復(fù)合抗原ESAT-6/CFP-10/Rv3615cELISPOT輔助診斷活動(dòng)性肺結(jié)核的應(yīng)用價(jià)值*

史會(huì)影，劉振華，占衛(wèi)紅，雷 航，王 琳，梁瑞霞，任偉宏，湯兵祥#

1)鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院呼吸內(nèi)科 鄭州 450052 2)復(fù)旦大學(xué)附屬閔行中心醫(yī)院檢驗(yàn)科 上海201100 3)上海交通大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)教研室 上海 200025 4)復(fù)旦大學(xué)附屬公共衛(wèi)生臨床中心 上海 200540 5)河南省胸科醫(yī)院呼吸內(nèi)科 鄭州 450008 6)河南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科 鄭州 450008

復(fù)合抗原ESAT-6/CFP-10/Rv3615cELISPOT輔助診斷活動(dòng)性肺結(jié)核的應(yīng)用價(jià)值*

史會(huì)影1)，劉振華2)，占衛(wèi)紅3)，雷 航3)，王 琳4)，梁瑞霞5)，任偉宏6)，湯兵祥5)#

1)鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院呼吸內(nèi)科 鄭州 450052 2)復(fù)旦大學(xué)附屬閔行中心醫(yī)院檢驗(yàn)科 上海201100 3)上海交通大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)教研室 上海 200025 4)復(fù)旦大學(xué)附屬公共衛(wèi)生臨床中心 上海 200540 5)河南省胸科醫(yī)院呼吸內(nèi)科 鄭州 450008 6)河南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科 鄭州 450008

肺結(jié)核；ESAT-6;CFP-10;Rv3615c

目的：評(píng)估結(jié)核分枝桿菌復(fù)合抗原ESAT-6/CFP-10/Rv3615c在活動(dòng)性肺結(jié)核診斷中的應(yīng)用價(jià)值。方法選取肺結(jié)核病患者78例，非結(jié)核性肺部疾病患者27例和健康體檢者39例，分別用復(fù)合抗原ESAT-6/CFP-10/Rv3615c、ESAT-6肽段庫(kù)和CFP-10肽段庫(kù)作為抗原刺激單個(gè)核淋巴細(xì)胞(PBMCs)，采用酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)檢測(cè)斑點(diǎn)形成細(xì)胞數(shù)，判斷肺結(jié)核感染情況。結(jié)果復(fù)合抗原ESAT-6/CFP-10/Rv3615c、ESAT-6肽段庫(kù)和CFP-10肽段庫(kù)檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌感染的敏感性依次為87.2%(68/78)、80.8%(63/78)、76.9%(60/78)，特異性依次為81.8%(54/66)、84.8%(56/66)、87.9%(58/66)。結(jié)論復(fù)合抗原ESAT-6 /CFP-10 /Rv3615c有較高的敏感性和特異性，對(duì)活動(dòng)性肺結(jié)核的輔助診斷有一定的臨床應(yīng)用價(jià)值。

結(jié)核病(TB)是由結(jié)核分枝桿菌(mycobacterium tuberculosis，MTB)感染引起的慢性傳染病，主要通過(guò)呼吸道傳播。全身各個(gè)臟器均能引起結(jié)核感染，其中以肺部感染最為常見。目前TB仍是嚴(yán)重威脅人類健康的傳染病。2015年全球新增TB病例1 040萬(wàn)，死亡180萬(wàn)，但僅有610萬(wàn)人明確診斷[1]。因此早期快速診斷MTB感染是控制和預(yù)防TB的關(guān)鍵。目前的TB診斷方法仍不能滿足早期快速診斷的需要。由于MTB是一種胞內(nèi)寄生菌，因此，血清中的抗體很難進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)對(duì)其進(jìn)行殺滅；機(jī)體抗結(jié)核感染需T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫參與，細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)是機(jī)體對(duì)結(jié)核感染防御的主要免疫機(jī)制[2]。2011年，Millington等[3]發(fā)現(xiàn)Rv3615c在細(xì)胞免疫中發(fā)揮重要作用，能夠產(chǎn)生與傳統(tǒng)用于MTB感染檢測(cè)的ESAT-6、CFP-10抗原相當(dāng)水平的T細(xì)胞免疫反應(yīng)。因此，該研究采用MTB重組抗原ESAT-6/CFP-10/Rv3615c(E/C/R)進(jìn)行酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)實(shí)驗(yàn)(ELISPOT)，檢測(cè)產(chǎn)生γ干擾素效應(yīng)T淋巴細(xì)胞的數(shù)量，判斷結(jié)核菌的感染情況，并與結(jié)核菌特異性抗原ESAT-6、CFP-10進(jìn)行比較，探討其對(duì)活動(dòng)性肺結(jié)核的輔助診斷價(jià)值。

