原花青素白藜蘆醇漿對(duì)急性酒精性肝損傷大鼠SOD和MDA的影響

劉青青，甘仲霖，謝惠波，汪春梅，郝麗月，楊艷，*

（1．西南醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院營(yíng)養(yǎng)與食品衛(wèi)生學(xué)教研室，四川瀘州646000；2.西南醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院環(huán)境衛(wèi)生與勞動(dòng)衛(wèi)生學(xué)教研室，四川瀘州646000；3.西南醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心，四川瀘州646000）

原花青素白藜蘆醇漿對(duì)急性酒精性肝損傷大鼠SOD和MDA的影響

劉青青1，甘仲霖2，謝惠波1，汪春梅3，郝麗月3，楊艷1，*

（1．西南醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院營(yíng)養(yǎng)與食品衛(wèi)生學(xué)教研室，四川瀘州646000；2.西南醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院環(huán)境衛(wèi)生與勞動(dòng)衛(wèi)生學(xué)教研室，四川瀘州646000；3.西南醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心，四川瀘州646000）

觀察原花青素白藜蘆醇漿對(duì)急性酒精性肝損傷的保護(hù)作用，并探討其機(jī)制。采用酒精灌胃法建立大鼠急性酒精性肝損傷模型。50只雄性SD大鼠隨機(jī)分為5組（n=10）：正常對(duì)照組、急性酒精肝損傷模型組、原花青素白藜蘆醇漿低、中、高劑量（0.5、1.5、4.5 g/kg）組。測(cè)定并比較各組大鼠肝臟/體重比，血清丙氨酸轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天門冬氨酸轉(zhuǎn)移酶（AST）水平，血清和肝勻漿超氧化物岐化酶（SOD）活性及丙二醛（MDA）含量。與模型組比較，原花青素白藜蘆漿可降低大鼠肝臟指數(shù)，降低血清ALT、AST水平和血清及肝臟MDA含量，提高血清及肝臟SOD活性。原花青素白藜蘆醇漿可通過(guò)清除自由基、抗脂質(zhì)過(guò)氧化對(duì)大鼠急性酒精性肝損傷起到保護(hù)作用。

原花青素白藜蘆醇漿；急性酒精性肝損傷；超氧化物歧化酶；丙二醛

Abstract：To observe the protective effect and to investigate the mechanism of proanthocyanidins resveratrol pulp on acute alcohol-induced hepatic injury in rats.Acute hepatic injury models were induced by infusing alcohol into stomach of rats.Fifry male SD rats were randomly divided into 5 groups：control group，acute liver injury model group，and low，middle，high doses of proanthocyanidins resveratrol pulp （0.5，1.5，4.5 g/kg）groups．Theratios of liver weight/body weight，serum levels of alanine aminotransferase （ALT）and aspartate aminotransferase（AST），superoxide dismutase（SOD）activities and malondialdehyde（MDA）content in serum and liver homogenate were assayed and compared between groups.Compared with model group，proanthocyanidins resveratrol pulp could obviously reduce the ratios of liver weight/body weight，serum levels of ALT and AST，MDA contents in serum and liver，elevate the serum and liver activity of SOD.Proanthocyanidins Resveratrol pulp can protect from the acute alcohol-induced hepatic injury in rats by scavenging free radicals and inhibiting hepatic lipid peroxidation.

Key words：proanthocyanidins resveratrol pulp；acute alcohol-induced hepatic injury；superoxide dismutase（SOD）；malondialdehyde（MDA）

