頭孢泊肟酯中有機(jī)溶劑殘留的測(cè)定方法

張清國(guó)　周芳　郭樹(shù)興

[摘要] 目的 建立適合頭孢泊肟酯中有機(jī)殘留溶劑的測(cè)定方法。 方法 采用Agilent DB-624毛細(xì)管柱（30.0 m×0.25 mm×1.4 μm），頂空氣相色譜法，F(xiàn)ID檢測(cè)器，運(yùn)用外標(biāo)法、內(nèi)標(biāo)法、標(biāo)準(zhǔn)加入法和加校正因子的標(biāo)準(zhǔn)加入法測(cè)定分析頭孢泊肟酯中乙醛、甲醇、乙醇、異丙醇、二氯甲烷、異丙醚、丁酮、乙酸乙酯、四氫呋喃、環(huán)己烷、吡啶、甲苯和乙酸正丁酯的殘留量。 結(jié)果 有效分離上述各有機(jī)溶劑，在考察的濃度范圍內(nèi)各方法的結(jié)果線性均良好，r值在0.9980～1.0000之間；各殘留溶劑的檢出限在0.0250～0.3284 μg/mL之間。殘留溶劑間回收率差異顯著，乙醛回收率最低，為39.7644%～42.1885%，環(huán)己烷回收率最高，為125.3627%～132.2517%。 結(jié)論 標(biāo)準(zhǔn)加入法分析適用于頭孢泊肟酯有機(jī)溶劑殘留的測(cè)定。

[關(guān)鍵詞] 頭孢泊肟酯；殘留溶劑；乙醛；丁酮；乙酸乙酯；氣相色譜法

[中圖分類號(hào)] R961 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-7210（2017）08（a）-0037-05

[Abstract] Objective To establish a suitable method for determination of residual solvents in Cefpodoxime Proxetil. Methods Agilent DB-624 capillary column （30.0 m×0.25 mm×1.4 μm） was used， with FID detector， thirteen residual solvents （acetaldehyde， methanol， ethanol， isopropanol， dichloromethane， isopropyl ether， butanone， ethylacetate， tetrahydrofuran， cyclohexane， pyridine， toluene， butyl acetate） in Cefpodoxime Proxetil were determinated and analyzed by external standard method， internal standard method， standard addition method and correction factor standard addition method. Results The results showed that all residual solvents could be separated， and good linear relationships were obtained in their respective concentration ranges in the methods （r = 0.9980-1.0000）， the detection limits were between 0.0250 to 0.3284 μg/mL. And significant differences recovery rates between all kinds of residual solvents， with the lowest recovery rates in acetaldehyde （39.7644%-42.1885%） and with the highest recovery rates in cyclohexane （125.3627%-132.2517%）. Conclusion The standard addition method is the most suitable determination method for the residual solvents in Cefpodoxime Proxetil.

[Key words] Cefpodoxime Proxetil； Residual solvent； Acetaldehyde； Butanone； Ethylacetate； Gas chromatography

頭孢泊肟酯是第三代頭孢菌素，臨床中具有很好的抗菌效果，需求量大[1-2]。其合成過(guò)程常需使用乙醛、甲醇等多種有機(jī)溶劑[3-4]。秦立等[5]采用DB-624毛細(xì)管柱（30.0 m×0.53 mm×3.0 μm）頂空氣相色譜法建立了8種有機(jī)溶劑的檢測(cè)方法?！吨袊?guó)藥典》2010版開(kāi)始收錄頭孢泊肟酯[6-7]，錄入有關(guān)殘留溶劑18種。對(duì)福建古田藥業(yè)有限公司（以下簡(jiǎn)稱“我司”）最近5年的頭孢泊肟酯檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果顯示，所有批次均檢出乙醛和甲醇，部分批次中檢出異丙醚等。目前，《中國(guó)藥典》2015版中頭孢泊肟酯殘留溶劑項(xiàng)下并未收錄乙醛和異丙醚[7]，文獻(xiàn)中較多同時(shí)檢測(cè)甲醇、乙醇、丙酮、吡啶等多種物質(zhì)的研究[8-12]，尚未見(jiàn)同時(shí)檢測(cè)藥物中乙醛、甲醇、丁酮和乙酸乙酯的報(bào)道，因此，探索有效分離乙醛和甲醇的同時(shí)并測(cè)定頭孢泊肟酯中有機(jī)溶劑殘留是對(duì)其檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)的進(jìn)一步完善探討以及對(duì)其檢測(cè)結(jié)果有效性和可靠性的必要提升。本文根據(jù)我司檢驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)，對(duì)其所有檢出的有機(jī)溶劑及其最難分離物質(zhì)共計(jì)13種進(jìn)行系統(tǒng)的研究，旨在建立一個(gè)簡(jiǎn)便、可靠的頭孢泊肟酯中有機(jī)溶劑的測(cè)定方法，為其檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行補(bǔ)充探討，同時(shí)為其用藥安全及相關(guān)研究提供一個(gè)新的思路和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

