唐山地區(qū)柴胡根腐病病原菌分離鑒定及生物學(xué)特性研究

唐山地區(qū)柴胡根腐病病原菌分離鑒定及生物學(xué)特性研究

姜峰1，馬艷芝1，客紹英1，李小芳2
（1.唐山師范學(xué)院生命科學(xué)系，河北唐山063000；2.遷西縣農(nóng)牧局，河北遷西064300）

柴胡根腐病在河北唐山地區(qū)呈逐年加重趨勢(shì)，嚴(yán)重影響了柴胡的產(chǎn)量和質(zhì)量。為了明確唐山地區(qū)柴胡根腐病病原菌的種類，在對(duì)柴胡根腐病菌分離純化的基礎(chǔ)上，通過(guò)菌落形態(tài)觀察與病原菌16s rDNA分析，鑒定病原菌種類，并分析了病原菌的生長(zhǎng)特性。結(jié)果表明：通過(guò)對(duì)分生孢子等形態(tài)學(xué)觀察，初步認(rèn)為柴胡根腐病病原菌屬鐮刀菌屬；應(yīng)用rDNA ITS區(qū)的通用引物對(duì)病原菌基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，PCR產(chǎn)物測(cè)序后經(jīng)BLAST分析，檢測(cè)結(jié)果與形態(tài)學(xué)鑒定結(jié)果一致，確定病原菌是腐皮鐮刀菌（Fusarium solani）。菌絲體在PDA培養(yǎng)基中的最適生長(zhǎng)溫度為25℃，適宜生長(zhǎng)pH值為6～8。致病菌孢子在30℃時(shí)萌發(fā)率最高；適宜萌發(fā)pH值為6～8；孢子在25℃水滴中2 h后開始萌發(fā)，9 h后萌發(fā)率達(dá)到100%；孢子臨界致死條件為50℃、10 min。

柴胡；根腐??；病原菌；生物學(xué)特性

柴胡（Bupleurum chinense DC.）為傘形科多年生草本植物，以根入藥，具有發(fā)表退熱、疏肝解郁、升舉陽(yáng)氣的功效，在臨床上應(yīng)用廣泛，是我國(guó)常用的大宗中藥材品種[1]。由于需求量巨大，市場(chǎng)上的柴胡主要為人工栽培[2]。山西、河北、甘肅等地區(qū)是我國(guó)柴胡的主要種植地[3]。

柴胡栽培過(guò)程中的主要病害為根腐病。根腐病為土傳真菌病害，一般由1種或多種病原菌在植物根部或莖部的創(chuàng)傷口入侵而引發(fā)，菌絲體或孢子長(zhǎng)期存在于土壤或植株殘?bào)w中，在高溫、高濕和種植密集條件下極易引起根腐病的發(fā)生。在夏季6～8月高溫多雨季節(jié)，柴胡種植區(qū)的根腐病發(fā)病面積在15%～30%，在排水不暢地塊發(fā)病面積高達(dá)60%以上。因此，柴胡根腐病已成為影響柴胡產(chǎn)量和質(zhì)量的主要因素之一[4]。

李勇等[5，6]研究發(fā)現(xiàn)，柴胡根腐病在北京地區(qū)普遍發(fā)生，其中，1 a生柴胡病害較輕，2 a生柴胡發(fā)病較重。柴胡與小麥套種地區(qū)的根腐病發(fā)病率和病情指數(shù)均高于柴胡單獨(dú)栽培區(qū)。同時(shí)還發(fā)現(xiàn)，同一柴胡品種在不同區(qū)域栽培，根腐病發(fā)病率和病情指數(shù)存在較大差異。說(shuō)明栽培方式和環(huán)境因素對(duì)柴胡根腐病的發(fā)病率有較大影響。進(jìn)一步分離柴胡根腐病致病菌，鑒定其為尖孢鐮刀菌（Fusarium oxysporum），并對(duì)致病菌的生物學(xué)特性進(jìn)行了研究。向瓊等[4]在陜西商洛地區(qū)的柴胡種植基地調(diào)查時(shí)發(fā)現(xiàn)，根腐病一般在5月中、下旬開始發(fā)病，6月中旬～7月上旬為發(fā)病盛期。引起根腐病的致病菌是腐皮鐮刀菌（F.solani）。對(duì)根腐病的預(yù)防措施主要是農(nóng)業(yè)防治，即通過(guò)篩選抗性品種、輪作和控制水肥等方式，控制或減少病害的發(fā)生。朱再標(biāo)等[7]研究發(fā)現(xiàn)，施用氮、鉀肥會(huì)顯著降低柴胡對(duì)根腐病的抗性，大量施用磷肥可以降低柴胡根腐病的病情指數(shù)；對(duì)于早期發(fā)病植株，建議采用化學(xué)殺菌劑如百菌清、甲基硫菌靈和代森錳鋅等進(jìn)行灌根或噴施處理[8]。