酒精性肝病（ALD）是全球最主要的終末期肝病病因之一，已成為僅次于病毒性肝炎的第二大肝臟疾病[1]，近年來(lái)ALD在我國(guó)呈明顯增加趨勢(shì)。開發(fā)篩選對(duì)ALD有確切防治作用的保健食品是當(dāng)前面臨的重要課題。野生山枇杷，又名皺葉莢蒾，屬忍冬科莢蒾屬植物，沿古藺縣赤水河流域漫山遍野自然生長(zhǎng)，是純粹的天然綠色植物資源，有關(guān)古籍記載其具有一定的保健功效，當(dāng)?shù)厝艘恢庇惺秤谩Ｔ谒拇ü盘A吉利果品有限公司與西南醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院合作，研制了以野生山枇杷為主要原料的原花青素白藜蘆醇漿（因含有原花青素和白藜蘆醇而命名）。原花青素和白藜蘆醇作為極具發(fā)展前景的天然植物提取物，具有抗氧化、調(diào)節(jié)免疫活性、保肝、抗癌等多種生物活性作用[2-5]，對(duì)ALD具有防治和保護(hù)作用。本研究采用酒精灌胃法建立急性酒精性肝損傷模型，通過(guò)干預(yù)，從大鼠肝臟脂質(zhì)過(guò)氧化損傷方面探討原花青素白藜蘆醇漿對(duì)大鼠急性酒精性肝損傷的保護(hù)作用，以期為廣大飲酒人士提供一款新型健康飲品。

1 材料與儀器

1.1 動(dòng)物

SD大鼠50只，雄性，體重180 g～200 g，由西南醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證SCXK（川）2013-17，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證SYXK（川）2013-065。

1.2 受試品與試劑

原花青素白藜蘆醇漿為暗紅色的黏稠液體由四川古藺吉利果品有限公司提供；52°紅星二鍋頭白酒：北京紅星股份有限公司；總超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）測(cè)定試劑盒：南京建成生物工程研究所；丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（AST）、總蛋白（TP）試劑盒：長(zhǎng)春匯力生物技術(shù)有限公司。

1.3 儀器

VERSAMAX連續(xù)波長(zhǎng)酶標(biāo)儀：美國(guó)Molecular Devices公司；威圖SELECTRA Junior全自動(dòng)生化分析儀：荷蘭威圖公司；5810 R冷凍型臺(tái)式大容量高速離心機(jī)：德國(guó)eppendorf公司；UV-2450紫外-可見分光光度計(jì)：日本島津公司；LD4-2A型臺(tái)式低速離心機(jī)：北京眾益中和生物技術(shù)有限公司；HH-8數(shù)顯恒溫水浴鍋：常州國(guó)華電器有限公司。

2 方法

2.1 分組與處理

50只雄性SD大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)6天后，隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組、原花青素白藜蘆醇漿低、中、高劑量組（0.5、1.5、4.5g/kg），除正常對(duì)照組給蒸餾水外，其余各組均用52°紅星二鍋頭灌胃，用量為第1天7 mL/kg，第 2 天 10 mL/kg～8 天 10 mL/kg，連續(xù)灌胃 8 d。大鼠造模的同時(shí)灌服原花青素白藜蘆醇漿，正常對(duì)照組和模型組給予蒸餾水灌胃，每天1次，每次灌胃體積均按10 mL/kg計(jì)算。

末次灌胃后禁食不禁飲12 h～16 h，大鼠按體重腹腔注射2%戊巴比妥鈉45 mg/kg（2.25mL/kg）麻醉，腹主動(dòng)脈采血，3000 r/min離心10 min分離血清。取肝臟全葉用生理鹽水漂洗，濾紙拭干，稱重后精確稱量肝臟組織塊0.5 g，加入預(yù)冷的生理鹽水，冰水中制成10%的肝勻漿，4℃3 000 r/min離心10 min，提取上清液。

2.2 指標(biāo)檢測(cè)

2.2.1 血清ALT、AST測(cè)定

威圖SELECTRA Junior全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)大鼠血清ALT、AST含量。

2.2.2 血清和肝組織SOD、MDA測(cè)定

取大鼠血清和肝勻漿液，按照試劑盒方法測(cè)定血清和肝臟SOD、MDA含量。

2.3 數(shù)據(jù)處理

用Excle2003錄入并整理數(shù)據(jù)，SPSS22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。資料采用進(jìn)行統(tǒng)計(jì)描述，單因素方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)推斷，LSD法進(jìn)行兩兩比較。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

根據(jù)人體推薦每日攝入量（3 g/人，為生產(chǎn)者提供的人均量），以10、30、90倍計(jì)算得出原花青素白藜蘆醇漿低、中、高劑量組的設(shè)置[6]。

