。根據(jù)急性毒性實驗結(jié)果,確定GO對大型溞無急性毒性濃度范圍后設(shè)置5個實驗濃度組和1個空白對照組,每組10個平行樣。暴露時間為21 d,每天喂食,隔天更換實驗溶液。實驗結(jié)束后,空白對照組大型溞的死亡率低于20%且平均每只母溞總產(chǎn)溞量大于60只,則實驗結(jié)果有效。毒性表征采用21 d-LC50、母溞頭胎出生時間、頭胎幼溞數(shù)、單胎最高產(chǎn)溞數(shù)和總產(chǎn)溞數(shù)表示。

    大型溞體內(nèi)SOD、CAT活力以及MDA含量的測定:實驗用溞為出生3~4 d幼溞。根據(jù)急性毒性實驗結(jié)果,確定GO對大型溞無急性毒性濃度范圍后,設(shè)置5個實驗濃度組和1個空白對照組。暴露48 h后,準確稱取大型溞的待測組織的重量,加入適當用量的磷酸緩沖溶液后,在冰水浴條件下機械勻漿,10 000 r·min-1,離心20 min,取上清液(每組3個平行樣),按南京建成生物研究所的試劑盒要求測定總蛋白含量、SOD和CAT活力以及MDA含量。

    大型溞的光學顯微鏡觀察:在急性毒性和慢性毒性實驗結(jié)束后,將暴露后的大型溞用人工稀釋水沖洗2~3次后置于光學顯微鏡(Olympus, Model YS100, Japan)下觀察,并用相機(Canon, EOS 760D, Japan)記錄結(jié)果。

    1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

    LC50及95%置信區(qū)間的計算參照Morrison等[19]的方法,使用SPSS 18.0(IBM,USA)軟件中的probit analysis進行。慢性毒性和氧化損傷毒性實驗數(shù)據(jù)采用平均數(shù) ± 標準差形式表示,用OriginPro 9.0(OriginLab,USA)軟件繪圖,用SPSS 18.0軟件中單方差分析(One-way ANOVA)中的土耳其檢驗(Tukey’s test)進行差異性分析(P < 0.05)。

    2 結(jié)果(Results)

    2.1 GO的粒徑表征

    經(jīng)納米粒度儀分析得出GO在超純水中的平均粒徑為(1 108 ± 51) nm,即平均粒徑在1 μm左右。

    2.2 GO對大型溞的急性毒性

    根據(jù)預實驗結(jié)果,選用不同濃度的GO懸浮液對大型溞進行急性毒性實驗,大型溞在暴露48 h后死亡率情況如表2所示。

    由表2可以看出,GO濃度小于50.0 mg·L-1時,對大型溞沒有表現(xiàn)出急性致死毒性,由此可以認為GO對大型溞急性毒性的最大無影響濃度(no observed effect concentration, NOEC)為50.0 mg·L-1。隨著GO濃度從65.0 mg·L-1增加到143.0 mg·L-1時,大型溞的死亡率由10%逐漸增加到100%,表明GO對大型溞的毒性表現(xiàn)出一定的劑量-效應(yīng)關(guān)系。

    表2 氧化石墨烯(GO)對大型溞的急性毒性Table 2 Acute toxicity of graphene oxide (GO) to D. magna

    經(jīng)計算得到GO對大型溞急性毒性的48 h-LC50值為84.2 mg·L-1(95%置信區(qū)間為81.6~87.0 mg·L-1)。

    2.3 GO對大型溞的慢性毒性

    在急性毒性研究的基礎(chǔ)上,進一步考察了GO對大型溞的慢性毒性。將大型溞暴露在不同濃度的GO懸浮液中,在21 d后統(tǒng)計其母溞死亡率、母溞頭胎出生時間、頭胎幼溞數(shù)、單胎最高產(chǎn)溞數(shù)和總產(chǎn)溞數(shù)情況,結(jié)果如圖1所示。

    不同濃度GO暴露后的母溞的存活狀況如圖1(A)所示。大型溞暴露于濃度為0.01 mg·L-1的GO中21 d后沒有出現(xiàn)死亡;當GO濃度從0.1 mg·L-1增加到50.0 mg·L-1,大型溞的死亡率由10%逐漸增加到100%。經(jīng)計算可得GO對大型溞慢性毒性的21 d-LC50值為3.3 mg·L-1(95%置信區(qū)間為0.4~15.2 mg·L-1)。由此可以看出,大型溞的21 d死亡率與GO呈現(xiàn)出一定的濃度效應(yīng)。

    在此基礎(chǔ)上,考察了GO對大型溞繁殖的毒性效應(yīng)。不同濃度的GO對母溞頭胎出生時間的影響如圖1(B)所示。由圖中可以看出,當GO濃度為1.0 mg·L-1時,GO會延遲大型溞頭胎的出生時間,從8 d延長至10 d;當GO濃度為10.0 mg·L-1時,大型溞在實驗周期21 d中均未生第一胎。GO對母溞頭胎幼溞數(shù)、單胎最高產(chǎn)溞數(shù)和總產(chǎn)溞數(shù)的影響如圖1(C)所示,由圖中可以看出,當GO濃度為0.1 mg·L-1時,GO開始對母溞頭胎幼溞數(shù)和總產(chǎn)溞數(shù)表現(xiàn)出抑制作用,數(shù)量分別由8只和73只減少到4只和51只;當GO濃度為1.0 mg·L-1時,GO開始對母溞單胎最高產(chǎn)溞數(shù)表現(xiàn)出抑制作用,產(chǎn)溞量由24只降低到17只。由此可以看出,GO對大型溞具有一定的慢性毒性,且母溞死亡率、母溞頭胎幼溞數(shù)以及總產(chǎn)溞量3個指標較為敏感。

    圖1 GO對大型溞的慢性毒性注:A,母溞死亡率;B,母溞頭胎出生時間;C,母溞頭胎幼溞數(shù),母溞單胎最高產(chǎn)溞數(shù),每只母溞的總產(chǎn)溞數(shù)。 柱形圖上不同字母表示存在顯著性差異(P<0.05)。Fig. 1 Chronic toxicity of GO on D. magnaNote: A, Mortality of parent animals; B,Time to production of first brood; C, Number of offspring of first brood, Number of offspring of the most productive brood, Total number of offspring. Different letters above each column indicate statistically significant differences (P<0.05).

