癲癇清顆粒對(duì)海人藻酸致癲癇大鼠海馬組織中IL-6含量及GFAP、Iba-1表達(dá)的影響Δ

齊越，李紀(jì)彤，姜鴻，王光函，劉小虎，向紹杰，秦文艷，韋丹，朱竟赫，賈冬#（.遼寧省中醫(yī)藥研究院藥理室，沈陽(yáng) 004；.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬第三醫(yī)院綜合病房，沈陽(yáng) 00；.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)省部共建中醫(yī)臟象理論及應(yīng)用教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，沈陽(yáng) 0847）

癲癇清顆粒對(duì)海人藻酸致癲癇大鼠海馬組織中IL-6含量及GFAP、Iba-1表達(dá)的影響Δ

齊越1＊，李紀(jì)彤2，姜鴻1，王光函1，劉小虎1，向紹杰1，秦文艷1，韋丹3，朱竟赫1，賈冬3#（1.遼寧省中醫(yī)藥研究院藥理室，沈陽(yáng) 110034；2.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬第三醫(yī)院綜合病房，沈陽(yáng) 110032；3.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)省部共建中醫(yī)臟象理論及應(yīng)用教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，沈陽(yáng) 110847）

目的：研究癲癇清顆粒對(duì)海人藻酸致癲癇大鼠海馬組織中白細(xì)胞介素6（IL-6）含量及膠質(zhì)纖維酸性蛋白（GFAP）、離子鈣接頭分子1（Iba-1）表達(dá)的影響，探討該藥防治癲癇的作用機(jī)制。方法：將大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組（蒸餾水）、模型組（蒸餾水）、苯妥英鈉組（0.03 g/kg，陽(yáng)性對(duì)照）和癲癇清顆粒低、中、高劑量組（4.74、9.47、18.94 g/kg，以生藥計(jì)），每組20只，每天ig給藥1次，連續(xù)7 d。末次給藥1 h后，除假手術(shù)組外的其余各組大鼠均于左側(cè)海馬CA1區(qū)單次注射海人藻酸復(fù)制癲癇模型，觀察大鼠行為學(xué)變化及死亡情況。造模24 h后，采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)大鼠海馬組織中IL-6含量，采用尼氏染色法對(duì)海馬組織神經(jīng)元進(jìn)行計(jì)數(shù)，采用免疫組化法檢測(cè)大鼠海馬組織中GFAP、Iba-1表達(dá)。結(jié)果：與假手術(shù)組比較，模型組大鼠造模后發(fā)生明顯癲癇癥狀，部分大鼠死亡；海馬組織中IL-6含量及神經(jīng)元數(shù)目明顯減少（P＜0.01），GFAP、Iba-1表達(dá)明顯增強(qiáng)（P＜0.01）。與模型組比較，各給藥組大鼠癲癇癥狀及死亡情況得到改善，而海馬組織中IL-6含量雖均不同程度升高，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；苯妥英鈉組和癲癇清顆粒中、高劑量組大鼠海馬組織神經(jīng)元個(gè)數(shù)明顯增加（P＜0.01），GFAP表達(dá)明顯降低（P＜0.01）；苯妥英鈉組和癲癇清顆粒高劑量組大鼠海馬組織中Iba-1表達(dá)明顯降低（P＜0.01）。結(jié)論：癲癇清顆?？赏ㄟ^(guò)抑制海馬組織中GFAP和Iba-1的表達(dá)、增加海馬組織中神經(jīng)元數(shù)量，從而發(fā)揮防治癲癇的作用。

