全自動(dòng)毛細(xì)管電泳技術(shù)在河源地區(qū)新生兒地中海貧血篩查的應(yīng)用及價(jià)值

王葭

【摘要】 目的 研究全自動(dòng)毛細(xì)管電泳技術(shù)用于河源地區(qū)新生兒地中海貧血篩查中的價(jià)值。方法 17454例河源地區(qū)新生兒為研究對(duì)象， 對(duì)全部新生兒使用Sebia全自動(dòng)毛細(xì)管電泳儀進(jìn)行濾紙干血斑標(biāo)本的血紅蛋白（Hb）電泳， 對(duì)于檢測(cè)顯示為陽性的標(biāo)本召回繼續(xù)進(jìn)行常見的α、β地中海貧血基因的檢測(cè)分析。結(jié)果 17454例新生兒中檢測(cè)出2712例血紅蛋白陽性， 陽性率為15.54%；其中1879例（10.77%）α型地中海貧血， 750例（4.30%）β型地中海貧血， 異常血紅蛋白83例（0.48%）；本院召回221例α地中海貧血樣本和80例β地中海貧血樣本進(jìn)行基因分析， 其中α地中海貧血的診斷符合率為90.05%， β地中海貧血診斷符合率為83.75%。結(jié)論 全自動(dòng)毛細(xì)管電泳篩查在新生兒地中海貧血的篩查中具有較高的價(jià)值， 診斷符合率高， 有助于臨床醫(yī)師早期發(fā)現(xiàn)地中海貧血， 并通過基因分析分型， 早期干預(yù)治療， 確保新生兒的健康成長發(fā)育。

【關(guān)鍵詞】 毛細(xì)管電泳；地中海貧血篩查；新生兒；診斷符合率；基因分析

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.19.035

地中海貧血是非常罕見的貧血性疾病， 是因珠蛋白基因不同而出現(xiàn)的多類型疾病， 癥狀較為輕微的患者基本不會(huì)受到影響， 但是嚴(yán)重的則會(huì)危及生命安全[1]。根據(jù)珠蛋白基因不同， 可以將地中海貧血分成四種類型， 也即：α、β、γ、δ型地中海貧血， 其中α、β型地中海貧血較為常見[2， 3]。在發(fā)病區(qū)域上， 我國南方地區(qū)的新生兒地中海貧血發(fā)病率較高， 其會(huì)嚴(yán)重影響到患兒的正常生活?，F(xiàn)就河源地區(qū)的17454例新生兒為例， 抽取足跟血采用全自動(dòng)毛細(xì)管電泳技術(shù)進(jìn)行地中海貧血的篩查， 現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取河源地區(qū)（五縣一區(qū)）在2016年1～6月出生的新生兒17454例為本次研究的對(duì)象， 新生兒出生3 d時(shí)抽取足跟血， 然后將血樣滴在血濾紙片上， 在自然晾干后送檢。記錄所有新生兒的檢驗(yàn)結(jié)果， 將其中陽性者召回進(jìn)行地中海貧血基因的檢測(cè)。

1. 2 方法

1. 2. 1 儀器和試劑 選擇法國Sebia公司的Capillarys2全自動(dòng)毛細(xì)管電泳儀以及血紅蛋白電泳試劑盒?；蚍治錾喜捎肈NA提取儀、PCR擴(kuò)增儀、分子雜交儀、電泳儀以及地中海貧血基因診斷試劑盒， 由深圳亞能生物技術(shù)有限公司提供基因診斷試劑盒。

1. 2. 2 檢測(cè)方法 首先對(duì)所有血樣進(jìn)行血紅蛋白電泳， 方法為：在濾紙干血斑上打1個(gè)4.84 mm2的血斑片， 然后置入到50 ml蒸餾水測(cè)試杯中進(jìn)行溶解處理， 保濕過夜后于第2天將測(cè)試杯放置到電泳儀中進(jìn)行檢測(cè)。將血紅蛋白電泳為陽性的血樣召回進(jìn)行基因分析， 確定地中海貧血的類型。

