規(guī)?；u場大腸桿菌病的鑒定及藥敏試驗

文│劉紅梅（河北省黃驊市農(nóng)業(yè)局）

規(guī)模化雞場大腸桿菌病的鑒定及藥敏試驗

文│劉紅梅（河北省黃驊市農(nóng)業(yè)局）

雞大腸桿菌病是指由禽致病性大腸桿菌所引起的局部或全身感染的疾病。大腸桿菌病在哺乳動物主要引起腸道疾病，而在禽類，當宿主受到高致病性大腸桿菌感染而其防御能力不足以抵抗或完全喪失時，常會引起典型的繼發(fā)性局部或全身性感染。此病可引起雞的胚胎死亡、臍炎、敗血癥、輸卵管炎、關(guān)節(jié)炎和滑膜炎、肉芽腫、卵黃性腹膜炎、眼炎等一系列病癥。該病的發(fā)病率為11%～69%，死亡率為3.8%～72.9%，致死率為40.2%～90.3%。該病在任何季節(jié)、地區(qū)、品種、日齡的雞群中均可發(fā)生，但以冬末春初和梅雨季節(jié)多發(fā)，特別是飼養(yǎng)密度過大、環(huán)境衛(wèi)生差、場地被嚴重污染的雞場發(fā)生率較高。2016年2月，河北省黃驊市某養(yǎng)殖戶飼養(yǎng)的大部分蛋雞突然發(fā)生一種以下痢和產(chǎn)蛋率下降為主要臨床特征的疾病，經(jīng)病理學檢查、微生物學檢查確診為大腸桿菌病。

一、材料和方法

1.材料。病料為2016年2月黃驊市某規(guī)?；B(yǎng)殖場送檢的病雞。普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基、細菌生化試驗培養(yǎng)基、革蘭氏染液均購自正規(guī)公司。試驗所用的藥敏紙片購自杭州天和微生物試劑有限公司。

2.方法。

（1）流行病學的調(diào)查。通過向雞場飼養(yǎng)員、技術(shù)員詢問雞群飼養(yǎng)狀況、管理條件及發(fā)病時間，了解發(fā)病情況。

（2）臨床癥狀及病理解剖觀察。通過對雞群精神狀態(tài)、雞冠肉髯色澤、糞便顏色及剖檢后皮膚、臟器、胃腸道、氣囊等觀察，對疾病做出初步診斷。

（3）細菌的分離與培養(yǎng)。用接種環(huán)無菌鉤取病雞少許肝組織、脾組織劃線分別接種于普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)24小時后取出觀察。選取麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上的單個紅色菌落，用接種環(huán)從該菌落中挑一部分涂片，革蘭氏染色鏡檢。

（4）細菌生化試驗。培養(yǎng)細菌用麥康凱培養(yǎng)基增菌后選取單個紅色菌落，將細菌培養(yǎng)物分別接種于木糖、吲哚、甲基紅、葡萄糖、甘露醇、麥芽糖、乳糖、蔗糖培養(yǎng)基上，做分離菌的糖發(fā)酵試驗。

（5）藥敏試驗。用滅菌接種環(huán)挑取麥康凱板培養(yǎng)24小時待試細菌的純培養(yǎng)物（選擇的菌落盡量大小一致），采用“十”字劃線法將細菌涂布到普通營養(yǎng)瓊脂板（細菌盡可能涂布均勻）。用滅菌尖頭鑷子，取已制備好的各種干燥抗菌藥敏片，分別密貼于上述培養(yǎng)基表面，用鑷子輕按下紙片，試紙片與培養(yǎng)基接觸緊密，每種藥敏片標記清楚。將貼藥敏片的平板置37℃溫箱中培養(yǎng)18小時，取出觀察結(jié)果，測量抑菌圈直徑。按抑菌圈直徑大小作為判定敏感性的標準：20毫米以上，極敏；15～20毫米，高敏；10～14毫米，低敏；10毫米以下，耐藥。