癲癇清顆粒；白細(xì)胞介素6；膠質(zhì)纖維酸性蛋白；離子鈣接頭分子1；大鼠

癲癇是一種以腦內(nèi)神經(jīng)元異常反復(fù)過(guò)度放電引起的短暫性腦功能障礙綜合征，其臨床主要表現(xiàn)為肌痙攣、神志喪失、認(rèn)知功能障礙、情感運(yùn)動(dòng)障礙及感覺(jué)異常[1]。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及癲癇患者切除的結(jié)節(jié)性硬化海馬中可發(fā)現(xiàn)神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞被激活、炎性因子及其調(diào)節(jié)介質(zhì)的存在[2-4]。因此，可通過(guò)抑制膠質(zhì)細(xì)胞的活化發(fā)揮抗癲癇的作用。癲癇清顆粒為遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院的院內(nèi)制劑，前期研究發(fā)現(xiàn)其可延長(zhǎng)戊四唑及海人藻酸（Kainic acid，KA）致大鼠癲癇發(fā)作的潛伏期、降低發(fā)作分級(jí)、縮短發(fā)作持續(xù)時(shí)間、增加腦組織內(nèi)白細(xì)胞介素4（Interleukin 4，IL-4）含量[5-9]。本研究以KA致癲癇大鼠模型為研究對(duì)象，通過(guò)對(duì)模型大鼠腦組織中IL-6含量、膠質(zhì)纖維酸性蛋白（GFAP）和小膠質(zhì)細(xì)胞（MG）標(biāo)記物離子鈣接頭分子1（Iba-1）表達(dá)的測(cè)定，進(jìn)一步探討癲癇清顆?？拱d癇的藥理作用機(jī)制，為其臨床使用提供必要的藥理學(xué)基礎(chǔ)。

1 材料

1.1 儀器

DW-5腦立體定位儀（成都泰盟科技有限公司）；Neofuge 13R高速冷凍離心機(jī)（上海力申科學(xué)儀器有限公司）；ELx800酶標(biāo)儀（美國(guó)伯騰儀器有限公司）；BX51顯微鏡（日本奧林巴斯株式會(huì)社）。

1.2 藥品與試劑

癲癇清顆粒（由遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院提供，批號(hào)：20140110，規(guī)格：生藥含量為5.31 g/g）；苯妥英鈉片（天津力生制藥股份有限公司，批號(hào)：1312027，規(guī)格：每片0.1 g）；KA（美國(guó)Sigma公司，批號(hào)：MKBQ0979V，純度：＞98%）；水合氯醛（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：20100709）；IL-6酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）試劑盒（深圳市達(dá)科為生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：E3060-1406-1）；兔抗Iba-1抗體（日本W(wǎng)ako公司，批號(hào)：CTP1721）；兔抗GFAP抗體（北京博奧森生物試劑有限公司，批號(hào)：140404）；超敏過(guò)氧化酶試劑盒（福州邁新生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：1404289706）；二氨基聯(lián)苯胺顯色液（福州邁新生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：1403030031）。

1.3 動(dòng)物

SPF級(jí)Wistar大鼠120只，♂，體質(zhì)量（200±20）g，由遼寧長(zhǎng)生生物技術(shù)有限公司提供[實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（遼）2010-0001]。大鼠實(shí)驗(yàn)期間分籠飼養(yǎng)、自由飲食。

2 方法

2.1 分組與給藥

將120只大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、苯妥英鈉組（陽(yáng)性對(duì)照）和癲癇清顆粒低、中、高劑量組，每組20只。根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果并參考文獻(xiàn)[10]設(shè)置各組給藥劑量：苯妥英鈉組大鼠ig 0.03 g/kg苯妥英鈉蒸餾水溶液，癲癇清顆粒低、中、高劑量組大鼠分別按生藥計(jì)ig 4.74、9.47、18.94 g/kg癲癇清顆粒蒸餾水溶液，假手術(shù)組和模型組大鼠ig等體積的蒸餾水。給藥體積均為20 mL/kg，每日給藥1次，連續(xù)給藥7 d。

2.2 造模

[8]方法復(fù)制KA致大鼠癲癇模型。末次給藥1 h后，水合氯醛（350 mg/kg）麻醉大鼠，頭部備皮后，固定于腦立體定位儀上，常規(guī)碘酒消毒，沿顱頂中線行3～4 cm手術(shù)切口，鈍性分離骨膜，將囟門設(shè)置為零點(diǎn)，移動(dòng)微量進(jìn)樣器，向后3.00 mm，中線旁開(kāi)2.20 mm，牙科鉆輕鉆至穿破骨膜，自鉆孔表面垂直進(jìn)針約3.70 mm。除假手術(shù)組外，其余各組大鼠在3 min內(nèi)緩慢勻速注入1 μg/μL KA 1.0 μL，留針5 min；假手術(shù)組大鼠注射等體積生理鹽水。最后縫合皮膚，碘伏消毒，注意大鼠保暖。觀察并記錄大鼠的行為學(xué)變化及死亡情況。

