江蘇省泰州地區(qū)某醫(yī)院婦科就診患者HPV感染狀態(tài)分析

丁雪晴, 田 田, 劉俊慧

(江蘇省泰州第二人民醫(yī)院 檢驗(yàn)科, 江蘇 泰州, 225500)

江蘇省泰州地區(qū)某醫(yī)院婦科就診患者HPV感染狀態(tài)分析

丁雪晴, 田 田, 劉俊慧

(江蘇省泰州第二人民醫(yī)院 檢驗(yàn)科, 江蘇 泰州, 225500)

人乳頭狀瘤病毒; 亞型; 泰州地區(qū)

人乳頭狀瘤病毒(HPV)已被流行病學(xué)[1-2]證實(shí)是宮頸癌發(fā)生的主要致病因子，尤其是高危型HPV持續(xù)感染。宮頸癌患者的病理樣本中幾乎均能檢出高危型HPV。HPV感染的檢測(cè)已成為臨床篩查和預(yù)防宮頸癌的重要方法[3]。本研究使用流式點(diǎn)陣檢測(cè)試劑，采用xMap技術(shù)即液態(tài)芯片技術(shù)，對(duì)3 281例患者進(jìn)行HPV感染的27種亞型分型進(jìn)行檢測(cè)，報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年5月—2016年6月婦科就診3 281例患者，年齡14～80歲，中位數(shù)43歲。所有樣本采集和診治過程均經(jīng)患者同意。

1.2 儀器和試劑

一次性使用宮頸細(xì)胞采集器，DNA提取試劑和人乳頭狀瘤病毒核酸擴(kuò)增分型檢測(cè)試劑均由上海透景生命科技股份有限公司提供。儀器為TIANLONGDTG-3型PCR擴(kuò)增儀，透景Luminex200檢測(cè)儀。

1.3 檢測(cè)方法

1.3.1 標(biāo)本的采集：由婦科醫(yī)生以擴(kuò)陰器暴露宮頸口后，用棉試子擦去宮頸口的分泌物，將宮頸刷子伸入宮頸口處順時(shí)針輕柔旋轉(zhuǎn)4～5圈，然后將宮頸刷裝于有細(xì)胞保存液的樣本管中保存。在樣本管上貼有患者信息的條碼，送至檢驗(yàn)科, 4 ℃保存, 1周內(nèi)檢測(cè)。

1.3.2 HPVDNA的制備：取保存有宮頸細(xì)胞的細(xì)胞保存液400 μL, 14 000 r/min離心3 min, 棄去上清液，加入核酸釋放劑200 μL, 震蕩混勻，金屬浴100 ℃ 15 min, 14 000 r/min離心3 min。取5 μL DNA提取液用于PCR擴(kuò)增。DNA的制備過程在生物安全柜內(nèi)完成。

1.3.3 PCR擴(kuò)增：使用透景HPVDNA擴(kuò)增試劑盒進(jìn)行擴(kuò)增，具體布驟按試劑盒說明書進(jìn)行。PCR反應(yīng)條件: 95 ℃ 5 min, 1個(gè)循環(huán), 95 ℃ 30 s, 58 ℃ 30 s, 72 ℃ 30 s, 5個(gè)循環(huán); 95 ℃ 30 s, 60 ℃ 30 s, 72 ℃ 30 s, 35個(gè)循環(huán), 72 ℃ 3 min, 1個(gè)循環(huán)。

1.3.4 雜交：取相應(yīng)大小的微孔雜交板，將微球雜交液震動(dòng)30 s, 每個(gè)雜交孔中加入22 μL微球雜交液及PCR擴(kuò)增產(chǎn)物3 μL, 貼好封板紙，放置于TIANLONGDTG-3型PCR擴(kuò)增儀。雜交運(yùn)行程序: 95 ℃ 5 min變性, 48 ℃ 30 min雜交, 48 ℃ 15 min孵育。撕下封板紙，每孔加入鏈霉親和素-藻紅蛋白75 μL, 封板紙重新貼好, 48 ℃下孵育15 min?？焖賹⑽⒖纂s交板移至已預(yù)熱好的Luminex 200上進(jìn)行檢測(cè)。

