乳與乳制品中三聚氰胺的快速檢測(cè)-高效液相色譜法

□ 王新喜 北京和瑞祥通檢測(cè)技術(shù)有限公司

乳與乳制品中三聚氰胺的快速檢測(cè)-高效液相色譜法

□ 王新喜 北京和瑞祥通檢測(cè)技術(shù)有限公司

通過(guò)測(cè)定高效液相色譜檢在牛奶中三聚氰胺的殘留量。目前為止，三聚氰胺已作為蛋白質(zhì)添加在食品中。但是根據(jù)相關(guān)規(guī)定，三聚氰胺為非食品添加劑。本文根據(jù)三聚氰胺的概述、三聚氰胺的檢測(cè)現(xiàn)狀以及三聚氰胺的檢測(cè) 分析結(jié)果有效認(rèn)識(shí)三聚氰胺。

三聚氰胺；高效液相色譜檢測(cè)；檢測(cè)

由于三聚氰胺在食品中的添加引發(fā)了大規(guī)模的食品事件。三聚氰胺嚴(yán)重超出蛋白質(zhì)含量。因?yàn)椋矍璋穼儆诨ぴ?，無(wú)色無(wú)味[1-3]。如果過(guò)多攝入三聚氰胺的使用量會(huì)導(dǎo)致嬰兒死亡。所以，加強(qiáng)對(duì)三聚氰胺的快速檢測(cè)是必要的。

1 三聚氰胺的概述

1.1 三聚氰胺的實(shí)驗(yàn)原理

用乙腈作乳與乳制品中的蛋白沉淀劑和三聚氰胺的提取劑，用強(qiáng)陽(yáng)離子交換色譜柱分離，高效液相色譜儀-DAD檢測(cè)，外標(biāo)法定量。復(fù)色光通過(guò)樣品池被組分選擇性吸收照射在二極管陣列裝置上。

1.2 三聚氰胺在食品中的檢測(cè)現(xiàn)狀

我國(guó)在蛋白質(zhì)、細(xì)菌和脂肪等檢測(cè)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)有明確規(guī)定，目前三聚氰胺不允許添加到食品中。三聚氰胺的檢測(cè)方法有三聚氰胺HPLC-UV定量方法、HPLC-MS檢測(cè)方法等。

2 材料與方法

2.1 儀器與試劑

儀器：液相色譜儀；二極管陣列檢測(cè)器（DAD）；分析天平（感量0.001 g）。

試劑：乙腈（色譜純）；氨水（分析純）；三氯乙酸（分析純）；5%氨水甲醇溶液（取5.0 mL氨水 用水定容至100 mL）；75%乙腈水溶液（取75 mL用水定容至100 mL）；1%三氯乙酸溶液（取10 g三氯乙酸溶在1 L水中）。

2.2 三聚氰胺的提取與凈化

（1）提取。根據(jù)提前儲(chǔ)存在冰箱中的牛奶，在實(shí)驗(yàn)之前必須在恒溫條件下，稱取樣品5 g（精確到0.01 g）放入50 mL的離心管中，等待檢測(cè)；在樣品中放入1%三氯乙酸溶液15.0 mL，乙腈5 mL，震蕩搖勻25 min，8 000 r/min的速度離心5 min，取上清液。

（2）凈化。MCX混合型陽(yáng)離子交換固相取柱在裝置上，使用甲醇3.0 mL和超純水活化后，添加樣品提取液5.0 mL；按照順序依次使用3.0 mL甲醇和0.1 mol/L鹽酸水溶液3.0 mL，3.0 mL 5%氨水甲醇溶液洗脫收集。使用氮?dú)獯蹈珊螅涣鲃?dòng)相定容，高效液相色譜分析。

（3）液相色譜條件。流動(dòng)相：磷酸鹽緩沖液+乙腈=80+20；流速：1.0 mL/min；柱溫：35 ℃；進(jìn)樣量：20 μL。

2.3 測(cè)量方法與含量計(jì)算

通過(guò)保留時(shí)間定性（光譜圖輔助定性），外標(biāo)法峰面積定量。根據(jù)表1、圖1和圖2結(jié)合實(shí)際探究結(jié)果如下。

計(jì)算公式。以三聚氰胺的含量為質(zhì)量，數(shù)值以mg/kg表示。

表1 不同濃度三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)濃液與峰面積表

圖1 樣品色譜圖

圖2 三聚氰胺的光譜圖

表2 樣品添加回收率表

式中：C——工作液中的濃度；

V——溶解后的體積；

m——稱樣量；

F——稀釋倍數(shù)。

通過(guò)三聚氰胺的光譜圖和樣品色譜圖，不能明顯看出DAD檢測(cè)器的優(yōu)勢(shì)。通過(guò)樣品回收率以及標(biāo)準(zhǔn)曲線圖具體分析。樣品添加回收率見(jiàn)表2。

2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析

根據(jù)三聚氰胺的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖得知：在0.0～50 mg/L線性關(guān)系良好。具有良好精密度和準(zhǔn)確度，樣品處理簡(jiǎn)單，快速，適合實(shí)驗(yàn)室大批量檢測(cè)。與其他檢測(cè)器相比，DAD檢測(cè)器具有噪音低、靈敏度高，可以得到任意波長(zhǎng)的色譜圖，效果極為方便。而UV檢測(cè)器只是對(duì)特定波長(zhǎng)做檢查，結(jié)果出來(lái)是特定波長(zhǎng)下的吸收，在定性上不如DAD有優(yōu)勢(shì)。

3 結(jié)論

三聚氰胺是我國(guó)最大的尿素生產(chǎn)能源，這種含有大量的化工原料是嚴(yán)重禁止在食品、乳制品之中使用。長(zhǎng)時(shí)間攝取能給造成很大的傷害。綜上所述：通過(guò)對(duì)三聚氰胺的認(rèn)知，明確三聚氰胺的使用范圍，希望能夠引起人們的足夠重視,加強(qiáng)檢測(cè)。希望相關(guān)部門(mén)能夠合理地處理三聚氰胺帶來(lái)的危害。

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[3]程海燕,王輝,曹曉燕.牛奶中三聚氰胺殘留量的高效液相色譜檢測(cè)[J].食品安全導(dǎo)刊,2017(9):143-145.