高F值寡肽液中芳香族氨基酸的脫除工藝優(yōu)化

祁文翰，樓康薇，羅紅宇

（浙江海洋大學(xué)食品與醫(yī)藥學(xué)院，浙江舟山 316022）

高F值寡肽液中芳香族氨基酸的脫除工藝優(yōu)化

祁文翰，樓康薇，羅紅宇

（浙江海洋大學(xué)食品與醫(yī)藥學(xué)院，浙江舟山 316022）

為了脫除酶解魷魚(yú)碎肉制備的寡肽液中芳香族氨基酸以提高寡肽的F值，研究了活性炭串聯(lián)靜態(tài)吸附法的脫除效果。在對(duì)活性炭型號(hào)進(jìn)行篩選的基礎(chǔ)上，探討了溫度、pH、固液比、吸附時(shí)間對(duì)芳香族氨基酸吸附效果的影響，通過(guò)正交試驗(yàn)優(yōu)化了吸附工藝。結(jié)果表明，325目粉末活性炭吸附效果最好，最佳吸附條件為溫度25℃、pH為2、固液比1:25，第一次吸附時(shí)間180 min，第二次吸附時(shí)間30 min，吸附后寡肽液F值達(dá)到25.209。

F值；高F值寡肽；活性炭吸附

高F值寡肽是一個(gè)由2～9個(gè)氨基酸殘基組成的混合小肽體系[1]。在該體系中，支鏈氨基酸（BCAA:Val,Ile,Leu）與芳香族氨基酸（AAA:Trp，Tyr，Phe）的含量比值即F值應(yīng)大于20[2]。高F值寡肽因獨(dú)特的氨基酸組成、生理調(diào)節(jié)功能且寡肽分子較游離氨基酸更易被人體吸收等諸多優(yōu)點(diǎn)[2]，已逐漸成為食品與醫(yī)藥領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)。

制備高F值寡肽的關(guān)鍵是在降低酶解液中的芳香族氨基酸含量同時(shí)，保留酶解液中的支鏈氨基酸，增大支鏈氨基酸與芳香族氨基酸含量的比值。目前去除高F值寡肽液中芳香族氨基酸的方法有很多，如凝膠過(guò)濾法、膜分離法、滲透蒸發(fā)技術(shù)、離子交換法、高效液相色譜法[3]等，但這些方法工藝復(fù)雜，成本較高，且產(chǎn)量較小，不適合工業(yè)化生產(chǎn)。活性炭吸附法不僅價(jià)格低廉，且吸附工藝簡(jiǎn)單，可重復(fù)利用，更適合用于高F值寡肽的大規(guī)模生產(chǎn)。研究表明，活性炭吸附效率高，且對(duì)疏水性化合物具有極高的親和性[4]，而芳香族氨基酸與支鏈氨基酸都為疏水性氨基酸但活性炭對(duì)芳香族氨基酸的吸附作用力還包括其具有的非極性苯環(huán)側(cè)鏈與活性炭表面存在的非極性吸附，因而當(dāng)兩類(lèi)氨基酸同時(shí)存在時(shí)，活性炭會(huì)優(yōu)先吸附芳香族氨基酸。已有文獻(xiàn)報(bào)道采用活性炭吸附脫除芳香族氨基酸，如華從伶[5]利用胰蛋白酶與風(fēng)味蛋白酶雙步酶解米糟蛋白制得米糟蛋白寡肽液，通過(guò)活性炭一步吸附脫芳后測(cè)得寡肽液F值為37.62；孔芳[6]以Alcalase酶與風(fēng)味蛋白酶雙步酶解牛乳酪蛋白制得的牛乳酪蛋白寡肽液為原料，通過(guò)活性炭一步靜態(tài)吸附去除芳香族氨基酸，所得產(chǎn)品的F值達(dá)到21.06。有資料顯示，米糟蛋白與牛乳酪蛋白中支鏈氨基酸含量分別占氨基酸總含量的23.79%與17.09%，芳香族氨基酸含量分別占氨基酸總含量的26.30%與9.37%，因兩種原料中支鏈氨基酸含量本身很高，故通過(guò)活性碳對(duì)芳香族氨基酸的特異性吸附很容易實(shí)現(xiàn)高F值。而魷魚(yú)碎肉中支鏈氨基酸與芳香族氨基酸占總氨基酸含量分別為18.22%與3.81%，均較低，因而加大了活性炭吸附芳香族氨基酸的難度。已有研究表明，高F值寡肽具有輔助治療肝腦疾病、醒酒、抗疲勞、改善手術(shù)后病人蛋白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)等多種生理功能[7]，目前臨床上大多使用的是通過(guò)氨基酸配制而成的高支（支鏈氨基酸）低芳（芳香族氨基酸）的口服液。利用魷魚(yú)加工副產(chǎn)物碎肉制備的高F值寡肽不僅具有特有的生理活性，而且還具有小肽的優(yōu)點(diǎn)，如小肽有特定的轉(zhuǎn)運(yùn)吸收機(jī)制，可直接被機(jī)體吸收，也能直接被組織蛋白質(zhì)合成利用，參與組織蛋白質(zhì)的合成[8]，特別適合體虛、消化吸收功能差的人群。同時(shí)還可以提高魷魚(yú)資源的利用效率、減少環(huán)境污染。因此，本文對(duì)活性炭串聯(lián)靜態(tài)吸附去除寡肽液中芳香族氨基酸的工藝可行性進(jìn)行探究，為活性炭吸附法提高寡肽F值提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

