百令片對維持性血液透析患者外周血T淋巴細(xì)胞的影響

楊濤　張任　趙黎

[摘要]目的 探討百令片對維持性血透患者T淋巴細(xì)胞的影響。方法 以在我院血液凈化中心維持性血液透析患者為研究對象，用回顧性分析的方法，接受百令片治療者為治療組，未接受百令片治療者為對照組，檢測各組患者外周血淋巴細(xì)胞表達(dá)頻率、T細(xì)胞及亞群表達(dá)比例；回顧分析兩組患者近1年因肺部感染住院頻次及住院時間。結(jié)果 兩組間基本資料血清肌酐、尿素、年齡、血清白蛋白、血紅蛋白、透析時間、透析頻率等方面兩組無顯著性差異。兩組患者外周血淋巴細(xì)胞均較正常值下降，但服用百令片組淋巴細(xì)胞絕對值（1.46±0.12）G/L、T淋巴細(xì)胞比例均較未服用組高[（1.46±0.12）G/L vs（1.16±0.08）G/L；（72.34±2.86）% vs（62.74±3.45）%，P<0.05]；兩組患者T淋巴細(xì)胞亞群比例（CD4+/CD8+T）無顯著差異。服用百令片組患者近1年因肺部感染住院頻率、住院時間顯著低于對照組[0.07 vs 0.23；（6.67±0.33）d vs（9.57±0.72）d，P<0.05]。結(jié)論 百令片能改善血透患者的低淋巴細(xì)胞血癥，部分糾正患者T淋巴細(xì)胞比例，調(diào)節(jié)患者的免疫功能，減少患者因肺部感染住院頻次。

[關(guān)鍵詞] 維持性透析；淋巴細(xì)胞；CD3；CD4；CD8

[中圖分類號] R587.2 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 2095-0616（2017）15-178-04

[Abstract] Objective To investigate the efficacy of Bailing tablets on peripheral blood T cells in Maintenance hemodialysis（MHD） patients. Methods The maintenance hemodialysis patients in our hospital blood purification center were selected as the study object， and they were retrostpectively analyzed. The MHD patients by Bailing tablets were treatment group， patients did not receive Bailing tablets treatment were control group. The peripheral blood lymphocytes， the percentage of T lymphocyte，CD3+ CD8+ T cells，CD3+ CD4+ T cells were measured. Observe the hospitalization rate and hospital stays of the two groups for pulmonary infection during the last year were retrospectively analyzed. Results There were no significant differences in the serum creatinine， Urea， fasting blood sugar， between the two groups. Peripheral blood lymphocytes of the two groups were decreased， compared with the normal level. However， the percentage of lymphocyte and T lymphocyte in the Bailing group were higher than the control group[（1.46±0.12）G/L vs （1.16±0.08）G/L， （72.34±2.86）% vs （62.74±3.45）%，P<0.05）]. There was no significant difference in CD4+/CD8+T lymphocyte of the two groups. In latest one years， the frequency and length of hospitalization of the Bailing group were significantly lower than the control group[0.07 VS 0.23， （6.67±0.33）d vs （9.57±0.72）， P<0.05]. Conclusion Bailing can increase the peripheral blood lymphocytes of MHD patients， partly correct the proportion of T lymphocytes. Bailing tablets may improve the immunity function of MHD patients， and decrease the hospitalization rate for pulmonary infections .

[Key words] Maintenance hemodialysis； Lymphocyte； CD3； CD4； CD8

維持性血液透析是終末期腎臟?。‥SRD）患者維系生命的重要手段，其全因死亡率是普通人群的10～20倍以上[1]，其中感染占第2位[2]。維持性血液透析患者感染性疾病發(fā)病率高、進(jìn)展快、病情重、死亡率高，免疫力下降是患者感染的重要因素。維持性血液透析患者免疫力低下，與患者體內(nèi)尿毒

癥毒素的蓄積所致體液免疫、細(xì)胞免疫功能紊亂相關(guān)，相關(guān)的免疫細(xì)胞為單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)、中性粒細(xì)胞、T/B淋巴細(xì)胞等[3]。這些免疫細(xì)胞可表現(xiàn)為數(shù)量、細(xì)胞亞群的比例異常，細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)及細(xì)胞因子的表達(dá)異常，細(xì)胞表面受體/配體的表達(dá)量異常，它們之間相互影響、相互作用促成尿毒癥患者免疫功能的紊亂。

