間充質(zhì)干細(xì)胞與神經(jīng)干細(xì)胞序貫移植修復(fù)大鼠脊髓損傷的作用研究

陳志　申才良

摘要：目的 通過比較由單獨(dú)神經(jīng)干細(xì)胞（NSCs）移植治療大鼠脊髓損傷（SCI）和由骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSCs）與NSCs序貫治療大鼠SCI的脊髓恢復(fù)情況不同，研究BMSCs對(duì)大鼠脊髓微環(huán)境的影響以及序貫治療的可行性和優(yōu)勢(shì)。方法 體外分離，培養(yǎng)，純化NSCs和BMSCs，改良Allen法制造大鼠脊髓損傷（SCI）模型，48只大鼠隨機(jī)分為單獨(dú)標(biāo)記神經(jīng)干細(xì)胞移植組（A組，n=24），間充質(zhì)干細(xì)胞+標(biāo)記神經(jīng)干細(xì)胞序貫移植組（B組，n=24）。分別于移植后3 d、1 w、2 w，3 w、4 w、6 w、8 w取脊髓組織，觀察脊髓空洞形成情況，神經(jīng)干細(xì)胞分化生長(zhǎng)情況，以及脊髓膠質(zhì)疤痕大小。結(jié)果 序貫移植組BBB評(píng)分比單獨(dú)神經(jīng)干細(xì)胞移植組高（P<0.05）；觀察大鼠在治療后1，2，3，4，6，8 w時(shí)的神經(jīng)元細(xì)胞數(shù)目，血管生長(zhǎng)情況，膠質(zhì)疤痕以及脊髓空洞大小A，B組之間有顯著性差異（P≤0.05）。結(jié)論 BMSCs可促進(jìn)了NSCs的有效分化，減少膠質(zhì)化傾向，改善了脊髓的微環(huán)境有利于治療SCI，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與神經(jīng)干細(xì)胞序貫移植對(duì)大鼠脊髓損傷的療效優(yōu)于單獨(dú)移植神經(jīng)干細(xì)胞。

關(guān)鍵詞：脊髓損傷；細(xì)胞培養(yǎng)；移植；慢病毒轉(zhuǎn)染；序貫移植

中圖分類號(hào)：R651.2 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1006-1959（2017）20-0038-05

Abstract：Objective To compare by separate neural stem cells（NSCs）transplantation for the treatment of spinal cord injury（SCI）and bone marrow mesenchymal stem cells（BMSCs）and NSCs sequential therapy of SCI rats spinal cord recovery，effects of BMSCs on rat spinal cord microenvironment and sequential treatment of culture method of feasibility and advantage.Methods In vitro，separation，purification of NSCs and BMSCs in rats with spinal cord injury，manufacturing method of modified Allen（SCI）model，48 rats were randomly divided into separate labeled neural stem cells transplantation group（group A，n=24），Mesenchymal stem cells+labeled neural stem cells in the sequential transplantation group （group B，n=24）.The spinal cord tissue was observed at 3 d，1 w，2 w，3 w，4 w，6 w and 8 w after transplantation.The formation of spinal cord formation， the growth of neural stem cells and the size of glial scar were observed.Results The BBB score of the sequential transplantation group was higher than that of the neural stem cell transplantation group（P<0.05）.The number of neuronal cells，the growth of the blood vessels were observed at 1，2，3，4，6 and 8 w after treatment.There was a significant difference between the quality scar and the size of the syringia in group A and B（P≤0.05）.Conclusion BMSCs can promote the differentiation of NSCs effectively，reduce glial tendency，improve the micro environment of the spinal cord is conducive to the treatment of SCI，bone marrow mesenchymal stem cells and neural stem cells transplantation on curative effect is better than that of sequential injury of rat spinal cord neural stem cells transplantation alone.