1.3.5 結(jié)果判讀：打開透景科技3.2計(jì)算軟件，軟件自動(dòng)判斷樣本的檢測(cè)結(jié)果。每個(gè)樣本的Globin值>150, 微球數(shù)>50個(gè)為實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效, HPVDNA27種亞型檢測(cè)值>150為陽(yáng)性, <150為陰性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用Microsoft Excel 2010和SPSS 10.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料以陽(yáng)性率表示，各年齡組HPV陽(yáng)性率采用Pearson χ2檢驗(yàn),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

檢測(cè)的3 281例婦科患者中，檢出陽(yáng)性標(biāo)本839例，陽(yáng)性率為25.57%。檢測(cè)的27種亞型均有出現(xiàn)，陽(yáng)性率的排序如下: HPV52(9.66%), HPV16(8.56%), HPV58(6.78%), HPV81(6.44%), HPV53(6.44%), HPV39(5.50%), HPV18(5.08%), HPV61(4.66%), HPV55(4.66%), HPV56(4.40%), HPV51(4.23%), HPV43(4.15%), HPV33(3.64%), HPV44 (3.56%), HPV35(3.39%),HPV66(2.88%), HPV11(2.46%), HPV42(2.37%), HPV59(2.29%), HPV31(1.52%), HPV45(1.52%), HPV6(1.44%), HPV68(1.44%), HPV82(1.12%), HPV83(1.01%), HPV40(0.67%), HPV26(0.13%)。

單一亞型陽(yáng)性例數(shù)為最多, 839例陽(yáng)性標(biāo)本中, 590例為單一亞型，占陽(yáng)性例數(shù)的70.32%, 占受檢總?cè)藬?shù)的17.98%; 二重感染185例，占陽(yáng)性例數(shù)的22.05%, 占受檢人數(shù)的5.64%; 三重感染49例，占陽(yáng)性例數(shù)的5.84%, 占受檢人數(shù)的1.49%; 四重以上感染人數(shù)15例，占陽(yáng)性例數(shù)的1.79%, 占受檢人數(shù)的0.45%。多重感染的樣本為249例，占陽(yáng)性樣本的29.68%, 占受檢總?cè)藬?shù)的7.59%。多重感染的樣本中，高?；旌闲?8例，高低?；旌闲?34例，低?；旌闲?7例，占多重感染樣本的比例分別為39.36%、53.82%、6.82%。占受檢人數(shù)的比例分別為2.99%, 4.08%, 0.5%。839例陽(yáng)性樣本由于有多重感染的樣本共檢出1 172例HPV亞型，其中高危型804例，低危型368例，占受檢人數(shù)的比例分別是24.51%、11.12%, 占總檢出亞型的比例分別為68.60%、31.39%。

3 281例受檢患者年齡為14～80歲，以30～49歲受檢者居多，總共2 463例，占受檢人數(shù)的75.06%。30～49歲組陽(yáng)性數(shù)占總陽(yáng)性例數(shù)的72.71%。大于60歲組檢出陽(yáng)性率最高為31.09%, 其次為14～29歲組檢出陽(yáng)性率為28.06%。HPV感染各年齡組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 各年齡段就診患者HPV陽(yáng)性率

3 討 論

在發(fā)展中國(guó)家宮頸癌的發(fā)病率位居?jì)D科腫瘤的的首位。高危型HPV持續(xù)感染已被流行病學(xué)和生物學(xué)[4]證明，是引起宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)和宮頸癌的重要因素。HPV是一種具有種屬特異性的嗜上皮病毒，屬雙鏈閉環(huán)的小DNA病毒。1995年國(guó)際癌癥研究協(xié)會(huì)(IARC)根據(jù)HPV的致癌性將其分為高危型和低危型兩大類。高危性HPV檢測(cè)有效提高臨床對(duì)宮頸癌前病變的檢測(cè)靈敏度，降低了漏診率，已成為宮頸癌篩查的重要方法。