近年來(lái)，根腐病在河北唐山地區(qū)柴胡種植基地也有發(fā)生，且呈逐年加重趨勢(shì)，嚴(yán)重影響了柴胡的產(chǎn)量和質(zhì)量。為此，在對(duì)柴胡根腐病菌分離純化的基礎(chǔ)上，對(duì)其從形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)方面進(jìn)行鑒定，以期明確唐山地區(qū)柴胡根腐病的主要致病菌及其生物學(xué)特性，為進(jìn)一步的病害防治提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

柴胡根腐病發(fā)病植株，2013年7月采自河北省唐山市玉田縣柴胡種植基地。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 病原菌的分離純化采用組織分離法，從病株根部切取厚0.2 cm的病健交界處組織，先用5%的NaClO溶液表面消毒3 min，而后用無(wú)菌水沖洗3次，再用滅菌濾紙吸干，接種到PDA培養(yǎng)基上，25℃培養(yǎng)5 d。在無(wú)菌條件下，從菌落邊緣部分挑取菌絲轉(zhuǎn)接到PDA培養(yǎng)基上，25℃培養(yǎng)2～3 d，待菌絲長(zhǎng)出后挑取菌絲進(jìn)行純化，純化的菌種于4℃保存，待用。

1.2.2 病原菌的形態(tài)學(xué)鑒定將分離獲得的候選真菌分別在PDA培養(yǎng)基上25℃培養(yǎng)7 d，觀察菌落形態(tài)、顏色；用顯微鏡觀察候選真菌分生孢子形態(tài)、隔膜有無(wú)及數(shù)目、產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)、厚垣孢子有無(wú)及著生部位等。

1.2.3 病原菌致病性的測(cè)定

1.2.3.1 離體接種。將純化的菌株在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)7 d后，加無(wú)菌水3 mL，制成濃度為107個(gè)/mL的孢子懸浮液。選取健康無(wú)病的1 a生柴胡根組織，先用清水沖洗干凈，而后用5%的NaClO溶液表面消毒3 min，再用無(wú)菌水沖洗多次，置于滅菌的培養(yǎng)皿中。采用針刺法，接種孢子懸浮液100 μL，以接種等量無(wú)菌水作為對(duì)照（CK）。在溫度25℃、相對(duì)濕度95%條件下培養(yǎng)，每處理均3次重復(fù)。

1.2.3.2 盆栽接種。選取溫室內(nèi)栽培的健康1 a生柴胡植株，先用清水將根部沖洗干凈，而后用5%的NaClO溶液對(duì)根表面消毒3 min，再用無(wú)菌水沖洗多次，晾干后，用無(wú)菌手術(shù)刀片將根部切傷，將柴胡根部在濃度為107個(gè)/mL的孢子菌懸液中浸泡10 min后，栽植于直徑20 cm的花盆中，再將孢子菌懸液灌注到根部附近的土壤中，接種量20 mL/株。以灌注無(wú)菌水作為空白對(duì)照（CK），每處理接種10株。接種后置于溫室內(nèi)，定期觀察發(fā)病情況。

1.2.4 病原菌的分子鑒定

1.2.4.1 基因組DNA提取。柴胡致病菌在PDA培養(yǎng)基上25℃恒溫培養(yǎng)7 d后，取菌絲體0.2 g，應(yīng)用CTAB法提取病原菌基因組DNA。用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)基因組DNA的完整性。