Key words：Spinal cord injury；Cell culture；Transplantation；Lentivirus transfection；Sequential transplantation

脊髓損傷（spinal cord injury，SCI）可導(dǎo)致嚴(yán)重的運(yùn)動(dòng)、感覺和自主神經(jīng)功能障礙，它是一種高花費(fèi)、高致殘率的疾病，目前，對(duì)受傷的脊髓還沒有有效的治療方法[1]。脊髓損傷的治療一直是骨科醫(yī)生的研究熱點(diǎn)和重點(diǎn)，然而手術(shù)只能解除對(duì)脊髓的壓迫和恢復(fù)脊柱的穩(wěn)定性，還無法使損傷的脊髓恢復(fù)功能[2]，而應(yīng)用SCs的多向分化潛能，可生成各種組織細(xì)胞，特別是特定的神經(jīng)細(xì)胞，這使得修復(fù)損傷的脊髓組織，恢復(fù)脊髓功能成為可能，應(yīng)用SCs移植有可能治愈SCI，是最具潛力的治療方法。近年來多項(xiàng)研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)神經(jīng)干細(xì)胞和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞局部移植均可促進(jìn)脊髓損傷的修復(fù)[3-4]，但深入研究發(fā)現(xiàn)：移植的NSCs在體內(nèi)存活較少，且即使存活分化也存在困難，原因是脊髓損傷后微環(huán)境不利于NSCs的存活，定植及分化。在2013年，F(xiàn)orostyak提出了間充質(zhì)干細(xì)胞能改善脊髓損傷的微環(huán)境[5]。同時(shí)我們體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：MSCs促進(jìn)了NSCs的有效分化[6-7]。那么，其在體內(nèi)是否顯示同樣的效應(yīng)？為了探明在動(dòng)物體內(nèi)間充質(zhì)干細(xì)胞是否對(duì)脊髓微環(huán)境起改善作用以及間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞分化的影響，探索序貫移植的有效性及其方法，我們利用大鼠的脊髓損傷模型分別進(jìn)行了序貫移植與單獨(dú)神經(jīng)干細(xì)胞移植治療大鼠SCI的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。endprint

1 材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)材料

實(shí)驗(yàn)所用SPF大鼠均由安徽醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，4 w雌性大鼠5只，SPF級(jí)，重（100 ±10）g；新生大鼠5只，SPF級(jí)；成年雌性大鼠48只，SPF級(jí)，重（230±20）g。主要試劑與儀器：胎牛血清FBS（美國(guó)Gibco公司）；慢病毒載體（上海吉?jiǎng)P基因公司）；B-27（美國(guó)Invitrogen公司）；CO2恒溫培養(yǎng)箱（日本三洋）。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 大鼠NSCs的培養(yǎng)、轉(zhuǎn)染、鑒定 新生SPF級(jí)大鼠腹腔麻醉（10%水合氯醛），剪刀離斷頭顱，75%酒精浸泡5 min，紫外線照射30 min，取大鼠全腦，Hank's液漂洗三次，剪碎全腦，加入神經(jīng)元基礎(chǔ)培養(yǎng)基5 ml，加入胰酶細(xì)胞消化液1 ml，消化5 min，加入10%胎牛血清培養(yǎng)基終止消化；70 μm孔徑的篩網(wǎng)過濾，制成單細(xì)胞懸液，1000 r/min離心10 min，棄上清液， 反復(fù)吹打單細(xì)胞懸液，加入2 ml無血清培養(yǎng)基 （含有 DMEM/F-12 + 2 %B-27 + 20 ng/mlEGF + 20 ng/mlbFGF + 青霉素100 U/ml + 鏈霉素0.1 mg/ml），1000 r/min離心3 min，棄上清液， 加入無血清培養(yǎng)基，吹打單細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)。將單細(xì)胞懸液以1×106/ ml接種于25 cm2培養(yǎng)瓶中，恒溫培養(yǎng)箱（37 ℃、5%CO2）培養(yǎng)， 每3 d換液1次。2～3 d后鏡下觀察，可見懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞球，7 d后，600 r/min離心5 min，吸棄上清液，加入新鮮培養(yǎng)基，長(zhǎng)頸吸管反復(fù)吹打細(xì)胞球，制成單細(xì)胞懸液，分別接種到兩個(gè)新培養(yǎng)瓶中，1×105個(gè)細(xì)胞/瓶，培養(yǎng)條件不變。每3 d換液1次，每7 d傳代1次。提取2瓶傳代培養(yǎng)三代的NSCs，分別倒入兩只25 ml試管中，3000 r/min離心5 min，吸棄上清液，將細(xì)胞沉淀接種于6孔板上（接種體積2 ml+病毒量160 μl+ENi.S.液160 μl）。經(jīng)轉(zhuǎn)染后的神經(jīng)干細(xì)胞繼續(xù)置入37 ℃、5 %CO2恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，，每3 d換液1次。神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)7 d后鏡下觀察轉(zhuǎn)染后神經(jīng)干細(xì)胞的分化情況。