    2.4 GO對大型溞的致毒機理探究

    2.4.1 光學顯微鏡觀察

    為探究GO對大型溞的致毒機理,將暴露48 h和21 d后的大型溞置于光學顯微鏡下進行觀察,結(jié)果如圖2所示。與48 h控制組的圖2(A)相比,可以看出暴露于GO中的大型溞的消化道中有深棕色物質(zhì)積累(見圖2(B)),表明GO能夠被大型溞直接吞食,并積累在消化道中。與21 d控制組的圖2(C)相比,可以看出在喂食柵藻的情況下,暴露21 d后的大型溞消化道內(nèi)仍有GO積累(見圖2(D, E, F, G))。

    2.4.2 SOD、CAT活力以及MDA含量的測定結(jié)果

    為進一步探究GO對大型溞的致毒機理,對暴露在GO懸浮液中48 h后的大型溞體內(nèi)的SOD和CAT活力以及MDA含量情況進行了測定,結(jié)果如圖3所示。

    暴露在不同濃度GO中的大型溞體內(nèi)的SOD和CAT活力的變化情況如圖3(A和B)所示。當GO的濃度為0.1 mg·L-1時,GO對SOD和CAT活力均表現(xiàn)出顯著的促進效應(yīng);隨著GO濃度的增加,大型溞體內(nèi)SOD和CAT活力分別由164.8 U·mg prot-1和48.6 U·mg prot-1逐漸增加到237.3 U·mg prot-1和70.6 U·mg prot-1。

    暴露在不同濃度GO中的大型溞體內(nèi)MDA含量的變化情況如圖3(C)所示。當GO的濃度為0.1 mg·L-1時,GO對MDA含量表現(xiàn)出顯著的促進效應(yīng);隨著GO濃度的增加,MDA含量由1.3 nmol·mg prot-1逐漸增加到2.0 nmol·mg prot-1。

    GO對數(shù)濃度分別與對應(yīng)的大型溞體內(nèi)SOD和CAT活力及MDA含量的線性擬合曲線如圖3所示。通過圖3中擬合方程的R2值和P值,可以看出GO的濃度與CAT和MDA的相關(guān)性較好,而與SOD的相關(guān)性稍差。

    3 討論(Discussion)

    本研究通過大型溞的急性毒性實驗,給出了GO對大型溞的急性毒性數(shù)據(jù)(48 h-LC50為84.2 mg·L-1),對GO的生物毒性數(shù)據(jù)作了很好的補充。大型溞作為國際上公認的標準受試生物被廣泛應(yīng)用于廢水[20-22]、重金屬[23]、納米材料[24-26]等污染物的生物毒性評價中,因此GO對大型溞毒性數(shù)據(jù)的補充就顯得尤為重要。已有文獻報道了GO對其他水生動、植物的急性毒性數(shù)據(jù),如GO對紋藤壺[12]48 h-LC50值為560 mg·L-1,對豐年蝦[13]48 h-LC50值為650 mg·L-1。由此可以看出,與紋藤壺和豐年蝦相比,GO對大型溞的急性毒性作用較強,或者說大型溞對GO的急性毒性(48 h)響應(yīng)比較敏感。另外,96 h的實驗結(jié)果表明GO對月牙藻生長的96 h-EC50值為20 mg·L-1[1],對小眼蟲生長的96 h-EC50值為3.76 mg·L-1[11]。本研究發(fā)現(xiàn)大型溞暴露在濃度為50.0 mg·L-1的GO懸浮液中96 h后沒有出現(xiàn)死亡現(xiàn)象,這說明與小眼蟲和月牙藻相比,GO對大型溞的亞慢性毒性(96 h)作用較弱。

    圖2 GO在大型溞體內(nèi)的攝入情況注:A,空白(48 h);B,GO濃度為50 mg·L-1 (48 h);C,空白(21 d);D~G,GO濃度分別為0.01、0.1、1和10 mg·L-1 (21 d)。Fig. 2 Ingestion of GO by D. magnaNote: A, control (48 h); B, 50 mg·L-1 of GO (48 h); C, control (21 d); D-G,concentrations of GO was 0.01, 0.1, 1 and 10 mg·L-1 respectively (21 d).

    圖3 GO濃度對大型溞體內(nèi)SOD和CAT活力及MDA含量的影響注:柱形圖上不同字母表示存在顯著性差異(P<0.05)。圖中斜線為GO對數(shù)濃度分別 與對應(yīng)的大型溞體內(nèi)SOD和CAT活力及MDA含量的線性擬合曲線。Fig. 3 Effect of GO concentrations on SOD and CAT activities and MDA content in D. magnaNote: Different letters above each column indicate statistically significant differences (P<0.05). The linear fit was shown as oblique lines between logarithm concentration of GO and SOD and CAT activities and MDA content in D. magna, respectively.