目前，國(guó)內(nèi)關(guān)于HPV感染陽(yáng)性率和型別的報(bào)道有著不同地域的差異。本研究中，泰州地區(qū)3 281例受檢患者共檢出HPV陽(yáng)性樣本839例，陽(yáng)性率為25.57%。2007年美國(guó)健康與營(yíng)養(yǎng)調(diào)查研究發(fā)現(xiàn), 14～59歲女性中HPV的陽(yáng)性率為26.8%[3]。王艷等[5]報(bào)道的浙南地區(qū)陽(yáng)性率為29.50%, 與本研究結(jié)果相近。本研究中, 27種亞型均有檢出。最常見的10種亞型及其所占陽(yáng)性樣本的比例按由高到低的順序排列為HPV52(9.66%), HPV16(8.56%), HPV58(6.78% ), HPV81(6.44%), HPV53(6.44%), HPV39(5.50%), HPV18(5.08%), HPV61(4.66%), HPV55(4.66%), HPV56(4.40%)。大量的流行病學(xué)資料[6]表明，HPV基因型分布存在區(qū)域差異。本研究顯示泰州地區(qū)HPV高危型亞型的型別與國(guó)內(nèi)的多數(shù)報(bào)道相一致[7-8], 以HPV52, HPV16, HPV58為主。HPV低危型亞型以HPV81, HPV55為主，與以往報(bào)道的HPV6, HPV11為主的結(jié)果不一致，可能是檢測(cè)方法和病例選擇的不同有關(guān)。

本研究中，以單一亞型陽(yáng)性例數(shù)為最多, 839例陽(yáng)性標(biāo)本中590例為單一亞型，占陽(yáng)性例數(shù)的70.32%, 占受檢總?cè)藬?shù)的17.98%。HPV感染型別以高危亞型為主。多重感染隨感染亞型數(shù)的增多比例逐漸下降，檢出合并感染亞型數(shù)最多是五重陽(yáng)性。多重感染以高低?；旌闲蜑橹?，其次是高?；旌闲?，低?；旌闲妥钌?，所占多重感染的比例分別為53.82%、39.36%、6.82%, 與已有報(bào)道[9]多重感染以高低危混合型為主的研究結(jié)果相一致。

本研究結(jié)果顯示, HPV感染率在各年齡組間存在差異。最高值在>60歲組(31.09%), 其次為<30歲組(28.06%)。多重感染大于3種亞型的陽(yáng)性樣本多數(shù)分布在這兩個(gè)年齡組。分析其原因?yàn)?30歲組年輕女性性活躍HPV感染率高，隨著年齡的增長(zhǎng)而感染率下降, >60歲組感染率出現(xiàn)最高峰值，隨著女性卵巢功能低下，激素水平降低，機(jī)體的免疫功能下降，加之老年女性的健康意識(shí)不強(qiáng)而導(dǎo)致HPV的高感染率[10]。

定期的HPV的分型檢測(cè)可以了解機(jī)體的感染是一過性感染或持續(xù)性感染，還可用于宮頸病變患者療效的評(píng)估。美國(guó)癌癥協(xié)會(huì)和美國(guó)婦產(chǎn)科醫(yī)師學(xué)會(huì)[11]認(rèn)為，在30歲以上的婦女中，聯(lián)合使用TCT和HPV檢測(cè)可提高宮頸癌的篩檢率，有效提高了宮頸癌前病變檢測(cè)的靈敏度，降低漏診率。

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2017-02-19

R 737.33

A

1672-2353(2017)15-223-02

10.7619/jcmp.201715080