維生素E對(duì)小鼠出血時(shí)間、凝血時(shí)間和紅細(xì)胞滲透脆性的影響

謝國(guó)云+何明亮+范文鳳+黃碧隆+黃麗碧+韋選雷+陸秀重+王彩冰

【摘要】目的觀察維生素E（VE）對(duì)小鼠出血時(shí)間（BT）、凝血時(shí)間（CT）和紅細(xì)胞滲透脆性（ROF）的影響。方法取昆明種小鼠50只，隨機(jī)平均分為正常對(duì)照組（給予0.9%NaCl注射液）、酚磺乙胺組（給予酚磺乙胺40 mg/ml）、肝素組（給予肝素0.03 mg/ml）、VE低濃度組和高濃度組（分別給予VE 2.5、5.0 mg/ml）灌胃，灌胃量按小鼠體重（0.01 ml/g）計(jì)算，每天1次，連續(xù)14天。在末次灌胃后30 min用斷尾法檢測(cè)BT，用玻片法檢測(cè)CT，用摘除眼球法取血檢測(cè)ROF。結(jié)果VE高濃度組和肝素組的BT明顯長(zhǎng)于正常對(duì)照組、酚磺乙胺組（P<0.01），VE高濃度組與肝素組的BT比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；VE高濃度組、VE低濃度組、正常對(duì)照組的CT兩兩比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），酚磺乙胺組的CT明顯短于其余4組（P<0.01），肝素組的CT明顯長(zhǎng)于其余4組（P<0.01）；各組的紅細(xì)胞開始破裂的NaCl溶液濃度兩兩比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論VE不影響血液凝固和紅細(xì)胞膜穩(wěn)定性，能延長(zhǎng)生理性止血時(shí)間，此作用存在量效關(guān)系。

【關(guān)鍵詞】維生素E；出血時(shí)間；凝血時(shí)間；紅細(xì)胞滲透脆性；小鼠

中圖分類號(hào)：R285.5文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：ADOI：10.3969/j.issn.1003-1383.2017.04.018

【Abstract】ObjectiveTo observe the effects of vitamin E（VE）on bleeding time（BT），clotting time（CT）and red cell osmotic fragility（ROF）in mice.Methods50 Kunming mice were randomly divided into normal control group（given 0.9% of NaCl by injection），etamsylate group（given 40 mg/ml of etamsylate by intragastric administration）and heparin group（given 0.03 mg/ml of heparin by intragastric administration），VE low concentration group and high concentration group（given 2.5 and 5.0 mg/ml of VE by intragastric administration，respectively），with 10 case in each group.The amount of gastric lavage was calculated according to the body weight of mice（0.01 ml/g），once a day，for 14 consecutive days.30 min after the last intragastric administration，tail-cutting method was used to measure BT，slide method was used to detect CT，and eyeball enucleation was used to collect blood to detect ROF.ResultsThe BT in the VE high concentration group and the heparin group was longer than that in the normal control group and the etamsylate group（P<0.01），there was no statistically significant difference in BT between the VE high concentration group and the heparin group（P>0.05）.There was no statistically significant difference in the CT between the VE high concentration group，the VE low concentration group and the normal control group（P>0.05）.The CT of the etamsylate group was shorter than that of the other four groups（P<0.01），but the CT of the heparin group was significantly longer than that of the other four groups（P<0.01）.There was no statistical significance in the concentration of NaCl solution in which the red blood cells began to burst in pairwise comparison between each group（P>0.05）.ConclusionVE has no effect on blood coagulation and erythrocyte membrane stability，it can prolong physiological hemostasis time，and there is dose effect relationship in this effect.

【Key words】VE；BT；CT；ROF；miceendprint

維生素E（Vitamin E，VE）又稱生育酚，是一種很強(qiáng)的脂溶性抗氧化劑，能清除自由基和維持細(xì)胞膜的正常結(jié)構(gòu)[1]。近年研究發(fā)現(xiàn)，VE對(duì)心、肝、腎、胃等器官有保護(hù)作用[2～5]，但尚未發(fā)現(xiàn)有VE對(duì)出血時(shí)間（Bleeding time，BT）、凝血時(shí)間（clotting time，CT）和紅細(xì)胞滲透脆性（Red cells osmotic fragility，ROF）影響的報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)利用VE、酚磺乙胺、肝素的臨床用量[6]換算為小鼠灌胃量給小鼠灌胃后，檢測(cè)小鼠的BT、CT和ROF，并與臨床常用的促凝血藥酚磺乙胺和抗凝血藥肝素作比較分析，明確VE對(duì)血液系統(tǒng)的生理特性影響，為臨床用藥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物昆明種健康雄性KM小鼠50只，體重20～30 g，由右江民族醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK 桂2011-0010，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK桂2012-0003。