1.2.4.2 DNA-ITS區(qū)段擴(kuò)增。用真核生物基因組中的rDNA-ITS區(qū)段通用引物ITS1（5′-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3′）和ITS4（5′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′）擴(kuò)增病原菌基因組DNA。引物由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成。PCR反應(yīng)體系為25μL，包括：10×PCRBuffer（含Mg2+）2.5μL，dNTP（2.5 mmol/L）1 μL，模板DNA（約30 ng）1 μL，引物ITS1和ITS4（10 μmol/L）各1 μL，TaqDNA聚合酶（5 U/μL）0.2 μL，ddH2O 18.3 μL。擴(kuò)增程序?yàn)椋?5℃預(yù)變性5 min；95℃變性30 s，55℃退火30 s，72℃延伸60 s，30個(gè)循環(huán)；最后，72℃延伸10 min。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，Bio-Rad凝膠成像系統(tǒng)觀察、照相。

1.2.4.3 純化及測(cè)序。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳，在紫外燈下切取凝膠中的目的條帶，經(jīng)瓊脂糖凝膠回收試劑盒（上海生工）純化，由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司測(cè)序。

1.2.4.4 同源性分析。測(cè)序結(jié)果經(jīng)BLAST（http：//www. ncbi.nlm.nih.gov/blast）與NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中的已知序列進(jìn)行同源性比較，根據(jù)同源性比較結(jié)果，結(jié)合對(duì)病原菌的形態(tài)學(xué)觀察及致病性測(cè)定，最終鑒定柴胡根腐病的病原菌。

1.2.5 病原菌的生長(zhǎng)特征

1.2.5.1 溫度對(duì)病原菌菌絲生長(zhǎng)的影響。參照李勇等[6]方法，將病原菌先接種在PDA培養(yǎng)基上，然后分別放置于5、10、15、20、25、30和35℃的生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，6 d后利用十字交叉法測(cè)量菌落直徑。每處理3次重復(fù)。計(jì)算不同溫度下病原菌菌絲的生長(zhǎng)速率。

1.2.5.2 pH值對(duì)菌落生長(zhǎng)的影響。參照李勇等[6]方法，分別用1 mol/L的HCL溶液和1 mol/L的NaOH溶液調(diào)節(jié)PDA培養(yǎng)基的pH值至2、4、6、8、10和12，將培養(yǎng)基滅菌后再接種致病菌，在25℃生化培養(yǎng)箱中恒溫培養(yǎng)，6 d后測(cè)量菌落直徑。每處理3次重復(fù)。計(jì)算不同pH值下病原菌的生長(zhǎng)速率。

1.2.5.3 孢子萌發(fā)規(guī)律的研究。參照鄒慶道等[9]方法，取1滴濃度為106cfu/mL的孢子水懸液滴于凹玻片的凹坑中央，然后將凹玻片放置于鋪有吸水紙的培養(yǎng)皿中，25℃恒溫保濕培養(yǎng)，每隔1 h隨機(jī)統(tǒng)計(jì)100個(gè)孢子的萌發(fā)情況。每處理3次重復(fù)。計(jì)算不同時(shí)間的孢子萌發(fā)率。

1.2.5.4 溫度對(duì)孢子萌發(fā)的影響。采用孢子懸滴萌發(fā)法，取濃度為106cfu/mL的病原菌孢子菌懸液100 μL滴入無(wú)菌凹玻片中，然后將凹玻片置于培養(yǎng)皿中，分別放置在5、10、15、20、25、30和35℃的培養(yǎng)箱中保濕培養(yǎng)24 h，在顯微鏡下隨機(jī)統(tǒng)計(jì)100個(gè)孢子的萌發(fā)情況。計(jì)算不同溫度下的孢子萌發(fā)率。

1.2.5.5 pH值對(duì)孢子萌發(fā)的影響。分別用1 mol/L的HCL溶液和1 mol/L的NaOH溶液調(diào)節(jié)孢子水懸液的pH值至2、4、6、8、10和12，放置于25℃培養(yǎng)箱中恒溫保濕培養(yǎng)24 h，隨機(jī)觀察100個(gè)孢子的萌發(fā)情況。計(jì)算不同pH值下的孢子萌發(fā)率。

1.2.5.6 孢子致死溫度的測(cè)定。取濃度為106cfu/mL的孢子菌懸液500 μL于1.5 mL離心管中，放置于恒溫金屬浴中，分別在35～70℃（其中35～50℃以5℃為間隔，51～70℃以1℃為間隔）處理10 min，之后取100 μL滴于凹玻片上，置于25℃生化培養(yǎng)箱中恒溫培養(yǎng)24 h。觀察孢子的萌發(fā)情況，測(cè)定孢子的致死溫度。