1 對(duì)象與方法

1.1研究對(duì)象肺結(jié)核組為河南省胸科醫(yī)院的住院患者，共78例，其中菌陽(yáng)33例，菌陰45 例；年齡18～78(41.8±17.4)歲；女23例，男55例。非結(jié)核性肺部疾病組(簡(jiǎn)稱肺部疾病組)為河南省胸科醫(yī)院住院患者，共27例，其中肺炎15 例，肺癌9 例，支氣管囊腫1例，支氣管擴(kuò)張2例，年齡28～84(43.3±16.5)。健康對(duì)照組為在復(fù)旦大學(xué)附屬閔行中心醫(yī)院進(jìn)行健康體檢的健康人，共39例，年齡18～51(30.3±7.1歲)。肺結(jié)核組入選標(biāo)準(zhǔn)參照2001年中華醫(yī)學(xué)會(huì)結(jié)核病分會(huì)肺結(jié)核診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]。(1)菌陽(yáng)肺結(jié)核：痰抗酸桿菌涂片連續(xù)2次(+)，或1次()，或1次培養(yǎng)陽(yáng)性。(2)菌陰肺結(jié)核(痰抗酸桿菌涂片3次陰性及1次培養(yǎng)陰性)：①典型肺結(jié)核臨床癥狀和胸部X線表現(xiàn)。②抗結(jié)核治療有效。③臨床可排除其他非結(jié)核性肺部疾患。④PPD強(qiáng)陽(yáng)性；血清抗結(jié)核抗體陽(yáng)性。⑤痰結(jié)核菌PCR+ 探針檢測(cè)呈陽(yáng)性。⑥肺外組織病理證實(shí)結(jié)核病變。⑦BALF檢出抗酸分枝桿菌。⑧支氣管或肺部組織病理證實(shí)結(jié)核病變，具備①～⑥項(xiàng)中3項(xiàng)或⑦、⑧項(xiàng)中任何1項(xiàng)可確診。所有患者無(wú) HIV 感染，無(wú)糖尿病、肝炎等并發(fā)癥，無(wú)嚴(yán)重的肝、腎功能障礙，均有 BCG 接種史，抗結(jié)核治療時(shí)間小于2周。

1.2主要儀器和試劑96孔ELISPOT板購(gòu)自美國(guó)Millipore公司，植物凝集素(PHA)、ESAT-6肽段庫(kù)、CFP-10肽段庫(kù)購(gòu)自深圳達(dá)科為生物技術(shù)有限公司，人IFN-γ ELISPOT 檢測(cè)試劑盒購(gòu)自美國(guó)eBioScience公司；二級(jí)生物安全柜(力新儀器上海有限公司)，CO2培養(yǎng)箱(HERACELL 150i)，BioReader4000型酶聯(lián)斑點(diǎn)分析儀(德國(guó)Biosys GmbH公司)，復(fù)合抗原E/C/R由北京曠博生物科技有限公司提供。

1.3外周血單個(gè)核淋巴細(xì)胞的分離和計(jì)數(shù)采集5 mL外周血標(biāo)本于肝素鈉抗凝的真空采血管內(nèi)，血標(biāo)本注入管內(nèi)后，立即輕輕顛倒5次，充分混勻。在抗凝血中加入RPMI 1640培養(yǎng)基進(jìn)行稀釋混勻。新的離心管中加入一定體積的Ficoll淋巴細(xì)胞分離液，然后將稀釋后的血樣輕輕地平鋪到分離液液面上方(分離液抗凝血RPMI 1640=111，體積比)；放入離心機(jī)，18 ℃、800g離心20 min；離心結(jié)束后用吸管吸取白色云霧狀外周血單核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cells，PBMCs)層至另一15 mL無(wú)菌尖底離心管中，加入RPMI 1640培養(yǎng)基至10 mL，18 ℃、800g離心10 min；棄上清，重懸后加入7 mL RPMI 1640培養(yǎng)基，700g離心10 min；棄上清，加0.5 mL AIM-V培養(yǎng)基重懸，吸取10 μL，使用臺(tái)盼藍(lán)染色顯微鏡下計(jì)數(shù)，根據(jù)計(jì)數(shù)結(jié)果調(diào)整細(xì)胞懸液密度為2.5×106mL-1。

