黑素瘤組織中乙醛脫氫酶1、上皮性鈣黏附蛋白及尿激酶型纖溶酶原激活物受體的表達(dá)及臨床意義

嚴(yán)紅霞，胡成久，李 巖，孔 雪，李天航，楊錫貴

黑素瘤組織中乙醛脫氫酶1、上皮性鈣黏附蛋白及尿激酶型纖溶酶原激活物受體的表達(dá)及臨床意義

嚴(yán)紅霞，胡成久，李 巖，孔 雪，李天航，楊錫貴

目的 研究黑素瘤組織中乙醛脫氫酶1（aldehyde dehydrogenase 1，ALDH1）、上皮性鈣黏附蛋白（E-cadherin，E-cad）及尿激酶型纖溶酶原激活物受體（urokinase-type plasminogen activator receptor，uPAR）的表達(dá)及與臨床病理特征的關(guān)系。方法 選擇50例黑素瘤和50例色素痣患者的病變組織作為研究對(duì)象，采用免疫組化法檢測(cè)病變組織中的ALDH1、E-cad及uPAR的表達(dá)情況，分析這3種蛋白表達(dá)與患者臨床組織病理特征、腫瘤分期的關(guān)系。結(jié)果 黑素瘤組織中ALDH1和uPAR表達(dá)陽(yáng)性率分別為82.00%（41/50）和86.00%（43/50），均顯著高于色素痣組（P＜0.05）；黑素瘤組織中E-cad陽(yáng)性表達(dá)率為38.00%（19/50），顯著低于色素痣組（P＜0.05）。ALDH1、uPAR表達(dá)陽(yáng)性率與患者年齡、性別、腫瘤厚度、浸潤(rùn)深度、是否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和組織病理分型均無(wú)相關(guān)性，但腫瘤厚度≥4 mm、浸潤(rùn)深度Ⅳ～Ⅴ、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等患者黑素瘤組織中ALDH1、uPAR表達(dá)陽(yáng)性率均＞90%。浸潤(rùn)深度Ⅳ～Ⅴ的黑素瘤患者E-cad表達(dá)陽(yáng)性率顯著低于浸潤(rùn)深度Ⅰ～Ⅲ的患者（P＜0.05），黑素瘤患者E-cad表達(dá)陽(yáng)性率與其他臨床特征無(wú)相關(guān)性。結(jié)論 黑素瘤在發(fā)生和進(jìn)展過(guò)程中ALDH1、uPAR表達(dá)上調(diào)，E-cad表達(dá)下調(diào)，E-cad表達(dá)下調(diào)與腫瘤程度有關(guān)。

黑素瘤；乙醛脫氫酶1；上皮性鈣黏附蛋白；尿激酶型纖溶酶原激活物受體

[J Pract Dermatol, 2017, 10(4):201-204]

黑素瘤（melanoma）是來(lái)源于黑素細(xì)胞的一類惡性腫瘤，好發(fā)于30歲以上人群；90%以上的黑素瘤發(fā)生在皮膚，稱為皮膚黑素瘤（cutaneous melanoma），多見(jiàn)于背部、胸腹部和腿部，少數(shù)發(fā)生于外陰、消化道和眼內(nèi)[1]。黑素瘤是目前發(fā)病率增長(zhǎng)最快的腫瘤之一，具有預(yù)后差、病死率高的特點(diǎn)，但早期惡性黑素瘤經(jīng)外科手術(shù)擴(kuò)大切除后95%～100%的患者可治愈[2]。研究表明，乙醛脫氫酶 1（aldehyde dehydrogenase 1，ALDH1）[3]、上皮性鈣黏附蛋白（E-cadherin，E-cad）[4]及尿激酶型纖溶酶原激活物受體（urokinase-type plasminogen activator receptor，uPAR）[5]等在腫瘤發(fā)生、進(jìn)展等過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。本研究旨在通過(guò)免疫組化法研究ALDH1、E-cad和uPAR在黑素瘤組織中的表達(dá)及其臨床意義。

1 材料和方法

1.1 材料

選擇50例黑素瘤和50例色素痣患者的病變組織作為研究對(duì)象，所有患者均經(jīng)組織病理檢查確診為黑素瘤或者色素痣。皮膚惡性黑素瘤組（試驗(yàn)組）中男29例，女21例；平均年齡（46.32±5.37）歲（36～68歲）；病變部位：背部19例、腿部17例、胸腹部8例、上肢和手部4例、外陰2例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移15例。色素痣組（對(duì)照組）中男27例、女23例；平均年齡（46.79±4.86）歲（36～69歲）；病變部位：背部20例、腿部15例、胸腹部10例、上肢和手部4例、外陰1例。兩組患者年齡、性別組成、病變部位等臨床資料比較均無(wú)顯著差異（P＞0.05），具有可比性。