秘魯魷魚(yú)加工邊角碎肉，由浙江海力生集團(tuán)有限公司提供。胃蛋白酶（3 000 U/g）、風(fēng)味蛋白酶（21 000 U/g）購(gòu)自廣西南寧龐博生物工程有限公司；氫氧化鈉、鹽酸（分析純）購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；1號(hào)活性炭（200目）、2號(hào)活性炭（150目）、3號(hào)活性炭（325目）購(gòu)自江蘇森森炭業(yè)科技有限公司；4號(hào)活性炭（220目）、5號(hào)活性炭（50目）購(gòu)自成都科龍化工試劑廠(chǎng)。

1.2 儀器與設(shè)備

α-1502型紫外分光光度計(jì)（上海譜元儀器有限公司）；FJ300-SH型均質(zhì)器（上海標(biāo)本模型廠(chǎng))；日立CR21G型高速離心機(jī)(日本日立公司)；HHS型恒溫水浴鍋（上海博迅實(shí)業(yè)有限公司）；SHA-B型恒溫水浴振蕩器（金壇市岸頭良友實(shí)驗(yàn)儀器廠(chǎng)）；日立 L-8900型氨基酸分析儀（日本日立公司）；PHB-4型便攜式pH計(jì)（上海儀電分析儀器有限公司）；LGJ-10型真空冷凍干燥機(jī)（河南兄弟儀器設(shè)備有限公司）。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 工藝流程

原料解凍→勻漿→雙酶分步水解→高溫滅酶→離心過(guò)濾→超濾→活性炭串聯(lián)吸附→離心→OD值測(cè)定→氨基酸組成分析。

其中，超濾是采用截留分子量為2 500的超濾膜，獲得MW≤2 500 Da的寡肽酶解液組分。

1.3.2 芳香族氨基酸脫除效果的評(píng)價(jià)

支鏈氨基酸在波長(zhǎng)為220 nm時(shí)有最大特征吸收峰，芳香族氨基酸在波長(zhǎng)為280 nm時(shí)有最大特征吸收峰[9]，因此可以通過(guò)紫外分光光度計(jì)測(cè)定酶解液在220 nm與280 nm下的吸光值，并以O(shè)D220/OD280作為脫芳效果的評(píng)價(jià)指標(biāo)反映酶解液中支鏈氨基酸與芳香族氨基酸的濃度比。