1.4IFN-γ釋放水平的ELISPOT檢測(cè)在無(wú)包被的96孔ELISPOT板中加入稀釋后的捕獲單克隆抗體，4 ℃過(guò)夜。加入含體積分?jǐn)?shù)10%胎牛血清(FBS)的RPMI 1640培養(yǎng)基室溫封閉1 h；每孔加入細(xì)胞密度2.5×106mL-1PBMCs懸液，陰性對(duì)照孔加入100 μL AIM-V培養(yǎng)基，陽(yáng)性對(duì)照孔加入100 μL植物血凝素，實(shí)驗(yàn)孔分別加入ESAT-6、CFP-10及復(fù)合抗原E/C/R，終質(zhì)量濃度均為10 mg/L。樣品加完后，放入37 ℃、體積分?jǐn)?shù)5% CO2培養(yǎng)箱中孵育18～24 h。加入100 μL稀釋后的檢測(cè)抗體，室溫孵育2 h。洗板，加入100 μL酶結(jié)合物液，室溫孵育45 min。洗板，每孔加入100 μL顯色底物AEC，室溫避光孵育15 min，棄顯色液，用去離子水終止反應(yīng)。反應(yīng)板置于背光、通風(fēng)良好干燥的環(huán)境中；應(yīng)用Biosys GmbH公司的BioReader 4000型酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)分析儀計(jì)數(shù)斑點(diǎn)。結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：當(dāng)陰性對(duì)照孔內(nèi)斑點(diǎn)數(shù)<10并且對(duì)照孔內(nèi)斑點(diǎn)數(shù)>20時(shí)視為實(shí)驗(yàn)有效，空白對(duì)照孔斑點(diǎn)數(shù)為0～5個(gè)，任何一個(gè)檢測(cè)孔斑點(diǎn)數(shù)減去空白對(duì)照孔斑點(diǎn)數(shù)≥6；空白對(duì)照孔斑點(diǎn)數(shù)為6～10個(gè)，且檢測(cè)孔斑點(diǎn)數(shù)≥2倍空白對(duì)照孔斑點(diǎn)數(shù)，以上兩種情況均判定為陽(yáng)性，如果不符合上述標(biāo)準(zhǔn)且陽(yáng)性質(zhì)控孔正常時(shí)檢測(cè)結(jié)果為陰性。采用E/C/R、ESAT- 6、CFP- 10作為結(jié)核分枝桿菌抗原刺激每個(gè)受檢者的PBMCs分泌IFN-γ，同時(shí)設(shè)定陰性對(duì)照及陽(yáng)性對(duì)照進(jìn)行質(zhì)控，實(shí)驗(yàn)孔的SFCs依照上述“結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)”進(jìn)行分析。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 19.0進(jìn)行分析，散點(diǎn)圖繪制采用GraphPad Prism 5。應(yīng)用校正χ2檢驗(yàn)比較E/C/R與ESAT-6、CFP-10的EILSPOT陽(yáng)性率的差異，應(yīng)用Mann-WhitneyU檢驗(yàn)比較兩組間斑點(diǎn)形成細(xì)胞數(shù)(spot forming cells，SFCs)的差異，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1肺結(jié)核組和對(duì)照組ELISPOT斑點(diǎn)形成結(jié)果見圖1。

A、F：陰性對(duì)照；B、G：陽(yáng)性；C、H：ESAT- 6；D、I：CFP- 10；E、J：E/C/R。 圖1 健康對(duì)照組(A～E)與肺結(jié)核組(F～J)ELISPOT結(jié)果

2.2復(fù)合抗原E/C/R與ESAT-6、CFP-10的ELISPOT結(jié)果比較復(fù)合抗原E/C/R和ESAT-6、CFP-10檢測(cè)肺結(jié)核病患者、肺部疾病患者及健康對(duì)照組的結(jié)核菌抗原陽(yáng)性率見表1，正常對(duì)照組與肺部疾病組2組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而肺結(jié)核組結(jié)核菌抗原陽(yáng)性率均高于肺部疾病組和正常對(duì)照組，復(fù)合抗原E/C/R和ESAT-6、CFP-10敏感性分別為87.2%(68/78)、80.8%(63/78)、76.9%(60/78)；特異性分別為81.8%(54/66)、84.8%(56/66)、87.9%(58/66)。

表1復(fù)合抗原E/C/R、ESAT-6

和CFP-10的ELISPOT診斷結(jié)果比較例(%)

