牛奶和蛋白類飲料防腐劑采取SPE—HPLC法檢測(cè)的效果分析

王林++許凌

摘要：目的 研究牛奶和蛋白類飲料防腐劑測(cè)定中采取固相萃取-高效液相色譜法（SPE-HPLC）的效果。方法 將牛奶和蛋白類飲料中提取的防腐劑作為研究對(duì)象，分別采用兩種檢測(cè)方式完成牛奶和蛋白類飲料中防腐劑的測(cè)定，對(duì)照組采用常規(guī)的TLC（薄層色譜法）進(jìn)行檢測(cè)，觀察組則采用固相萃取-高效液相色譜法進(jìn)行檢測(cè)，兩組均進(jìn)行0.2 g樣品量的稱取，對(duì)這兩種檢測(cè)方式的檢測(cè)結(jié)果與產(chǎn)品回收率進(jìn)行對(duì)比分析。結(jié)果 對(duì)照組乳飲品、蛋白、牛奶中的純度與分離率顯著高于對(duì)照組；觀察組的樣品回收率為99.80%，顯著高于對(duì)照組的82.00%（P<0.05）。結(jié)論 固相萃取-高效液相色譜法測(cè)定牛奶和蛋白類飲料防腐劑的效果顯著，具有簡(jiǎn)單、快捷、回收率高等優(yōu)點(diǎn)，值得廣泛推廣。

關(guān)鍵詞：牛奶；蛋白類飲料；防腐劑測(cè)定；固相萃取-高效液相色譜法

中圖分類號(hào)：R740 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1006-1959（2017）19-0080-03

Analysis of the Effect of SPE-HPLC Test on Preservatives in Milk and Protein Drinks

WANG Lin，XU Ling

（Chenghua District Center for Disease Control and Prevention，Chengdu 610051，Sichuan，China）

Abstract：Objective To study the effect of solid-phase extraction and high performance liquid chromatography（SPE-HPLC）on the determination of preservatives in milk and protein drinks.Methods The preservatives used in milk and protein beverage were used as the research object.The determination of preservatives in milk and protein beverage was carried out by two kinds of detection methods.The control group was tested by conventional TLC（thin layer chromatography），the observation group was treated by SPE-HPLC detection，the two groups were 0.2 g sample weighing， test results of the two kinds of detection methods and product recovery rate were analyzed.Results In the control group，milk drinks，protein purity and separation rate in milk was significantly higher than the control group；the sample recovery rate was 99.8% in the observation group，significantly higher than 82% in the control group（P<0.05）.Conclusion By SPE-HPLC method for the determination of the effect of milk and protein beverage preservatives significantly，has the advantages of simple，fast，high recovery and is worthy of extensive promotion.

Key words：Milk；Protein beverage；Preservative determination；Solid phase extraction-high performance liquid chromatography

現(xiàn)階段，在飲料分析過程中，固相萃取-高效液相色譜法得到了廣泛應(yīng)用，這種檢測(cè)方式具有高效、快捷等特點(diǎn)[1]。隨著科學(xué)技術(shù)的不斷進(jìn)步與發(fā)展，固相萃取-高效液相色譜法水平也在很大程度上得到提升，其分離效能、檢測(cè)靈敏度、分析速度與操作自動(dòng)化水平均得到改善[2]。雖然現(xiàn)階段的固相萃取-高效液相色譜法得到了較大發(fā)展，但是這種檢測(cè)方式依舊保留了經(jīng)典液相色譜法的一些優(yōu)點(diǎn)，例如流動(dòng)相較多、樣品適用范圍較廣、方便色譜制備等。在制藥工業(yè)、食品工業(yè)、生物工程以及石油化工等諸多領(lǐng)域，這種檢測(cè)方式均得到了廣泛應(yīng)用[3]。研究顯示，固相萃取-高效液相色譜法在牛奶和蛋白類飲料防腐劑測(cè)定中的效果顯著。本研究對(duì)此也進(jìn)行了研究，總結(jié)如下。