1. 2. 3 血紅蛋白電泳陽性的判斷標(biāo)準(zhǔn) α地中海貧血篩查陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)：HBbarts>0.2%即為α地中海貧血篩查陽性。β地中海貧血篩查陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)：按綜合分析法， 根據(jù)血紅蛋白組分HbA2含量、HbA含量及HbA2/HbA 比值篩查β地中海貧血陽性。見表1。

2 結(jié)果

17454例新生兒足跟血采用全自動(dòng)毛細(xì)管電泳技術(shù)篩查出2712例（15.54%）血紅蛋白陽性樣本， 其中α型地中海貧血1879例， 陽性率為10.77%（1879/17454）；β型地中海貧血750例， 陽性率為4.30%（750/17454）， 異常血紅蛋白83例為0.48%（83/17454）。

血樣召回遵循就近原則， 其中本院召回221例α地中海貧血血樣進(jìn)行基因分析， 確診199例為α型地中海貧血， 診斷符合率為90.05%（199/221）， 其中共有196例靜止型或輕型， 血紅蛋白H病3例。對(duì)β地中海貧血血樣召回80例在本院接受基因分析， 確診67例為β型地中海貧血， 診斷符合率為83.75%（67/80）。

3 討論

地中海貧血是指由珠蛋白生成障礙引起的遺傳性溶血疾病， 其是目前在全球分布最為廣泛且發(fā)病人數(shù)最多的一種單基因性疾病， 目前全球的地中海貧血基因攜帶者約為2億人， 且尚無治愈方法。由于地中海貧血具有非常大的異質(zhì)性， 部分病情輕微的無臨床癥狀， 且不會(huì)對(duì)日常生活造成明顯的影響， 而病情嚴(yán)重的患者會(huì)存在嚴(yán)重的貧血癥狀， 生活受到嚴(yán)重影響， 甚至死亡。尤其是β型地中海貧血， 多數(shù)在出生或是出生后很長時(shí)間都不會(huì)有典型臨床癥狀， 若沒有癥狀， 且父母均未做相關(guān)檢查以及產(chǎn)前的診斷， 那么在出生后難以進(jìn)行早期的地中海貧血診斷， 一般是在感染、炎癥時(shí)誘發(fā)貧血， 進(jìn)而被發(fā)現(xiàn)[4]。隨著圍生期保健技術(shù)的快速發(fā)展， 在婚孕前、產(chǎn)前的地中海貧血篩查已普遍開展起來， 中重型地中海貧血新生兒的出生率有所降低， 但是依然有不少地中海貧血攜帶患兒出生， 尤其是南方地區(qū)， 地中海貧血發(fā)病率極高， 也有部分地區(qū)已開始開展新生兒的地中海貧血篩查， 通過血常規(guī)、血紅蛋白電泳等方法進(jìn)行初篩， 然后采用基因檢測(cè)的方法對(duì)地中海貧血進(jìn)行基因分型[5]。在采血進(jìn)行檢測(cè)上， 由于新生兒的股靜脈、頸靜脈采血難度較大， 且新生兒較為痛苦， 因而臨床上一般采取足跟血。

正常新生兒的HbF占70%左右， HbA占30%左右， HbA2<1%；而地中海貧血新生兒的Hb組分和含量與正常新生兒不同， 通過檢驗(yàn)技術(shù)將多種血紅蛋白成分、含量區(qū)分開， 從而判斷是否為地中海貧血[6]。干血斑標(biāo)本目前已在多項(xiàng)新生兒疾病篩查中得到應(yīng)用， 標(biāo)本易于運(yùn)輸， 尤其適用于新生兒疾病的初步篩查中[7]。正常胎兒一般在3個(gè)月的時(shí)候開始合成HbA， 在6個(gè)月的時(shí)候已增加到5%～10%， 在分娩時(shí)則可達(dá)35%～40%， 而β地中海貧血新生兒在母體發(fā)育中因β珠蛋白合成存在障礙， 從而導(dǎo)致HbA含量較低， 遠(yuǎn)低于正常水平， 而且含量越低表明β地中海貧血越嚴(yán)重。所以在β地中海貧血的篩查中可以采用HbA含量高低來進(jìn)行初步的篩查。在α地中海貧血的篩查中， 一般采用血常規(guī)、紅細(xì)胞脆性法進(jìn)行篩查， 但是對(duì)于其中的靜止型和標(biāo)準(zhǔn)型這兩種沒有明顯血常規(guī)變化和臨床癥狀的攜帶者， 在篩查中漏診率極高， 因此并不能將血常規(guī)、紅細(xì)胞脆性法單獨(dú)用于臨床篩查中。endprint