    納米材料中,除GO外,其他碳納米材料對大型溞的急性毒性已有報道。如有研究表明碳納米管對大型溞的48 h-LC50值為29.3 mg·L-1[27];C60對大型溞的48 h-LC50值為7.9 mg·L-1[28];穩(wěn)定分散在沒食子酸(gallic acid)中的C70即C70-GA對大型溞的96 h-LC50值為0.4 mg·L-1[24]。與本研究結(jié)果相比,上述納米材料對大型溞的急性毒性較GO的毒性強(GO的NOEC為50 mg·L-1),這說明GO是一種環(huán)境較為友好的納米材料,為其工業(yè)化的廣泛應(yīng)用提供了基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

    相較于急性毒性來說,慢性毒性也同樣應(yīng)該引起人們的重視。有研究報道GO在環(huán)境中的濃度大概為0.01~1 mg·L-1[24]。在此濃度范圍下GO對大型溞沒有表現(xiàn)出急性致死毒性,但從本研究的結(jié)果來看,即使在這么低濃度下,長期暴露后仍然會對大型溞的生殖(如頭胎出生時間、總產(chǎn)溞量)產(chǎn)生影響,甚至導致死亡。考慮到生物種群及生態(tài)系統(tǒng)的穩(wěn)定性,慢性毒性研究對污染物的生態(tài)風險評價的意義也同樣應(yīng)該引起足夠的重視[30]。

    關(guān)于GO等納米材料對大型溞的慢性毒性,已有文獻報道過其他碳納米材料對大型溞的慢性毒性。Seda等[24]的研究表明,C70-GA對大型溞慢性毒性的21 d NOEC為0.125 mg·L-1,C70濃度達到1 mg·L-1時,會顯著抑制母溞存活率和母溞總產(chǎn)溞量。Mendon?a等[31]研究表明金剛石對大型溞慢性毒性的21 d NOEC為0.63 mg·L-1,當金剛石濃度達到1.3 mg·L-1時能夠顯著抑制母溞總產(chǎn)溞量。由此可以看出,相對于其他的碳納米材料來說,GO對大型溞的慢性毒性比C70-GA和金剛石的毒性強。

    本研究表明GO能夠被大型溞直接吞食,并積累在消化道中,因此消化道堵塞被認為是GO對大型溞的可能致毒途徑之一。大型溞是一種濾食生物,它在“濾水”的同時能攝入水中尺寸在0.4~4 μm的物質(zhì)[32]。本研究所用的GO在純水中的平均粒徑為1 μm左右,雖然GO在人工稀釋水中會發(fā)生團聚,但單獨分散的GO平均粒徑在1 μm左右,因此這部分GO是能夠被大型溞直接吞食的。被吞食的GO容易積累在大型溞的消化道中,很可能造成消化道的堵塞,從而阻止大型溞的正常攝食,表現(xiàn)出體長、繁殖數(shù)量等指標的降低,甚至可能引起死亡[27,33-34]。GO容易蓄積在水生生物的腸道中,這個發(fā)現(xiàn)在豐年蝦的研究中也有報道[13]。有研究認為:在喂食藻類的情況下,大型溞可以排除體內(nèi)積累的納米材料。但是,這種排除也只是部分排除,而不是完全的排除。例如,Guo等[16]用碳標記的石墨烯懸浮液對大型溞進行的恢復實驗,結(jié)果表明,養(yǎng)殖24 h后大型溞體內(nèi)蓄積的石墨烯含量基本沒有變化;同等條件下,飼以柵藻后大型溞體內(nèi)積累的石墨烯有90%被排出,但是仍有部分殘留在體內(nèi)。Petersen等[35]研究碳納米管在大型溞消化道中的蓄積情況時也有類似的發(fā)現(xiàn)。因此,根據(jù)圖2中顯示的GO在大型溞體內(nèi)的排除情況,我們推測消化道堵塞是GO對大型溞慢性毒性的可能致毒途徑。

    除了GO外,其他碳納米材料在大型溞體內(nèi)的蓄積情況也有相關(guān)的研究報道。如Guo等[16]將新生幼溞置于250 μg·L-1的石墨烯懸浮液暴露24 h后,發(fā)現(xiàn)幼溞體內(nèi)蓄積的石墨烯重量約占小溞干重的1%,隨后將暴露后的小溞置于清潔的人工稀釋水中進行養(yǎng)殖,24 h后幼溞體內(nèi)蓄積的石墨烯含量基本沒有改變;研究還發(fā)現(xiàn),將已懷卵的母溞在250 μg·L-1的石墨烯懸浮液中暴露24 h后,在新生幼溞體內(nèi)也會檢測出石墨烯。除此之外,Stanley等[27]在研究多壁碳納米管對大型溞的毒性時,認為堵塞在消化道中的納米材料可能抑制了大型溞對藻類的攝入,從而影響大型溞的生長和繁殖。

    除了消化道堵塞,氧化損傷也被認為是GO對大型溞的可能致毒途徑之一。SOD和CAT是生物體內(nèi)2種重要的抗氧化酶。SOD可以特異性地將O2·-催化分解為H2O2和O2,CAT可以催化H2O2分解為無毒性的H2O和O2,從而將活性氧(ROS)保持在較穩(wěn)定的水平,保護生物體免受ROS的損害[11]。ROS的量超過了抗氧化清除能力時,會對機體造成氧化損傷,如脂質(zhì)過氧化。MDA是脂質(zhì)過氧化的主要產(chǎn)物。生物體內(nèi)SOD和CAT活力及MDA含量的變化能夠闡明污染物的毒性機制。在本研究中大型溞體內(nèi)SOD和CAT活力升高,表明大型溞清除O2·-和H2O2自由基的能力增強,也表明了GO能夠誘導大型溞體內(nèi)產(chǎn)生過量的活性氧物種(如O2·-和H2O2)。而MDA含量的增加表明產(chǎn)生的過量的ROS已對大型溞造成了脂質(zhì)過氧化。由此可以看出氧化損傷可能是GO對大型溞的致毒途徑之一。

    本研究表明GO會使大型溞體內(nèi)SOD和CAT活力及MDA含量升高。除此之外,也有研究表明GO對其他水生生物也會造成氧化損傷。如,Hu等[11]的研究表明,當GO濃度為2.5 mg·L-1時,能夠顯著誘導小眼蟲體內(nèi)SOD和CAT活力及MDA含量的升高,這與本研究的結(jié)果一致。但是,Mesaric等[13]研究發(fā)現(xiàn),當GO濃度高達500 mg·L-1時對豐年蝦體內(nèi)CAT活力沒有顯著影響。Zhao等[29]也發(fā)現(xiàn),GO濃度在10~1 000 μg·L-1時,對擬南芥體內(nèi)SOD和CAT活力均沒有顯著的影響。另外,這說明GO對生物體內(nèi)抗氧化酶的影響機制較為復雜,需要進行更為深入的研究。