1 儀器與試劑

1.1試劑分析

選取市場(chǎng)上銷售的蛋白飲料、乳制飲料以及液體乳作為研究樣品；羥基苯甲酸酯（TCI-GR公司提供）、脫氫乙酸（fluka公司提供）、山梨酸、甲酸（DR公司提供）、磷酸二氫鉀、色譜純、磷酸、乙腈為主要的試劑。

1.2儀器分析

ALC-110.4電子天平；美國(guó)Waters 1525型高效液相色譜儀，配備Kromasil C18柱，2996型二極管陣列檢測(cè)器；XT-SPE-1固相萃取儀；PEP-SPE6cc固相萃取柱；上?？普躃H-3100薄層色譜系統(tǒng)；杭州奧盛KD200氮吹儀。endprint

1.3試驗(yàn)方法

將從市面上銷售的牛奶和蛋白類飲料中提取的防腐劑作為研究對(duì)象，將其分為對(duì)照組與觀察組，兩組均進(jìn)行0.2 g樣品量的稱取，對(duì)照組采用常規(guī)的TLC（薄層色譜法）進(jìn)行檢測(cè)，觀察組則采用固相萃取-高效液相色譜法進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)這兩種檢測(cè)方式的檢測(cè)結(jié)果與產(chǎn)品回收率進(jìn)行對(duì)比分析。

1.4樣品制備分析

稱取10 ml提取物，將其加入到25 ml的比色管中，然后再將乙腈加入，使其一直到刻度，進(jìn)行二十分鐘的超聲處理，對(duì)樣品進(jìn)行提取，并且將蛋白進(jìn)行科學(xué)合理的沉淀，然后再對(duì)其進(jìn)行過濾處理。完成過濾操作之后，在雞心瓶中放置5 ml濾液，將其進(jìn)行多次旋轉(zhuǎn)，蒸發(fā)到接近干，然后再將5ml甲酸水加入，對(duì)其進(jìn)行超聲洗滌，然后再對(duì)體上已經(jīng)進(jìn)行活化的PEP-SPE6cc固相萃取柱采用5 ml 10%的乙醇進(jìn)行凈化，同時(shí)采用5 ml水進(jìn)行凈化處理，進(jìn)行甲醇脫洗之后，將其定容到5 ml，氮吹到2 ml，過0.45 μm濾膜上機(jī)，對(duì)色譜進(jìn)行分析。

1.5高效液相色譜方法條件分析

①波長(zhǎng)：230 nm、254 nm；②進(jìn)樣的體積：10 μl；③柱溫：25 ℃；④流速：1.0 ml/min；⑤流動(dòng)相：乙腈與0.4%磷酸溶液（30：60）；⑥色譜柱：5 μm，4.6 mm×250 mm。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

將數(shù)據(jù)進(jìn)行錄入，然后采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)庫(kù)的建立，計(jì)數(shù)資料進(jìn)行方差齊性檢查之后，進(jìn)行？字2檢驗(yàn)；計(jì)量資料則采用（x±s）進(jìn)行表示。

2 結(jié)果

2.1兩組檢測(cè)方式檢測(cè)結(jié)果對(duì)比

通過對(duì)比分析可知，對(duì)照組乳飲品、蛋白、牛奶中的純度與分離率顯著高于對(duì)照組，其中觀察組中乳飲品的純度99.80%，分離率為 98.80%；蛋白飲料的純度99.80%，分離率為99.20%；牛奶的純度99.70%，分離率為99.90%；對(duì)照組中乳飲品的純度89.00%，分離率為 87.00%；蛋白飲料的純度90.00%，分離率為88.00%；牛奶的純度90.00%，分離率為88.00%。其次，觀察組的樣品回收率為99.80%，顯著高于對(duì)照組的82.00%（P<0.05）。