2 結(jié)果與分析

2.1 發(fā)病情況觀察

在唐山玉田地區(qū)，柴胡根腐病一般6月中下旬隨著雨水增多開始發(fā)病，7月中下旬為發(fā)病盛期。當(dāng)年生柴胡即有發(fā)病，如不采取措施，第2 a發(fā)病情況加重。高溫、高濕、多雨年份發(fā)病重，反之，則發(fā)病較輕。根腐病主要造成柴胡根部腐爛，之后整個(gè)植株萎蔫、死亡。發(fā)病初期，柴胡根部在病原菌侵入點(diǎn)開始腐爛，而地上部分發(fā)病株與健康株之間無(wú)明顯區(qū)別，隨著根部腐爛情況的加重，在根莖交界處可以看到黑褐色病斑并逐漸擴(kuò)大，更進(jìn)一步根部完全腐爛，整個(gè)植株萎蔫、死亡。

2.2 菌落形態(tài)觀察

分離純化的菌株在PDA培養(yǎng)基上蔓延生長(zhǎng)，氣生菌絲呈白色絨毛狀，不易產(chǎn)孢（圖1）。從PDA培養(yǎng)基上挑取少量菌絲，鏡檢發(fā)現(xiàn)大量分生孢子和分生孢子梗。分生孢子梗伸長(zhǎng)、不分枝；小型分生孢子長(zhǎng)橢圓形、腎型，單胞或雙胞，數(shù)量大，呈假頭狀聚生；大型分生孢子鐮刀型，兩端較鈍，頂胞稍彎，具1～6隔，其中3隔膜占總數(shù)的99%以上；厚垣孢子球形，表面光滑或粗糙，頂生或間生于菌絲中（圖2）。

圖1 柴胡根腐病病原菌在PDA培養(yǎng)基上的形態(tài)學(xué)特征Fig.1 Morphological characteristic of pathogen on PDA medium

圖2 柴胡根腐病病原菌不同類型的孢子Fig.2 Different types of spores

2.3 致病性檢測(cè)

為了明確分離菌的致病性，首先在室內(nèi)用離體根組織進(jìn)行接種，結(jié)果顯示，接種2 d后接種點(diǎn)周圍開始長(zhǎng)出白色的菌絲體，5 d后根段布滿白色菌絲體并且開始腐爛；室內(nèi)盆栽試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，接種10 d后接種部位顏色變深，之后開始逐漸擴(kuò)散，更進(jìn)一步根部變軟，地上部分葉片逐漸卷曲、萎蔫，呈現(xiàn)與田間柴胡相似的發(fā)病癥狀。而對(duì)照均無(wú)發(fā)病癥狀。從發(fā)病組織重新分離病原菌，菌落和孢子形態(tài)與原接種病原菌一致。說(shuō)明分離菌株為柴胡根腐病的主要致病菌。

2.4 基因組DNA提取和PCR擴(kuò)增

電泳分析結(jié)果（圖3）顯示，病原菌基因組DNA長(zhǎng)度＞10 kb，電泳條帶清晰完整，基本沒(méi)有降解。以病原菌基因組DNA為模板，用rDNA的ITS區(qū)段通用引物ITS1和ITS4擴(kuò)增，得到1條400 bp左右的擴(kuò)增條帶。經(jīng)回收、純化及序列測(cè)定，擴(kuò)增條帶實(shí)際為347 bp。

圖3 柴胡根腐病病原菌基因組DNA（左）和PCR產(chǎn)物（右）電泳結(jié)果Fig.3 Electrophoresis results of genomic DNA extraction and PCR products

2.5 PCR擴(kuò)增及測(cè)序

BLAST分析結(jié)果顯示，該擴(kuò)增片段的核酸序列（登錄號(hào)：KU747010）與Gen-Bank中F.solani對(duì)應(yīng)的ITS序列同源性最高，其中，與ITS序列（KR364579、KR364574、KF986692、KF986682、KF986675）的同源性為99%。分離到的鐮刀菌形態(tài)特征與腐皮鐮刀菌（F.solani）基本一致。綜合形態(tài)學(xué)觀察、致病性測(cè)定和ITS分析結(jié)果，最終確認(rèn)本研究分離的病原菌為腐皮鐮刀菌。

2.6 溫度對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響

溫度對(duì)柴胡根腐病病原菌的生長(zhǎng)有顯著影響，其中，病原菌菌絲在10～35℃溫度范圍內(nèi)均能生長(zhǎng)，適宜生長(zhǎng)溫度范圍為25～30℃，最適生長(zhǎng)溫度為25℃；溫度為5℃時(shí)，未觀察到菌落生長(zhǎng)（圖4）。