    本研究以大型溞為受試生物,考察了GO對大型溞的急性毒性和慢性毒性,為GO的生態(tài)毒性數(shù)據(jù)提供了補充;GO對大型溞的致毒機理的考察表明消化道堵塞和氧化損傷可能是GO對大型溞的主要致毒途徑。本研究的結(jié)果為GO的生態(tài)風險研究提供了基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。同時我們也應(yīng)看到,由于環(huán)境水體中的溶解性有機質(zhì)、重金屬等物質(zhì)的存在,都可能對排放到水體中的GO的毒性造成影響,因此有必要對影響GO生物毒性的相關(guān)物理及環(huán)境等因素進行后續(xù)的研究。

    [1] Nogueira P F M, Nakabayashi D, Zucolotto V. The effects of graphene oxide on green algae Raphidocelis subcapitata [J]. Aquatic Toxicology, 2015, 166: 29-35

    [2] 李婷, 張超智, 沈丹, 等. 石墨烯和氧化石墨烯的生物體毒性研究進展[J]. 南京大學學報: 自然科學版, 2016, 52(2): 235-243

    Li T, Zhang C Z, Shen D, et al. Progress in toxicity of graphene and graphene oxide in organisms [J]. Journal of Nanjing University: Natural Sciences, 2016, 52(2): 235-243 (in Chinese)

    [3] Li Y B, Wang Y, Tu L, et al. Sub-acute toxicity study of graphene oxide in the sprague-dawley rat [J]. International Journal of Environmental Research and Public Health, 2016, 13(11): 61-67

    [4] Mittal S, Kumar V, Dhiman N, et al. Physico-chemical properties based differential toxicity of graphene oxide/reduced graphene oxide in human lung cells mediated through oxidative stress [J]. Scientific Reports, 2016, 6: 39548

    [5] Pelin M, Fusco L, Leon V, et al. Differential cytotoxic effects of graphene and graphene oxide on skin keratinocytes [J]. Scientific Reports, 2017, 7: 40572

    [6] Nanda S S, Yi D K, Kim K. Study of antibacterial mechanism of graphene oxide using Raman spectroscopy [J]. Scientific Reports, 2016, 6: 28443

    [7] Combarros R G, Collado S, Diaz M. Toxicity of graphene oxide on growth and metabolism of Pseudomonas putida [J]. Journal of Hazardous Materials, 2016, 310: 246-252

    [8] Tang Y L, Tian J L, Li S Y, et al. Combined effects of graphene oxide and Cd on the photosynthetic capacity and survival of Microcystis aeruginosa [J]. Science of the Total Environment, 2015, 532: 154-161

    [9] Hu X G, Ouyang S H, Mu L, et al. Effects of graphene oxide and oxidized carbon nanotubes on the cellular division, microstructure, uptake, oxidative stress, and metabolic profiles [J]. Environmental Science & Technology, 2015, 49(18): 10825-10833

    [10] Ouyang S H, Hu X G, Zhou Q X. Envelopment-internalization synergistic effects and metabolic mechanisms of graphene oxide on single-cell Chlorella vulgaris are dependent on the nanomaterial particle size [J]. ACS Applied Materials & Interfaces, 2015, 7(32): 18104-18112

    [11] Hu C W, Wang Q, Zhao H T, et al. Ecotoxicological effects of graphene oxide on the protozoan Euglena gracilis [J]. Chemosphere, 2015, 128: 184-190

    [12] Mesaric T, Sepcic K, Piazza V, et al. Effects of nano carbon black and single-layer graphene oxide on settlement, survival and swimming behaviour of Amphibalanus amphitrite larvae [J]. Chemistry and Ecology, 2013, 29(7): 643

    [13] Mesaric T, Gambardella C, Milivojevic T, et al. High surface adsorption properties of carbon-based nanomaterials are responsible for mortality, swimming inhibition, and biochemical responses in Artemia salina larvae [J]. Aquatic Toxicology, 2015, 163: 121-129

    [14] Chen Y M, Ren C X, Ouyang S H, et al. Mitigation in multiple effects of graphene oxide toxicity in zebrafish embryogenesis driven by humic acid [J]. Environmental Science & Technology, 2015, 49(16): 10147-10154

    [15] Chen M J, Yin J F, Liang Y. Oxidative stress and immunotoxicity induced by graphene oxide in zebrafish [J]. Aquatic Toxicology, 2016, 174: 54-60

    [16] Guo X K, Dong S P, Petersen E J, et al. Biological uptake and depuration of radio-labeled graphene by Daphnia magna [J]. Environmental Science & Technology, 2013, 47(21): 12524-12531

    [17] OECD. Guide-lines for the testing of chemicals, Daphnia sp. acute immobilisation test, OECD guideline 202 [R]. Paris: OECD, 2004

    [18] OECD. Guide-lines for the testing of chemicals, Daphnia magna reproduction test, OECD guideline 211 [R]. Paris: OECD, 1998

    [19] Morrison S A, Mcmurry S T, Smith L M, et al. Acute toxicity of pyraclostrobin and trifloxystrobin to Hyalella azteca [J]. Environmental Toxicology and Chemistry, 2013, 32(7): 1516-1525

    [20] Kim S, Kim W, Chounlamany V, et al. Identification of multi-level toxicity of liquid crystal display wastewater toward Daphnia magna and Moina macrocopa [J]. Journal of Hazardous Materials, 2012, 227-228: 327-333

    [21] Zhou S Y, Watanabe H, Wei C, et al. Reduction in toxicity of coking wastewater to aquatic organisms by vertical tubular biological reactor [J]. Ecotoxicology and Environmental Safety, 2015, 115: 217-222

    [22] Zhao J L, Jiang Y X, Yan B, et al. Multispecies acute toxicity evaluation of wastewaters from different treatment stages in a coking wastewater-treatment plant [J]. Environmental Toxicology and Chemistry, 2014, 33(9): 1967-1975