2.2固相萃取-高效液相色譜法測(cè)定結(jié)果分析

選取乙腈作為液體乳、乳飲料和植物蛋白飲料中的萃取溶劑，選擇 Agela Cleanert PEP-SPE 6cc固相萃取柱，目標(biāo)化合物被萃取柱吸附后，分別采用5 ml10%甲醇與5 ml水淋洗凈化，對(duì)目標(biāo)化合物采用乙醇進(jìn)行洗脫處理。圖1代表對(duì)植物蛋白飲料進(jìn)行加標(biāo)處理之后，經(jīng)過PEP-SPE 6cc固相萃取柱處理、乙腈提取沉淀過濾后檢測(cè)波長(zhǎng)為230 nm時(shí)的色譜圖，圖2則代表檢測(cè)波長(zhǎng)為254 nm時(shí)的色譜圖。

采用紫外光譜儀進(jìn)行掃描，發(fā)現(xiàn)脫氫乙酸與苯甲酸在230 nm處吸收較大，對(duì)羥基苯甲酸酯、山梨酸在254 nm處吸收較大。

2.3固相萃取-高效液相色譜法回收率與精密度

在同一種液體乳、含乳飲料、蛋白飲料中分別定加入苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸與羥基苯甲酸酯，添加量分別10、50、250 mg/kg，對(duì)其進(jìn)行測(cè)定。通過分析可知，液體乳、含乳飲料、蛋白飲料的回收率均較高。

3 討論

高效液相色譜法也叫“近代柱色譜”、“高分離度液相色譜”、“高速液相色譜”、“高壓液相色譜”。這一檢測(cè)方式主要是將液體作為流動(dòng)相，采用高壓輸液系統(tǒng)來完成整個(gè)檢測(cè)過程，這種檢測(cè)方式屬于色譜檢測(cè)方法中一個(gè)重要組成部分[4]。實(shí)際上，固相萃取-高效液相色譜法的采用了選擇性吸附與選擇性洗脫的液相色譜法分離原理，通常是將液體樣品溶液通過吸附劑，將其中被測(cè)物質(zhì)保留，然后再將雜質(zhì)采用適當(dāng)強(qiáng)度的溶劑沖去，最終達(dá)到快速分離凈化與濃縮的目的。固相萃取-高效液相色譜法這一檢測(cè)方式中采用了敏感度較高的檢測(cè)器、新型高壓輸液泵與高效微粒固定相，所以其檢測(cè)效果更加顯著[5]。其次，固相萃取-高效液相色譜法中使用了小口徑柱與細(xì)小的高效液相色譜填料，在高壓輸液泵的作用下，溶液能夠以較快的速度從色譜柱流過[6]。相對(duì)于以往的經(jīng)典柱色譜法而言，這種檢測(cè)方式的速度更快，同時(shí)還具備有高速、高效、高壓與高靈敏度等優(yōu)點(diǎn)。

本研究主要采用固相萃取-高效液相色譜法對(duì)牛奶和蛋白類飲料中的防腐劑進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果顯示出對(duì)照組乳飲品、蛋白、牛奶中的純度與分離率顯著高于對(duì)照組；觀察組的樣品回收率為99.80%，顯著高于對(duì)照組的82.00%（P<0.05）。由此可知，牛奶和蛋白類飲料防腐劑測(cè)定中采取固相萃取-高效液相色譜法的效果顯著，這種檢測(cè)方式不僅能夠?qū)︼嬃虾窟M(jìn)行準(zhǔn)確、有效的測(cè)定，而且能夠?qū)嬃现械南嚓P(guān)物質(zhì)檢測(cè)出來，有利于對(duì)飲料中的防腐劑進(jìn)行有效檢測(cè)[7]。

綜上所述，固相萃取-高效液相色譜法具有重復(fù)性高、靈敏度高、純度高等諸多優(yōu)點(diǎn)，在臨床上具有良好的推廣價(jià)值。

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編輯/成森endprint