1.2藥品維生素E溶液（桂林南藥股份有限公司，批號(hào)：151201）、酚磺乙胺注射液（四川美大康華康藥業(yè)有限公司，批號(hào)：15070917）、肝素（南京新百藥業(yè)有限公司，批號(hào)：H32025851）、0.9%NaCl注射液（廣西裕源藥業(yè)有限公司，批號(hào)：L16062904）。

1.3實(shí)驗(yàn)方法將小鼠隨機(jī)平均分為5組，正常對(duì)照組、酚磺乙胺組、肝素組、VE低濃度組和VE高濃度組。正常對(duì)照組給予0.9%NaCl注射液，酚磺乙胺組給予40 mg/ml酚磺乙胺注射液，肝素組給予0.03 mg/ml肝素，VE低濃度組和高濃度組分別給予2.5、5.0 mg/ml VE溶液灌胃，灌胃量均按小鼠的體重計(jì)算（0.01 ml/g），每天1次，連續(xù)14 d。

1.4小鼠的BT檢測(cè)末次給藥灌胃前禁食12 h，禁水2 h，末次給藥灌胃后30 min將小鼠置于固定器中，用手術(shù)剪剪斷小鼠尾尖3 mm，每隔15 s 用濾紙輕吸尾尖自行溢出的血液直至出血停止，記錄斷尾至出血停止時(shí)間為BT（即生理性止血時(shí)間）。由專人進(jìn)行檢測(cè)并觀察結(jié)果。

1.5小鼠的CT檢測(cè)檢測(cè)BT后，用手術(shù)剪剪斷小鼠尾尖3 mm，用濾紙吸去第一滴血再將血滴在清潔的玻片上，血滴直徑約5 mm，每隔15 s 用清潔干燥的大頭針從血滴邊緣向內(nèi)輕挑1次，直至挑起出現(xiàn)纖維蛋白絲為止，記錄血滴到玻片至挑起出現(xiàn)纖維蛋白絲時(shí)間為CT。由專人進(jìn)行檢測(cè)并觀察結(jié)果。

1.6小鼠的ROF檢測(cè)檢測(cè)CT采血后，使用摘除眼球法取血放入肝素鈉采血管，分別向盛有濃度遞減（0.60%、0.58%、0.56%、0.54%、0.52%、0.50%、0.48%、0.46%、0.44%、0.42%、0.40%、0.38%、0.36%、0.34%、0.32%、0.30%）的低滲NaCl溶液試管中滴入0.1 ml血液，在37℃環(huán)境中靜置1 h，從高濃度開始依次觀察并記錄試管上清液開始呈現(xiàn)淺紅色（即紅細(xì)胞開始破裂）的Nacl溶液濃度為ROF。由專人進(jìn)行檢測(cè)并觀察結(jié)果。

1.7統(tǒng)計(jì)學(xué)方法利用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料符合正態(tài)分布采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)：α=0.05，雙側(cè)檢驗(yàn)。

2結(jié)果

VE高濃度組和肝素組的BT明顯長(zhǎng)于正常對(duì)照組、酚磺乙胺組（P<0.01），VE高濃度組與肝素組的BT比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），VE低濃度組的BT與其余4組相比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；VE高濃度組、VE低濃度組、正常對(duì)照組的CT兩兩比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），酚磺乙胺組的CT明顯短于其余4組（P<0.01），肝素組的CT明顯長(zhǎng)于其余4組（P<0.01）；各組的ROF兩兩比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表1。

3討論

酚磺乙胺、肝素都是臨床常用促凝血藥，在本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，酚磺乙胺組的凝血時(shí)間明顯短于正常對(duì)照組，提示酚磺乙胺通過促進(jìn)凝血達(dá)到止血作用；肝素組的出血時(shí)間和凝血時(shí)間均明顯長(zhǎng)于正常對(duì)照組，提示肝素通過延長(zhǎng)出血時(shí)間和凝血時(shí)間達(dá)到抗凝血作用；說明用于本研究的小鼠對(duì)促凝血藥物和抗凝血藥物有正常反應(yīng)的效果，提示本研究中VE對(duì)出血時(shí)間和凝血時(shí)間影響的結(jié)果可靠。由于肝素為紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)的理想抗凝劑[7]，因此本實(shí)驗(yàn)的血標(biāo)本抗凝處理環(huán)節(jié)采用肝素作為抗凝劑。