1.2.2 大鼠BMSCs的培養(yǎng)與鑒定 取4 w左右SPF級(jí)大鼠的雙側(cè)下肢骨，打開骨髓腔，10 ml培養(yǎng)液（含1萬U肝素）沖洗，加入3 ml Ficoll-Paque分離液，梯度離心，吸取中間界面層，PBS液沖洗3次，制成單細(xì)胞懸液，接種于aMEM培養(yǎng)基（含有10%FBS，100 U/ml青霉素，100 mg/ml鏈霉素），置于恒溫培養(yǎng)箱（37 ℃、5 %CO2），每3 d換液1次，去除未貼壁細(xì)胞，至細(xì)胞融合時(shí)胰蛋白酶消化收集，傳代并檢測(cè)CD29，CD34，CD90。

1.2.3 大鼠SCI模型的創(chuàng)建、分組及序貫移植治療 實(shí)驗(yàn)所用器械、場(chǎng)地均由安徽醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，取250 g左右的SPF級(jí)大鼠，10%水合氯醛腹腔注射麻醉，暴露胸9脊髓（見圖1），采用改良的Allen裝置制作大鼠脊髓損傷模型。脊髓損傷局部明膠海綿填塞止血，常規(guī)肌肉、筋膜、表皮3層縫合。術(shù)后3 d每天予青霉素（50000 U/Kg）在大腿處肌注。每6 h人工輔助排小便1次直至恢復(fù)自主排便。將48只脊髓損傷大鼠隨機(jī)分配為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，每組各24只，分籠飼養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)大鼠出現(xiàn)死亡后以同樣標(biāo)準(zhǔn)再次建模遞補(bǔ)。序貫移植治療：對(duì)照組（標(biāo)記神經(jīng)干細(xì)胞移植組，A組，24只）：T9脊髓損傷后3 d經(jīng)尾靜脈注射含單細(xì)胞濃度為1×106/ml的POLY-M慢病毒轉(zhuǎn)染后的NSCs條件培養(yǎng)液2 ml；實(shí)驗(yàn)組（序貫移植組，B組，24只）：T9脊髓損傷后1 d經(jīng)尾靜脈注射含單細(xì)胞濃度為1×106/ml的BMSCs條件培養(yǎng)液1ml，脊髓損傷后3d經(jīng)尾靜脈注射含單細(xì)胞濃度為2×106/ml的POLY-M慢病毒轉(zhuǎn)染后的NSCs條件培養(yǎng)液1 ml。

1.2.4 大鼠神經(jīng)功能評(píng)價(jià) 由本課題組兩名熟悉BBB標(biāo)準(zhǔn)得分的研究生對(duì)A、B 兩組大鼠進(jìn)行BBB評(píng)分：將大鼠放入一開口大盆，輕敲盆壁使它爬行，觀察它的臀部、后肢關(guān)節(jié)、爪的置放在行走時(shí)與軀干的關(guān)系情況。術(shù)前3 d，每天早晨9點(diǎn)將大鼠放入大盆中，使其熟悉環(huán)境。在術(shù)后24 h、72 h、1 w、2 w、3 w、4 w、6 w、8 w時(shí)每日晨9點(diǎn)分別對(duì)A、B 組進(jìn)行盲法評(píng)分（兩位觀察者未參與建模，兩組大鼠觀察前后由實(shí)驗(yàn)者抓?。?，每只需觀察5 min，由實(shí)驗(yàn)者記錄評(píng)分。