    [23] Barata C, Varo I, Navarro J C, et al. Antioxidant enzyme activities and lipid peroxidation in the freshwater cladoceran Daphnia magna exposed to redox cycling compounds [J]. Comparative Biochemistry and Physiology Part C: Toxicology & Pharmacology, 2005, 140(2): 175-186

    [24] Seda B C, Ke P, Mount A S, et al. Toxicity of aqueous C70-gallic acid suspension in Daphnia magna [J]. Environmental Toxicology and Chemistry, 2012, 31(1): 215-220

    [25] Alloy M M, Roberts A P. Effects of suspended multi-walled carbon nanotubes on daphnid growth and reproduction [J]. Ecotoxicology and Environmental Safety, 2011, 74(7): 1839-1843

    [26] Kim K T, Klaine S J, Cho J, et al. Oxidative stress responses of Daphnia magna exposed to TiO2nanoparticles according to size fraction [J]. Science of the Total Environment, 2010, 408(10): 2268-2272

    [27] Stanley J K, Laird J G, Kennedy A J, et al. Sublethal effects of multiwalled carbon nanotube exposure in the invertebrate Daphnia magna [J]. Environmental Toxicology and Chemistry, 2016, 35(1): 200-204

    [28] Lovern S B, Klaper R. Daphnia magna mortality when exposed to titaniun dioxide and fullerene (C60) nanoparticles [J]. Environmental Toxicology and Chemistry, 2006, 25(4): 1132-1137

    [29] Zhao S Q, Wang Q Q, Zhao Y L, et al. Toxicity and translocation of graphene oxide in Arabidopsis thaliana [J]. Environmental Toxicology and Pharmacology, 2015, 39(1): 145-156

    [30] Arndt D A, Moua M, Chen J, et al. Core structure and surface functionalization of carbon nanomaterials alter impacts to daphnid mortality, reproduction, and growth: Acute assays do not predict chronic exposure impacts [J]. Environmental Science & Technology, 2013, 47(16): 9444-9452

    [31] Mendon?a E, Diniz M, Silva L, et al. Effects of diamond nanoparticle exposure on the internal structure and reproduction of Daphnia magna [J]. Journal of Hazardous Materials, 2011, 186(1): 265-271

    [32] 范文宏, 劉通, 史志偉, 等. 立方體和八面體微/納米氧化亞銅對大型水蚤(Daphnia magna)的氧化脅迫和生理損傷[J]. 生態(tài)毒理學報, 2016, 11(5): 40-48

    Fan W H, Liu T, Shi Z W, et al. Oxidative stress and physiological damage of cubic and octahedral Cu2O micro/nanocrystals to Daphnia magna [J]. Asian Journal of Ecotoxicology, 2016, 11(5): 40-48 (in Chinese).

    [33] Jacobasch C, Volker C, Giebner S, et al. Long-term effects of nanoscaled titanium dioxide on the cladoceran Daphnia magna over six generations [J]. Environmental Pollution, 2014, 186: 180-186

    [34] Heinlaan M, Kahru A, Kasemets K, et al. Changes in the Daphnia magna midgut upon ingestion of copper oxide nanoparticles: A transmission electron microscopy study [J]. Water Research, 2011, 45(1): 179-190

    [35] Petersen E J, Pinto R A, Mai D J, et al. Influence of polyethyleneimine graftings of multi-walled carbon nanotubes on their accumulation and elimination by and toxicity to Daphnia magna [J]. Environmental Science & Technology, 2011, 45(3): 1133-1138

    TheToxicEffectsofGrapheneOxideonCrustaceanDaphniamagna

    Shi Liu, Wang Dong, Zhang Ying*, Cao Di, Meng Tiantian, Guo Xi, Zhou Jiti

    Key Laboratory of Industrial Ecology and Environmental Engineering (MOE), School of Environmental Science and Technology, Dalian University of Technology, Dalian 116024, China

    10.7524/AJE.1673-5897.20170114007

    2017-01-14錄用日期2017-03-30

    1673-5897(2017)3-416-09

    X171.5

    A

    張瑛(1972-),女,博士,副教授,主要研究方向為水生態(tài)風險評價及健康風險評價。

    國家自然科學基金項目(21477014,21261140334);中央高?;究蒲袠I(yè)務(wù)費專項資金資助項目

    石柳(1991-),女,碩士研究生,研究方向為水生態(tài)風險評價,E-mail: shiliumail@163.com;

    *通訊作者(Corresponding author), E-mail: yzhang@dlut.edu.cn

    石柳, 王棟, 張瑛, 等. 氧化石墨烯對大型溞的生物毒性效應(yīng)研究[J]. 生態(tài)毒理學報,2017, 12(3): 416-424

    Shi L, Wang D, Zhang Y, et al. The toxic effects of graphene oxide on crustacean Daphnia magna [J]. Asian Journal of Ecotoxicology, 2017, 12(3): 416-424 (in Chinese)