2.3 ELISA法測(cè)定KA致癲癇大鼠海馬組織中IL-6含量

造模24 h后，各組隨機(jī)取大鼠10只，斷頭取腦，冰盤上迅速剝離海馬組織，稱質(zhì)量，按1∶9的比例用磷酸鹽緩沖液（PBS）稀釋，勻漿，在4℃條件下以離心半徑為10 cm、3 000 r/min離心20 min，取上清液，按照試劑盒說(shuō)明操作測(cè)定上清液中IL-6含量。

2.4 尼氏染色測(cè)定KA致癲癇大鼠海馬組織神經(jīng)元的表達(dá)及計(jì)數(shù)

造模24 h后，各組大鼠有不同程度死亡，將每組剩余大鼠（約5～7只）ip 3.5%水合氯醛（10 mL/kg）麻醉，待其臥倒后剪開(kāi)胸腔，暴露心臟，將輸液針經(jīng)心尖刺入左心室，右心耳處剪一小口，先用預(yù)冷生理鹽水快速灌注，待右心房流出液體變透明時(shí)，將輸液針連接至預(yù)冷的4%多聚甲醛，先快后慢灌注，直至大鼠肝臟發(fā)白、四肢及尾巴抽搐、僵硬時(shí)，斷頭取腦。4%多聚甲醛4℃固定腦組織，常規(guī)制成5 μm厚的石蠟切片。將切片脫蠟至水后浸入10 g/L甲苯胺藍(lán)溶液中染色6 min；蒸餾水浸泡5 min去除浮色，梯度乙醇脫水；再次用二甲苯透明2次，每次5 min，中性樹(shù)膠封片。將切片置于200倍顯微鏡下，觀察各組大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)細(xì)胞的染色情況；于400倍顯微鏡下進(jìn)行圖像采集，對(duì)各組大鼠腦切片海馬組織CA1區(qū)相同部位進(jìn)行神經(jīng)元計(jì)數(shù)[9]。

2.5 免疫組化法測(cè)定KA致癲癇大鼠海馬組織中GFAP、Iba-1的表達(dá)

取“2.4”項(xiàng)下5 μm厚的石蠟切片，常規(guī)脫蠟脫水，高壓修復(fù)，5%牛血清白蛋白封閉，滴加一抗，4℃過(guò)夜，PBS洗滌后，滴加超敏過(guò)氧化酶試劑盒內(nèi)的二抗，二氨基聯(lián)苯胺顯色。采用400倍光學(xué)顯微鏡采集圖片，每只大鼠取5張連續(xù)冠狀切片。采用JEOA 801D形態(tài)學(xué)圖像分析軟件分析GFAP、Iba-1的表達(dá)（若胞漿呈棕褐色，則為陽(yáng)性表達(dá)），并記錄各切片中GFAP、Iba-1的平均光密度（IOD）值。

2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以±s表示。首先對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)，符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)，多組間比較采用單因素方差分析，若方差齊則采用LSD檢驗(yàn)進(jìn)行兩兩比較，若方差不齊則采用Dunnett’s T3檢驗(yàn)進(jìn)行兩兩比較；若不符合正態(tài)分布，則采用非參數(shù)檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 大鼠行為學(xué)及死亡情況觀察結(jié)果