1.2.5大鼠脊髓標(biāo)本制備和組織學(xué)檢測(cè) 分別于移植后1 w，3 w，6 w，8 w處死大鼠，用10%福爾馬林進(jìn)行灌注固定，以T9脊髓損傷處為中心取長(zhǎng)2 cm脊髓，連續(xù)20 μm厚度縱切SCI處脊髓標(biāo)本，行蘇木精-伊紅（HE）染色和MAP-2、GFAP、RECA免疫熒光染色，觀察脊髓空洞形成情況，神經(jīng)干細(xì)胞分化生長(zhǎng)情況，以及脊髓膠質(zhì)疤痕大小。

1.2.6 計(jì)算脊髓空洞體積 在移植后6 w處死大鼠，經(jīng)灌注法獲得 A、B組脊髓標(biāo)本， 制成石蠟切片張切片脊髓空洞的面積，計(jì)算出每個(gè)標(biāo)本損傷區(qū)中心的脊髓空洞體積。

1.2.7 免疫組化染色和光密度分析 將A、B組的脊髓切片60 ℃烘烤60 min；二甲苯浸泡10 min，更換二甲苯浸泡10 min；分別用無水、95%、85%、70%乙醇浸泡5 min；PBS浸泡5 min，清洗3次；將切片放入耐高溫塑料染色架，再將耐高溫塑料染色架放入燒杯中，加入抗原修復(fù)緩沖液，高火煮沸，保持微沸狀態(tài)20 min，而后將裝有玻片的燒杯浸入流水中，自然冷卻；PBS浸泡5 min，清洗3次；3%H2O2-甲醇溶液浸泡15 min；PBS浸泡5min，清洗3次；加入一抗 100 μl，37 ℃，濕盒孵育2 h；PBS浸泡5 min，清洗3次；加入增強(qiáng)劑50 μl，37 ℃濕盒孵育20 min；加入酶標(biāo)二抗50 μl， 37 ℃濕盒孵育20 min；PBS浸泡5 min，清洗5次；每張片子加2滴新鮮配制的DAB溶液；鏡下觀察染色深淺，染好立即中止，用自來水輕柔沖洗15 min用蒸餾水終止顯色反應(yīng)；蘇木素染液染色。分別用70%、85%、95%、無水乙醇各浸泡5 min。兩次二甲苯浸泡，各10 min。晾干后在切片上加中性樹膠，加蓋玻片。應(yīng)用美國(guó)Media Cybernetics 公司專業(yè)圖片分析軟件Image-Pro Plus 6.0分別對(duì)A、B組切片進(jìn)行免疫組化光密度分析 。endprint

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

本實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)均采用SPSS 19軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)據(jù)以（x±s）表示，多組均數(shù)之間比較采用方差分析，兩組均數(shù)間比較行t檢驗(yàn)，結(jié)果以（P≤0.05） 為差異有顯著性意義。

2結(jié)果

2.1 NSCs的形態(tài)觀察及鑒定

原代NSCs細(xì)胞接種3 d后鏡下觀察：可見NSCs呈多個(gè)懸浮細(xì)胞團(tuán)，到第7 d時(shí)培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)可見球狀的細(xì)胞集落，生長(zhǎng)數(shù)目達(dá)數(shù)十甚至上百個(gè)， 細(xì)胞團(tuán)狀似桑葚，有較強(qiáng)折光性，少數(shù)細(xì)胞貼壁，未見明顯細(xì)胞突起形成，見圖2。將培養(yǎng)7 d的懸浮NSCs進(jìn)行慢病毒轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)，確定神經(jīng)干細(xì)胞最佳的MOI值為10，見圖3。

2.2大鼠行為學(xué)評(píng)價(jià)結(jié)果

脊髓損傷3 d內(nèi)，兩組大鼠的BBB評(píng)分都較低差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，自大鼠脊髓損傷1 w后，間充質(zhì)干細(xì)胞與神經(jīng)干細(xì)胞序貫移植處理的實(shí)驗(yàn)組大鼠BBB評(píng)分高于神經(jīng)干細(xì)胞靜脈移植處理的對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=-5.818， P=0.004），見表1。