2.3復(fù)合抗原E/C/R作用后3組受試者分泌IFN-γT淋巴細(xì)胞應(yīng)答水平比較結(jié)果見圖2。復(fù)合抗原E/C/R在肺結(jié)核組的SFC數(shù)均高于健康組及肺部疾病組(U=283.000、217.500，P均<0.001)，肺部疾病組與健康組的SFC數(shù)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(U=398.000，P=0.082)。

圖2 不同抗原在結(jié)核組、非結(jié)核性 肺部疾病組和健康對(duì)照組間SFCs形成數(shù)量的比較

2.4 3個(gè)抗原分別檢測(cè)菌陽(yáng)和菌陰肺結(jié)核組的結(jié)果見表2。

表2 E/C/R、ESAT-6、CFP-10分別在菌陽(yáng)和菌陰肺結(jié)核中的檢測(cè)結(jié)果 例(%)

3 討論

前期該課題組用血清學(xué)評(píng)估出一個(gè)敏感性和特異性都較高的M.tuberculosisRD5區(qū)的特異性抗原Rv3117，證實(shí)DDA/MPL佐劑具有提高免疫BCG小鼠的體液免疫和細(xì)胞免疫的作用[5-7]；同時(shí)通過(guò)ELISA實(shí)驗(yàn)對(duì)重組蛋白R(shí)v0315進(jìn)行初步的血清學(xué)抗原活性評(píng)價(jià)[8]，顯示Rv0315具有一定的血清學(xué)診斷價(jià)值，其后分別采用MTB重組蛋白R(shí)v0315及E/C/R進(jìn)行ELISPOT試驗(yàn)，探討基于Rv0315及E/C/R抗原的ELISPOT對(duì)活動(dòng)性肺結(jié)核病的輔助診斷價(jià)值[9-10]。2011年有學(xué)者[3]報(bào)道Rv3615c是一個(gè)高度依賴結(jié)核分枝桿菌基因組RD1區(qū)免疫調(diào)控的分泌抗原，非RD1區(qū)編碼，與CFP-10和ESAT-6大小相近及序列具有同源性，包含了多個(gè)肽段的集合體，可以提高檢測(cè)的靈敏度，該研究將3種復(fù)合抗原作為結(jié)核分枝桿菌刺激抗原，評(píng)估其在細(xì)胞免疫診斷價(jià)值。

建立在細(xì)胞免疫基礎(chǔ)上的γ干擾素釋放實(shí)驗(yàn)(IFN-gamma release assays，IGRAs)近年來(lái)得到了迅速發(fā)展，目前商品化的IGRA共有2種：QuantiFERON-TB(CellestisLtd，Australia)及T-SPOT.TB(Oxford Immunotec，UK)，這些實(shí)驗(yàn)都是用MTB RD1區(qū)域編碼的早期分泌抗原靶蛋白(early secreting antigen target 6kd，ESAT-6)和培養(yǎng)濾液蛋白(culture filtrate protein 10kd，CFP10)作為檢測(cè)刺激抗原，通過(guò)IFN-γ釋放水平，間接檢測(cè)MTB感染。相比結(jié)核菌素皮膚試驗(yàn)(TST)所應(yīng)用的抗原——純化蛋白衍生物(PPD)，這些抗原具有更高的特異性,王曉艷等[11]對(duì)985例結(jié)核病患者同時(shí)進(jìn)行PPD皮膚測(cè)試和ELISA法定量檢測(cè)血清IFN-γ的含量，對(duì)其結(jié)果進(jìn)行回顧性分析，TB-IGRA的敏感性和特異性(88.4%、90.8%)顯著高于PPD(77.3%、56.7%)。但現(xiàn)有的IGRAs仍然存在諸多不足，限制了其在結(jié)核病診斷中的應(yīng)用，主要集中在敏感性仍然有待提高，特別是在使用免疫抑制劑、吸煙、淋巴細(xì)胞減少癥患者容易出現(xiàn)假陰性結(jié)果[12-14]。為了改進(jìn)現(xiàn)有的IGRA診斷技術(shù)，采用增加MTB特異性抗原的方法來(lái)提高肺結(jié)核診斷的敏感性和特異性。因?yàn)槿魏螁我换騼蓚€(gè)MTB特異性抗原多肽不足以覆蓋MTB引起T淋巴細(xì)胞免疫應(yīng)答的所有表位，采用多種特異性抗原聯(lián)合可以提高敏感性。因此尋找用于診斷的新型抗原標(biāo)志物就顯得尤為重要。