大鼠海馬組織內(nèi)注射KA 5 min后，出現(xiàn)排便、咀嚼、呼吸急促、胡須顫動(dòng)和面部肌肉抽搐等癥狀。約1 h后麻醉藥效果消退，除上述癥狀外大鼠逐漸出現(xiàn)翹尾、流涎、節(jié)律性點(diǎn)頭、“濕狗樣”抖動(dòng)、單側(cè)（或雙側(cè)）前肢抖動(dòng)癥狀。最后，隨著癲癇發(fā)作程度的加深，出現(xiàn)狂跑、跳躍、翻滾、頭部向硬物猛烈撞擊、全身強(qiáng)直等癲癇大發(fā)作癥狀，癥狀反復(fù)多次，并持續(xù)數(shù)小時(shí)以上。各組大鼠均有死亡情況。癲癇清顆粒組癲癇大鼠的行為學(xué)改變有減弱，死亡情況減少。假手術(shù)組、模型組、苯妥英鈉組和癲癇清顆粒低、中、高劑量組大鼠死亡只數(shù)分別為3、5、3、4、3、3只。

3.2 大鼠海馬組織中IL-6含量的測(cè)定結(jié)果

與假手術(shù)組比較，模型組大鼠海馬組織中IL-6含量明顯減少（P＜0.01）；與模型組比較，苯妥英鈉組和癲癇清顆粒各劑量組大鼠海馬組織中IL-6的含量均有一定增加，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。假手術(shù)組、模型組、苯妥英鈉組和癲癇清顆粒低、中、高劑量組大鼠海馬組織中IL-6含量分別為（2 633.00±457.73）、（1 238.72±287.51）、（1 737.75± 185.87）、（1 356.00± 340.61）、（1 524.83±272.45）、（2 206.50±381.85）pg/mL。

3.3 大鼠神經(jīng)元染色觀察及計(jì)數(shù)結(jié)果

假手術(shù)組大鼠海馬組織中神經(jīng)元細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰、排列整齊，染色質(zhì)分布均勻，可見(jiàn)豐富藍(lán)色顆粒狀的尼氏小體；與假手術(shù)組比較，模型組大鼠海馬組織中神經(jīng)元細(xì)胞結(jié)構(gòu)明顯改變，神經(jīng)元數(shù)目減少（P＜0.01），核內(nèi)染色質(zhì)凝集，尼氏小體數(shù)減少；與模型組比較，苯妥英鈉組及癲癇清顆粒各劑量組大鼠海馬組織中神經(jīng)元細(xì)胞結(jié)構(gòu)較清晰，神經(jīng)元損傷減輕，其中癲癇清顆粒中、高劑量組大鼠海馬組織神經(jīng)元個(gè)數(shù)較模型組明顯增加（P＜0.01）。染色結(jié)果見(jiàn)圖1，神經(jīng)元計(jì)數(shù)結(jié)果見(jiàn)表1。

3.4 大鼠海馬組織中GFAP、Iba-1表達(dá)的測(cè)定結(jié)果

圖1 各組大鼠海馬組織中神經(jīng)元細(xì)胞的顯微鏡圖（尼氏染色，×400）Fig 1 Microscopic images of neurons cells in hippocampus tissue of rats in each group（Nissl staining，×400）

表1 各組大鼠海馬組織中神經(jīng)元計(jì)數(shù)結(jié)果（±s）Tab 1 Results of the number of neurons in hippocampus tissue of rats in each group（±s）

表1 各組大鼠海馬組織中神經(jīng)元計(jì)數(shù)結(jié)果（±s）Tab 1 Results of the number of neurons in hippocampus tissue of rats in each group（±s）

注：與假手術(shù)組比較，＊＊P＜0.01；與模型組比較，##P＜0.01Note：vs.sham operation group，＊＊P＜0.01；vs.model group，##P＜0.01

神經(jīng)元計(jì)數(shù)，個(gè)33.02±1.52 17.64±3.19＊＊30.84±0.70##22.60±1.68 27.68±1.11##29.36±1.66##組別假手術(shù)組模型組苯妥英鈉組癲癇清顆粒低劑量組癲癇清顆粒中劑量組癲癇清顆粒高劑量組n757677