2.3脊髓空洞體積

對(duì)NSCs/序貫移植術(shù)后1 w，6 w的A組和B組大鼠行經(jīng)心臟灌注法處死，固定脊髓段，切片制作標(biāo)本并進(jìn)行 HE 染色后，用 Image J1.38檢測(cè)損傷區(qū)脊髓空洞體積顯示：1 w時(shí)，A 、B兩組大鼠脊髓損傷區(qū)可見明顯的脊髓空洞，體積差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)；6 w時(shí)，B組大鼠脊髓損傷區(qū)脊髓空洞（0.17±0.08）mm3 較A組（0.39±0.09）mm3 體積小，見圖4，得知對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組之間的差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=3.164， P=0.034）。

2.4組織學(xué)評(píng)價(jià)結(jié)果

2.4.1 MAP-2結(jié)果及光密度分析 對(duì)NSCs/序貫移植術(shù)后3 w的A組和B組大鼠行經(jīng)心臟灌注法處死，固定脊髓段，切片制作標(biāo)本并進(jìn)行MAP-2染色后，鏡下觀察序貫移植組損傷區(qū)及周圍MAP-2陽(yáng)性表達(dá)排列完整呈短束狀，染色較強(qiáng)，形態(tài)規(guī)則，染色均勻；而NSCs移植組損傷區(qū)及周圍MAP-2陽(yáng)性表達(dá)排列紊亂，染色明顯較少較淡。用 Image-Pro Plus 6.0檢測(cè)損傷區(qū)MAP-2光密度顯示，經(jīng)過序貫靜脈移植處理的實(shí)驗(yàn)（B）組大鼠脊髓損傷區(qū)MAP-2陽(yáng)性積分光密度（129765±9617）較對(duì)照（A）組（90806± 9046）體積大，見圖5，得知對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組之間的差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=-5.315，P=0.006）。

2.4.2 GFAP染色結(jié)果及光密度分析 對(duì)NSCs/序貫移植術(shù)后3 w的A組和B組大鼠行經(jīng)心臟灌注法處死，固定脊髓段，切片制作標(biāo)本并進(jìn)行GFAP染色后，鏡下觀察可見序貫移植組與NSCs靜脈移植處理的對(duì)照組GFAP皆呈點(diǎn)狀表達(dá)，而對(duì)照組表達(dá)高于序貫移植組。 用Image-Pro Plus 6.0檢測(cè)損傷區(qū)GFAP光密度顯示，經(jīng)過序貫靜脈移植處理的實(shí)驗(yàn)（B）組大鼠脊髓損傷區(qū)GFAP陽(yáng)性積分光密度（37462±4230）較對(duì)照（A）組（89288±3992）體積小，見圖6，得知對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組之間的差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=15.868，P=0.001）。

由兩組SCI大鼠術(shù)后BBB評(píng)分對(duì)比可知：在損傷3 d內(nèi)兩組大鼠的運(yùn)動(dòng)功能均未恢復(fù)，3 d后兩組大鼠運(yùn)動(dòng)功能開始恢復(fù)且序貫組大鼠比對(duì)照組大鼠恢復(fù)更快，至第8 w兩組大鼠BBB評(píng)分趨于穩(wěn)定，序貫組大鼠的神經(jīng)功能恢復(fù)更好；由兩組SCI大鼠治療后脊髓損傷區(qū)脊髓空洞結(jié)果對(duì)比可知：在1 w時(shí)，兩組大鼠脊髓損傷區(qū)的脊髓空洞體積差異不大，而在6 w時(shí)，序貫移植組脊髓空洞體積較對(duì)照組更??；由兩組SCI大鼠治療后脊髓損傷區(qū)MAP-2、GFAP免疫組化染色對(duì)比可知：序貫組大鼠脊髓損傷區(qū)神經(jīng)元特異標(biāo)記物MAP-2的細(xì)胞明顯增多，而星形膠質(zhì)細(xì)胞的特異性標(biāo)記物GFAP的細(xì)胞明顯減少，可見NSCs向神經(jīng)元分化增多，而向星形膠質(zhì)細(xì)胞分化減少。