該研究結(jié)果顯示，肺結(jié)核組3種蛋白的T淋巴細(xì)胞反應(yīng)均高于健康組及肺部疾病組。為了評(píng)價(jià)非結(jié)核感染是否會(huì)影響抗原的特異性免疫反應(yīng)，作者比較了肺部疾病組與健康組抗原特異性T細(xì)胞反應(yīng)，結(jié)果顯示3種抗原差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。以上結(jié)果表明非特異性免疫刺激對(duì)E/C/R、ESAT-6、CFP-10抗原的細(xì)胞免疫反應(yīng)無(wú)影響。

復(fù)合抗原E/C/R的ELISPOT陽(yáng)性率明顯高于ESAT-6、CFP-10，表明Rv3615c在結(jié)核病的細(xì)胞學(xué)診斷中發(fā)揮了重要的作用；其特異性略低于ESAT-6、CFP-10，說(shuō)明該抗原在提高敏感性的同時(shí)不可避免地會(huì)引起特異性的下降，可能與Rv3615c存在一些非特異性表位有關(guān)。Qiu等[15]研究發(fā)現(xiàn)，以細(xì)菌學(xué)診斷為金標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)用Rv3615c、ESAT-6和CFP-10 3抗原組成的肽庫(kù)與T-SPOT.TB及TB-IGRA相比較，其敏感度及特異度(86.2%，87.2%)高于TB-IGRA(83.9%，88.6%)，稍低于T-SPOT.TB(89.7%，91.1%)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，作者的研究結(jié)果與該研究結(jié)果相似。因此，應(yīng)用Rv3615c、ESAT-6、CFP-10抗原組合能夠有效地提高結(jié)核菌感染的檢出率，但當(dāng)合并其他疾病時(shí)(尤其是免疫抑制性疾病)可能產(chǎn)生較高的假陰性，需慎重考慮。作者對(duì)菌陽(yáng)及菌陰肺結(jié)核病患者結(jié)核特異抗原的陽(yáng)性率分析表明，痰菌陽(yáng)性與陰性結(jié)核病患者的陽(yáng)性率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。由于臨床上存在大量的痰菌陰性的TB患者，因此不依賴病原菌檢測(cè)，對(duì)痰菌陰性的肺結(jié)核具有重要的診斷價(jià)值。

綜上所述，復(fù)合抗原E/C/R在肺結(jié)核的細(xì)胞免疫學(xué)診斷中具有較高的敏感性和特異性，對(duì)肺結(jié)核具有重要的輔助診斷價(jià)值。

[1] ANSUMANA R,KEITELL S,ROBERTS GM,et al.Impact of infectious disease epidemics on tuberculosis diagnostic,management,and preventionservices:experiences and lessons from the 2014-2015 Ebola virus disease outbreak in West Africa[J].Int J Infect Dis,2017,56:101

[2] DHAR N, RAO V, TYAGI AK. Skewing of the Th1/Th2 responses in mice due to variation in the level of expression of an antigen in a recombinant BCG system[J].Immunol Lett,2003,88(3):175

[3] MILLINGTON KA,FORTUNE SM,LOW J,et al.Rv3615c is a highly immunodominant RD1 (region of difference 1)-dependent secreted antigen specific for Mycobacterium tuberculosis infection[J].Proc Natl Acad Sci USA,2011,108(14):5730

[4] 中華醫(yī)學(xué)會(huì)結(jié)核病學(xué)分會(huì).肺結(jié)核診斷和治療指南[J].中國(guó)實(shí)用鄉(xiāng)村醫(yī)生雜志,2013,20(2):7

[5] ZHANG MM,ZHAO JW,SUN ZQ,etal.Identification of RD5-encoded mycobacterium tuberculosis proteins as B-cell antigens used for serodiagnosis of tuberculosis[J].Clin Dev Immunol,2012,2012:738043

[6] 葉娟,高孟哲,張舒林,等.結(jié)核分枝桿菌新型抗原Rv3117聯(lián)合DDA/MPL佐劑作為亞單位疫苗在小鼠體內(nèi)的免疫評(píng)估[J].上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2015,35(1):1

[7] 湯俊明,陳翠翠,王學(xué)才,等.結(jié)核分枝桿菌特異性抗原 Rv3117的克隆表達(dá)和誘導(dǎo)小鼠免疫應(yīng)答的實(shí)驗(yàn)研究[J].上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2012，32(11):1444