圖4 溫度對(duì)柴胡根腐病病原菌菌絲生長(zhǎng)的影響Fig.4 Effect of temperature on hyphal extension of pathogen

2.7 pH值對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響

柴胡根腐病病原菌的菌絲在pH值2～12之間均能生長(zhǎng)，其中，pH值＜4時(shí)，菌絲生長(zhǎng)較為緩慢；pH值為6～8時(shí)，菌絲生長(zhǎng)良好，菌落背面呈現(xiàn)暗白色（圖5）。

圖5 pH值對(duì)柴胡根腐病病原菌菌絲生長(zhǎng)的影響Fig.5 Effect of pH on hyphal extension of pathogen

2.8 病原菌孢子萌發(fā)規(guī)律

25℃條件下，柴胡根腐病病原菌分生孢子2 h后開始萌發(fā)，6 h后萌發(fā)率達(dá)到88%，9 h后全部萌發(fā)（圖6）。

2.9 溫度對(duì)孢子萌發(fā)的影響

溫度對(duì)柴胡根腐病病原菌孢子萌發(fā)具有顯著影響，其中，30℃條件下病原菌孢子萌發(fā)率最高，且與其他溫度處理差異均達(dá)到了顯著水平（表1），表明柴胡根腐病病原菌孢子萌發(fā)的最適溫度為30℃。而溫度≤10℃時(shí)，孢子均不萌發(fā)；溫度＞30℃時(shí)，孢子萌發(fā)率又顯著降低。

圖6 柴胡根腐病病原菌孢子的萌發(fā)規(guī)律Fig.6 Characteristics of spore germination

表1 溫度對(duì)柴胡根腐病病原菌孢子萌發(fā)的影響（%）Table 1 Effect of temperature on spore germination

2.10 pH值對(duì)孢子萌發(fā)的影響

pH值對(duì)柴胡根腐病病原菌孢子萌發(fā)有顯著影響，其中，pH值為8條件下病原菌孢子萌發(fā)率最高，其次是pH值為6處理，二者孢子萌發(fā)率為94%~95%且差異不顯著（表2），表明柴胡根腐病病原菌孢子萌發(fā)的適宜pH值為6～8。而pH值＜6或＞10時(shí)，孢子萌發(fā)率均顯著降低（表2）。

表2 pH值對(duì)柴胡根腐病病原菌孢子萌發(fā)的影響（%）Table 2 Effect of pH on spore germination

2.11 孢子的臨界致死溫度

柴胡根腐病致病菌孢子在溫度35～45℃條件下均可萌發(fā)，但是萌發(fā)率隨著溫度的升高而降低，其中，溫度＞45℃時(shí)分生孢子不能萌發(fā)，延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間，仍然未見到孢子萌發(fā)（圖7）。表明柴胡根腐病孢子的臨界致死溫度為50℃，高溫處理后分生孢子無(wú)萌發(fā)現(xiàn)象。

圖7 柴胡根腐病分生孢子的臨界致死溫度Fig.7 Spore critical lethal temperature

3 結(jié)論與討論

近年來(lái)，由于中藥市場(chǎng)需求持續(xù)增長(zhǎng)和仿野生栽培技術(shù)的推廣，中藥材種植面積迅速擴(kuò)大，同時(shí)其病害問(wèn)題也日益突出。根莖類中藥材由于經(jīng)濟(jì)部位是根莖部，因此根腐病嚴(yán)重影響該類中藥材的產(chǎn)量和質(zhì)量。根腐病在三七[10]、黃芪[11，12]、板藍(lán)根[13]、丹參[14，15]、川芎[16，17]等中藥材種植基地均有不同程度的發(fā)生。

引起中藥材根腐病的致病菌主要是鐮刀菌屬真菌，其中，以尖孢鐮刀菌和腐皮鐮刀菌分離報(bào)道頻率較高[18]。李勇等[5]從北京地區(qū)的發(fā)病柴胡中分離并鑒定根腐病致病菌為尖孢鐮刀菌。而向瓊等[4]認(rèn)為柴胡根腐病是由腐皮鐮刀菌引起。本研究通過(guò)形態(tài)學(xué)和分子鑒定，并經(jīng)過(guò)回接驗(yàn)證，確認(rèn)引起河北唐山地區(qū)柴胡根腐病的致病菌是腐皮鐮刀菌。這說(shuō)明，不同地區(qū)的柴胡根腐病是由不同的致病菌引起。因此，更需要對(duì)不同地區(qū)的柴胡根腐病致病菌進(jìn)行分離鑒定。