1.3.3 活性炭型號(hào)篩選

魷魚(yú)碎肉蛋白酶解液，經(jīng)真空抽濾后取上清液，調(diào)節(jié)上清液pH，按固液比為1:20分別加入5種不同型號(hào)的活性炭靜態(tài)吸附2 h，之后于8 000 r/min離心10 min取上清液，并測(cè)定上清液（稀釋200倍）在220 nm與280 nm下的吸光度比值（OD220/OD280），篩選出芳香族氨基酸去除率與支鏈氨基酸保留率最優(yōu)的活性炭型號(hào)。其中支鏈氨基酸保留率及芳香族氨基酸去除率計(jì)算方法如下。

1.3.4 活性炭吸附芳香族氨基酸的單因素試驗(yàn)

選定活性炭型號(hào)后，分別改變溫度、pH、固液比、吸附時(shí)間，考察四個(gè)因素的不同水平對(duì)活性炭靜態(tài)吸附效果的影響。

1.3.5 靜態(tài)吸附工藝優(yōu)化

根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果，以pH、固液比、吸附時(shí)間作為影響活性炭靜態(tài)吸附脫芳效果的因素，設(shè)計(jì)三因素三水平正交試驗(yàn)，以脫芳后蛋白酶解液OD220/OD280比值作為考察指標(biāo)，對(duì)活性炭靜態(tài)吸附脫芳的條件進(jìn)行優(yōu)化。

表1 正交試驗(yàn)因素水平表Tab.1 Factors and levels of orthogonal array design

1.3.6 二次吸附脫芳實(shí)驗(yàn)

將第一次活性炭吸附后的寡肽液于8 000 r/min離心10 min，取上清液，調(diào)節(jié)上清液溫度為25℃、pH為2、固液比為1:25，考察二次吸附時(shí)間分別為15、30、45、60、120、180 min時(shí)，再次脫芳效果。

1.3.7 寡肽液氨基酸組成分析與F值的測(cè)定

利用氨基酸自動(dòng)分析儀對(duì)脫芳前后寡肽液的氨基酸組成進(jìn)行測(cè)定。按下式計(jì)算寡肽液的F值：

式中，Val、Ile、Tyr、Phe、Leu分別代表纈氨酸、異亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸和亮氨酸的含量。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論

2.1 活性炭型號(hào)篩選

活性炭靜態(tài)吸附是為了最大程度脫除芳香族氨基酸的同時(shí)盡量保證支鏈氨基酸的損失率較小，以提高寡肽液的F值。因此本實(shí)驗(yàn)以O(shè)D220/OD280、支鏈氨基酸保留率與芳香族氨基酸去除率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，篩選出吸附效果最佳的活性炭型號(hào)。結(jié)果如圖1。

研究表明，活性炭制作原料的差異、比表面積的大小均可以影響活性炭的吸附效果[10]。本實(shí)驗(yàn)使用的1、2、3、4號(hào)活性炭均為粉末活性炭，5號(hào)為顆?；钚蕴?，從圖1可以看出，5號(hào)活性炭為顆粒型，比表面積較小，吸附容量小。2號(hào)活性炭吸附能力最差，且吸附后OD220/OD280過(guò)低，因而不予考慮。而其余三種粉末活性炭目數(shù)更高，比表面積更大，具有更好的吸附力。1號(hào)活性炭與3、4號(hào)活性炭相比，雖然支鏈氨基酸的保留率更高，但芳香族氨基酸的去除率和OD220/OD280都更低。3號(hào)活性炭在三項(xiàng)評(píng)價(jià)指標(biāo)中均優(yōu)于4號(hào)，這是因?yàn)?號(hào)活性炭比表面積最大，吸附容量高于其它型號(hào)活性炭，故吸附效果最好，因此本實(shí)驗(yàn)選用3號(hào)活性炭（325目）作為吸附劑。

圖1 不同活性炭吸附效果比較Fig.1 Comparison of absorption result of different activated carbon

2.2 活性炭靜態(tài)吸附單因素實(shí)驗(yàn)