3.4.1 海馬組織中GFAP表達(dá)測(cè)定結(jié)果 假手術(shù)組大鼠海馬組織中GFAP陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)較少，胞體較小，突起及其分枝細(xì)長(zhǎng)而少，染色較弱。與假手術(shù)組比較，模型組大鼠海馬組織中GFAP陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目明顯增多，胞體增大，突起及其分枝增多且粗長(zhǎng)，染色強(qiáng)度明顯增強(qiáng)（IOD值明顯升高，P＜0.01）。與模型組比較，苯妥英鈉組及癲癇清顆粒各劑量組大鼠海馬組織GFAP陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)減少，突起及分枝亦減少，染色強(qiáng)度減弱（其中苯妥英鈉組和癲癇清顆粒中、高劑量組IOD值明顯降低，P＜0.01）。免疫組化染色圖見(jiàn)圖2，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。

3.4.2 海馬組織中Iba-1表達(dá)的測(cè)定結(jié)果 假手術(shù)組大鼠海馬組織中Iba-1陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)較少，胞體較小，突起及分枝較少，免疫染色較弱，細(xì)胞呈“靜息狀態(tài)”。與假手術(shù)組比較，模型組大鼠海馬組織中Iba-1陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)增多，胞體增大變狹長(zhǎng)狀及圓形，突起增多、變短增粗，染色加深（IOD值明顯升高，P＜0.01），細(xì)胞呈“活化狀態(tài)”。與模型組比較，苯妥英鈉組及癲癇清顆粒各劑量組大鼠海馬組織中Iba-1陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)較模型組減少，胞體減小，染色強(qiáng)度降低（其中苯妥英鈉組和癲癇清顆粒高劑量組IOD值明顯降低，P＜0.01）。免疫組化染色圖見(jiàn)圖3，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。

4 討論

神經(jīng)細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)的游離核糖體分布于粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中，光鏡下呈嗜堿性顆粒或小塊，即為尼氏小體。癲癇發(fā)作時(shí)，神經(jīng)元受損，尼氏小體的數(shù)量會(huì)減少甚至消失，影像神經(jīng)細(xì)胞的數(shù)量。因此，常根據(jù)神經(jīng)細(xì)胞的數(shù)量差異來(lái)判別神經(jīng)細(xì)胞損傷程度。苯妥英鈉除了是經(jīng)典的抗癲癇藥外，還可減輕癲癇發(fā)作時(shí)的炎癥反應(yīng)[11]，故本研究以其為陽(yáng)性對(duì)照。本研究結(jié)果顯示，苯妥英鈉和癲癇清顆粒均可升高KA致癲癇大鼠海馬組織中神經(jīng)元細(xì)胞數(shù)量，且高劑量癲癇清顆粒的作用與苯妥英鈉接近，提示癲癇清顆粒具有改善神經(jīng)元損傷的作用。

圖2 各組海馬組織中GFAP表達(dá)的切片圖（免疫組化染色，×400）Fig 2 Slice diagram of GFAP expressions in hippocampus tissue of rats in each group（immunohistochemical staining，×400）

表2 各組大鼠海馬組織中GFAP、Iba-1表達(dá)的測(cè)定結(jié)果（±s）Tab 2 Determination results of GFAP，Iba-1 expressions in hippocampus tissue of rats in each group（±s）

表2 各組大鼠海馬組織中GFAP、Iba-1表達(dá)的測(cè)定結(jié)果（±s）Tab 2 Determination results of GFAP，Iba-1 expressions in hippocampus tissue of rats in each group（±s）

注：與假手術(shù)組比較，＊＊P＜0.01；與模型組比較，##P＜0.01Note：vs.sham operation group，＊＊P＜0.01；vs.model group，##P＜0.01

組別假手術(shù)組模型組苯妥英鈉組癲癇清顆粒低劑量組癲癇清顆粒中劑量組癲癇清顆粒高劑量組Iba-1 0.371±0.085 1.177±0.060＊＊0.780±0.106##1.084±0.145 1.076±0.094 0.822±0.063##n 757677 IOD值GFAP 0.356±0.068 0.703±0.099＊＊0.511±0.018##0.672±0.021 0.550±0.011##0.514±0.009##

圖3 各組大鼠海馬組織中Iba-1表達(dá)的切片圖（免疫組化染色，×400）Fig 3 Slice diagram of Iba-1 expressions in hippocampus tissue of rats in each group（immunohistochemical staining，×400）

