EB病毒感染對兒童傳染性單核細(xì)胞增多癥T細(xì)胞亞群的影響

崔強(qiáng)華,孫 莉,吳 琳,方 萍

(1.陜西省漢中市人民醫(yī)院兒科 723000；2.西安交通大學(xué)第二附屬醫(yī)院呼吸內(nèi)科，西安 710004)

論著·臨床研究doi:10.3969/j.issn.1671-8348.2017.25.012

EB病毒感染對兒童傳染性單核細(xì)胞增多癥T細(xì)胞亞群的影響

崔強(qiáng)華1,孫 莉1,吳 琳1,方 萍2

(1.陜西省漢中市人民醫(yī)院兒科 723000；2.西安交通大學(xué)第二附屬醫(yī)院呼吸內(nèi)科，西安 710004)

目的觀察EB病毒(EBV)感染對兒童傳染性單核細(xì)胞增多癥(IM)T細(xì)胞亞群的影響。方法選取2013年1月至2016年1月陜西省漢中市人民醫(yī)院兒科收治的80例IM患兒作為研究對象，所有患兒均接受抗病毒治療，觀察患兒治療后的EBV-DNA轉(zhuǎn)陰率。比較EBV-DNA陽性及陰性患兒的T細(xì)胞亞群分布，分析EBV-DNA未轉(zhuǎn)陰的相關(guān)因素。結(jié)果經(jīng)過治療后，67例(83.75%)患兒EBV-DNA轉(zhuǎn)陰。治療后，EBV-DNA陰性組CD3+和CD8+比例低于EBV-DNA陽性組，CD4+比例和CD4+/CD8+高于EBV-DNA陽性組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。對患兒EBV-DNA未轉(zhuǎn)陰的相關(guān)因素進(jìn)行分析：性別、白細(xì)胞計數(shù)(WBC)及淋巴細(xì)胞計數(shù)與EBV-DNA轉(zhuǎn)陰無相關(guān)性(P>0.05)，干擾素的使用、年齡及初始Ct與EBV-DNA未轉(zhuǎn)陰具有相關(guān)性(P<0.05)。結(jié)論EB病毒感染可以引起IM患兒T細(xì)胞亞群的紊亂，臨床上應(yīng)采取積極的抗病毒治療。

皰疹病毒4型，人；傳染性單核細(xì)胞增多癥；T細(xì)胞亞群

傳染性單核細(xì)胞增多癥(infectious mononucleosis，IM)是由EB病毒(EBV)感染導(dǎo)致的急性傳染病，患者以兒童和青少年為主，但部分患兒可能出現(xiàn)爆發(fā)性肝炎、心肌炎、噬血細(xì)胞綜合征等嚴(yán)重的并發(fā)癥[1-2]。研究發(fā)現(xiàn)，IM患兒存在免疫功能異常，患兒自然殺傷細(xì)胞(NK)和T細(xì)胞功能過度激活，導(dǎo)致免疫性損傷[3]。本研究旨在觀察EBV感染對IM患兒T細(xì)胞亞群的影響。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2013年1月至2016年1月陜西省漢中市人民醫(yī)院收治的80例IM患兒作為研究對象，其中男45例，女35例，年齡2～10歲，平均(5.9±2.4)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)[4]：(1)所有患兒均以發(fā)熱、咽炎及扁桃體炎等癥狀入院，并經(jīng)過血常規(guī)及白細(xì)胞分類計數(shù)檢查；(2)患兒血清EBV衣殼抗原IgM抗體(EB-VCA-IgM)檢測陽性；(3)患兒家長均自愿參與本研究，并簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并有心肌炎、肝炎、溶血性貧血及血小板減少的病情危急的患兒；(2)入院前2周內(nèi)有免疫調(diào)節(jié)劑及糖皮質(zhì)激素使用史的患兒。選取健康兒童40例作為空白組，男22例，女18例，年齡2～11歲，平均(5.9±2.7)歲。兩組兒童的性別、年齡差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2治療方法 所有患兒在基礎(chǔ)護(hù)理及對癥治療(臥床休息、降低體溫及預(yù)防感染等)的基礎(chǔ)上使用更昔洛韋(亞寶藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司，批號：151201)10 mg/(kg·d)靜脈滴注，部分患兒聯(lián)合應(yīng)用注射用重組人干擾素αIb(深圳科興生物工程有限公司，批號：201607054)肌內(nèi)注射，10～30萬U每天1次，或者30～50萬U隔日1次?；純褐委煶掷m(xù)7 d。