2.2.1 溫度對(duì)活性炭吸附效果的影響

在pH為3，固液比1:20，吸附時(shí)間為3 h條件下，分別考察了溫度為 25℃、30℃、35℃、40℃、45℃、50℃時(shí)活性炭靜態(tài)吸附芳香族氨基酸的效果，結(jié)果如圖2。

從圖2可以看出，伴隨溫度的變化，芳香族氨基酸去除率、支鏈氨基酸保留率與OD220/OD280值均無(wú)顯著性差異，由此說(shuō)明在試驗(yàn)設(shè)計(jì)的溫度范圍內(nèi)，溫度對(duì)活性炭靜態(tài)吸附效果影響不大?；钚蕴课锢砦降倪^(guò)程是一個(gè)放熱過(guò)程，從熱力學(xué)的角度分析，溫度升高將導(dǎo)致活性炭吸附率下降[11]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果與熱力學(xué)分析不一致，原因與活性炭對(duì)芳香族氨基酸的吸附機(jī)理有關(guān)?；钚蕴繉?duì)氨基酸的吸附作用力主要包含靜電作用力與非靜電作用力，隨著溫度升高，堵在活性炭微孔口的分子和碳表面基團(tuán)之間的靜電作用力被削弱，因此芳香族氨基酸可以順利通過(guò)微孔口，得以與自己的吸附位點(diǎn)接觸，在這兩種現(xiàn)象的共同作用下導(dǎo)致溫度對(duì)活性炭吸附效果影響較低。因此，綜合考慮OD220/OD280值和生產(chǎn)能耗因素，本試驗(yàn)選擇常溫25℃為最適溫度。

2.2.2 pH對(duì)活性炭吸附效果的影響

在溫度為25℃，固液比1:20，吸附時(shí)間為3 h條件下，分別考察了 pH 為 1、2、3、4、5、6 時(shí)活性炭靜態(tài)吸附芳香族氨基酸的效果，結(jié)果如圖3。

從圖3可以看出，pH對(duì)活性炭靜態(tài)吸附的效果影響顯著，酸性條件下活性炭吸附能力最強(qiáng)，對(duì)芳香族與支鏈氨基酸都有較強(qiáng)吸附，原因可能與支鏈氨基酸與芳香族氨基酸的等電點(diǎn)有關(guān)，兩類(lèi)氨基酸的等電點(diǎn)均在5.48～6.02，因而當(dāng)pH在低于這個(gè)范圍的酸性條件下，易使含有該類(lèi)型氨基酸的蛋白質(zhì)帶有正電荷進(jìn)而增強(qiáng)了與活性炭之間的吸附效果[12]。因活性炭對(duì)芳香族氨基酸具有的非極性苯環(huán)側(cè)鏈存在的非極性吸附作用力，因而活性炭對(duì)芳香族氨基酸的特異性選擇吸附更強(qiáng)。脫芳反應(yīng)的整體趨勢(shì)為伴隨pH升高，活性炭吸附能力降低，尤其對(duì)芳香族氨基酸吸附能力降低明顯，OD220/OD280呈先增后降的趨勢(shì)，在pH為2時(shí)達(dá)到最大，當(dāng)pH為1時(shí)溶液酸性過(guò)強(qiáng)，蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)易遭到破壞，影響吸附效果。

2.2.3 不同固液比對(duì)活性炭吸附效果的影響

在pH為2、溫度為25℃，吸附時(shí)間為3 h條件下，分別考察了固液比為 1:10、1:15、1:20、1:25、1:30、1:35時(shí)對(duì)活性炭靜態(tài)吸附芳香族氨基酸的效果，結(jié)果如圖4。

