2012—2014年上海市蜱和宿主動(dòng)物新型布尼亞病毒感染狀初步調(diào)查

朱奕奕，吳寰宇，張春哲，毛盛華，周 欣，張清慧，潘 浩

2012—2014年上海市蜱和宿主動(dòng)物新型布尼亞病毒感染狀初步調(diào)查

朱奕奕1，吳寰宇1，張春哲1，毛盛華1，周 欣1，張清慧2，潘 浩1

目的掌握上海市蜱分布及攜帶新型布尼亞病毒情況，了解上海市蜱動(dòng)物宿主以及動(dòng)物感染病毒狀況，從而評(píng)估上海地區(qū)是否存在新型布尼亞病毒的傳播風(fēng)險(xiǎn)。方法采用布旗法捕捉室外“游離蜱”，動(dòng)物“寄生蜱”采用動(dòng)物體表采集法捕獲犬體表蜱類(lèi)樣本；蜱病毒核酸的檢測(cè)采用熒光定量PCR法；動(dòng)物血清抗新型布尼亞病毒的總抗體檢測(cè)采用雙抗原夾心法。結(jié)果2012—2014年期間，上海松江辰山和金山大金山島監(jiān)測(cè)到室外“游離蜱”，蜱種均為長(zhǎng)角血蜱；上海17個(gè)區(qū)中10個(gè)區(qū)監(jiān)測(cè)到“寄生蜱”，主要分布在崇明、奉賢、閔行等區(qū)，血紅扇頭蜱為優(yōu)勢(shì)蜱種。檢測(cè)的143只蜱中，未發(fā)現(xiàn)病毒核酸。上海“寄生蜱”的動(dòng)物宿主主要為犬，其次為羊，分布在6個(gè)主城區(qū)的198只犬、浦東新區(qū)和奉賢區(qū)的120份豬和崇明區(qū)的36頭羊中，均未發(fā)現(xiàn)感染病毒。結(jié)論2012—2014年上海地區(qū)蜱尚未發(fā)現(xiàn)新型布尼亞病毒的攜帶，動(dòng)物監(jiān)測(cè)中未發(fā)現(xiàn)感染。因此，尚無(wú)證據(jù)證實(shí)上海地區(qū)為新型布尼亞病毒自然疫源地，需進(jìn)一步調(diào)查研究證實(shí)。

發(fā)熱伴血小板減少綜合征；蜱；血紅扇頭蜱；長(zhǎng)角血蜱

“發(fā)熱伴血小板減少綜合征”(Severe Fever with Thrombocytopenia Syndrome，SFTS)是由人粒細(xì)胞無(wú)形體、立克次體、病毒等病原體引起并以發(fā)熱伴血小板減少為主要臨床特征的一種綜合癥。2010年9月，Yu XJ等學(xué)者在我國(guó)部分省份SFTS病例的血液中分離到了一種新型病毒，命名為“發(fā)熱伴血小板減少綜合征新型布尼亞病毒”，簡(jiǎn)稱(chēng)新型布尼亞病毒(SFTSV)[1]。新型布尼亞病毒病例多分布于丘陵地帶，呈高度散發(fā)。研究表明蜱是最為可能的傳播媒介，部分病例有蜱暴露或叮咬史；蜱中分離到病毒并且蜱源的病毒序列與人源病毒同源性高達(dá)93%～100%；蜱的宿主動(dòng)物(牛、羊、犬)中血清學(xué)抗體檢測(cè)呈陽(yáng)性。蜱是一種吸食血液的節(jié)肢動(dòng)物，能寄生于家畜體表。2010年，呂燕寧等人對(duì)北京地區(qū)5個(gè)郊區(qū)縣81份鼠類(lèi)、19份犬類(lèi)血清以及97只蜱開(kāi)展了SFTSV核酸檢測(cè)，結(jié)果均為陰性[2]。目前上海地區(qū)已報(bào)告輸入性發(fā)熱伴血小板病例[3]，但關(guān)于蜱是否攜帶SFTSV，蜱動(dòng)物宿主SFTSV的感染狀況等未見(jiàn)相關(guān)研究報(bào)道。因此，有必要對(duì)上海地區(qū)蜱種類(lèi)、宿主動(dòng)物以及攜帶新布尼亞病毒情況開(kāi)展研究。本研究選擇上海具有代表性的區(qū)，于2012—2014年連續(xù)開(kāi)展蜱分布、帶毒情況調(diào)查和動(dòng)物宿主病毒感染狀況的檢測(cè)，從而為掌握上海地區(qū)蜱的種群分布、動(dòng)態(tài)變化和攜帶新布尼亞病毒情況，為宿主動(dòng)物感染的種類(lèi)、狀況提供科學(xué)依據(jù)，同時(shí)為上海市蜱傳疾病的科學(xué)防制和防控決策提供決策參考。