星型膠質(zhì)細(xì)胞具有調(diào)控腦電壓及離子通道平衡、保護(hù)神經(jīng)元和分泌神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的作用。正常情況下，星型膠質(zhì)細(xì)胞胞體較小、分枝細(xì)長(zhǎng)，呈“靜止型”。GFAP是星型膠質(zhì)細(xì)胞的特異性標(biāo)志物，GFAP表達(dá)量的多少可反映其活性的大小[12]。當(dāng)腦組織受到外界損傷時(shí)，迅速激活的星型膠質(zhì)細(xì)胞胞體增大、分枝增多，GFAP表達(dá)增強(qiáng)，呈“反應(yīng)型”。羅景華等[13]對(duì)40例顳葉內(nèi)側(cè)癲癇患者手術(shù)中切除的海馬組織進(jìn)行觀察，發(fā)現(xiàn)海馬各區(qū)GFAP表達(dá)均增強(qiáng)。在本研究中，模型組大鼠海馬組織中GFAP表達(dá)明顯增強(qiáng)，與上述研究結(jié)果一致。與模型組比較，各給藥組大鼠海馬組織中GFAP的表達(dá)明顯減弱，提示癲癇清顆?？赡芡ㄟ^(guò)降低癲癇大鼠腦組織中GFAP的表達(dá)，抑制癲癇大鼠海馬組織中星型膠質(zhì)細(xì)胞的激活而發(fā)揮抗癲癇作用。

小膠質(zhì)細(xì)胞具有維持神經(jīng)元細(xì)胞環(huán)境穩(wěn)定的作用。一般情況下，小膠質(zhì)細(xì)胞處于靜息狀態(tài)，呈分枝形。當(dāng)受到外界刺激后，小膠質(zhì)細(xì)胞活化可以從形態(tài)上支鏈狀形態(tài)通過(guò)縮回這些分枝朝著超支鏈或變形蟲(chóng)樣形態(tài)轉(zhuǎn)變區(qū)分，幾個(gè)標(biāo)記物（包括Iba-1、CDllb及Mac-1等）的表達(dá)會(huì)上調(diào)。小膠質(zhì)細(xì)胞活化后具有“兩面性”，一面是釋放促炎因子、細(xì)胞毒素等，此過(guò)程為經(jīng)典途徑的M1型毒性機(jī)制；另一面則是當(dāng)疾病發(fā)展到一定階段時(shí)，小膠質(zhì)細(xì)胞發(fā)揮著清除死亡的神經(jīng)元和吞噬細(xì)胞碎片的作用，此過(guò)程為活化的小膠質(zhì)細(xì)胞替代途徑的M2型神經(jīng)保護(hù)機(jī)制[14]。本研究中，模型組大鼠海馬組織中Iba-1表達(dá)增強(qiáng)，各給藥組海馬組織中Iba-1表達(dá)降低。

炎癥反應(yīng)在癲癇發(fā)作過(guò)程中具有重要的作用。癲癇動(dòng)物模型和癲癇患者腦組織中均存在炎癥因子的變化。IL-6主要由腦內(nèi)神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生，可參與機(jī)體的炎癥反應(yīng)、細(xì)胞免疫和造血功能調(diào)控等。研究發(fā)現(xiàn)，癲癇模型大鼠腦組織中IL-6表達(dá)會(huì)增加[15]。然而，也有研究表明，IL-6具有神經(jīng)保護(hù)和營(yíng)養(yǎng)的作用，其可減輕N-甲基天門冬氨酸對(duì)神經(jīng)元的損傷，抑制神經(jīng)元細(xì)胞凋亡[16]。小膠質(zhì)細(xì)胞-凋亡細(xì)胞共培養(yǎng)后，IL-1β及腫瘤壞死因子α的mRNA表達(dá)水平較正常培養(yǎng)的小膠質(zhì)細(xì)胞顯著降低[16]。在本研究中，模型組大鼠腦組織IL-6含量降低，筆者推測(cè)這可能是由于凋亡細(xì)胞的存在，促進(jìn)了小膠質(zhì)細(xì)胞的吞噬功能并抑制了IL-6的表達(dá)。給予癲癇清顆粒后IL-6含量增加，這可能是由于凋亡細(xì)胞的數(shù)目減少，小膠質(zhì)細(xì)胞吞噬功能下降，從而導(dǎo)致IL-6表達(dá)增加，但具體機(jī)制尚需要進(jìn)一步探討。