從圖4可以看出，固液比對(duì)吸附效果的影響顯著。溶液中支鏈氨基酸含量遠(yuǎn)大于芳香族氨基酸，所以當(dāng)固液比較大時(shí)，活性炭對(duì)芳香族氨基酸的結(jié)合位點(diǎn)達(dá)到飽和，對(duì)支鏈氨基酸仍在吸附，造成支鏈氨基酸損失率增加，同時(shí)也增加了活性炭的用量，導(dǎo)致離心等后續(xù)操作的困難。而當(dāng)固液比較小時(shí)，溶液中芳香族氨基酸含量超過(guò)活性炭吸附容量，導(dǎo)致芳香族氨基酸去除率過(guò)低，OD220/OD280的數(shù)值也過(guò)小，不利于蛋白酶解液的高F值化。而當(dāng)固液比為1:25時(shí)，OD220/OD280數(shù)值達(dá)到最高，因此本實(shí)驗(yàn)確定固液比為1:25為最佳靜態(tài)吸附條件。

圖2 溫度對(duì)吸附效果的影響Fig.2 The influence of temperature on absorption result

圖3 pH對(duì)吸附效果的影響Fig.3 The influence pH on absorption result

圖4 活性炭固液比對(duì)吸附效果的影響Fig.4 The influence of solid-liquid ratio of activated carbon on adsorption result

2．2．4 吸附時(shí)間對(duì)活性炭吸附效果的影響

在pH為2、溫度為25℃，固液比為1:20條件下，分別考察了時(shí)間為 30、60、120、180、240、300 min 時(shí)活性炭靜態(tài)吸附芳香族氨基酸的效果，結(jié)果如圖5。

從圖5可以看出，伴隨吸附時(shí)間的增加，支鏈氨基酸的保留率逐漸降低但變化不大，芳香族氨基酸去除率逐漸升高后趨于穩(wěn)定，OD220/OD280值在180 min達(dá)到最高。在30 min時(shí)支鏈氨基酸保留率最高而芳香族氨基酸去除率較低，但OD220/OD280比值已達(dá)到10．27，造成這一現(xiàn)象的主要原因?yàn)榈鞍姿庖褐谐ф湴被崤c芳香族氨基酸外還含有其他多種氨基酸，而多數(shù)氨基酸在220 nm的波長(zhǎng)下都具有吸收，因而220 nm的吸光度只能粗略反應(yīng)支鏈氨基酸的保留率，在280 nm具有特征吸收峰的氨基酸只有芳香族氨基酸[13]，因而在吸附過(guò)程剛開(kāi)始時(shí)，會(huì)因多種氨基酸與活性炭吸附速度較快而導(dǎo)致220 nm下吸光度突降，隨著吸附的進(jìn)行，當(dāng)吸附解吸達(dá)到平衡后，此時(shí)通過(guò)蛋白水解液在220 nm下的吸光度反映支鏈氨基酸會(huì)更加準(zhǔn)確。因此綜合各項(xiàng)指標(biāo)，吸附時(shí)間為180 min時(shí)活性炭吸附效果最佳，且OD220/OD280達(dá)到最大值11．28。

2．3 活性炭靜態(tài)吸附工藝優(yōu)化結(jié)果

因溫度對(duì)吸附效果影響不顯著，故確定25℃作為最適溫度，不再優(yōu)化。在單因素實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，通過(guò)三因素三水平正交試驗(yàn)對(duì)活性炭靜態(tài)吸附芳香族氨基酸的工藝進(jìn)行優(yōu)化，結(jié)果見(jiàn)表2。

圖5 吸附時(shí)間對(duì)吸附效果的影響Fig．5 The influence of reaction time on absorption result

表2 正交試驗(yàn)結(jié)果Tab．2 Results of orthogonal array design

表3 方差分析結(jié)果Tab．3 Results of variance analysis

由極差分析可知，三因素對(duì)活性炭靜態(tài)吸附效果的影響強(qiáng)弱順序?yàn)镃＞A＞B。由方差分析可知，活性炭固液比與pH值對(duì)吸附效果影響顯著（P＜0．05），吸附時(shí)間對(duì)本實(shí)驗(yàn)影響不顯著（P＞0．05）。通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化可得出本實(shí)驗(yàn)的最佳工藝為A1B2C2。即pH為2、吸附時(shí)間為180 min，活性炭固液比為1:25。在此實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行了三次平行試驗(yàn)，測(cè)得脫芳后蛋白水解液OD220/OD280值達(dá)到14．97±0．21，說(shuō)明此優(yōu)化工藝是穩(wěn)定可行的。