[8] 陳芳芳,周業(yè)成,趙靜,等.結(jié)核分枝桿菌蛋白R(shí)v0315的克隆表達(dá)及其抗原性研究[J].中國(guó)熱帶醫(yī)學(xué),2012,12(10):1172

[9] 周業(yè)成,陳翠翠,葉娟,等.結(jié)核分枝桿菌Rv0315重組蛋白ELISPOT輔助診斷活動(dòng)性肺結(jié)核的應(yīng)用價(jià)值[J].上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2013,33(7):970

[10]陳翠翠,葉娟,趙軍偉,等.復(fù)合抗原ESAT-6/CFP-10/Rv0315在活動(dòng)性肺結(jié)核輔助診斷中的價(jià)值[J].鄭州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2014,49(2):211

[11]王曉艷，劉慧，朱俊，等.TB-IGRA檢測(cè)在結(jié)核病診斷中的價(jià)值[J].臨床肺科雜志,2014,19(5):944

[12]JEON YL, NAM YS,YOU E, et al.Factors influencing discordant results of the QuantiFERON-TB Gold in-tube test in patients with active TB[J].J Infect,2013,67(4):288

[13]HANG NT, LIEN LT, KOBAYASHI N, et al.Analysis of factors lowering sensitivity of interferon-γ release assay for tuberculosis[J].PLoS One,2011,6(8):e23806.

[14]Pan L, Jia H, Liu F, et al. False negative results of QuantiFERON TN-TB Gold in-tube test in active tuerculosis[J].Tuberc Respir Dis, 2012, 72(5):416

[15]QIU Y,WANG Y,LIN N,et al.Multicenter clinical evaluation of three commercial reagent kits based on the interferon-gamma release assay for the rapiddiagnosis of tuberculosis in China[J].Int J Infect Dis,2015,40:108

(2016-11-24收稿 責(zé)任編輯趙秋民)

Diagnositc value of ELISPOT by multiple antigens in detection of active pulmonary tuberculosis

SHIHuiying1),LIUZhenhua2),ZHANWeihong3),LEIHang3),WANGLin4),LIANGRuixia5),RENWeihong6),TANGBingxiang5)

1)DepartmentofRespiratoryMedicine，theFirstAffiliatedHospital，ZhengzhouUniversity，Zhengzhou450052 2)DepartmentofClinicalLaboratory，MinhangCentralHospital,FudanUniversity，Shanghai201100 3)DepartmentofPathogenicBiology，CollegeofBasicMedicalSciences，ShanghaiJiaotongUniversity，Shanghai200025 4)ClinicalCenterofPublicHealth，F(xiàn)udanUniversity，Shanghai200540 5)DepartmentofRespiratoryMedicine，HenanChestHospital，Zhengzhou450008 6)DepartmentofClinicalLaboratory,theFirstAffiliatedHospital,HenanUniversityofTraditionalChineseMedicine,Zhengzhou450008

pulmonary tuberculosis；ESAT-6；CFP-10；Rv3615c

Aim: To evaluate the value of mycobacterium tuberculosis composite antigen ESAT-6/CFP-10/Rv3615c in the diagnosis of active pulmonary tuberculosis. Methods: Seventy-eight patients with pulmonary tuberculosis, 27 patients with non-tuberculous lung disease and 39 healthy control were selected. The peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) were stimulated with the composite antigen ESAT-6/CFP-10/Rv3615c, ESAT-6 peptide or CFP-10 peptide. SFCs was detected by ELISPOT to determine the situation of tuberculosis infection. Results: The sensitivities of mycobacterium tuberculosis infection detected by the composite antigen ESAT-6/CFP-10/Rv3615c, ESAT-6 peptide and CFP-10 peptide were 87.2%(68/78), 80.8%(63/78), 76.9%(60/78) , respectively, and the specificities were 81.8%(54/66), 84.8%(56/66) and 87.9%(58/66) , respectively. Conclusion: The complex antigen ESAT-6/CFP-10/Rv3615c has high sensitivity and specificity, and is of certain clinical value for the auxiliary diagnosis of active pulmonary tuberculosis.

10.13705/j.issn.1671-6825.2017.05.028

*“十二·五”國(guó)家科技重大專項(xiàng) 2013ZX10003002-005；國(guó)家自然科學(xué)基金 81271794；河南省衛(wèi)生廳科技攻關(guān)項(xiàng)目 201204110

R521

#通信作者，男，1956年4月生，碩士，主任醫(yī)師，研究方向：呼吸系統(tǒng)疾病基礎(chǔ)及臨床，E-mail：tangbingxiang01@sina.com