阿司匹林磷脂復(fù)合物的制備及其表征

賀智勇，吳朝花，嚴(yán)俊麗，李海志，沈祥春，陶玲#

（1.貴州醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，貴陽550004；2.貴州省普通高等學(xué)校天然藥物藥理與成藥性評(píng)價(jià)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，貴陽 550025）

阿司匹林磷脂復(fù)合物的制備及其表征

賀智勇1，2＊，吳朝花1，2，嚴(yán)俊麗1，2，李海志1，2，沈祥春1，2，陶玲1，2#

（1.貴州醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，貴陽550004；2.貴州省普通高等學(xué)校天然藥物藥理與成藥性評(píng)價(jià)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，貴陽 550025）

目的：制備阿司匹林磷脂復(fù)合物（ASP-PC）并進(jìn)行表征。方法：以ASP與PC的復(fù)合率為指標(biāo)，采用單因素試驗(yàn)篩選ASP-PC的制備方法、PC種類、溶劑種類、反應(yīng)時(shí)間、反應(yīng)溫度、溶劑體積和藥脂比，并進(jìn)行驗(yàn)證。采用紫外分光光度法、熱重分析法、X射線衍射法和傅里葉紅外光譜分析對(duì)所制ASP-PC進(jìn)行表征。結(jié)果：采用磁力攪拌-冷凝回流法，藥物-大豆磷脂比為1∶3（mol/mol），溶劑為四氫呋喃（50 mL），58℃下反應(yīng)3 h，所制ASP-PC的平均復(fù)合率為83.52%（RSD＝1.16%，n＝3）。與ASP、ASP和PC的物理混合物比較，紫外光譜顯示ASP-PC沒有出現(xiàn)新的吸收峰；熱重分析、X射線衍射分析和傅里葉紅外光譜分析顯示ASP-PC中的ASP與PC發(fā)生了相互作用，且ASP-PC在0～300℃范圍內(nèi)質(zhì)量變化較小。結(jié)論：成功制得ASP-PC，其中ASP與PC復(fù)合成功，但仍有微量ASP以晶體形式存在。

阿司匹林；磷脂復(fù)合物；制備工藝；光譜學(xué)性質(zhì)

ABSTRACTOBJECTIVE：To prepare aspirin phospholipid complex（ASP-PC）and conduct the characterization.METHODS：Using the combination rate of ASP and PC as index，single factor test was used to screen the preparation method of ASP-PC，PC type，solvent type，reaction time，reaction temperature，solvent volume and drug-lipid ratio.The verification test was conducted.UV spectrophotometry，Thermogravimetric analysis，X-ray diffraction and Fourier transform infrared spectroscopy were used for the characterization of ASP-PC.RESULTS：Magnetic stirring-condensing reflux method was adopted，drug-soybean phospholipids ratio was 1 ∶3（mol/mol），solvent was tetrahydrofuran，reacting for 3 h under 58 ℃.The average combination rate of prepared ASP-PC was 83.52%（RSD＝1.16%，n＝3）.Compared with ASP，physical mixture of ASP and PC，UV spectrum showed that ASP-PC had no new absorption peak.Thermogravimetric analysis，X-ray diffraction and Fourier transform infrared spectroscopy showed the ASP and PC in ASP-PC were interacted；and ASP-PC changed little in quality within 0-300 ℃.CONCLUSIONS：ASP-PC can be successfully prepared，in which，ASP and PC were combined successfully；while there are still trace amounts of ASP in the form of crystals.

KEYWORDSAspirin；Phospholipid complex；Preparation technology；Spectroscopic properties

阿司匹林（Asprin，ASP）又名乙酰水楊酸，在干燥空氣中穩(wěn)定，遇潮會(huì)緩慢水解為水楊酸和醋酸，微溶于水；傳統(tǒng)用于解熱鎮(zhèn)痛、抗炎抗風(fēng)濕疾病，數(shù)年來已廣泛用于抑制血小板聚集，成為心血管疾病的重要基礎(chǔ)治療藥物[1]。另外，其在抑制動(dòng)脈粥樣硬化、抗腫瘤、防治心肌纖維化[2]等方面的臨床用途也不斷得到擴(kuò)展。但ASP在抑制環(huán)氧酶（COX）活性從而發(fā)揮抑制血小板聚集效果的同時(shí)，間接導(dǎo)致胃黏膜上皮脫落增加并超過更新速度，使胃黏液減少，引起胃黏膜損傷或加重潰瘍的程度。此外，ASP水溶性差、生物利用度低、胃腸道藥物殘留量高，其酸性直接致胃黏膜損傷，可透過胃腸黏膜上皮脂蛋白膜層，破壞脂蛋白膜的保護(hù)作用，使胃酸可逆地彌散到組織中損傷細(xì)胞，致毛細(xì)血管破損而出血，是導(dǎo)致患者停藥的主要原因[3-4]。提高ASP的生物利用度，可減少藥物在胃腸道的殘留量，減輕藥物對(duì)胃腸道的直接刺激作用，對(duì)于提高患者依從性、維持心腦血管疾病患者的抗凝治療具有重要意義。