3.1 原花青素白藜蘆醇漿對(duì)大鼠急性酒精性肝損傷模型肝臟/體重比的影響

與正常對(duì)照組性比，模型組肝臟/體重比顯著增加（P＜0.01）；與模型組相比，原花青素白藜蘆醇漿三個(gè)劑量組肝臟/體重比有降低趨勢(shì)，原花青素白藜蘆醇漿高劑量組具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 原花青素白藜蘆醇漿對(duì)大鼠急性酒精性肝損傷模型肝臟/體重比的影響（s，n=10）Table 1 Effects of proanthocyanidins resveratrol pulp on liver/body weight ratio of acute chronic alcoholic hepatic injury rat models（s，n=10）

表1 原花青素白藜蘆醇漿對(duì)大鼠急性酒精性肝損傷模型肝臟/體重比的影響（s，n=10）Table 1 Effects of proanthocyanidins resveratrol pulp on liver/body weight ratio of acute chronic alcoholic hepatic injury rat models（s，n=10）

注：*與正常對(duì)照組比較P＜0.05，**與正常對(duì)照組比較P＜0.01；#與模型對(duì)照比較P＜0.05，##與模型對(duì)照比較P＜0.01；△與低劑量比較P＜0.05。

組別劑量/（g/kg）肝臟指數(shù)/%正常對(duì)照組 0 3.32±0.23模型組 0 3.79±0.24**低劑量組 0.5 3.67±0.32**中劑量組 1.5 3.60±0.26*高劑量組 4.5 3.56±0.14*#

3.2 原花青素白藜蘆醇漿對(duì)大鼠急性酒精性肝損傷模型血清ALT、AST水平的影響

模型組的血清ALT、AST明顯高于正常對(duì)照組（P＜0.01），具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明急性酒精中毒對(duì)肝臟有顯著損害。與模型組比較，原花青素白藜蘆醇漿三個(gè)劑量組血清ALT、AST有降低趨勢(shì)，中、高劑量組血清ALT、AST血清明顯降低（P＜0.05），與低劑量組比較，中、高劑量組血清中AST水平明顯降低（P＜0.05），表明原花青素白藜蘆醇漿對(duì)大鼠急性酒精性肝損傷有很好的保護(hù)作用，且中、高劑量效果優(yōu)于低劑量，見表2。

表2 原花青素白藜蘆醇漿對(duì)大鼠急性酒精性肝損傷模型血清ALT、AST 水平（s，n=10）Table 2 Effects of proanthocyanidins resveratrol pulp on serum ALT、AST levels of acute chronic alcoholic hepatic injury rat models（s，n=10）

表2 原花青素白藜蘆醇漿對(duì)大鼠急性酒精性肝損傷模型血清ALT、AST 水平（s，n=10）Table 2 Effects of proanthocyanidins resveratrol pulp on serum ALT、AST levels of acute chronic alcoholic hepatic injury rat models（s，n=10）

注：*與正常對(duì)照組比較P＜0.05，**與正常對(duì)照組比較P＜0.01；#與模型對(duì)照比較P＜0.05，##與模型對(duì)照比較P＜0.01；△與低劑量比較P＜0.05。

組別劑量/（g/kg）ALT（U/L）AST（U/L）正常對(duì)照組 0 37.48±4.34 154.36±13.18模型組 0 54.71±8.35** 195.59±10.70**低劑量組 0.5 50.06±8.19** 184.72±18.57**中劑量組 1.5 48.63±5.10**# 170.04±16.04*##△高劑量組 4.5 47.45±6.32**# 167.50±12.49*##△

3.3 原花青素白藜蘆醇漿對(duì)大鼠急性酒精性肝損傷模型血清及肝臟SOD的影響

模型組血清和肝臟的SOD均顯著低于正常對(duì)照組（P＜0.01），具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明急性酒精中毒對(duì)肝臟有顯著損害。與模型組相比，原花青素白藜蘆醇漿3個(gè)劑量組血清和肝臟SOD均有升高趨勢(shì)，血清原花青素白藜蘆醇漿3個(gè)劑量組SOD均明顯升高（P＜0.01），且中、高劑量組SOD比低劑量組高（P＜0.05）；肝臟原花青素白藜蘆醇漿中、高劑量組SOD顯著升高（P＜0.05），且高劑量組 SOD 比低劑量組高（P＜0.05），表明原花青素白藜蘆醇漿有很好的抗氧化和清除自由基的能力，且中、高劑量效果優(yōu)于低劑量，見表3。