1.3觀察指標(biāo) (1)所有患兒在治療前及治療7 d后檢測EB病毒DNA(EBV-DNA)水平。EBV-DNA檢查采用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)，引物由上海生工生物工程股份有限公司合成，ABI Prism7300熒光定量PCR儀購自上海迪普生物技術(shù)有限公司。將咽拭子或全血標(biāo)本按照說明書進(jìn)行處理和DNA提取，并加入26 μL的DNA檢測體系中，將反應(yīng)管放入樣品槽中進(jìn)行擴(kuò)增及檢測：50 ℃預(yù)反應(yīng)2 min，94 ℃預(yù)變性5 min，每個循環(huán)包括94 ℃10 s，60 ℃ 40 s，共進(jìn)行50個循環(huán)。標(biāo)本熒光強(qiáng)度曲線達(dá)到閾值時所需循環(huán)數(shù)(Ct值)≤39為陽性，記錄患兒治療前后的Ct值。(2)比較治療7 d后EBV-DNA陽性及陰性患兒的臨床資料，包括年齡、性別、初始的Ct值、白細(xì)胞計數(shù)(WBC)及淋巴細(xì)胞計數(shù)以及治療過程中干擾素的使用情況。分析患兒EBV-DNA未轉(zhuǎn)陰的影響因素。(3)患兒在治療前及治療7 d后均采集空腹靜脈血5 mL，對照組在疫苗接種前采集空腹血5 mL，加入抗凝試管中。取100 μL抗凝血置于計數(shù)管內(nèi)，檢測CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、CD19+及NK細(xì)胞(CD16+CD56+)，試劑盒由貝克曼庫爾特商貿(mào)(中國)有限公司提供。比較不同時刻EBV-DNA陽性及陰性患兒的T淋巴細(xì)胞亞群變化。

2 結(jié) 果

2.1EBV-DNA陽性及陰性患兒的基線資料比較 治療7 d后，67例(83.75%)患兒EBV-DNA轉(zhuǎn)陰。EBV-DNA陽性及陰性患兒的性別、初始WBC及初始淋巴細(xì)胞計數(shù)的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，干擾素的使用、年齡及初始Ct值的差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

2.2患兒EBV-DNA未轉(zhuǎn)陰的相關(guān)因素分析 對患兒EBV-DNA未轉(zhuǎn)陰的相關(guān)因素進(jìn)行分析：性別、WBC及淋巴細(xì)胞計數(shù)與EBV-DNA轉(zhuǎn)陰無顯著相關(guān)性(P>0.05)，干擾素的使用、年齡及初始Ct與EBV-DNA未轉(zhuǎn)陰有相關(guān)性(P<0.05)，見表2。

2.3患兒治療前后外周血T淋巴細(xì)胞亞群變化 與空白組相比，兩組患兒治療前CD3+和CD8+比例升高，CD4+、CD19+、CD16+CD56+比例和CD4+/CD8+降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。與治療前相比，患兒治療7 d后，CD3+和CD8+比例降低，CD4+、CD19+、CD16+CD56+比例和CD4+/CD8+升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。治療后，觀察組的CD3+和CD8+比例低于對照組，CD4+、CD19+、CD16+CD56+比例和CD4+/CD8+高于對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；治療后CD16+CD56+的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，見表3。

表1 EBV-DNA陽性及陰性患兒的基線資料比較

表2 患兒EBV-DNA未轉(zhuǎn)陰的相關(guān)因素分析

表3 各組的淋巴細(xì)胞變化

g*：P<0.05，與空白組比較；**：P<0.05，與EBV-DNA陽性組比較；#:P<0.05，與治療前比較

3 討 論

IM是由EBV感染引起的單核-巨噬細(xì)胞系統(tǒng)的急性增生性疾病，小兒較易發(fā)。近年來，IM的發(fā)病率呈現(xiàn)上升趨勢，且診斷具有一定的困難，應(yīng)該引起臨床上的重視[5]。目前，臨床上關(guān)于EBV感染及抗病毒治療在IM患兒中的療效尚存在一定的爭議[6-7]。但是大量臨床及基礎(chǔ)研究證明IM患兒存在繼發(fā)性的免疫損傷，故抗病毒藥物單獨(dú)應(yīng)用效果不理想。

本研究選取40例健康兒童作為對照組，兩組IM患兒的淋巴細(xì)胞均明顯增加，CD4+/CD8+比例下降，患兒出現(xiàn)免疫功能紊亂。對這一結(jié)果進(jìn)行分析：B淋巴細(xì)胞是EBV的主要潛伏細(xì)胞，病毒增殖時細(xì)胞表面可表達(dá)多種抗原，并經(jīng)抗原提呈細(xì)胞提呈后激活CD8+淋巴細(xì)胞，引發(fā)細(xì)胞毒效應(yīng)，殺傷受到感染的B淋巴細(xì)胞，導(dǎo)致CD4+淋巴細(xì)胞大量消耗，外周血中CD4+細(xì)胞數(shù)量下降，患兒出現(xiàn)CD4+/CD8+下降甚至倒置[8]。CD19+是B淋巴細(xì)胞的表面標(biāo)記，本研究中，除T細(xì)胞亞群分布發(fā)生改變外，IM患兒的B淋巴細(xì)胞顯著降低，盡管EBV不能直接作用于B淋巴細(xì)胞，但是可以通過IM急性期過度增殖的T細(xì)胞殺傷B細(xì)胞，導(dǎo)致B淋巴細(xì)胞免疫功能缺陷[9-10]。NK細(xì)胞在抗病毒免疫中發(fā)揮重要的作用，與對照組兒童相比，IM患兒NK細(xì)胞比例降低，但是經(jīng)過治療后患兒的NK細(xì)胞無明顯上升，這一結(jié)果說明NK細(xì)胞在IM患兒病毒復(fù)制期的免疫作用有限。

熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測EBV-DNA是近年來發(fā)展的技術(shù)，可以定量反映體內(nèi)的EBV-DNA水平，并準(zhǔn)確反映EBV感染和病毒的復(fù)制情況。EBV-DNA的載量與器官損害程度及疾病種類、疾病的嚴(yán)重程度及病死率呈正相關(guān)，臨床上可以根據(jù)EBV-DNA拷貝數(shù)大小來判斷病情嚴(yán)重程度[11-12]。經(jīng)過治療后，患兒的EBV-DNA滴度明顯下降，癥狀好轉(zhuǎn)，67例患兒EBV-DNA轉(zhuǎn)陰，但是13例患兒的EBV-DNA仍為陽性；EBV-DNA陰性患兒的CD4+/CD8+比例顯著高于陽性患兒，EBV-DNA轉(zhuǎn)陰后患兒免疫功能恢復(fù)。盡管EBV-DNA陽性患兒治療后的T細(xì)胞亞群恢復(fù)水平不及陰性患兒，但仍較治療前明顯好轉(zhuǎn)。其原因為本研究所有患兒均接受積極的抗病毒治療，更昔洛韋是臨床常用的廣譜抗病毒藥物，能夠有效抑制病毒復(fù)制[13]。

對EBV-DNA未轉(zhuǎn)陰的相關(guān)因素進(jìn)行分析：干擾素使用、年齡及初始Ct與EBV-DNA轉(zhuǎn)陰具有顯著相關(guān)性。初始Ct值反映患兒體內(nèi)病毒復(fù)制水平，與疾病嚴(yán)重程度相關(guān)；3歲以下患兒的免疫系統(tǒng)尚未發(fā)育完善，故恢復(fù)較慢；干擾素的抗病毒作用主要為廣譜的病毒抑制作用，能夠誘導(dǎo)細(xì)胞對感染病毒產(chǎn)生抗性，干擾細(xì)胞內(nèi)病毒基因的轉(zhuǎn)錄及蛋白的翻譯，從而限制或xg抑制病毒的復(fù)制；同時，干擾素對細(xì)胞免疫及體液免疫均具有調(diào)節(jié)作用，對巨噬細(xì)胞及NK細(xì)胞的免疫功能也有一定的增強(qiáng)作用[14-15]。上述結(jié)果說明，對于病情嚴(yán)重、低齡或免疫功能較低下的患兒，應(yīng)該酌情應(yīng)用干擾素。

綜上所述，EBV感染可以引起IM患兒T細(xì)胞亞群的紊亂，臨床上應(yīng)采取積極的抗病毒治療。

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InfluenceofEpstein-BarrvirusinfectiononTcellsubsetinchildrenwithinfectiousmononucleosis*

CuiQianghua1,SunLi1,WuLin1，F(xiàn)angPing2

(1.DepartmentofPediatrics,HanzhongMunicipalPeople′sHospital,Hanzhong,Shaanxi723000,China；2.DepartmentofRespirationMedicineSecondAffiliatedHospitalofXi′anJiaotongUniversity,Xi′an,Shaanxi710004,China)

ObjectiveTo observe the influence of Epstein-Barr virus(EBV) infection on T cell subsets in children with infectious mononucleosis(IM).MethodsEighty children patients with IM in the Hanzhong Municipal People′s Hospital from January 2013 to January 2016 were chosen as the study subjects and received the anti-virus therapy.The negative conversion rate of EBV-DNA after treatment was observed.The distributions of T cell subsets were compared between the children patients with EBV-DNA positive and patients with EBV-DNA negative.The related factors of EBV-DNA non-negative conversion were analyzed.ResultsAfter treatment,67 children cases (83.75%) were EBV-DNA negative conversion.The proportions of CD3+and CD8+after treatment in the EBV-DNA negative group were lower than those in the EBV-DNA positive group,and the proportion of CD4+and CD4+/CD8+were higher than those in the EBV DNA positive group,the difference had statistical significance (P<0.05).In the analysis on the related factors in the children patients with EBV DNA non-negative conversion,the gender,WBC count and lymphocyte count had no significant correlation with EBV-DNA negative conversion(P>0.05),while interferon use,age and initial Ct demonstrated significant correlation with EBV-DNA non-negative conversion(P<0.05).ConclusionEBV infection can lead to disturbance of T cell subsets in children with IM,so clinic should adopt an active anti-virus treatment.

herpesvirus 4,human；infectious mononucleosis;T cell subsets

R725

A

1671-8348(2017)25-3491-03

2016-12-13

2017-06-11)

國家自然科學(xué)基金資助項目(81000009)。

崔強(qiáng)華(1970-)，本科，副主任醫(yī)師，主要從事兒童呼吸疾病方面的研究。