慢性丙肝及肝硬化患者外周血Th17/Treg細胞及其相關細胞因子的表達及意義

康慧琴　孟娟　行超然

[摘要] 目的 研究慢性丙肝及肝硬化患者外周血Th17細胞、Treg細胞及其相關因子的表達及意義，分析Th17細胞、Treg細胞及其相關因子的變化對患者的影響。 方法 選取2014年3月～2016年2月在運城市中心醫(yī)院進行治療的慢性丙肝患者47例，肝硬化患者27例，同時從健康人群中選取39人，分成慢性丙肝組、肝硬化組和健康對照組。用流式細胞檢測三組患者Th17細胞和Treg細胞表達率，用ELSIA技術檢測IL-10、 IL-17、IL-6、TGF-β的血清水平，比較三組之間的差異。 結果 健康對照組Th17細胞表達率及IL-6、IL-17水平明顯低于慢性丙肝組，健康對照組Treg細胞表達率及IL-6水平明顯低于慢性丙肝組和肝硬化組，健康對照組和慢性丙肝組Th17/Treg比值明顯高于肝硬化組，健康對照組和慢性丙肝組TGF-β、IL-10水平明顯低于肝硬化組，差異均有統計學意義（P<0.05）。 結論 Th17細胞和Treg細胞表達率以及相關因子的血清水平的變化與慢性丙肝及肝硬化有密切的關系，關注Th17細胞和Treg細胞表達率以及相關因子的血清水平的變化對預防慢性丙肝及肝硬化有重要指導意義。

[關鍵詞] 慢性丙肝；肝硬化；Th17細胞；Treg細胞；細胞因子

[中圖分類號] R512.6 [文獻標識碼] B [文章編號] 2095-0616（2017）15-248-04

[Abstract] Objective To study the expression and significance of Th17 cells， Treg cells and related factors in peripheral blood of patients with chronic hepatitis C and cirrhosis， and to analyze the effect of Th17 cells， Treg cells and their related factors on the patients. Methods 47 patients with chronic hepatitis C and 27 patients with cirrhosis treated in Yuncheng Central Hospital from March 2014 to February 2016， and 39 healthy subjects were selected. They were divided into chronic hepatitis C group， cirrhosis group and healthy control group. The expression rates of Th17 cells and Treg cells were detected by flow cytometry. Serum levels of IL-10， IL-17， IL-6 and TGF-β were measured by ELSIA technique. The differences between the three groups were compared. Results The expression of IL-6 and IL-17 in healthy control group was significantly lower than that in chronic hepatitis C group. The expression rate of Treg cells and IL-6 level in healthy control group were significantly lower than those in chronic hepatitis C group and cirrhosis group. The ratio of Th17/ Treg in chronic hepatitis C group was significantly higher than that in cirrhosis group， and the level of TGF-β and IL-10 in healthy control group and chronic hepatitis C group was significantly lower than that in cirrhosis group （P<0.05）. Conclusion The expression of Th17 cells and Treg cells and the serum levels of related factors are closely related to chronic hepatitis C and cirrhosis. Paying close attention to the expression rates of Th17 cells and Treg cells and the serum levels of related factors have important guiding significance for the prevention of chronic hepatitis C and cirrhosis.

[Key words] Chronic hepatitis C； Cirrhosis； Th17 cells； Treg cells； Cytokines

慢性丙型肝炎患者的主要致病原因是感染了丙型肝炎病毒（Hepatitis C virus）。根據統計資料顯示，全球丙型肝炎病毒感染者約有1.7億[1-2]。感染丙型肝炎病毒的患者中，約有大約80%的患者急性感染丙型肝炎病毒后發(fā)展為慢性肝病，20%的患者發(fā)展為肝硬化甚至肝癌，引發(fā)了嚴重的社會衛(wèi)生安全問題[3-4]。但是，丙型肝炎病毒的發(fā)病機制尚未清楚[5]，有研究指出，丙型肝炎病毒誘發(fā)慢性肝病過程中Th17/Treg細胞失衡對其有重要影響。Th17是一種輔助性T細胞，同Treg細胞一樣具有防止自身免疫，維持免疫應答的作用[6]，但Th17細胞和Treg細胞的具體職能還不明確。細胞因子是當前研究丙型肝炎病毒領域的熱點，細胞因子在細胞維持正常免疫應答過程中起到重要調節(jié)作用。本研究通過比較慢性丙肝及肝硬化患者外周血Th17細胞、Treg細胞的表達及其相關因子血清水平，分析Th17細胞、Treg細胞及其相關因子的變化的臨床意義及對患者的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2014年3月～2016年2月在運城市中心醫(yī)院進行治療的慢性丙肝患者47例，肝硬化患者27例，同時從健康人群中選取39人，分成慢性丙肝組、肝硬化組和健康對照組。慢性丙肝組男30例，女17例，平均年齡（40.4±12.9）歲；肝硬化組男17例，女10例，平均年齡（41.6±11.6）歲；健康對照組男25人，女14人，平均年齡（40.0±13.4）歲，三組患者在性別和年齡方面差異無統計學意義（P>0.05）。三組患者經檢查未患有其他疾病，目前或在本研究前1個月內未接受其他臨床試驗，患者及其家屬對本次研究知情，且同意簽署知情同意書。