    猜你喜歡
    頭胎納米材料毒性
    武器中的納米材料
    學與玩(2022年8期)2022-10-31 02:41:56
    二維納米材料在腐蝕防護中的應(yīng)用研究進展
    二孩家庭存在的教育困境與有效策略研究
    魅力中國(2020年28期)2020-12-08 06:31:34
    動物之最——毒性誰最強
    不同月齡荷斯坦牛產(chǎn)奶量的研究
    頭胎沒奶水不代表二胎也沒有
    親子(2016年8期)2016-10-25 16:11:03
    生二胎和生頭胎有啥不一樣嗎?
    MoS2納米材料的制備及其催化性能
    RGD肽段連接的近紅外量子點對小鼠的毒性作用
    PM2.5中煤煙聚集物最具毒性
    成人午夜精彩视频在线观看| 七月丁香在线播放| 欧美黑人精品巨大| 两个人看的免费小视频| 老司机亚洲免费影院| 大片电影免费在线观看免费| 国产 一区精品| 亚洲天堂av无毛| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 99国产综合亚洲精品| 亚洲成色77777| 精品少妇黑人巨大在线播放| 国产精品久久久人人做人人爽| 亚洲人成网站在线观看播放| 精品一品国产午夜福利视频| 国产免费又黄又爽又色| 国产午夜精品一二区理论片| 国产精品久久久久久精品电影小说| 亚洲欧美清纯卡通| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 精品国产一区二区三区四区第35| 在线观看一区二区三区激情| 欧美在线黄色| 久久婷婷青草| 久久久久精品人妻al黑| 99精国产麻豆久久婷婷| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 男女边摸边吃奶| 国产成人精品久久二区二区91 | 亚洲av电影在线进入| 国产在线免费精品| 性高湖久久久久久久久免费观看| 99国产精品免费福利视频| 亚洲,欧美,日韩| 欧美激情极品国产一区二区三区| 国产熟女欧美一区二区| 亚洲七黄色美女视频| 交换朋友夫妻互换小说| 1024视频免费在线观看| 丝袜人妻中文字幕| 国产黄色免费在线视频| 丝袜人妻中文字幕| 男人操女人黄网站| 日韩大码丰满熟妇| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 超色免费av| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 国产熟女午夜一区二区三区| 国产极品粉嫩免费观看在线| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 又大又黄又爽视频免费| 少妇人妻 视频| 十分钟在线观看高清视频www| 国产国语露脸激情在线看| 亚洲国产av影院在线观看| 最新在线观看一区二区三区 | 在线看a的网站| 国产免费福利视频在线观看| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o | 1024视频免费在线观看| 电影成人av| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 这个男人来自地球电影免费观看 | 国产精品熟女久久久久浪| 又黄又粗又硬又大视频| 2021少妇久久久久久久久久久| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 久久 成人 亚洲| 中文字幕高清在线视频| 99久久综合免费| 国产免费一区二区三区四区乱码| 午夜日韩欧美国产| 久久久久久久久免费视频了| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 国产 一区精品| 日本wwww免费看| 国产精品亚洲av一区麻豆 | 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 丝袜喷水一区| 亚洲第一av免费看| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 欧美在线黄色| 国产成人午夜福利电影在线观看| 亚洲久久久国产精品| 欧美日韩综合久久久久久| 男女免费视频国产| av.在线天堂| 麻豆av在线久日| 黄片无遮挡物在线观看| 中文欧美无线码| 欧美日韩福利视频一区二区| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 成人国产av品久久久| 大话2 男鬼变身卡| 日韩一本色道免费dvd| 天天操日日干夜夜撸| 国产精品成人在线| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 性少妇av在线| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| av天堂久久9| 综合色丁香网| 一本久久精品| 少妇 在线观看| www.自偷自拍.com| 亚洲欧美色中文字幕在线| 天天影视国产精品| 国产av一区二区精品久久| 人妻一区二区av| 宅男免费午夜| 成人免费观看视频高清| 女人久久www免费人成看片| 国产伦人伦偷精品视频| 人成视频在线观看免费观看| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 国产av国产精品国产| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 在现免费观看毛片| 一区二区三区激情视频| 亚洲av成人不卡在线观看播放网 | 亚洲精品乱久久久久久| 色吧在线观看| 夫妻午夜视频| 久久97久久精品| 美国免费a级毛片| 国产精品99久久99久久久不卡 | 视频在线观看一区二区三区| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 成人三级做爰电影| 久久久精品94久久精品| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 日韩欧美精品免费久久| 麻豆乱淫一区二区| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 男人添女人高潮全过程视频| 久久精品国产亚洲av涩爱| 成人亚洲精品一区在线观看| 伦理电影大哥的女人| 中文天堂在线官网| 婷婷色综合大香蕉| 色综合欧美亚洲国产小说| 大片电影免费在线观看免费| 观看美女的网站| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 青春草国产在线视频| 久久久久久久国产电影| 亚洲精品一二三| 99re6热这里在线精品视频| 国产av精品麻豆| 一级片免费观看大全| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频 | 日本91视频免费播放| 亚洲国产看品久久| 久久精品国产亚洲av涩爱| 天堂中文最新版在线下载| 欧美精品一区二区免费开放| 亚洲成国产人片在线观看| 久久ye,这里只有精品| 久久青草综合色| 老司机亚洲免费影院| 欧美成人精品欧美一级黄| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 亚洲视频免费观看视频| 叶爱在线成人免费视频播放| 国产精品国产三级专区第一集| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 精品少妇久久久久久888优播| 美国免费a级毛片| 热re99久久精品国产66热6| 久久人人97超碰香蕉20202| 赤兔流量卡办理| 精品福利永久在线观看| 国产麻豆69| 天堂8中文在线网| 国产精品99久久99久久久不卡 | 街头女战士在线观看网站| 亚洲美女视频黄频| 国产精品一区二区在线不卡| 又黄又粗又硬又大视频| 国产精品久久久久久久久免| 国产精品香港三级国产av潘金莲 | 国产男女超爽视频在线观看| 最新的欧美精品一区二区| 成人国语在线视频| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| av不卡在线播放| 久久久久久久国产电影| 亚洲,欧美精品.