1 材料與方法

1.1 時(shí)間和地點(diǎn) 2012—2014年期間，每年開(kāi)展兩次，于5—10月在上海市17個(gè)區(qū)范圍內(nèi)開(kāi)展寄生蜱、野外和室內(nèi)游離蜱調(diào)查：1)每個(gè)區(qū)調(diào)查點(diǎn)數(shù)量不少于5個(gè)；2)調(diào)查動(dòng)物總數(shù)不少于100頭，兩條件均需滿(mǎn)足。調(diào)查同時(shí)，若該地點(diǎn)不適宜開(kāi)展室內(nèi)游離蜱調(diào)查，可以另選其他點(diǎn)以補(bǔ)足數(shù)量。發(fā)現(xiàn)蜱陽(yáng)性后需在周邊開(kāi)展拖旗法調(diào)查外環(huán)境蜱情況。

1.2 方法

1.2.1 野外環(huán)境游離蜱的采集 發(fā)現(xiàn)蜱陽(yáng)性的調(diào)查點(diǎn)周邊開(kāi)展野外環(huán)境游離蜱調(diào)查。采用人工布旗法： 用90 cm×60 cm的白棉布旗，窄的一邊兩端用繩子固定在竹竿上，將旗子平鋪地面，拖拉繩子前進(jìn)，每步行10 m即可停下檢視附著的蜱數(shù)，根據(jù)調(diào)查地段內(nèi)植被情況選擇不同的方法進(jìn)行定時(shí)或定距拖蜱。如需調(diào)查密度，可在選擇的樣地均勻地拖或揮旗，以人/h 或100 m/h所捕捉的蜱數(shù)進(jìn)行密度指數(shù)統(tǒng)計(jì)。采集的蜱放入統(tǒng)一編號(hào)的采集管內(nèi)，帶回實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行分類(lèi)鑒定、計(jì)數(shù)和檢測(cè)。

1.2.2 室內(nèi)游離蜱的采集 于畜舍、圈欄、狗房、雞窩等場(chǎng)所采集時(shí)，需檢查其表面尤其是墻角，不易進(jìn)入的巢穴，可利用吸引或粘附的長(zhǎng)柄工具如勺匙、絨布探棒等進(jìn)行調(diào)查，狗舍、雞舍等如是土坯或磚可翻磚尋找。采集的蜱放入統(tǒng)一編號(hào)的采集管帶回實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行分類(lèi)鑒定、計(jì)數(shù)和檢測(cè)。

1.2.3 動(dòng)物“寄生蜱”采用動(dòng)物體表捕捉法

1.2.3.1 采用宿主動(dòng)物體表檢拾法 在家畜如牛、羊、狗等身上進(jìn)行體表?yè)焓?，采集的蜱在?shí)驗(yàn)室中進(jìn)行相關(guān)的分類(lèi)鑒定、計(jì)數(shù)和檢測(cè)。

1.2.3.2 家畜和家禽中蜱的檢查方法 動(dòng)物適當(dāng)固定，重點(diǎn)檢查動(dòng)物的耳朵、眼睛周?chē)?、口鼻周?chē)?、脖子、腋窩、胸脯、乳房、大腿根、陰囊、肛周、會(huì)陰、尾根等部位，毛較長(zhǎng)的動(dòng)物需用手觸摸，發(fā)現(xiàn)蜱時(shí)，如正在吸血的蜱類(lèi)假頭容易折斷，應(yīng)用小鑷子夾緊假頭先輕輕拉拽和左右晃動(dòng)，使之能上下?lián)u動(dòng)，再果斷拔除，必要時(shí)可連帶部分動(dòng)物皮毛。

1.2.4 蜱病毒核酸的檢測(cè) 蜱標(biāo)本按重量分組，每組約30 mg，用高壓滅菌過(guò)的無(wú)菌、去除RNA酶的水清洗3次后，然后用高壓滅菌過(guò)的濾紙吸干。各組標(biāo)本分別放入無(wú)菌研缽中，加入適量液氮快速冷凍，加入500 μL裂解液,在冰上研磨均勻。按照RNA提取試劑盒(購(gòu)自中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司)說(shuō)明提取總RNA，檢測(cè)設(shè)陽(yáng)性和陰性對(duì)照，進(jìn)行熒光定量PCR檢測(cè)和結(jié)果判定。試驗(yàn)結(jié)果判定Ct≤35為陽(yáng)性，Ct值>35時(shí)為陰性。