近些年來， 不少學(xué)者提出可將全自動(dòng)毛細(xì)管血紅蛋白電泳分析技術(shù)應(yīng)用到新生兒地中海貧血的篩查中， 該技術(shù)是利用新生兒濾紙干血斑中的微量血紅蛋白在高壓電作用下， 在25 μm直徑的毛細(xì)管中進(jìn)行血紅蛋白組分的分離， 其對(duì)血紅蛋白組分的檢測(cè)具有非常高的靈敏度和穩(wěn)定性， 可以準(zhǔn)確測(cè)定出各種血紅蛋白組分的含量， 是目前進(jìn)行新生兒地中海貧血篩查最為簡(jiǎn)便、有效的方法[8]。本研究對(duì)河源地區(qū)的17454例新生兒進(jìn)行地中海貧血的篩查， 采用的是法國Sebia Capillarys2全自動(dòng)毛細(xì)管電泳儀進(jìn)行檢測(cè)， 該電泳儀使用的是未處理的石英毛細(xì)管電泳柱， 其能在十幾分鐘內(nèi)進(jìn)行血紅蛋白的常規(guī)分析， 而且無需對(duì)樣本進(jìn)行處理就能得到與瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)相似的結(jié)果。曾有學(xué)者對(duì)這兩種電泳技術(shù)進(jìn)行對(duì)比， 發(fā)現(xiàn)在新生兒地中海貧血篩查中， 兩種方法都具有較高的靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度， 在α、β地中海貧血陽性的檢測(cè)中， 兩種檢測(cè)方法的靈敏度相似， 而在HbCS和HbH上， 毛細(xì)管電泳檢測(cè)的靈敏度更高[9]。毛細(xì)管電泳技術(shù)可以直接顯示出HbH、HbCS、HbE的異常區(qū)帶， 不會(huì)與HbA、HbA2出現(xiàn)重疊現(xiàn)象， 故而準(zhǔn)確結(jié)果非常高；而且對(duì)于血紅蛋白各個(gè)組分的分辨率非常高， 能準(zhǔn)確檢測(cè)出組分的含量， 測(cè)出準(zhǔn)確的百分比， 定量準(zhǔn)確[10， 11]。而且在應(yīng)用電泳儀檢測(cè)過程中， 有相關(guān)配套的質(zhì)控品進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控， 這樣能更好的保證結(jié)果準(zhǔn)確性。本研究結(jié)果顯示：17454例新生兒出現(xiàn)血紅蛋白異常的幾率為15.54%， 其中10.77%為α地中海貧血， 4.30%為β地中海貧血， 0.48%為異常血紅蛋。本院召回的221例α地中海貧血樣本和80例β地中海貧血樣本經(jīng)過檢測(cè)發(fā)現(xiàn)， 對(duì)于α地中海貧血的診斷符合率為90.05%， β地中海貧血診斷符合率為83.75%， 診斷符合率高。結(jié)果指出河源地區(qū)的新生兒地中海貧血發(fā)生率較高， 加強(qiáng)對(duì)新生兒的地中海貧血篩查具有重要意義。

綜上所述， 全自動(dòng)毛細(xì)管電泳技術(shù)在河源地區(qū)新生兒地中海貧血的篩查中應(yīng)用具有重大價(jià)值， 診斷符合率高， 且操作簡(jiǎn)單、耗時(shí)短、成本低， 可以作為新生兒地中海貧血篩查的重要手段。

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[收稿日期：2017-03-13]endprint