誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS）對(duì)重癥急性胰腺炎時(shí)胰島內(nèi)分泌功能的影響

李昌+母珍珍+王磊+韓冰+王仰亮+藍(lán)諾

[摘要] 目的 研究重癥急性胰腺炎大鼠胰腺內(nèi)分泌功能的變化，探討iNOS在胰腺內(nèi)分泌功能損傷中的作用。方法 2015年7月—2016年7月在濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心取健康雄性Wistar大鼠，體重250～300 g，24只隨機(jī)分成2組，對(duì)照組12只，SAP組12只，應(yīng)用5%?；悄懰徕c逆行注入大鼠胰膽管制作重癥急性胰腺炎（severe acute pancreatitis， SAP）大鼠模型，檢測(cè)血清淀粉酶、血糖濃度；分離胰島，行葡萄糖刺激胰島素分泌試驗(yàn)；應(yīng)用NOS試劑盒檢測(cè)胰島iNOS的活性。結(jié)果 SAP組血糖、血清淀粉酶、葡萄糖葡萄糖刺激胰島素分泌實(shí)驗(yàn)和胰島的iNOS活性分別為：（11.50±1.36）mmol/L、（1 575.36±435.33）mIU/L、（3.90±0.78）mIU/L、（10.36±2.14）mIU/L和（30.27±3.57）U/mL；對(duì)照組分別為：（5.32±1.25）mmol/L、（104.18±35.58）mIU/L、（7.82±1.03）mmol/L、（25.60±3.72）mmol/L和（7.79±0.58）U/mL；兩組分別相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 重癥急性胰腺炎時(shí)對(duì)胰島功能影響較大SAP胰島功能損傷與iNOS活性增強(qiáng)有關(guān)系，對(duì)胰島素分泌產(chǎn)生負(fù)面影響。

[關(guān)鍵詞] 急性胰腺炎；動(dòng)物模型；誘導(dǎo)性一氧化氮合酶；內(nèi)分泌功能；胰島素

[中圖分類號(hào)] R657 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-0742（2017）06（b）-0042-03

[Abstract] Objective To research the changes of rat endocrine function of severe acute pancreatitis and study the effect of iNOS in the pancreatic endocrine function injuries. Methods 24 healthy male rats in the animal experimental center of Jining Medical College whose weight was 250～300 g from July 2015 to July 2016 were randomly divided into two groups with 12 rats in each， and the serum amylase and blood glucose concentration were tested and the insulin was isolated and the rats were given the glucose-stimulated insulin secretion test， and the insulin iNOS activity was tested by the NOS kit. Results The differences in the blood glucose， serum amylase， glucose and glucose stimulated insulin secretion test and iNOS activity of insulin between the SAP group and the control group were statistically significant[（11.50±1.36）mmol/L，（1 575.36±435.33）mIU/L， （3.90±0.78）mIU/L， （10.36±2.14）mIU/L， （30.27±3.57） U/mL vs （5.32±1.25）mmol/L，（104.18±35.58）mIU/L，（7.82±1.03）mmol/L，（25.60±3.72）mmol/L（7.79±0.58）U/mL]（P<0.05）. Conclusion The effect of severe acute pancreatitis on the insulin function is bigger， and the SAP insulin function injury is related to the enhancement of iNOS activity and has a negative effect on the insulin secretion.

[Key words] Acute pancreatitis； Animal mode； Inducible nitric oxide synthase； Endocrine function； Insulin

急性胰腺炎（ acute pancreatitis，AP）是普外科多發(fā)的疾病，隨著生活水平提高，發(fā)病率在增加，同時(shí)常伴有糖代謝異常，提示急性胰腺炎對(duì)胰腺胰島功能有一定的影響[1-2]。SAP時(shí)更易發(fā)生胰腺內(nèi)分泌功能損傷，近來(lái)研究表明胰腺內(nèi)外分泌系統(tǒng)之間有很強(qiáng)的功能聯(lián)系[3]。SAP胰島功能改變的機(jī)制尚不十分清楚。尤其是重癥胰腺炎時(shí)，會(huì)加劇胰腺組織釋放的炎癥介質(zhì)和細(xì)胞因子影響胰腺炎病程[4-6]，促使iNOS激活，表達(dá)，這，iNOS的mRNA，翻譯成iNOS，iNOS形成二聚體催化NO合成。正常情況下NOS是胰島β細(xì)胞分泌胰島素的重要遞質(zhì)，因此iNOS激活表達(dá)是SAP胰島功能改變可能有一定聯(lián)系。該實(shí)驗(yàn)2015年7月—2016年7月在濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心取健康雄性Wistar大鼠24只進(jìn)行隨機(jī)分組建模研究，探討iNOS活性增強(qiáng)是否參與SAP胰島功能損傷，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