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Effects of Dianxianqing Granule on the IL-6 Content and GFAP，Iba-1 Expressions in Hippocampus Tissue of Rats with Kainate-induced Epilepsy

QI Yue1，LI Jitong2，JIANG Hong1，WANG Guanghan1，LIU Xiaohu1，XIANG Shaojie1，QIN Wenyan1，WEI Dan3，ZHU Jinghe1，JIA Dong3（1.Dept.of Pharmacology，Liaoning Provincial Institute of TCM，Shenyang 110034，China；2.Integrated Ward，the Third Affiliated Hospital of Liaoning University of TCM，Shenyang 110032，China；3.Key Laboratory of TCM Viscera-state Theory and Applications Co-founded by Liaoning Province and Ministry of Education，Liaoning University of TCM，Shenyang 110847，China）

OBJECTIVE：To study the effects of Dianxianqing granule on the interleukin（IL-6）content and glial fibrillary acidic protein（GFAP），ionized calcium linker molecules 1（Iba-1）expressions in hippocampus tissue of rats with kainate-induced epilepsy，and explore its mechanism of preventing and treating epilepsy.METHODS：Rats were randomly divided into sham operation group（distilled water），model group（distilled water），phenytoin group（0.03 g/kg，positive control）and Dianxianqing granule low-dose，medium-dose，high-dose groups（4.74，9.47，18.94 g/kg，calculated by crude drug），20 in each group.Rats were intragastrically administrated once a day，for 7 d.After 1 h of last administration，except for sham operation group，rats in other groups

single injection of kainite in hippocampus CA1 of left side to induce the epilepsy model.Behavioral changes and death of rats were observed.After 24 h of modeling，enzyme-linked immunosorbent method was used to detect the IL-6 content in hippocampus tissue of rats，Nissl staining was used to count the hippocampus neurons，and immunohistochemistry was used to detect the GFAP，Iba-1 expressions in hippocampus tissue of rats.RESULTS：Compared with sham operation group，rats in model group had obvious epilepsy symptoms after modeling，and parts of rats died；IL-6 content and number of neurons in hippocampus tissue were obviously decreased（P＜0.01），while GFAP，Iba-1 expressions were obviously enhanced（P＜0.01）.Compared with model group，epilepsy symptoms and death in each administration group had improved，while IL-6 content in hippocampus tissue were increased to varying degrees，with no statistical significance（P＞0.05）.The numbers of neurons in phenytoin group，Dianxianqing granule medium-dose，high-dose groups were obviously increased（P＜0.01）；GFAP expression was obviously decreased（P＜0.01）.Iba-1 expressions in hippocampus tissue in phenytoin group，Dianxianqing granule high-dose group were obviously decreased （P＜0.01）.CONCLUSIONS：Dianxianqinggranule can play the role in preventing and treating epilepsy by inhibiting GFAP，Iba-1 expressions in hippocampus tissue and increasing the number of neurons in hippocampus tissue.

Dianxianqing granule；Interleukin 6；Glial fibrillary acidic protein；Ionized calcium linker molecule 1；Rats

R285

A

1001-0408（2017）28-3927-05

2017-03-29

2017-07-12）

（編輯：林 靜）

遼寧省博士科研啟動(dòng)基金資助項(xiàng)目（No.201601385）

＊副研究員，博士。研究方向：神經(jīng)藥理學(xué)。電話：024-86803170。E-mail：lnzyxyqy2003@163.com

#通信作者：研究員。研究方向：神經(jīng)藥理學(xué)。電話：024-31207389。E-mail：jiadg2003@126.com

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2017.28.11