經(jīng)氨基酸組成分析測(cè)得脫芳后蛋白水解液F值為12．81，未達(dá)到高F值寡肽要求，因而對(duì)再次吸附條件進(jìn)行探究，以提高酶解液的F值。

2．4 二次吸附脫芳結(jié)果

通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)及正交優(yōu)化設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)可以得出，溫度對(duì)活性炭吸附效果影響不大，pH為2、固液比為1:25時(shí)活性炭吸附效果最佳，因此本實(shí)驗(yàn)僅通過(guò)比較時(shí)間因素對(duì)活性炭的二次靜態(tài)吸附效果的影響，目的是將寡肽液的F值提高至20以上，以滿(mǎn)足高F值寡肽的要求。試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 吸附時(shí)間對(duì)二次吸附效果的影響Tab．4 The influence of reaction time on the second absorption result

由表4可知，隨著時(shí)間的增加，芳香族氨基酸去除率先升高并于30 min后趨于穩(wěn)定，支鏈氨基酸保留率先降低，與45 min后逐漸穩(wěn)定，吸附時(shí)間為30 min時(shí)的OD220/OD280比15min時(shí)顯著升高并達(dá)到最大值，之后OD220/OD280呈下降趨勢(shì)。原因主要在于酶解液經(jīng)第一次吸附脫芳后，芳香族氨基酸含量降低，因而只需較短時(shí)間就達(dá)到吸附平衡，隨著時(shí)間延長(zhǎng)反而造成支鏈氨基酸的損失，因此確定二次吸附時(shí)間為30 min，通過(guò)三次平行實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了在此條件下，二次吸附酶解液OD220/OD280達(dá)到28．81±0．11，蛋白水解液F值為25．209，滿(mǎn)足高F值寡肽要求。

2．5 氨基酸組成分析與F值的測(cè)定

對(duì)魷魚(yú)碎肉蛋白水解液、該水解液通過(guò)活性炭靜態(tài)吸附優(yōu)化工藝進(jìn)行脫芳處理后，取上清液冷凍干燥并進(jìn)行氨基酸組成分析，結(jié)果見(jiàn)表5～7。

由表5、6可知，經(jīng)過(guò)吸附，支鏈氨基酸含量占總氨基酸含量的17．30%，芳香族氨基酸含量占總氨基酸含量的1．35%，且本實(shí)驗(yàn)的支鏈氨基酸保留率達(dá)到83．35%，芳香族氨基酸的去除率達(dá)到69．14%。理論上在波長(zhǎng)為280 nm的條件下僅有芳香族氨基酸具有特征吸收峰，因而實(shí)驗(yàn)中利用測(cè)定280 nm數(shù)值判斷芳香族氨基酸含量的方法可以較準(zhǔn)確的反映出芳香族氨基酸的去除率，而220 nm波長(zhǎng)下雖支鏈氨基酸具有最大吸收峰但仍有多種氨基酸具有吸收，因此在吸附過(guò)程中于活性炭在吸附支鏈氨基酸的同時(shí)也吸附了其他多種氨基酸，會(huì)導(dǎo)致通過(guò)實(shí)驗(yàn)中利用測(cè)定220 nm下吸光值反映的支鏈氨基酸的保留率較低。通過(guò)氨基酸組成分析得到的芳香族氨基酸去除率與實(shí)驗(yàn)中通過(guò)吸光度計(jì)算的芳香族氨基酸去除率相差不大，而支鏈氨基酸保留率確較吸光度法高出較多，驗(yàn)證了這一理論。但最優(yōu)條件下吸附獲得的蛋白水解液F值雖有了大幅提升，但仍?xún)H達(dá)到12．81，并未滿(mǎn)足高F值寡肽液F值大于20的標(biāo)準(zhǔn)。究其原因主要為本實(shí)驗(yàn)原料為秘魯魷魚(yú)碎肉，具有水分含量高，蛋白含量低的特點(diǎn)，且不同種類(lèi)魷魚(yú)的氨基酸組成區(qū)別較大，因而酶解液中含有較多芳香族氨基酸，導(dǎo)致了僅通過(guò)一步吸附實(shí)現(xiàn)高F值，因此需要進(jìn)行二次吸附，將經(jīng)過(guò)一次吸附的酶解液F值進(jìn)一步提高。