1.2.5 動(dòng)物血清抗病毒的總抗體檢測(cè) 采用ELISA法檢測(cè)動(dòng)物血清中的抗新型布尼亞病毒總抗體。試劑盒(受贈(zèng)于中國(guó)疾病預(yù)防控制中心病毒病控制所出血熱室)在微孔條包被新型布尼亞病毒重組抗原，配以新型布尼亞病毒酶標(biāo)抗原，采用雙抗原夾心法原理檢測(cè)人及各種動(dòng)物血清、血漿或血漿中的SFTS總抗體。檢測(cè)設(shè)陽(yáng)性和陰性對(duì)照，設(shè)定酶標(biāo)儀波長(zhǎng)為450 nm，測(cè)定各孔OD值。Cutoff=陰性對(duì)照OD值的平均值+0.1，陽(yáng)性判定：樣品OD值≥Cutoff者判為陽(yáng)性，樣品OD值

2 結(jié) 果

2.1 上海市蜱分布及攜帶新型布尼亞病毒的調(diào)查研究

2.1.1 游離蜱 2014年在本市17個(gè)區(qū)共捕獲54只蜱，均為長(zhǎng)角血蜱。其中松江區(qū)辰山捕捉到40只，金山區(qū)大金山島捕捉到14只。

2.1.2 寄生蜱 2012-2014年在本市共捕獲“寄生蜱”306只，其中2012年捕捉到132只，2013年捕捉到63只，2014年捕捉到111只。3年期間能夠捕捉到蜱蟲(chóng)的共有10個(gè)區(qū)，僅閔行區(qū)和崇明區(qū)每年均能捕捉到蜱。區(qū)分布詳見(jiàn)表1。

“寄生蜱”宿主有犬、貓、羊、牛、豬等動(dòng)物。其中調(diào)查的犬最多，占3年宿主總調(diào)查數(shù)的83.4%。從表2可以看出，“寄生蜱”主要來(lái)自于犬類(lèi)，其次是羊，但在貓、牛和豬等動(dòng)物中沒(méi)有發(fā)現(xiàn)蜱。2014年從鼠(黃胸鼠)體表捕捉到一只蜱。2012、2013年捕捉的蜱全部來(lái)自犬，2014年捕捉的蜱來(lái)自犬、羊和黃胸鼠。在3種宿主動(dòng)物中，“寄生蜱”來(lái)于犬的最多，共捕捉到的“寄生蜱”數(shù)量達(dá)247只，來(lái)源于羊的“寄生蜱”捕捉量達(dá)58只。來(lái)源于鼠的寄生蜱僅捕捉到1只。

表2 2012-2014年上海市“寄生蜱”調(diào)查中被調(diào)查的宿主和陽(yáng)性宿主情況Tab.2 Tick carriage and prevalence on host animals in Shanghai, from 2012 to 2014

2.1.3 上海地區(qū)主要蜱種和分布 由表3可知：于2012-2014年每年5—10月期間，在本市17個(gè)區(qū)中捕捉蜱。其中血紅扇頭蜱共捕捉到243只，均為“寄生蜱”，除一只捕捉于鼠，其他均捕捉于犬。243只血紅扇頭蜱主要分布在上海郊區(qū)，主要為奉賢、崇明、松江、閔行、青浦等郊區(qū)，城區(qū)也有少量分布。血紅扇頭蜱活動(dòng)高峰分別為6月和9月，以6月為主。長(zhǎng)角血蜱共捕捉到113只，其中59只為“寄生蜱”，占52.2%，“寄生蜱”的長(zhǎng)角血蜱主要捕捉于閔行和崇明，閔行為主(98.3%)，崇明只有1只；宿主來(lái)源主要來(lái)自于羊(98.3%)，只有1只來(lái)自犬。另捕捉4只鈴頭血蜱，捕捉地點(diǎn)在嘉定區(qū)華庭街道，來(lái)自于寵物犬。

表3 2012-2014年期間上海市不同蜱種的月分布情況Tab.3 Monthly distribution of tick species in Shanghai, from 2012 to 2014