1 儀器與試藥

島津GC-2010plus氣相色譜儀，F(xiàn)ID檢測(cè)器，Labsolutions DB 6.70工作站；DANIHSS86.50PLUS頂空進(jìn)樣器；Agilent DB-624毛細(xì)管色譜柱（30.0 m×0.25 mm×1.4 μm）；梅特勒·托利多（AB204-N）萬(wàn)分之一電子天平。甲醇（批號(hào)：20150422）、乙醇（批號(hào)：20160808）、正丙醇（批號(hào)：T20110727）、乙酸乙酯（批號(hào)：20121204）、環(huán)己烷（批號(hào)：20160902）、乙酸丁酯（批號(hào)：20161020）和二甲基亞砜（批號(hào)：20151228）為國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)；異丙醇（批號(hào)：20140802）、甲苯（批號(hào)：20150110）為天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)；二氯甲烷（批號(hào)：130618）、四氫呋喃（批號(hào)：090731）為上海試一化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)；丁酮（批號(hào)：20100520）為上海森灝精細(xì)化工有限公司生產(chǎn)；吡啶（批號(hào)：0705101）為上海申博化工有限公司生產(chǎn)；乙醛（批號(hào)：P56251）、異丙醚（批號(hào)：B2315-3）為山東西亞化學(xué)工業(yè)有限公司生產(chǎn)；其中甲醇和異丙醇為色譜純，其余試劑為分析純。頭孢泊肟酯為國(guó)內(nèi)某公司提供（批號(hào)：1611028）。endprint

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

Agilent DB-624毛細(xì)管色譜柱（30.0 m×0.25 mm×1.4 μm），程序升溫，起始溫度40℃，維持22 min，以每分鐘100℃的速率升溫至120℃，維持10 min。色譜柱流量為1.0 mL/min，分流比為20︰1，柱前壓76.5 kPa。進(jìn)樣口溫度為200℃，檢測(cè)器溫度為250℃。氮?dú)鉃檩d氣，頂空氣化室溫度為70℃平衡30 min，定量環(huán)溫度為90℃，樣品傳輸管溫度為100℃，進(jìn)樣時(shí)間1 min。

2.2 溶液配制

2.2.1 內(nèi)標(biāo)溶液

精密稱取正丙醇83.9 mg，用二甲基亞砜稀釋至500 mL。

2.2.2 對(duì)照物質(zhì)儲(chǔ)備溶液

精密稱取乙醛507.4 mg、甲醇300.9 mg、乙醇491.7 mg、二氯甲烷63.2 mg、異丙醇500.7 mg、異丙醚499.2 mg、丁酮521.5 mg、乙酸乙酯501.6 mg、四氫呋喃68.5 mg、環(huán)己烷391.5 mg、甲苯93.4 mg、吡啶29.0 mg、乙酸丁酯507.3 mg，用內(nèi)標(biāo)溶液稀釋至50 mL作為對(duì)照物質(zhì)儲(chǔ)備溶液。

2.2.3 梯度標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照物質(zhì)供試溶液

精密量取“2.2.2”項(xiàng)下儲(chǔ)備溶液1、2、3、4、5、6 mL分別置50 mL容量瓶中，用內(nèi)標(biāo)溶液稀釋至刻度，混勻，分別標(biāo)記為標(biāo)1、標(biāo)2、標(biāo)3、標(biāo)4、標(biāo)5和標(biāo)6溶液，其中標(biāo)5溶液各有機(jī)溶劑濃度約為規(guī)定限度濃度。

2.2.4 頭孢泊肟酯樣品供試溶液

取頭孢泊肟酯0.20 g置頂空瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液1 mL，密封，使溶解。

2.2.5 加樣的梯度標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照物質(zhì)供試溶液

分別取頭孢泊肟酯0.20 g置頂空瓶中，精密加入標(biāo)1、標(biāo)2、標(biāo)3、標(biāo)4、標(biāo)5和標(biāo)6溶液各1 mL，密封，使溶解。

2.3 方法學(xué)驗(yàn)證

2.3.1 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

取“2.2.5”項(xiàng)下標(biāo)5溶液1 mL置頂空瓶中，密封，進(jìn)樣，記錄色譜圖。殘留溶劑最難分離物質(zhì)對(duì)乙醛和甲醇的分離度為2.39，丁酮和乙酸乙酯的分離度為2.18。結(jié)果見(jiàn)圖1。