本研究結(jié)果顯示，VE低濃度組的出血時(shí)間與正常對(duì)照組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，VE高濃度組的出血時(shí)間明顯長(zhǎng)于正常對(duì)照組，但VE低濃度組和VE高濃度組的出血時(shí)間與肝素組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明VE能的延長(zhǎng)生理性止血時(shí)間，此作用存在量效關(guān)系，該作用與肝素的效果相當(dāng)；VE低濃度組和VE高濃度組的凝血時(shí)間與正常對(duì)照組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但明顯長(zhǎng)于酚磺乙胺組、短于肝素組，說明VE不影響血液凝固過程；各組的紅細(xì)胞滲透脆性濃度兩兩比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明VE、酚磺乙胺、肝素的紅細(xì)胞滲透脆性正常，同時(shí)提示這些物質(zhì)都不影響紅細(xì)胞膜的穩(wěn)定性。本研究結(jié)果提示VE不影響血液凝固和紅細(xì)胞膜穩(wěn)定性，能延長(zhǎng)生理性止血時(shí)間。

綜上所述，VE對(duì)心、肝、腎、胃等器官有保護(hù)作用，還能抗衰老，增加機(jī)體的免疫力和記憶力等[2～5，7～9]，但VE用于保健和治療時(shí)，并不適合所有機(jī)體的應(yīng)用，VE能延長(zhǎng)生理性止血時(shí)間，從而提示我們患有血液病（如血小板減少癥、再生障礙性貧血、白血病、血友病等）和可能導(dǎo)致出血的疾病（如高血壓?。┘笆中g(shù)病人、產(chǎn)婦要禁用或慎用VE，而血液易凝固的疾病（如腦栓塞、肺栓塞、心肌栓塞等）可作為輔助治療藥物。

從生理學(xué)角度分析，生理性止血包括小血管收縮、血小板止血栓形成、血液凝固等三個(gè)過程[10]，本研究結(jié)果表明VE不影響血液凝固和紅細(xì)胞膜穩(wěn)定性，但能延長(zhǎng)生理性止血時(shí)間，提示VE延長(zhǎng)生理性止血時(shí)間可能通過影響小血管收縮、血小板止血栓形成的環(huán)節(jié)實(shí)現(xiàn)，又有資料表明VE能抑制血小板聚集而防止血栓形成[6]，但VE是否影響小血管收縮還有待于今后的研究證實(shí)。

參考文獻(xiàn)

[1] 楊寶峰，蘇定馮，周宏，等.藥理學(xué)[M].7版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2008：271.

[2] 郭文萃，許立新，謝偉.維生素E對(duì)大劑量維生素D3所致心肌損傷保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)性研究[J].內(nèi)科急危重癥雜志，2009，15（3）：146-147.

[3] 徐明，孫申，張洋.維生素C和維生素E單用及聯(lián)用對(duì)慢性酒精性肝損傷模型大鼠的預(yù)防性保護(hù)作用[J].中國(guó)藥房，2010，21（45）：4240-4242.

[4] 毛曉明，王愛萍，饒亞平，等.維生素E對(duì)糖尿病患者腎臟的保護(hù)作用[J].中華內(nèi)分泌代謝雜志，2000，16（5）：315-316.

[5] 王彩冰，晉玲，黃俊杰，等.維生素E對(duì)吲哚美辛誘導(dǎo)小鼠胃黏膜損傷的愈合干預(yù)[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2014，33（5）：589-592.

[6] 陳新謙，金有豫，湯光.新編藥物學(xué)[M].17版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2011：529，535，782.

[7] 肖小慧，魏壽忠，黃素，等.不同抗凝劑對(duì)紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)結(jié)果的影響[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2009，6（12）：966，968.

[8] 侯文彬，許艷萍.維生素E功能研究進(jìn)展[J].中國(guó)醫(yī)學(xué)工程，2015，23（2）：199，201.

[9] 于波.維生素E對(duì)機(jī)體免疫功能的影響[J].赤峰學(xué)院學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2015，31（1）：195-196.

[10] 朱大年，王庭槐.生理學(xué)[M].8版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2013：71-72.endprint