磷脂（Phospholipid，PC）復(fù)合物是指藥物與PC以一定的配比關(guān)系結(jié)合而成的復(fù)合物。PC主要成分為磷脂酰膽堿，由于其兩親性的特性而成為藥物遞送系統(tǒng)領(lǐng)域的一種特殊載體[5-6]，可以改善藥物的溶解度和藥物的釋放速率。PC復(fù)合物和胃腸液之間具有較低的界面張力，可以促進(jìn)藥物透膜轉(zhuǎn)運(yùn)，提高藥物較低的膜滲透率[7]，從而改善口服藥物的滲透和吸收[8]，提高藥物的生物利用度，減少藥品不良反應(yīng)，甚至起到一定的損傷修復(fù)作用等。因此，本研究旨在篩選具有較高復(fù)合率的ASP-PC復(fù)合物（簡稱ASP-PC）的制備工藝并進(jìn)行表征，以期在ASP-PC基礎(chǔ)上，為制備溶解性能改善、生物利用度提高、胃腸道副作用減輕的阿司匹林新遞送系統(tǒng)奠定基礎(chǔ)。

1 材料

1.1 儀器

D/Max-2200型全自動(dòng)X射線衍射儀（日本理學(xué)電機(jī)公司）；Nicolet 6700型傅里葉變換紅外分析儀（美國Thermo Fisher Scientific公司）；Q50型熱重分析儀（美國Waters公司）；UV-5800PC型紫外分光光度（UV）計(jì)（上海元析儀器有限公司）。

1.2 藥品與試劑

ASP原料藥[阿拉丁試劑（上海）有限公司，批號(hào)：D1316056，純度：99%]；注射用大豆PC（批號(hào)：20140702，磷脂酰膽堿含量：≥90%；批號(hào)：20140703，磷脂酰膽堿含量：≥80%）和注射用蛋黃PC（批號(hào)：20150101，磷脂酰膽堿含量：≥80%）均購自上海太偉藥業(yè)有限公司；四氫呋喃（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 ASP-PC的制備及復(fù)合率的測(cè)定

ASP和PC按照一定比例溶于適量的有機(jī)溶劑中，一定溫度條件下攪拌反應(yīng)一定時(shí)間后，減壓回收有機(jī)溶劑；加入適量石油醚，充分溶解后，經(jīng)0.22μm微孔濾膜過濾；濾液回收石油醚，真空干燥得到ASP-PC，－20℃冷凍保存。收集濾膜上殘余沉淀，干燥12 h并稱質(zhì)量，得到未復(fù)合的ASP的量，計(jì)算復(fù)合率。復(fù)合率＝（ma－mb）/ma×100%，式中，ma為ASP的初始投藥量，mb為未復(fù)合ASP的量。

2.2 單因素試驗(yàn)篩選處方工藝

2.2.1 制備方法 根據(jù)文獻(xiàn)[9]以及預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，設(shè)定ASP與PC比例為1∶3（mol/mol）、四氫呋喃50 mL，考察不同制備方法（室溫1 000 r/min磁力攪拌12、24 h；冰浴150 W超聲0.5、1 h；58℃下冷凝回流，1 000 r/min磁力攪拌2、3 h）對(duì)ASP-PC復(fù)合率的影響。不同制備方法對(duì)ASP-PC復(fù)合率的影響結(jié)果見表1。

表1 不同制備方法對(duì)ASP-PC復(fù)合率的影響Tab 1 Effects of different preparation methods on the combination ratio ofASP-PC

由表1可知，采用磁力攪拌-冷凝回流法，溫度為58℃，反應(yīng)時(shí)間為3 h時(shí)，所制ASP-PC復(fù)合率最高。

2.2.2 PC種類 按“2.2.1”項(xiàng)下條件制備ASP-PC，考察不同種類PC（磷脂酰膽堿含量≥80%的大豆PC、磷脂酰膽堿含量≥90%的大豆PC和磷脂酰膽堿含量≥80%的蛋黃PC）對(duì)ASP-PC復(fù)合率的影響。結(jié)果顯示，所制ASP-PC的復(fù)合率分別為54.56%、83.56%、54.20%，由此確定PC為磷脂酰膽堿含量≥90%的大豆PC。

2.2.3 反應(yīng)溶劑 根據(jù)“2.2.1”“2.2.2”項(xiàng)下條件制備ASP-PC，考察不同反應(yīng)溶劑（四氫呋喃、乙酸乙酯、甲醇、無水乙醇、二氯甲烷、丙酮）對(duì)ASP-PC復(fù)合率的影響。結(jié)果顯示，所制ASP-PC的復(fù)合率分別為83.56%、58.03%、31.39%、14.18%、8.49%、61.90%，由此確定反應(yīng)溶劑為四氫呋喃。