本研究所用小鼠抗人ALDH1、E-cad和uPAR單克隆抗體、S-P免疫組化檢測(cè)試劑盒均購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.2 方法

采用免疫組化法[6]檢測(cè)各樣本ALDH1、E-cad和uPAR蛋白表達(dá)水平，實(shí)驗(yàn)操作步驟嚴(yán)格按照S-P免疫組化檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。采用PBS緩沖液代替一抗作為陰性對(duì)照，已知抗體陽(yáng)性標(biāo)本作為陽(yáng)性對(duì)照。

ALDH1和uPAR表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)中，E-cad表達(dá)在細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)，相應(yīng)位置表現(xiàn)為淡黃色至棕褐色即為陽(yáng)性。染色結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：陽(yáng)性染色為棕色，位于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜。隨機(jī)抽取10個(gè)高倍鏡視野進(jìn)行觀察。①染色強(qiáng)度：無(wú)著色計(jì)0分，淺黃色計(jì)1分，棕黃色計(jì)2分，棕褐色計(jì)3分；②陽(yáng)性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)：無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)0分，＜10%計(jì)1分，11%～50%計(jì)2分，51%～75%計(jì)3分，＞75%計(jì)4分。以上述兩者乘積作為最后結(jié)果，其中0～2分為陰性，≥3分為陽(yáng)性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 15.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料表示為[n（%）] ，進(jìn)行χ2檢驗(yàn)。等級(jí)資料用頻數(shù)表示，多組組間采用Kruskal-Wallis檢驗(yàn)進(jìn)行比較，兩組間采用Mann-Whitney檢驗(yàn)進(jìn)行比較。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 ALDH1、E-cad和uPAR蛋白在不同組織中的表達(dá)

采用免疫組化法分別對(duì)50例試驗(yàn)組患者（圖1）以及50例對(duì)照組患者的皮損組織中ALDH1、E-cad、uPAR蛋白表達(dá)情況進(jìn)行檢測(cè)。ALDH1及uPAR檢測(cè)結(jié)果表明，在顯微鏡下能夠觀察到皮膚惡性黑素瘤組織中有部分細(xì)胞核以及細(xì)胞質(zhì)呈棕色，而在色素痣組織中則呈陰性表達(dá)。E-cad檢測(cè)結(jié)果表明，其在皮膚惡性黑素瘤組織中呈弱陽(yáng)性表達(dá)，能夠觀察到有少量細(xì)胞質(zhì)因細(xì)胞核為褐色或者棕色；而在色素痣組織中則呈陽(yáng)性表達(dá)，能夠觀察到大量細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞核均為棕色或褐色（圖2）。ALDH1、E-cad和uPAR蛋白在黑素瘤和色素痣組織中的表達(dá)情況見(jiàn)表1。黑素瘤組織中ALDH1和uPAR表達(dá)陽(yáng)性率分別為82.00%（41/50）和86.00%（43/50），均顯著高于色素痣組（P＜0.05）；而E-cad陽(yáng)性表達(dá)率為38.00%（19/50），顯著低于色素痣組（P＜0.05）。

圖1 黑素瘤患者典型臨床表現(xiàn)

圖2 黑素瘤患者皮損組織病理免疫組化（Envision染色×200）

表1 ALDH1、E-cad和uPAR蛋白在不同組織中的表達(dá) [例（%）]

表2 ALDH1、E-cad和uPAR蛋白表達(dá)與黑素瘤臨床組織病理特征的關(guān)系 [例（%）]

2.2 ALDH1、E-cad和uPAR蛋白表達(dá)與黑素瘤臨床組織病理特征的關(guān)系

ALDH1、uPAR表達(dá)陽(yáng)性率與患者年齡、性別、腫瘤厚度、浸潤(rùn)深度、是否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和組織病理分型均無(wú)相關(guān)性。但在腫瘤厚度≥4 mm、浸潤(rùn)深度Ⅳ～Ⅴ、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者皮損組織中ALDH1、uPAR表達(dá)陽(yáng)性率均＞90%。浸潤(rùn)深度Ⅳ～Ⅴ的黑素瘤患者E-cad表達(dá)陽(yáng)性率顯著低于浸潤(rùn)深度Ⅰ～Ⅲ的患者（P＜0.05），黑素瘤患者E-cad表達(dá)陽(yáng)性率除浸潤(rùn)深度外，與其他臨床特征無(wú)相關(guān)性（表2）。