1.2 方法

Th17細胞、Treg細胞檢測采用的流式細胞術檢測，使用的儀器是美國Beckman公司生產的FC500流式細胞儀，試劑是Biolegend公司的Th17流式檢測試劑盒和CD3+CD25+Foxp3+Treg一步法流式檢測試劑盒。

相關細胞因子血清水平檢測試劑包括Biolegend公司生產的IL-17 ELSIA試劑盒、Bender Medsestems公司生產的IL-23試劑盒、欣博盛生生物科技有限公司生產的IL-6試劑盒和TGF-β試劑盒。

抽取慢性丙肝組、肝硬化組、健康對照組每人6mL靜脈血，平均分成兩管，分別進行Th17和Treg細胞的流式細胞術檢測和IL-10、IL-17、IL-6、TGF-β血清水平ELISA檢測。檢測過程嚴格遵循產品說明書。

1.3 統計學方法

采集到的數據資料經過整理后導入SPSS19.0統計學軟件以進行統計分析，計量資料用（）表示，采用方差分析；采用Pearson分析相關指標的相關性。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 Th17及Treg細胞在三組患者外周血中的表達情況

健康對照組Th17細胞表達率明顯低于慢性丙肝組，差異有統計學意義（t=2.289，P=0.026）。肝硬化組細胞表達率相對于健康對照組有上升趨勢，但低于慢性丙肝組Th17細胞表達率。健康對照組Treg細胞表達率明顯低于慢性丙肝組和肝硬化組，差異有統計學意義（t=2.156，P=0.032； t=2.573，P=0.011）。健康對照組和慢性丙肝組Th17/Treg比值明顯高于肝硬化組，差異有統計學意義（t=2.463，P=0.014； t=2.551，P=0.012）。見表1。

2.2 外周血細胞因子檢測結果

慢性丙肝組和健康對照組IL-10血清水平明顯低于肝硬化組，差異有統計學意義（t=2.701，P=0.007； t=2.815，P=0.005）。肝硬化組和健康對照組IL-17血清水平明顯低于慢性丙肝組，差異有統計學意義（t=2.318，P=0.021； t=2.952，P=0.003）。健康對照組IL-6血清水平明顯低于慢性丙肝組和肝硬化組，差異有統計學意義（t=2.774，P=0.006； t=2.301，P=0.022）。慢性丙肝組和健康對照組TGF-β血清水平明顯低于肝硬化組，差異有統計學意義（t=2.403，P=0.016； t=2.373，P=0.018）。見表2。

2.3 Th17細胞和Treg細胞與細胞因子的相關性

Th17細胞與IL-10、IL-6、TGF-β無明顯相關性（P>0.05），與IL-17成正相關（P<0.05）；Treg細胞與IL-10、IL-6、IL-17無明顯相關性（P>0.05），與TGF-β成正相關（P<0.05）。見表3。

3 討論

從表1可以看出，健康對照組Th17細胞表達率明顯低于慢性丙肝組，差異有統計學意義（t=2.289，P=0.026）。在患者感染丙型肝炎病毒后，肝細胞會釋放一種胸腺基質淋巴細胞生成素，在這種物質的作用下，Th17細胞開始加快生長和分化[7]。IL-17是Th17分泌出的維持肝細胞生存的細胞因子，丙型肝炎病毒也是在IL-17的作用下生存下來，從而會使患者發(fā)展為慢性丙肝和肝硬化[8]。有研究指出隨著感染丙型肝炎病毒病程的增長，Treg細胞表達率逐漸下降，而Th17細胞表達率是逐漸上升的，這就導致Th17/Treg細胞失衡[9]，誘發(fā)肝硬化。本次研究結果健康對照組Treg細胞表達率明顯低于慢性丙肝組和肝硬化組，差異具有統計學意義（t=2.156，P=0.032；t=2.573，P=0.011）。本次研究驗證了Th17和Treg細胞在患者感染丙型肝炎病毒后進一步發(fā)展為慢性丙肝和肝硬化過程中發(fā)揮著作用。健康對照組和慢性丙肝組Th17/Treg比值明顯高于肝硬化組，差異有統計學意義（t=2.463，P=0.014；t=2.551，P=0.012）。由研究數據來看，Th17/Treg細胞失衡是誘發(fā)肝硬化的影響因素。肝硬化組Th17/Treg比值偏低，說明Treg細胞的表達率增高并且高于Th17細胞。本研究認為在患者感染丙型肝炎病毒并進一步發(fā)展為慢性丙肝和肝硬化過程中，Treg細胞加速分化，引起丙型肝炎病毒發(fā)展成慢性丙肝和肝硬化。