| 国产成人精品无人区| 视频区图区小说| 男女国产视频网站| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 日韩中文字幕欧美一区二区 | 午夜影院在线不卡| 不卡视频在线观看欧美| 国产精品偷伦视频观看了| 欧美中文综合在线视频| 嫩草影院入口| 在线观看www视频免费| 日韩一区二区视频免费看| 黑丝袜美女国产一区| 欧美日韩视频精品一区| 啦啦啦在线观看免费高清www| 久久精品国产综合久久久| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 亚洲视频免费观看视频| a级毛片在线看网站| 亚洲国产欧美在线一区| 一区二区三区乱码不卡18| 男人舔女人的私密视频| 欧美人与善性xxx| 51午夜福利影视在线观看| 日本一区二区免费在线视频| www.熟女人妻精品国产| 一区二区三区乱码不卡18| 晚上一个人看的免费电影| 1024香蕉在线观看| 久久精品国产亚洲av高清一级| 精品久久久久久电影网| 我的亚洲天堂| 母亲3免费完整高清在线观看| av在线观看视频网站免费| 日日撸夜夜添| 亚洲色图综合在线观看| 婷婷色av中文字幕| 日韩视频在线欧美| 国产熟女欧美一区二区| 国产极品粉嫩免费观看在线| 国产99久久九九免费精品| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 少妇精品久久久久久久| 久久精品人人爽人人爽视色| 日本av免费视频播放| 大码成人一级视频| 亚洲国产最新在线播放| 丝袜喷水一区| 中文天堂在线官网| 国产一区二区 视频在线| 色婷婷久久久亚洲欧美| av在线app专区| 亚洲av日韩精品久久久久久密 | 欧美黄色片欧美黄色片| 男女边摸边吃奶| 成人三级做爰电影| 免费日韩欧美在线观看| 亚洲少妇的诱惑av| 成人亚洲精品一区在线观看| 看非洲黑人一级黄片| 天美传媒精品一区二区| 少妇人妻精品综合一区二区| 秋霞伦理黄片| 亚洲精品aⅴ在线观看| 日韩中文字幕视频在线看片| 99久久99久久久精品蜜桃| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 午夜福利,免费看| 一区二区三区精品91| 亚洲国产精品一区三区| 久久久久国产精品人妻一区二区| 欧美变态另类bdsm刘玥| 一级片免费观看大全| 欧美中文综合在线视频| 老司机在亚洲福利影院| 国产淫语在线视频| 亚洲av欧美aⅴ国产| 日本vs欧美在线观看视频| 99久久99久久久精品蜜桃| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 精品少妇黑人巨大在线播放| 免费人妻精品一区二区三区视频| 国产一区亚洲一区在线观看| 2021少妇久久久久久久久久久| 一个人免费看片子| 国产免费福利视频在线观看| 9色porny在线观看| 飞空精品影院首页| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 国产成人91sexporn| 91精品国产国语对白视频| 国产野战对白在线观看| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 精品午夜福利在线看| 水蜜桃什么品种好| 午夜影院在线不卡| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 国产精品熟女久久久久浪| 青春草视频在线免费观看| 大话2 男鬼变身卡| 啦啦啦在线观看免费高清www| 国产老妇伦熟女老妇高清| 日韩精品免费视频一区二区三区| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 日韩大片免费观看网站| 亚洲国产欧美网| 嫩草影视91久久| 亚洲成色77777| 色婷婷av一区二区三区视频| 亚洲国产最新在线播放| 国产成人系列免费观看| 男女下面插进去视频免费观看| 一级片'在线观看视频| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 十八禁人妻一区二区| 欧美国产精品一级二级三级| 亚洲精品日本国产第一区| 极品少妇高潮喷水抽搐| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 亚洲国产欧美一区二区综合| 丝袜人妻中文字幕| 黄片播放在线免费| 晚上一个人看的免费电影| 性高湖久久久久久久久免费观看| 国产一区二区在线观看av| netflix在线观看网站| 91成人精品电影| 国产福利在线免费观看视频| www.精华液| 麻豆乱淫一区二区| 黄片小视频在线播放| 婷婷色综合大香蕉| 黄色毛片三级朝国网站| 涩涩av久久男人的天堂| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 国产精品免费大片| 亚洲五月色婷婷综合| 91精品三级在线观看| 操出白浆在线播放| 老司机深夜福利视频在线观看 | 久久午夜综合久久蜜桃| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 国产午夜精品一二区理论片| av在线观看视频网站免费| av在线播放精品| 一个人免费看片子| 一级片免费观看大全| 丰满乱子伦码专区| 久久人人爽人人片av| 国产欧美亚洲国产| 日韩大片免费观看网站| 曰老女人黄片| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 亚洲精品日本国产第一区| 久久天堂一区二区三区四区| 成人黄色视频免费在线看| 国产福利在线免费观看视频| 色婷婷av一区二区三区视频| 9热在线视频观看99| 欧美黄色片欧美黄色片| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 少妇被粗大的猛进出69影院| 街头女战士在线观看网站| 91精品伊人久久大香线蕉| 精品一品国产午夜福利视频| 69精品国产乱码久久久| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 久热这里只有精品99| 只有这里有精品99| 91精品伊人久久大香线蕉| h视频一区二区三区| 在线观看免费日韩欧美大片| 91精品伊人久久大香线蕉| 国产成人系列免费观看| 日韩一本色道免费dvd| 毛片一级片免费看久久久久| 99久久人妻综合| 黄频高清免费视频| 精品一区二区三区av网在线观看 | 国产精品女同一区二区软件| 国产精品99久久99久久久不卡 | 极品人妻少妇av视频| 亚洲国产精品成人久久小说| 午夜福利一区二区在线看| 久久精品亚洲av国产电影网| av国产久精品久网站免费入址| 日韩欧美一区视频在线观看| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 黄色毛片三级朝国网站| 国产免费又黄又爽又色| 国产精品成人在线| 好男人视频免费观看在线| 国产又爽黄色视频| 黄片无遮挡物在线观看| 最近手机中文字幕大全| 亚洲,欧美精品.| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 热99久久久久精品小说推荐| bbb黄色大片| 九色亚洲精品在线播放| 欧美日本中文国产一区发布| 少妇的丰满在线观看| 97精品久久久久久久久久精品| 精品酒店卫生间| 美女扒开内裤让男人捅视频| 中文字幕制服av| 美女大奶头黄色视频| 国产av国产精品国产| av在线老鸭窝| 男人操女人黄网站| 中文字幕精品免费在线观看视频| kizo精华| 色吧在线观看| 秋霞在线观看毛片| 国产高清不卡午夜福利| 久久久久人妻精品一区果冻| 亚洲精品中文字幕在线视频| 你懂的网址亚洲精品在线观看| av天堂久久9| 欧美av亚洲av综合av国产av | 亚洲色图综合在线观看| 欧美在线黄色| 99精品久久久久人妻精品| 国产精品熟女久久久久浪| 啦啦啦 在线观看视频| 午夜激情久久久久久久| 999久久久国产精品视频| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 精品卡一卡二卡四卡免费| kizo精华| 成人三级做爰电影| 18禁动态无遮挡网站| 国产成人精品无人区| 成人漫画全彩无遮挡| 亚洲精品一区蜜桃| 一级片免费观看大全| 少妇的丰满在线观看| 最近2019中文字幕mv第一页| 色94色欧美一区二区| 国产精品三级大全| 亚洲图色成人| 欧美日韩成人在线一区二区| 老司机影院成人| 午夜福利在线免费观看网站| 99久久综合免费| 国产亚洲av高清不卡| 人体艺术视频欧美日本| 青青草视频在线视频观看| 日韩精品免费视频一区二区三区| 国产成人91sexporn| 妹子高潮喷水视频| 午夜福利网站1000一区二区三区| av国产精品久久久久影院| 日韩欧美一区视频在线观看| 免费不卡黄色视频| 黄色 视频免费看| 国产精品久久久久久人妻精品电影 | 高清黄色对白视频在线免费看| 国产1区2区3区精品| 久久久欧美国产精品| 久久久久视频综合| 国产深夜福利视频在线观看| 十八禁人妻一区二区| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 国产高清不卡午夜福利| 国产av国产精品国产| kizo精华| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 18禁动态无遮挡网站| 免费高清在线观看视频在线观看| 免费日韩欧美在线观看| 欧美最新免费一区二区三区| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 考比视频在线观看| 欧美少妇被猛烈插入视频| 美女视频免费永久观看网站| 永久免费av网站大全| 精品久久久精品久久久| 不卡视频在线观看欧美| 国产精品三级大全| 日日啪夜夜爽| 美女主播在线视频| 色婷婷久久久亚洲欧美| 久久精品人人爽人人爽视色| 中国国产av一级| 男人添女人高潮全过程视频| 国产国语露脸激情在线看| 美国免费a级毛片| 一级爰片在线观看| av.在线天堂| 亚洲成国产人片在线观看| 久久久久网色| 精品一品国产午夜福利视频| 国产熟女欧美一区二区| 少妇人妻久久综合中文| 亚洲欧美清纯卡通| 少妇精品久久久久久久| 男女之事视频高清在线观看 | 久久鲁丝午夜福利片| 国产亚洲欧美精品永久| av在线老鸭窝| 日本wwww免费看| 99久久人妻综合| 国产熟女午夜一区二区三区| 麻豆乱淫一区二区| 国产免费福利视频在线观看| 久久精品国产综合久久久| 成年人免费黄色播放视频| 国产精品一区二区在线不卡| 精品国产一区二区三区四区第35| 色婷婷av一区二区三区视频| 欧美成人精品欧美一级黄| 一区二区三区精品91| 国产精品99久久99久久久不卡 | 一区二区三区四区激情视频| 午夜福利一区二区在线看| 国产精品人妻久久久影院| 丝瓜视频免费看黄片| 婷婷色麻豆天堂久久| 成年人午夜在线观看视频| 久久精品国产亚洲av高清一级| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 最新在线观看一区二区三区 | 啦啦啦视频在线资源免费观看| 国产毛片在线视频| 欧美中文综合在线视频| 亚洲第一av免费看| 国产精品亚洲av一区麻豆 | 久久精品久久久久久噜噜老黄| 热re99久久精品国产66热6| 麻豆av在线久日| 又黄又粗又硬又大视频| 天天添夜夜摸| 国产1区2区3区精品| 久久精品人人爽人人爽视色| 久久韩国三级中文字幕| videosex国产| 毛片一级片免费看久久久久| 黄色一级大片看看| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 捣出白浆h1v1| 日本av手机在线免费观看| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 国产亚洲最大av| h视频一区二区三区| 国产男女内射视频| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 大片电影免费在线观看免费| 亚洲第一av免费看| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 一个人免费看片子| 国产精品人妻久久久影院| 国产一区有黄有色的免费视频| 高清av免费在线| 欧美黑人精品巨大| 午夜久久久在线观看| 亚洲国产看品久久| 在线观看三级黄色| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 国产成人欧美在线观看 | 国产1区2区3区精品| 性高湖久久久久久久久免费观看| 久久精品久久精品一区二区三区| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 综合色丁香网| 在线天堂中文资源库| 黄色毛片三级朝国网站| 久久国产精品大桥未久av| 高清欧美精品videossex| 国产成人精品无人区| 国产精品欧美亚洲77777| 久久久精品免费免费高清| 激情五月婷婷亚洲| 午夜福利,免费看| 中国三级夫妇交换| 日韩视频在线欧美| 男女国产视频网站| 尾随美女入室| xxxhd国产人妻xxx| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 免费观看av网站的网址| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 久久久久久久久久久久大奶| 少妇人妻精品综合一区二区| 国产精品成人在线| 国产精品蜜桃在线观看| 国产麻豆69| 男女午夜视频在线观看| 在线观看三级黄色| 日韩欧美一区视频在线观看| 91老司机精品| 波野结衣二区三区在线| 99久国产av精品国产电影| 国产精品 国内视频| 秋霞在线观看毛片| 观看av在线不卡| 精品人妻一区二区三区麻豆| 亚洲国产欧美在线一区| 久热这里只有精品99| 成人影院久久| 不卡视频在线观看欧美| 99久久综合免费| 国产成人精品久久久久久| 一二三四在线观看免费中文在| 欧美日韩成人在线一区二区| 久久久久久久大尺度免费视频| 精品国产一区二区久久| 久久久久久久国产电影| 十分钟在线观看高清视频www| 精品视频人人做人人爽| 久久久久久久久免费视频了| 90打野战视频偷拍视频| 日本欧美国产在线视频| 亚洲av国产av综合av卡| 国产一级毛片在线|