2.1.4 蜱中新型布尼亞病毒的檢測(cè)情況 360只蜱被送至實(shí)驗(yàn)室，檢測(cè)了其中的143只蜱，檢測(cè)率41.21%。143只蜱中既有游離蜱也有寄生蜱，既包含血紅扇頭蜱也包含長(zhǎng)角血蜱,經(jīng)real time RT-PCR檢測(cè)結(jié)果均為陰性。見(jiàn)表4。

2.2 宿主動(dòng)物新型布尼亞病毒感染狀況調(diào)查 在本市蜱宿主動(dòng)物犬、羊等可查到寄生蜱，開(kāi)展上海市犬、豬、羊等動(dòng)物中新型布尼亞病毒的感染情況調(diào)查。2.2.1 犬中抗新型布尼亞病毒總抗體結(jié)果 共檢測(cè)了本市6個(gè)區(qū)共198頭犬的血清標(biāo)本犬主要為家養(yǎng)寵物犬，各區(qū)的犬血清采集情況如下：黃浦區(qū)59份；靜安區(qū)：28份；徐匯區(qū)：33份；長(zhǎng)寧區(qū)：28份；虹口區(qū)：20份；楊浦區(qū)：30份。所有犬類(lèi)血清檢測(cè)結(jié)果均為抗新型布尼亞病毒總抗體陰性。

2.2.2 豬中抗新型布尼亞病毒總抗體結(jié)果 共檢測(cè)了本市2個(gè)區(qū)共120頭豬的血清標(biāo)本，其中60份來(lái)自浦東新區(qū)，60份來(lái)自奉賢區(qū)。所有豬血清檢測(cè)結(jié)果均為抗新型布尼亞病毒總抗體陰性。

2.2.3 羊中抗新型布尼亞病毒總抗體結(jié)果 共檢測(cè)了崇明區(qū)36頭羊的血清標(biāo)本，均為抗新型布尼亞病毒總抗體陰性。

3 討 論

蜱作為一種重要的媒介，可以傳播新型布尼亞病毒等多種病原體[4]。人類(lèi)感染SFTSV的風(fēng)險(xiǎn)與宿主的數(shù)量，疫源地的特點(diǎn)、人類(lèi)暴露概率、蜱蟲(chóng)叮咬頻率和個(gè)人防護(hù)等均有關(guān)。截至2006年，世界已知蜱類(lèi)有3科18屬897種，中國(guó)發(fā)現(xiàn)2科10屬119種[5]。本研究發(fā)現(xiàn)上海地區(qū)采集的蜱經(jīng)鑒定分別隸屬于硬蜱科、硬蜱亞科的血蜱亞科和扇頭蜱亞科，血蜱亞科為長(zhǎng)角血蜱(Haemaphysalis longicornis) 和鈴頭血蜱(Haemaphysalis campanulata)，扇頭蜱亞科為血紅扇頭蜱(Rhipicephalus sanguineus)。其中游離蜱均為長(zhǎng)角血蜱，寄生蜱發(fā)現(xiàn)蜱種類(lèi)為血紅扇頭蜱、長(zhǎng)角血蜱和鈴頭血蜱。中國(guó)和韓國(guó)等均發(fā)現(xiàn)長(zhǎng)角血蜱和血紅扇頭蜱攜帶新型布尼亞病毒[6-8]。2016年希臘在血紅扇頭蜱中檢出新型布尼亞病毒[9]。中國(guó)鈴頭血蜱雖未發(fā)現(xiàn)新型布尼亞病毒攜帶陽(yáng)性，但作為可能的傳播媒介，仍應(yīng)引起重視[8]。本次研究檢測(cè)了捕獲的143只蜱，包括上述血紅扇頭蜱和長(zhǎng)角血蜱，新型布尼亞病毒核酸檢測(cè)結(jié)果均為陰性。

表4 2012-2014年期間蜱中布尼亞病毒檢測(cè)結(jié)果Tab.4 Novel bunyavirus detection on ticks in Shanghai, from 2012 to 2014