2.3.2 線性關(guān)系考察

2.3.2.1 精密量取“2.2.3”項(xiàng)下梯度標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照物質(zhì)供試溶液各1.0 mL置頂空瓶中，密封，頂空進(jìn)樣，重復(fù)三次，記錄色譜圖。使用外標(biāo)法分析，各物質(zhì)在上述濃度范圍內(nèi)，峰面積與濃度呈良好的線性關(guān)系，r值在0.9983～0.9999之間；使用內(nèi)標(biāo)法分析，各物質(zhì)峰面積與內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰面積之比與濃度呈良好的線性關(guān)系，r值在0.9983～1.0000之間。結(jié)果見(jiàn)表1。

2.3.2.2 取“2.2.4”項(xiàng)下樣品供試溶液和“2.2.5”項(xiàng)下加樣的梯度標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照物質(zhì)供試溶液，頂空進(jìn)樣，重復(fù)三次，記錄色譜圖。樣品供試溶液和加樣的標(biāo)5溶液的色譜圖見(jiàn)圖2。

使用標(biāo)準(zhǔn)加入法分析，各物質(zhì)峰面積與濃度呈良好的線性關(guān)系，r值在0.9989～0.9999之間；使用加校正因子的標(biāo)準(zhǔn)加入法分析，各物質(zhì)峰面積和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰面積之比與濃度間呈良好的線性關(guān)系，r值在0.9980～0.9999之間。結(jié)果見(jiàn)表2。

2.3.3 回收率考察

根據(jù)“2.3.2”項(xiàng)下標(biāo)準(zhǔn)溶液回歸方程與標(biāo)準(zhǔn)加入法結(jié)果分別計(jì)算各濃度的回收率，以各濃度的回收率平均值作為該溶劑的回收率，并計(jì)算RSD。結(jié)果見(jiàn)表3。其中，乙醛的回收率最低，約為40%，環(huán)己烷的回收率最高，約為130%。

2.3.4 檢出限和穩(wěn)定性考察

精密量取標(biāo)5溶液1 mL，置頂空瓶中，密封，進(jìn)樣，記錄色譜圖，重復(fù)12次。以CL=KSC/X計(jì)算方法的檢出限[13]，式中CL為方法的檢出限；K為置信因子，取3；S為樣品測(cè)量讀數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)偏差；C為樣品含量值；X為樣品測(cè)量讀數(shù)平均值。穩(wěn)定性以12次檢測(cè)結(jié)果的RSD表示。標(biāo)準(zhǔn)加入法和加校正因子的標(biāo)準(zhǔn)加入法的檢出限分別以外標(biāo)法和內(nèi)標(biāo)法的檢出限除以各物質(zhì)的回收率。結(jié)果見(jiàn)表4。

2.3.5 樣品的測(cè)定

取“2.3.2.2”項(xiàng)下頭孢泊肟酯樣品溶液和加樣的標(biāo)準(zhǔn)溶液檢測(cè)結(jié)果，采用外標(biāo)法、內(nèi)標(biāo)法、標(biāo)準(zhǔn)加入法和加校正因子的標(biāo)準(zhǔn)加入法進(jìn)行計(jì)算，供試頭孢泊肟酯中檢出乙醛、甲醇、異丙醇、乙酸乙酯、環(huán)己烷和甲苯6種溶劑殘留，結(jié)果見(jiàn)表5。

3 討論

殘留溶劑種類多、成分復(fù)雜以及基質(zhì)效應(yīng)顯著影響頭孢泊肟酯溶劑殘留檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，標(biāo)準(zhǔn)加入法常用于性質(zhì)不穩(wěn)定的物質(zhì)或基質(zhì)效應(yīng)顯著的樣品的氣相色譜法分析[14-16]，本研究顯示，標(biāo)準(zhǔn)加入法結(jié)果較可靠，加校正因子有利于檢測(cè)結(jié)果的穩(wěn)定性和提高檢出能力，但內(nèi)標(biāo)物質(zhì)不易確定，本文使用正丙醇為內(nèi)標(biāo)物質(zhì)，其與異丙醚分離度較小，對(duì)儀器性能要求較高，因此，通用方法建議使用標(biāo)準(zhǔn)加入法?！吨袊?guó)藥典》尚無(wú)乙醛和異丙醚的限度規(guī)定，但乙醛對(duì)機(jī)體毒性明顯[17-19]，且和甲醇不易分離；異丙醚尚無(wú)足夠毒理學(xué)資料，殘留限度需進(jìn)一部論證[7]。本研究同時(shí)對(duì)其加以分離測(cè)定，提高了頭孢泊肟酯殘留溶劑檢測(cè)的準(zhǔn)確性，并為其有關(guān)物質(zhì)、用藥安全以及相關(guān)研究建立檢測(cè)基礎(chǔ)。

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（收稿日期：2017-04-17 本文編輯：李亞聰）endprint