3 討論

ALDH1是乙醛脫氫酶家族成員之一。人類的ALDH1基因位于9號(hào)染色體，共包含13個(gè)外顯子，編碼501個(gè)氨基酸。Ginestier等[7]研究表明ALDH1可作為乳腺癌的標(biāo)志物，之后研究人員又發(fā)現(xiàn)在白血病、結(jié)腸癌等多種腫瘤中發(fā)現(xiàn)ALDH1的表達(dá)。李亭等[8]研究發(fā)現(xiàn)ALDH1在結(jié)腸癌中表達(dá)率為76.5%，顯著高于癌旁組織。同時(shí)該研究還發(fā)現(xiàn)ALDH1表達(dá)與結(jié)腸癌的組織分化程度、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。潘兆軍等[9]研究顯示ALDH1表達(dá)與結(jié)腸癌患者的年齡、性別、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度、浸潤(rùn)深度等均無(wú)明顯相關(guān)性，但ALDH1高表達(dá)患者5年生存率明顯低于低表達(dá)患者，提示ALDH1表達(dá)程度對(duì)結(jié)腸癌患者預(yù)后有一定預(yù)測(cè)價(jià)值。本研究結(jié)果表明，ALDH1在黑素瘤組織中的表達(dá)率為82.00%，ALDH1表達(dá)陽(yáng)性率與患者年齡、性別、腫瘤厚度、浸潤(rùn)深度、是否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和組織病理分型均無(wú)相關(guān)性，但腫瘤厚度≥4 mm、浸潤(rùn)深度Ⅳ～Ⅴ、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等患者黑素瘤組織中ALDH1表達(dá)陽(yáng)性率均＞90%。

uPAR是尿激酶型纖溶酶原激活物（urokinase-type plasminogen activator，uPA）的受體，uPAR可以與uPA生長(zhǎng)因子樣區(qū)域結(jié)合，通過(guò)跨膜蛋白控制細(xì)胞外蛋白質(zhì)水解和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，進(jìn)而活化細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)分子，如黏著斑激酶（focal adhesion kinase，F(xiàn)AK）、酪氨酸與絲氨酸蛋白激酶、JAK/STAT，具有調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞增殖、分化、遷移和侵襲的作用[10]。研究證實(shí)，uPAR具有多種功能，其錨鏈結(jié)構(gòu)能夠增加細(xì)胞膜上受體的移動(dòng)，迅速捕捉和聚集uPA，能夠促進(jìn)細(xì)胞遷移、新血管生成、組織重建以及腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移等諸多生理和病理過(guò)程[11]。腫瘤的生長(zhǎng)、侵襲和轉(zhuǎn)移均依賴于腫瘤自身血管的形成，研究表明毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的出芽生長(zhǎng)強(qiáng)烈依賴于血管生長(zhǎng)因子與整合素和uPAR的相互作用[12]。另一方面，uPAR過(guò)度表達(dá)可能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞直接或者間接分泌血管生成因子，如血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）、血小板衍生因子（Platelet-derived growth factor，PDGF）及肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子（hepatocyte growth factor，HGF）等[13]。Borgfeltd等[14]研究了卵巢癌組織中uPA、uPAR的表達(dá)水平，結(jié)果顯示高分化卵巢癌組織中uPAR水平顯著高于低分化卵巢癌組織，而晚期卵巢癌組織中uPAR水平顯著低于早期卵巢癌，這可能與卵巢癌在發(fā)生、發(fā)展和侵襲過(guò)程中uPAR逐漸被消耗殆盡有關(guān)。本研究結(jié)果顯示uPAR在黑素瘤組織中的表達(dá)率為86.00%，但與患者年齡、性別、腫瘤厚度、浸潤(rùn)深度、是否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和組織病理分型均無(wú)相關(guān)性，但腫瘤厚度≥4 mm、浸潤(rùn)深度Ⅳ～Ⅴ、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等患者黑素瘤組織中uPAR表達(dá)陽(yáng)性率均＞90%，與ALDH1一致。