本研究中對(duì)柴胡根腐病菌絲體生長(zhǎng)和孢子萌發(fā)條件進(jìn)行了探索，結(jié)果表明，病原菌在PDA培養(yǎng)基上10～35℃條件下均能生長(zhǎng)，最適生長(zhǎng)溫度為25℃。在一定的溫度范圍內(nèi)，升高溫度對(duì)菌絲生長(zhǎng)有促進(jìn)作用，溫度越高，菌絲生長(zhǎng)越快；但過(guò)高溫度會(huì)對(duì)菌絲生長(zhǎng)產(chǎn)生抑制作用，溫度超過(guò)30℃時(shí)菌絲生長(zhǎng)速率急劇下降。病原菌生長(zhǎng)適宜pH值為6～8。pH值為6～12時(shí)，病原菌菌絲生長(zhǎng)相對(duì)較快，說(shuō)明病原菌適宜在中性稍偏堿性的環(huán)境中生長(zhǎng)。病原菌孢子在適宜的條件下2 h即開始萌發(fā)，9 h后全部萌發(fā)，且孢子在較為寬泛的溫度和pH值條件下均能很好地萌發(fā)，說(shuō)明病原菌有較強(qiáng)的生命力。在唐山柴胡種植基地觀察發(fā)現(xiàn)，根腐病一般6月中下旬隨著雨水增多開始發(fā)病，7月中下旬為發(fā)病盛期。這期間當(dāng)?shù)仄骄鶜鉁貫?0～30℃，且全年降水也主要集中在6～8月，這種條件正適合柴胡根腐病病原菌的生長(zhǎng)、產(chǎn)孢和萌發(fā)，也正是該時(shí)期柴胡根腐病高發(fā)的重要原因。

柴胡根腐病菌在適宜的條件下能夠快速生長(zhǎng)繁殖，一旦發(fā)病，難于控制。因此，對(duì)柴胡根腐病的控制應(yīng)以預(yù)防為主，定期檢查土壤及柴胡根際致病鐮刀菌的情況，及時(shí)采取措施，預(yù)防病害的發(fā)生，從而提高柴胡的質(zhì)量和產(chǎn)量，促進(jìn)種植戶增產(chǎn)增收。

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Identification and Biological Characteristics of Root Rot Pathogen of Bupleurum chinense DC. in Tangshan Area

JIANG Feng1，MA Yan-zhi1，KE Shao-ying1，LI Xiao-fang2
（1.Life Science Department of Tangshan Normal University，Tangshan 063000，China；2.Agriculture and Animal Husbandry Bureau of Qianxi，Qianxi 064300，China）

Plate dilution method were used to identification of root rot pathogen of Bupleurum chinense DC.in Tangshan area，and pathogenicity was test through in vivo and in vitro experiments.The pathogen was preliminarily identified as Fusarium spp.according to its morphology，color and growth rate of the colonies，and morphology of macroconidia，microconidia，chlamydospores，and conidiophores．The fungal rDNA ITS was amplified and sequenced．The sequencing results was accepted by GenBank and the accession number is KU747010．The results of molecular detection and morphologic observation both showed that the pathogens causing root rot of Bupleurum chinense DC. is Fusarium solani．Pathogens optimum grow temperature and pH value were 25℃and 6-8，respectively.Under the environment of 25℃，the spore began to germinate in 2 hours and germination rate reached 100%after 9 hours. The killing conditions of spore were 50℃，10 min.

Bupleurum chinense DC.；Root rot；Pathogen；Biological characteristics

S435.672

A

1008-1631（2017）03-0045-06

2016-11-30

國(guó)家科技支撐計(jì)劃子課題項(xiàng)目（2011BAI07B05-4）；河北省科學(xué)技術(shù)廳項(xiàng)目（15456420）；唐山市科學(xué)技術(shù)局項(xiàng)目（15130265a）

姜峰（1976-），男，黑龍江寧安人，副教授，博士，主要從事藥用植物土傳病害生物防治研究。Tel：0315-3863212；E-mail：foodman307@163.com。