2.2.4 反應(yīng)時(shí)間 根據(jù)“2.2.1”～“2.2.3”項(xiàng)下條件制備ASP-PC，考察不同反應(yīng)時(shí)間（1、2、3、3.5、4 h）對(duì)ASP-PC復(fù)合率的影響。結(jié)果顯示，所制ASP-PC的復(fù)合率分別為47.53%、57.32%、83.56%、74.87%、65.28%，由此確定反應(yīng)時(shí)間為3 h。

2.2.5 反應(yīng)溫度 根據(jù)“2.2.1”～“2.2.4”項(xiàng)下條件制備ASP-PC，考察不同反應(yīng)溫度（30、40、50、58 ℃）對(duì)ASP-PC復(fù)合率的影響。結(jié)果顯示，所制ASP-PC的復(fù)合率分別為39.73%、41.81%、57.46%、83.56%，由此確定反應(yīng)溫度為58℃。

2.2.6 溶劑體積 根據(jù)“2.2.1”～“2.2.5”項(xiàng)下條件制備ASP-PC，考察不同溶劑體積（30、50、70、90 mL）對(duì)ASP-PC復(fù)合率的影響。結(jié)果顯示，所制ASP-PC的復(fù)合率分別為50.0%、83.56%、59.13%、54.70%，由此確定溶劑體積為50 mL。

2.2.7 ASP與PC比例 根據(jù)“2.2.1”～“2.2.6”項(xiàng)下條件制備ASP-PC，考察ASP與PC不同比例（1∶1、1∶2、1∶3、1∶3.5、1∶4，mol/mol）對(duì)ASP-PC復(fù)合率的影響。結(jié)果顯示，所制ASP-PC的復(fù)合率分別為12.52%、46.87%、83.56%、84.26%、88.83%，綜合考慮確定ASP與PC比例為1∶3。

2.3 驗(yàn)證試驗(yàn)

根據(jù)“2.2”項(xiàng)下篩選得到的處方工藝：采用磁力攪拌-冷凝回流法，ASP與PC比例為1∶3（mol/mol），四氫呋喃50 mL，58℃條件下反應(yīng)3 h，重復(fù)3次，制備3批次的ASP-PC。計(jì)算得其平均復(fù)合率為83.52%，RSD為1.16%（n＝3），說明該工藝穩(wěn)定、重復(fù)性好。

2.4 ASP-PC的光譜學(xué)分析

2.4.1 UV分析 將ASP、PC、ASP與PC物理混合物和ASP-PC分別溶于適量無水乙醇中，以無水乙醇為空白對(duì)照，在190～400 nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行UV掃描。結(jié)果顯示，與ASP和物理混合物比較，ASP-PC沒有出現(xiàn)新的吸收峰，但吸光度有所減小。這表明ASP-PC中ASP的發(fā)色基團(tuán)結(jié)構(gòu)未發(fā)生變化，但可能由于PC的極性鍵與ASP發(fā)生了相互作用，導(dǎo)致其吸光度減小。光譜圖見圖1。

2.4.2 熱重分析 采用熱重分析儀對(duì)ASP、PC、ASP與PC物理混合物和ASP-PC進(jìn)行熱重分析，溫度范圍0～300℃。結(jié)果顯示，ASP、PC和物理混合物在整個(gè)溫度范圍內(nèi)質(zhì)量均有所下降，但ASP-PC的質(zhì)量變化較小，表明ASP與PC極性端結(jié)合使得ASP-PC的熔點(diǎn)較原來的化合物有所上升，使ASP穩(wěn)定性增大。熱重分析圖見圖2。

圖1 紫外吸收光譜圖Fig 1 UV absorbance spectra

圖2 熱重分析圖Fig 2 Thermogravimetric analysis spectra

2.4.3 X射線衍射分析 在室溫下，采用X射線衍射對(duì)ASP、PC、ASP與PC的物理混合物和ASP-PC的晶體狀態(tài)進(jìn)行分析。工作電壓40 kV，測(cè)試條件Cu靶，工作電流40 mA，掃描范圍0°～80°，掃描速度4°/min。結(jié)果顯示，ASP以結(jié)晶形式存在；PC表現(xiàn)出無定形的特征；物理混合物表現(xiàn)出ASP結(jié)晶的衍射峰，但強(qiáng)度較ASP顯著減弱；ASP-PC中ASP結(jié)晶的衍射峰均消失，僅在7.454°、15.721°附近有結(jié)晶峰存在，這可能是ASP與PC的極性端之間的相互作用，使部分晶體特征被抑制所致。X射線衍射分析圖見圖3。