E-cad是表達(dá)在多數(shù)上皮組織中的一種跨膜蛋白，在上皮細(xì)胞黏附中發(fā)揮重要的作用。研究表明，E-cad表達(dá)下調(diào)與多種上皮源性腫瘤的轉(zhuǎn)移和不良預(yù)后有一定的相關(guān)性[15]。本研究結(jié)果顯示，黑素瘤組織中E-cad陽(yáng)性表達(dá)率為38.00%（19/50），顯著低于色素痣組（P＜0.05），浸潤(rùn)深度Ⅳ～Ⅴ的黑素瘤患者E-cad表達(dá)陽(yáng)性率顯著低于浸潤(rùn)深度Ⅰ～Ⅲ的患者（P＜0.05）。楊慧敏等[16]研究了皮膚黑素瘤組織中E-cad表達(dá)情況，結(jié)果表明皮膚黑素瘤組織中E-cad表達(dá)率低于色素痣組，并與腫瘤浸潤(rùn)深度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。紀(jì)長(zhǎng)偉等[17]研究發(fā)現(xiàn)，黑素瘤荷瘤小鼠病變組織中的E-cad隨發(fā)病時(shí)間的延長(zhǎng)下降。本研究結(jié)果顯示黑素瘤組織中E-cad表達(dá)率顯著低于色素痣組，可能提示E-cad表達(dá)下調(diào)與黑素瘤發(fā)生和進(jìn)展有關(guān)。

綜上，黑素瘤的發(fā)生、進(jìn)展過(guò)程中ALDH1和uPAR表達(dá)上調(diào)，而E-cad表達(dá)下調(diào)；E-cad表達(dá)下調(diào)與腫瘤浸潤(rùn)深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)。對(duì)于ALDH1、uPAR和E-cad三者之間在腫瘤發(fā)生和進(jìn)展中是否具有相關(guān)性，有待今后進(jìn)一步研究。

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Expression and clinical significance of ALDH1, E-cad and uPAR in human melanoma

YAN Hong-xia，HU Cheng-jiu，LI Yan，et al
Jinan University & College of Medical and Life Science, Shandong Academy of Medical Science, Jinan 250117, China

Objective To study the expression of aldehyde dehydrogenase 1(ALDH1), E-cadherin(E-cad) and urokinase-type plasminogen activator receptor(uPAR) in melanoma tissues and their relationship with clinicopathological features. Methods A total of 50 lesions of melanoma and 50 lesions of nevus were selected as the research objects, and the expression of ALDH1, E-cad and uPAR were detected by immunohistochemical method, then the correlations between the expression of the three kinds of proteins, clinicopathological features, and tumor staging were analyzed. Results ALDH1 and uPAR positive expression rate of melanoma tissues were 82.00% (41/50) and 86.00% (43/50) respectively, which were signifcantly higher than that of pigmented nevus group (P＜0.05); melanoma tissue E-cad positive expression rate was 38.00% (19/50), which was signifcantly lower than that of pigmented nevus group (P＜0.05). ALDH1, uPAR expression wasn’t related to age, gender, tumor thickness, depth of invasion, lymph node metastasis and pathological classifcation, but for the melanoma tissues which tumor invasion depth over 4mm, depth of invasion ranged IV ～ V and lymph node metastasis occurred, the positive expression rate of ALDH1 and uPAR was above 90%. The positive expression rate of E-cad was signifcantly lower in patients with infltrative depth ranged IV ～ V than that in patients with invasive depth ranged I ～ III (P＜0.05), and the positive expression rate of E-cad was not associated with other clinical features. Conclusion The expression of ALDH1 and uPAR was up-regulated and the expression of E-cad was down-regulated during the development and progression of melanoma. The down-regulation of E-cad expression was related to the degree of tumor.

Melanoma；ALDH1；E-cad；uPAR

R739.5

A

1674-1293(2017)04-0201-04

嚴(yán)紅霞

2017-03-16

2017-06-03）

（本文編輯 耿建麗）

10.11786/sypfbxzz.1674-1293.20170403

250117 濟(jì)南，濟(jì)南大學(xué)山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院（嚴(yán)紅霞）；山東省濟(jì)寧市第一人民醫(yī)院（胡成久，李巖，李天航）；中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院皮膚病醫(yī)院（孔雪）；山東大學(xué)附屬山東省腫瘤醫(yī)院（楊錫貴）

嚴(yán)紅霞，碩士研究生，主治醫(yī)師，研究方向：惡性腫瘤的治療，E-mail: yhx0537@163.com

楊錫貴， E-mail:zlysxgy@126.com