表3 原花青素白藜蘆醇漿對(duì)大鼠急性酒精性肝損傷模型血清及肝組織 SOD 的影響（s，n=10）Table 3 Effects of proanthocyanidins resveratrol pulp on serum，liver homogenate SOD levels of acute chronic alcoholic hepatic injury rat models（s，n=10）

表3 原花青素白藜蘆醇漿對(duì)大鼠急性酒精性肝損傷模型血清及肝組織 SOD 的影響（s，n=10）Table 3 Effects of proanthocyanidins resveratrol pulp on serum，liver homogenate SOD levels of acute chronic alcoholic hepatic injury rat models（s，n=10）

注：*與正常對(duì)照組比較P＜0.05，**與正常對(duì)照組比較P＜0.01；#與模型對(duì)照比較P＜0.05，##與模型對(duì)照比較P＜0.01；△與低劑量比較P＜0.05。

（g/kg） 血清SOD（U/mL） 肝臟SOD（U/mgprot）正常對(duì)照組 0 353.51±16.08 350.01±31.42模型組 0 251.29±15.49** 275.49±21.99**低劑量組 0.5 271.91±19.35**## 292.19±25.98**中劑量組 1.5 289.82±13.32**##△ 301.43±27.52**#高劑量組 4.5 297.55±12.48**##△ 320.84±23.49*##△組別 劑量/

3.4 原花青素白藜蘆醇漿對(duì)大鼠急性酒精性肝損傷模型血清及肝臟MDA的影響

模型組血清和肝臟MDA均顯著高于正常對(duì)照組（P＜0.01），具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明急性酒精中毒對(duì)肝臟有顯著損害。與模型組相比，原花青素白藜蘆醇漿3個(gè)劑量組血清和肝臟MDA均顯著降低（P＜0.05），肝臟原花青素白藜蘆醇漿3個(gè)劑量組MDA均明顯升高（P＜0.01），且中、高劑量組SOD比低劑量組高（P＜0.05）；血清原花青素白藜蘆醇漿3個(gè)劑量組MDA顯著升高（P＜0.05），且高劑量組MDA低于低劑量組低（P＜0.05），表明原花青素白藜蘆醇漿有很好的抗氧化和清除自由基的能力，且中、高劑量效果優(yōu)于低劑量，見表4。

表4 原花青素白藜蘆醇漿對(duì)大鼠急性酒精性肝損傷模型血清及肝組織 MDA 的影響（s，n=10）Table 4 Effects of proanthocyanidins resveratrol pulp on serum，liver homogenate MDA levels of acute chronic alcoholic hepatic injury rat models（s，n=10）

表4 原花青素白藜蘆醇漿對(duì)大鼠急性酒精性肝損傷模型血清及肝組織 MDA 的影響（s，n=10）Table 4 Effects of proanthocyanidins resveratrol pulp on serum，liver homogenate MDA levels of acute chronic alcoholic hepatic injury rat models（s，n=10）

注：*與正常對(duì)照組比較P＜0.05，**與正常對(duì)照組比較P＜0.01；#與模型對(duì)照比較P＜0.05，##與模型對(duì)照比較P＜0.01；△與低劑量比較P＜0.05。

肝臟MDA（nmol/mgprot）正常對(duì)照組 0 3.29±0.39 7.05±0.62模型組 0 4.05±0.39** 10.37±1.14**低劑量組 0.5 3.70±0.44*# 9.11±1.06**##中劑量組 1.5 3.40±0.40## 8.24±0.86**##△高劑量組 4.5 3.29±0.16##△ 8.01±0.92*##△組別劑量/（g/kg）血清MDA（nmol/mL）

4 結(jié)論與討論

原花青素和白藜蘆醇單用的報(bào)道較多[7-9]，而將原花青素和白藜蘆醇聯(lián)合運(yùn)用于ALD的防治未見報(bào)道。自然界同時(shí)含原花青素和白藜蘆醇兩種成分的植物不多，野生山枇杷就是其中之一，且含量較高。原花青素白藜蘆醇漿就是對(duì)野生山枇杷這一植物資源的開發(fā)產(chǎn)物。