本研究中，肝硬化組和健康對照組IL-17血清水平明顯低于慢性丙肝組，差異有統計學意義（t=2.318，P=0.021；t=2.952，P=0.003）。健康對照組IL-17血清水平低于肝硬化組，肝硬化組IL-17血清水平低于慢性丙肝組，慢性丙肝組IL-7血清水平最高。IL-17作用于肝星形細胞上，促進肝星形細胞接收TGF-β，而TGF-β是作用于肝臟星狀細胞，使肝臟星狀細胞合成胞外基質的速度加快，引起肝的纖維化[10]。所以，IL-17血清水平升高會引起丙型肝炎病毒發(fā)展成慢性丙肝和肝硬化。TGF-β細胞因子血清水平升高會促使Th0細胞分化成Treg細胞，而TGF-β細胞因子和IL-6血清水平降低會促使Th0細胞分化成Th17細胞。所以，健康對照組Th17細胞表達率明顯低于慢性丙肝組，健康對照組Treg細胞表達率明顯低于肝硬化組。正是因為這些細胞因子的相互作用，使Th17/Treg細胞失衡，引發(fā)了慢性丙肝以及肝硬化患者病情加重。IL-6細胞因子可由Th2細胞、血管內皮細胞、骨髓基質細胞、巨噬細胞等合成[11]。健康對照組IL-6血清水平明顯低于慢性丙肝組，差異有統計學意義（t=2.774，P=0.006； t=2.301，P=0.022）。從具體數據來看，健康對照組IL-6血清水平低于肝硬化組，肝硬化組IL-6血清水平低于慢性丙肝組，慢性丙肝組IL-6血清水平最高。有研究指出，IL-6血清水平與肝臟的纖維化有密切關系[12]，與肝臟炎癥嚴重程度呈正相關[13]。IL-6血清水平對慢性丙肝及肝硬化的病情發(fā)展有指導意義。從表2中可以看出，慢性丙肝組和健康對照組TGF-β血清水平明顯低于肝硬化組，差異有統計學意義（t=2.403，P=0.016；t=2.373，P=0.018）。另外，IL-10、黏液素蛋白-3/TGF-β等細胞因子增多會促使Treg細胞加速分化，引起丙型肝炎病毒發(fā)展成慢性丙肝。TGF-β可以激活HSC，其水平在促纖維化中的起到重要作用。TGF-β可以加速胞外基質沉積同時抑制胞外基質的降解，TGF-β血清水平增高可能是誘發(fā)肝硬化的重要原因[14]。炎性浸潤的單核細胞核淋巴細胞合成IL-10，所以炎性浸潤程度越嚴重則IL-10水平越高。IL-10對TGF-β有抑制作用，同時IL-10也可以對炎癥反應進行抑制，比如抑制單核細胞增殖等，使得IL-10水平又逐漸下降，促進了TGF-β的合成，加重肝纖維化的程度。IL-10細胞因子的功能是抑制Th0細胞分化成Th17細胞[15]，由表2可知肝硬化組患者IL-10血清水平高于健康對照組，但是健康對照組Th17細胞表達率卻低于肝硬化組，說明免疫細胞及細胞因子之間存在著復雜的關系，各種因素之間相互作用、相互影響，共同作用于人體的免疫網絡。

綜上所述，盡管丙型肝炎病毒感染和發(fā)病機制并不明確，但是通過本次研究可以得出：Th17細胞和Treg細胞表達率以及相關因子的血清水平的變化與慢性丙肝及肝硬化有密切的關系，關注Th17細胞和Treg細胞表達率以及相關因子的血清水平的變化對預防慢性丙肝及肝硬化有重要指導意義。

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（收稿日期：2017-05-19）