由表7可知，經(jīng)過(guò)活性炭的二次吸附，支鏈氨基酸含量占總氨基酸含量的13．65%，芳香族氨基酸基本吸附完全，余下含量?jī)H占總氨基酸含量的0．54%，且樣品F值達(dá)到25．209，滿(mǎn)足高F值寡肽F值大于20的要求，因此制備的酶解液符合高F值寡肽的要求。

表5 活性炭吸附前酶解液的氨基酸組成分析Tab.5 Result of amino acid analysis of supernatant before the adsorption

表6 活性炭一次吸附后酶解液的氨基酸組成分析Tab.6 Result of amino acid analysis of supernatant after the first time adsorption

表7 活性炭二次吸附后酶解液的氨基酸組成分析Tab.7 Result of amino acid analysis of supernatant after the second time adsorption

3 結(jié)論

通過(guò)對(duì)活性炭靜態(tài)串聯(lián)吸附脫芳工藝優(yōu)化，確定了第一次活性炭常溫靜態(tài)吸附的最佳工藝為：pH為2、吸附時(shí)間180 min，活性炭固液比1:25，此條件下制備的寡肽液OD220/OD280數(shù)值達(dá)到14.97±0.21，F(xiàn)值為12.81。第二次常溫靜態(tài)吸附的最佳條件為：pH為2、吸附時(shí)間30 min，活性炭固液比1:25，測(cè)得二次吸附寡肽液OD220/OD280數(shù)值達(dá)到28.81±0.11，F(xiàn)值為25.209，滿(mǎn)足高F值寡肽F值≥20的要求，且芳香族氨基酸含量?jī)H占總氨基酸含量的0.54%，為進(jìn)一步的分離純化提供依據(jù)。

致謝：舟山中學(xué)2015級(jí)中美AP班的張?jiān)跊炌瑢W(xué)與本文的部分試驗(yàn)及數(shù)據(jù)分析作圖工作，在此表示感謝。

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The Removal Process Optimization of Aromatic Amino Acids in High Fischer Ratio Oligo-peptide

QI Wen-han,LOU Kang-wei,LUO Hong-yu
(Food and Medicine School of Zhejiang Ocean University,Zhoushan 316022,China)

In order to remove the aromatic amino acid in the oligopeptide prepared by enzymatic hydrolysis to improve the F value of the oligo-peptide,the removal effect of the activated carbon series static adsorption method was studied.Based on the screening of activated carbon model,the effects of temperature,pH,solid-liquid ratio and adsorption time on the adsorption of aromatic amino acids were discussed,The adsorption process was optimized by orthogonal test.The results showed that the best adsorption conditions were as follows:temperature 25℃,pH 2,solid-liquid ratio 1:25,first adsorption time 180 min,second adsorption time 30 min,after adsorption the oligo-peptide liquid F value reached 25.209.

F value;high fischer ratio oligo-peptide;activated carbon adsorption

S986.2

A

1008－830X(2017)02－0122－08

2017-02-01

國(guó)家海洋局海洋公益性行業(yè)科研專(zhuān)項(xiàng)（201305013）

祁文翰（1993-），男，江蘇溧陽(yáng)人，碩士研究生，研究方向：水產(chǎn)品精深加工.

羅紅宇（1968-），女，教授，研究方向：水產(chǎn)品精深加工.E-mail:lisa8919@163.com