二、試驗結(jié)果

1.發(fā)病情況調(diào)查。河北省滄州市黃驊市某規(guī)?；B(yǎng)殖場所養(yǎng)的1萬只蛋雞采食量不斷減少，其中900只表現(xiàn)下痢，產(chǎn)蛋率下降15%，少數(shù)病雞死亡。

2.臨床癥狀觀察。病雞的臨床癥狀表現(xiàn)為采食量少，精神沉郁，羽毛蓬亂，兩翅下垂，排淺綠色或灰白色稀糞、肛門周圍粘有黃白色腥臭稀糞，腹部腫大、兩腳關(guān)節(jié)腫大不能站立，產(chǎn)蛋量下降，個別病雞突然死亡。

3.病理學檢查結(jié)果。剖檢可見病死雞消瘦，氣囊渾濁；腹腔有淡黃色半透明積液，時間稍長即變?yōu)槟z凍樣；心臟、肝臟等臟器被乳白色纖維膜包裹，并與其他組織粘連，切開包膜可見輪層；肝臟瘀血，胰腺、十二指腸黏膜出血；其中多只送檢雞的小腸、盲腸和輸卵管漿膜、肝臟、心臟、脾臟和腎臟被膜等處還可見大小不等的白色結(jié)節(jié)，呈圓形或橢圓形，有綠豆大至玉米粒大，有明顯的蒂；結(jié)節(jié)質(zhì)地堅實，有完整的包膜，表面光滑，切面呈灰白色、均質(zhì)。

4.細菌的分離與培養(yǎng)。在麥康凱培養(yǎng)基上長有邊緣整齊或波狀、稍凸起、表面光滑濕潤、直徑1.5～2毫米粉紅色或深紅色菌落；在普通瓊脂平板上長有表面光滑、濕潤、半透明、灰白色圓形、微凸起的中等大小菌落。染色鏡檢可觀察到該細菌為革蘭氏陰性，兩端鈍圓短粗的小桿菌，多數(shù)單個散在，個別成雙排列，無芽孢。

5.細菌生化試驗。生化試驗結(jié)果見表1。

6.藥敏試驗。具體結(jié)果詳見表2。

通過藥敏試驗結(jié)果表明，慶大霉素、阿米卡星、環(huán)丙沙星、氟苯尼考對大腸桿菌極敏；鏈霉素、新霉素、氧氟沙星對大腸桿菌高敏；強力霉素、四環(huán)素、阿莫西林對大腸桿菌耐藥。

表1 細菌生化試驗結(jié)果

三、討論

根據(jù)病雞的臨床表現(xiàn)、剖檢病理變化以及采集的病死雞的病料接種于麥康凱培養(yǎng)基上，培養(yǎng)基長出中等大小的粉紅色光滑菌落，取典型菌落抹片染色鏡檢可見革蘭氏陰性中等大的桿菌，生化試驗對葡萄糖、乳糖、麥芽糖和甘露醇產(chǎn)酸產(chǎn)氣，與大腸桿菌的特征一致。

根據(jù)藥敏試驗可得出結(jié)論，臨床上應用較多的四環(huán)素、強力霉素、阿莫西林對大腸桿菌的耐受性很強。應用較少的氟苯尼考、氨基糖苷類藥對大腸桿菌有高度的敏感性。

表2 藥敏試驗結(jié)果

該病可根據(jù)藥敏試驗的結(jié)果選擇合適的藥物進行治療，因此建議在臨床上應停用已普遍產(chǎn)生耐藥性、臨床上已明顯無效的藥物，選用目前應用較少、經(jīng)藥敏試驗證明對大腸桿菌敏感的藥物。環(huán)丙沙星、慶大霉素和氟苯尼考等，對本病通常具有較好的治療效果。另外，還應考慮采取聯(lián)合用藥、交叉或輪換用藥等方法。用藥物治療效果不理想時，用當?shù)胤蛛x的菌株制備的大腸桿菌滅活苗對該病也有較好的防治效果。生產(chǎn)中發(fā)現(xiàn)，通過接種疫苗來預防大腸桿菌病，效果比較明顯，接種疫苗后即使發(fā)病也比較輕，而且用藥后也容易治愈。