調(diào)查發(fā)現(xiàn)上海地區(qū)犬、羊和鼠攜帶寄生蜱。2011年劉琴等發(fā)現(xiàn)上海市犬類(lèi)動(dòng)物體表攜帶血紅扇頭蜱和長(zhǎng)角血蜱，本次研究結(jié)果與之一致[10]。中國(guó)山東、湖北等地區(qū)均發(fā)現(xiàn)羊、犬、牛等動(dòng)物中新型布尼亞病毒抗體陽(yáng)性[11-14]。羊(74.8%), 牛(57.1%), 狗(52.1%), 雞(35.9%)等動(dòng)物中的抗體水平[12]可能較實(shí)際報(bào)告病例數(shù)更為真實(shí)體現(xiàn)SFTSV疫源地的實(shí)際感染情況。此外，有研究發(fā)現(xiàn)黑線(xiàn)姬鼠SFTSV檢測(cè)陽(yáng)性，可能是發(fā)熱伴血小板減少綜合征的潛在宿主[15]。根據(jù)中國(guó)寧波地區(qū)的一項(xiàng)研究，蜱蟲(chóng)叮咬鼠的過(guò)程可能導(dǎo)致鼠感染SFTSV[6]。本次研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)上海地區(qū)犬、羊、豬等動(dòng)物中開(kāi)展血清新型布尼亞病毒IgG抗體檢測(cè)結(jié)果均為陰性，暫未發(fā)現(xiàn)動(dòng)物感染SFTSV。因此，本次研究尚未能明確上海地區(qū)是否為SFTSV的自然疫源地，在今后的監(jiān)測(cè)中，應(yīng)關(guān)注蜱、動(dòng)物和人群的監(jiān)測(cè)結(jié)果。

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Pan Hao，Email：panhao@scdc.sh.cn

PreliminaryinvestigationoninfectionofnovelbunyavirusamonganimalsandticksinShanghai,from2012to2014

ZHU Yi-yi1, WU Huan-yu1, ZHANG Chun-zhe1, MAO Sheng-hua1, ZHOU Xin1, ZHANG Qing-hui2, PAN Hao1

(1.ShanghaiMunicipalCenterforDiseaseControlandPrevention,Shanghai200336,China; 2.ShanghaiSongjiangDistrictCenterofDiseaseControlandPrevention,Shanghai, 201620,China)

To investigate the distribution of ticks and to detect the new bunyavirus in ticks and infection rate in animals in Shanghai, outdoor free ticks were captured by flag method and ticks on animals were collected by animal capture. SFTSV in ticks were detected by real-time RT-PCR. Total antibodies against SFTSV in host animal sera were tested by double antigen sandwich method. Results showed that during 2012-2014, free ticks were captured in Chenshan Park and Jinshan Island, which were allHaemaphysalislongicornis. Ten of seventeen districts found ticks on animals which were dominantlyRhipicephalussanguineus. No nucleic acid of SFTSV was detected in 143 ticks. Main host animal for ticks was dog, sheep was in the second. Sera in 198 dogs from 6 urban districts, 120 swine from Pudong and Fenxian districts and 36 sheep from Chongming District were all SFTSV antibody negative. Ticks were not found with SFTSV in Shanghai during 2012-2014. No SFTSV infection was found in host animals. Therefore, there is no evidence that Shanghai is the natural foci of SFTSV. Further surveillance and investigations should be carried out in the future.

SFTS; tick;Rhipicephalussanguineus;Haemaphysalislongicornis

10.3969/j.issn.1002-2694.2017.08.007

上海市第四輪公共衛(wèi)生三年行動(dòng)計(jì)劃傳染病與病原微生物學(xué)重點(diǎn)學(xué)科資助項(xiàng)目(No.15GWZK0101)，上海市第四輪公共衛(wèi)生三年行動(dòng)計(jì)劃高端海外研修團(tuán)隊(duì)培養(yǎng)計(jì)劃資助項(xiàng)目(No.GWTD2015S02)，長(zhǎng)三角區(qū)域重大突發(fā)性傳染病跨境公共衛(wèi)生安全保障技術(shù)的開(kāi)發(fā)及示范應(yīng)用(No.16495810201)聯(lián)合資助

潘 浩，Email：panhao@scdc.sh.cn

1.上海市疾病預(yù)防控制中心，上海 200336； 2.上海市松江區(qū)疾病預(yù)防控制中心，上海 200336

The 4th Round of Three-Year Public Health Action Plan of Shanghai(No. 15GWZK0101)；the 4th round of three years action plan on public health of Shanghai for overseas training plan for high-end talents(No. GWTD2015S02)；Study on the Innovation and Demonstration of Regional Public Health Security Technology on Cross-border Emergency Infectious Diseases Control and Prevention in Yangtze River Delta(No. 16495810201)

R384.4

：A

：1002-2694(2017)08-0700-05

2017-02-17編輯：梁小潔