取健康雄性雄性Wistar大鼠，24只，8周齡，體重250～300 g，由濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，實(shí)驗(yàn)分組及建模：隨機(jī)分成2組，對(duì)照組12只，SAP組12只。大鼠SAP模型建立方法：大鼠禁食水12 h。參考Aho等的方法建模型。對(duì)照組：開(kāi)腹翻動(dòng)大鼠胰腺3次。兩組樣本資料的數(shù)量、年齡、體重等差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。主要試劑：?；悄懰徕c；T4009膠原酶；Histopaque-1077。

1.2 標(biāo)本采集

①成模1 h后，開(kāi)腹自下腔靜脈采血。檢測(cè)血清淀粉酶、血糖。②胰島細(xì)胞分離純化原位灌注膠原酶V聯(lián)合Histopaque 1077純化的方法分離純化大鼠胰島。③葡萄糖刺激胰島素分泌試驗(yàn)：測(cè)定胰島素水平。④胰島組織iNOS活性測(cè)定：使用NOS檢測(cè)試劑盒測(cè)定胰島組織中iNOS活性。

1.3 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，組間比較獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

SAP組血糖高達(dá)到（11.50±1.36）mmol/L，與對(duì)照組（5.32±1.25）mmol/L相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。SAP大鼠血清淀粉酶高達(dá)（1 575.36±435.33）IU/L，與正常對(duì)照組（104.18±35.58）mIU/L相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。SAP組大鼠在3.3、16.7 mmol/L葡萄糖刺激下，胰島素分泌量分別為（3.90±0.78）mIU/L和（10.36±2.14）mIU/L，均明顯低于正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），SAP大鼠升胰島iNOS活性高達(dá)（30.27±3.57）U/mL，與正常對(duì)照組（7.79±0.58） U/mL相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表1。

3 討論

急性胰腺炎是外科常見(jiàn)的急腹癥。急性胰腺炎病人常伴有高血糖及尿糖，使人們認(rèn)識(shí)到急性胰腺炎對(duì)內(nèi)分泌功能有一定影響的器官研究表明，胰腺內(nèi)外分泌部是一個(gè)結(jié)構(gòu)與功能整合的器官。在胰腺的正常生理和胰腺疾病的發(fā)生、發(fā)展上，兩者是相互作用、相互影響。越來(lái)越多的證據(jù)表明SAP時(shí)大量炎癥因子釋放，造成胰腺細(xì)胞的損傷，同時(shí)也對(duì)胰島功能造成損傷，出現(xiàn)內(nèi)分泌功能的改變，造成血糖升高和胰島素分泌的下降，iNOS活性增加使胰島β細(xì)胞產(chǎn)生抑制作用[7]。

該研究顯示亦證明上述觀點(diǎn)，SAP組血糖高達(dá)到（11.50±1.36）mmol/L，與對(duì)照組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。急性重癥胰腺炎時(shí)早期就出現(xiàn)血糖異常，可能原因是致炎癥因子使胰胰島細(xì)胞功能受損所致[8]；同時(shí)葡萄糖刺激胰島素分泌，SAP組大鼠在3.3、16.7 mmol/L葡萄糖刺激下，胰島素分泌量分別為（3.90±0.78）mIU/L和（10.36±2.14）mIU/L，均明顯低于正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。表示SAP大鼠在早期胰島功能的出現(xiàn)了損傷，這因此糖耐量的異常。原因可能有兩方面：①較早已出現(xiàn)存在胰島功能的損傷；②出現(xiàn)的胰島數(shù)目的絕對(duì)減少。

急性重癥胰腺胰腺炎時(shí)胰島功能受到抑制扮演重要角色。大量的炎癥介質(zhì)和細(xì)胞因子使iNOS的mRNA激活，是iNOS大量翻譯表達(dá)，iNOS則形成二聚體催化NO合成。NO過(guò)量產(chǎn)生而對(duì)[9]。該研究結(jié)果顯示：SAP大鼠升胰島iNOS活性高達(dá)（30.27±3.57） U/mL，與正常對(duì)照組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），胰島iNOSmRNA表達(dá)明顯增強(qiáng)，可能催化NO大量合成，而iNOS生成過(guò)量的NO可以導(dǎo)致β細(xì)胞的損害，這可能是胰島功能下降的重要原因。該研究發(fā)現(xiàn)SAP胰島功能損傷iNOS活性增強(qiáng)有關(guān)系，抑制胰島素功能。

綜上所述，SAP早期胰島內(nèi)分泌功能已經(jīng)發(fā)生變化，iNOS參與了SAP胰島功能損傷，對(duì)胰島分泌產(chǎn)生負(fù)面影響。

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（收稿日期：2017-03-11）