酒精性肝損傷是由于乙醇在體內(nèi)代謝過(guò)程中產(chǎn)生自由基引起細(xì)胞膜脂質(zhì)體過(guò)氧化而造成肝損傷。攝入大量酒精后代謝過(guò)程中產(chǎn)生大量自由基，導(dǎo)致脂質(zhì)過(guò)氧化，損傷肝細(xì)胞，引起細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的破壞，大量肝內(nèi)酶（ALT、AST）釋放入血，并加速清除自由基酶（SOD）的耗竭，肝功能異常，脂質(zhì)代謝紊亂，導(dǎo)致血液和肝臟中的SOD活性降低、MDA過(guò)量產(chǎn)生，這與急性酒精性肝損傷的發(fā)病機(jī)制密切相關(guān)[10-12]。隨著酒精攝入量的增加，肝臟系數(shù)升高，這可能與酒精毒性及其影響營(yíng)養(yǎng)素吸收導(dǎo)致體重降低有關(guān)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，模型組大鼠肝臟系數(shù)明顯高于正常對(duì)照組，原花青素白藜蘆醇漿的攝入可有效抑制肝臟系數(shù)的增加。ALT、AST是反映肝細(xì)胞損害的較靈敏指標(biāo)。本研究中大鼠酒精灌胃后ALT、AST水平普遍高于正常對(duì)照組，提示：酒精灌胃大鼠出現(xiàn)了不同程度肝細(xì)胞損害，而經(jīng)原花青素白藜蘆醇漿干預(yù)的大鼠，其ALT、AST水平低于模型組，說(shuō)明原花青素白藜蘆醇漿對(duì)酒精性肝損傷有保護(hù)作用。脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)的終產(chǎn)物MDA可反映體內(nèi)自由基脂質(zhì)過(guò)氧化的程度，其含量間接反映細(xì)胞受自由基攻擊的程度。SOD作為抗氧化酶，能催化氧自由基歧化反應(yīng)，清除自由基，保護(hù)細(xì)胞免受損傷，其活力反映機(jī)體清除氧自由基的能力[13]。研究顯示，酒精灌胃大鼠SOD降低、MDA升高，而經(jīng)原花青素白藜蘆醇漿干預(yù)的大鼠，SOD活性升高，MDA降低，說(shuō)明原花青素白藜蘆醇漿可通過(guò)清除自由基、抑制肝臟脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)對(duì)酒精性肝損傷起到保護(hù)作用。

綜上所述，原花青素白藜蘆醇漿不僅能降低因酒精暴露引起的血清ALT、AST增高，降低機(jī)體血脂水平，同時(shí)可清除自由基、抑制肝臟脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，提高肝臟組織中SOD活性，發(fā)揮抗氧化作用，從而達(dá)到防治急性酒精性肝損傷的作用。野生山枇杷作為古藺縣野生植物資源，有一定保健功能，要注意合理開發(fā)利用和保護(hù)管理，對(duì)其還需做進(jìn)一步研究，使其更好的為人類社會(huì)服務(wù)。

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Effects of Proanthocyanidins Resveratrol Pulp on SOD Activity and MDA Content in Rats with Acute Alcohol-induced Hepatic Injury

LIU Qing-qing1，GAN Zhong-lin2，XIE Hui-bo1，WANG Chun-mei3，HAO Li-yue3，YANG Yan1，*
（1.Department of Nutrition and Food Hygiene，School of Public Health，Southwest Medical University，Luzhou 646000，Sichuan，China；2.Department of Environmental and Occupational Hygiene，School of Public Health，Southwest Medical University，Luzhou 646000，Sichuan，China；3.Experiment Teaching Centre，School of Public Health，Southwest Medical University，Luzhou 646000，Sichuan，China）

2016-11-16

10.3969/j.issn.1005-6521.2017.19.040

瀘州市科技局基金項(xiàng)目（2011-S-31（2/3））

劉青青（1987—），女（漢），助教，碩士，研究方向：保健食品研發(fā)，營(yíng)養(yǎng)與食品分析。

*通信作者：楊艷（1974—），女（漢），副教授，碩士，研究方向：保健食品研發(fā)，食品安全與營(yíng)養(yǎng)。