圖3 X射線衍射分析圖Fig 3 X-ray diffraction analysis

2.4.4 傅里葉紅外光譜分析 采用傅里葉紅外光譜儀對(duì)ASP、PC、ASP與PC的物理混合物和ASP-PC進(jìn)行分析，以KBr為參比制劑進(jìn)行紅外光譜分析，波長范圍400～4 000 cm－1。結(jié)果顯示，ASP-PC保留了PC的1 733 cm－1波長處的特征吸收峰，但其寬度以及峰的強(qiáng)度發(fā)生了一定的變化；另外，不再保持—COOH基團(tuán)的特征峰，其吸收峰的形狀和寬度也發(fā)生了變化，這可能是ASP當(dāng)中的某個(gè)官能團(tuán)與PC分子的某些部位發(fā)生了相互作用所致。傅里葉紅外光譜圖見圖4。

圖4 傅里葉紅外光譜圖Fig 4 Fourier transform infrared spectra

3 討論

根據(jù)Giraud MN等[10]研究表明，通過將ASP與二棕櫚酰磷脂酰膽堿（DPPC）制備成復(fù)合物，可以明顯增加ASP在胃腸道內(nèi)的吸收，但關(guān)于ASP-PC的制備技術(shù)的研究尚未見報(bào)道。

由于DPPC目前市場(chǎng)價(jià)位過高，不利于后期大生產(chǎn)的應(yīng)用，因此筆者選用了大豆PC和蛋黃PC進(jìn)行PC種類的考察，結(jié)果表明，磷脂酰膽堿含量≥90%的大豆PC所制的ASP-PC復(fù)合率最高。反應(yīng)溶劑考察結(jié)果表明，介電常數(shù)較小的四氫呋喃中所制的ASP-PC復(fù)合率較高，可能是由于溶劑的介電常數(shù)大，所產(chǎn)生的反向電勢(shì)也大，相應(yīng)降低了反應(yīng)物間的作用力，不利于電荷相反的離子間的化合反應(yīng)[9]。隨著反應(yīng)時(shí)間的增加，所制的ASP-PC復(fù)合率在一定范圍內(nèi)增加，但是當(dāng)反應(yīng)時(shí)間超過3.0 h后復(fù)合率反而有下降的趨勢(shì)，這可能是由于反應(yīng)時(shí)間過長、PC不穩(wěn)定引起的。盡管隨著反應(yīng)溫度的增加，復(fù)合率呈上升的趨勢(shì)，但是PC在大于60℃時(shí)易氧化變性，因此反應(yīng)溫度確定為58℃。溶劑體積過大時(shí)，ASP與PC的碰撞機(jī)會(huì)減少，而當(dāng)溶劑體積過小時(shí)，PC濃度過高可能會(huì)出現(xiàn)飽和，兩種情況都會(huì)降低復(fù)合率，綜合考慮確定溶劑體積為50 mL。隨著PC加入量的增加，復(fù)合率相應(yīng)增加，當(dāng)藥脂比增加到1∶3.5和1∶4時(shí)復(fù)合率雖然較高，但是與1∶3時(shí)比較增加幅度很小?？紤]到PC過多會(huì)使ASP-PC干燥變慢且成本增加，因此選擇1∶3作為ASP和PC的最佳比例。

通過UV、紅外光譜、X射線衍射和熱重分析可知，ASP和PC的物理混合物只是ASP與PC簡單地加和；而ASP-PC中ASP的羧基特征吸收峰基本消失，且沒有新的化學(xué)鍵形成，從而推測(cè)ASP羧基上的氧可能與PC的極性端通過偶極-偶極作用力而形成了PC復(fù)合物。

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Preparation and Characterization of Aspirin Phospholipid Complex

HE Zhiyong1，2，WU Chaohua1，2，YAN Junli1，2，LI Haizhi1，2，SHEN Xiangchun1，2，TAO Ling1，2
（1.School of Pharmacy，Guiyang Medical University，Guiyang 550004，China；2.Key Laboratory of Natural Medicinal Pharmacology and Drugability in Guizhou Colleges and Universities，Guiyang 550025，China）

R943

A

1001-0408（2017）25-3562-04

2017-02-04

2017-04-05）

（編輯：鄒麗娟）

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2017.25.28

貴州省普通高等教育科技創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)（No.黔教合人才團(tuán)隊(duì)字〔2014〕31）；貴陽市科技計(jì)劃項(xiàng)目（No.筑科合同〔20141001〕12號(hào)）

＊碩士研究生。研究方向：藥物制劑新技術(shù)和新劑型。電話：0851-8841610。E-mail：254964684@qq.com

#通信作者：教授，碩士生導(dǎo)師。研究方向：藥物制劑新技術(shù)和新劑型。電話：0851-88416160。E-mail：649511230@qq.com