3討論

脊髓損傷后損傷部位會(huì)形成抑制NSCs的存活，定植及分化的微環(huán)境：脊髓損傷后局部的出血、炎癥、缺血、乏氧及高酸性環(huán)境影響NSCs的生存和定植 ；如前炎癥因子：腫瘤壞死因子a（tumor necrosis factor-alpha TNFa）可通過激活Bcl-2家族的PUMA誘導(dǎo)神經(jīng)前體細(xì)胞的凋亡[4]；而損傷后免疫系統(tǒng)的激活加重了對(duì)NSCs的損害；其又可通過加重膠質(zhì)疤痕的形成阻礙已分化神經(jīng)細(xì)胞的生長(zhǎng)[8]，當(dāng)神經(jīng)細(xì)胞觸及到膠質(zhì)疤痕后即引發(fā)生長(zhǎng)的停滯[9]；而由此引起脊髓空洞的擴(kuò)大干擾了NSCs的生存、分化及神經(jīng)元軸突的延伸，使得神經(jīng)干細(xì)胞主要分化為膠質(zhì)細(xì)胞，形成大量瘢痕組織，而極少分化為神經(jīng)元[4，10]。

在2013年，F(xiàn)orostyak提出了間充質(zhì)干細(xì)胞能改善脊髓損傷的微環(huán)境。同時(shí)在體外，本課題組已證實(shí)大鼠的BMSC-CM能夠促進(jìn)NSCs貼壁分化為神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞。眾所周知，神經(jīng)元細(xì)胞是脊髓中主要的功能細(xì)胞，有利于脊髓損傷功能的改善；而星形膠質(zhì)細(xì)胞主要形成膠質(zhì)疤痕，其增多不利于SCI的修復(fù)和功能改善。本實(shí)驗(yàn)證明在體內(nèi)，MSCs與NSCs序貫移植后大鼠脊髓損傷區(qū)NSCs向神經(jīng)元分化增多，而向星形膠質(zhì)細(xì)胞分化減少，序貫移植治療能夠促進(jìn)脊髓損傷后神經(jīng)功能的恢復(fù)、減小脊髓空洞體積?？梢哉J(rèn)為MSCs可促進(jìn)了NSCs的有效分化，減少膠質(zhì)化傾向，有利于治療SCI。

目前關(guān)于序貫治療仍是一片空白，本實(shí)驗(yàn)組提出的這種觀點(diǎn)是基于以往的多項(xiàng)研究成果，既然間充質(zhì)干細(xì)胞可以改變脊髓損傷區(qū)的微環(huán)境從而減少神經(jīng)干細(xì)胞死亡，而神經(jīng)干細(xì)胞又是目前來說研究的最成熟的可以用于細(xì)胞移植治療SCI的人體細(xì)胞，那么我們可以將間充質(zhì)干細(xì)胞與神經(jīng)干細(xì)胞結(jié)合，首先利用間充質(zhì)干細(xì)胞移植到脊髓損傷局部，改善脊髓損傷部位的微環(huán)境，使之有利于神經(jīng)細(xì)胞的生存，再移植神經(jīng)干細(xì)胞來治療脊髓損傷，讓神經(jīng)干細(xì)胞更好的發(fā)揮替代治療效應(yīng)。序貫移植治療可以作為突破脊髓損傷難以治療這個(gè)難題的一個(gè)方向，在未來的研究中我們要做更深入的探索——間充質(zhì)干細(xì)胞在體內(nèi)分泌了什么物質(zhì)影響微環(huán)境，這種物質(zhì)可以被替代嗎？序貫移植的最佳時(shí)機(jī)？神經(jīng)干細(xì)胞還可以與什么細(xì)胞聯(lián)合？等等以上問題都是我們未來需要探索的。endprint

本實(shí)驗(yàn)由于技術(shù)和時(shí)間關(guān)系無法完成大體示蹤。有關(guān)研究可在今后進(jìn)行。

4 結(jié)論

經(jīng)本次完整實(shí)驗(yàn)后可得出結(jié)論，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與神經(jīng)干細(xì)胞序貫靜脈移植修復(fù)大鼠脊髓損傷時(shí)BMSCs可促進(jìn)了NSCs的有效分化，減少膠質(zhì)化傾向，同時(shí) BMSCs減輕了局部炎性反應(yīng)，減少脊髓空洞和疤痕形成，序貫移植治療有利于脊髓損傷的修復(fù)和功能改善。

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