既往研究資料顯示冬蟲夏草菌粉存在免疫調(diào)節(jié)作用，可以增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的吞噬能力，提高自然殺傷細(xì)胞（NK）的活性[4]，促進(jìn)T細(xì)胞、B細(xì)胞及漿細(xì)胞的增值[5]，抑制促炎癥細(xì)胞因子產(chǎn)生同時促進(jìn)抑制炎癥細(xì)胞因子產(chǎn)生的功效[6-7]。臨床上，冬蟲夏草菌粉在腎病領(lǐng)域主要用于降低蛋白尿、延緩腎臟纖維化、保護(hù)腎功能[8]；在呼吸領(lǐng)域可改善慢性阻塞性肺病患者的肺功能，減輕氣道炎癥反應(yīng)[9]。但冬蟲夏草菌粉能否提高透析患者免疫力，減少患者臨床感染的發(fā)生率尚無明確報道。本試驗以透析患者為研究對象，通過臨床回顧性分析尋找依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

以我院的2015年12月～2016年12月維持性血液透析患者為研究對象，本透析中心共有血液透析患者147例，對患者進(jìn)行以下納入排除標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行篩選。

納入標(biāo)準(zhǔn)：慢性腎炎、高血壓腎病、ADPKD所致終末期腎臟病患者，維持性血液透析1年以上，采用普通的血液透析方式，透析頻率為3次/周，服用百令片1年以上為治療組（每次3次，每次≥5片），近1年未服用百令片為對照組。

排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）基礎(chǔ)疾病為糖尿病所致終末期腎病，或并發(fā)有糖尿病患者；原發(fā)病為系統(tǒng)性紅斑狼瘡等自身免疫性疾病所致腎衰竭患者；慢性腎衰竭合并慢性阻塞性肺病患者；極度消瘦、長期臥床，生活不能自理的患者；高齡患者（年齡>75歲）。（2）近期合并感染性疾病、消化道出血、嚴(yán)重心腦血管疾病患者；（3）采取高通量透析或普通透析合并血液灌流患者。（4）1年內(nèi)未使用糖皮質(zhì)激素，或其他免疫調(diào)節(jié)作用是西藥或中藥。

篩選后入組服用百令片透析組43例，其中男29例，女14例，平均年齡（56.1±4.1）歲；未服用百令片組30例，其中男18例，女12例，平均年齡（53.1±5.8）歲?；A(chǔ)疾病有慢性腎炎，高血壓腎病，多囊腎，兩組患者、年齡與基礎(chǔ)疾病無顯著差異（P>0.05）。

1.2 研究方法

檢測兩組患者外周血總淋巴細(xì)胞、T細(xì)胞比例，T細(xì)胞亞群的比例。回顧對比兩組患者近1年因感染住院人次。本研究遵循赫爾辛基宣言，經(jīng)過醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)，所有入組患者均簽署知情同意書。

1.3 主要試劑及儀器

紅細(xì)胞裂解液，美國Biolegend公司；淋巴細(xì)胞分離液，中國達(dá)科為公司；鼠抗人FITC anti-human CD3、APC anti-human CD8、PE anti-human CD4及同型對照，美國biolegend公司；流式細(xì)胞儀為BD Accuri C6；血細(xì)胞分析儀等。

1.4 檢測方法

采用EDTA抗凝管，透析前留取兩組患者外周血2份（共約3mL）；1份通過血細(xì)胞分析儀檢測各組患者淋巴細(xì)胞絕對值。另1份取0.5mL全血采用紅細(xì)胞裂解液裂解紅細(xì)胞后，流式染色，流式細(xì)胞儀分析。回顧統(tǒng)計1年內(nèi)，兩組患者因肺部感染性疾病住院頻次，住院天數(shù)。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS17.0，GraphPad Prism，BD Accuri C6自帶軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理及作圖，計數(shù)資料通過χ2檢驗進(jìn)行分析，計量資料符合正態(tài)分布，通過獨立樣本t檢驗分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者基線資料比較

百令片組患者平均服用百令片時間為132.12個月，合并用藥均為常規(guī)降壓、降糖藥、糾正貧血、糾正酸堿平衡，鈣磷代謝紊亂等常規(guī)用藥，兩組均無對免疫功能有影響的藥物。兩組患者血紅蛋白、血清白蛋白、透析總時間等一般情況比較無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）。見表1。

2.2 兩組患者淋巴細(xì)胞計數(shù)比較

兩組患者淋巴細(xì)胞均低于正常范圍，但服用百令片組其淋巴細(xì)胞計數(shù)顯著高于未服用百令片組，未服用百令片組為（1.16±0.08）G/L；百令片組為（1.46±0.12）G/L，t=2.287，P<0.05），見圖1。

2.3 兩組患者T淋巴細(xì)胞比較

兩組患者T淋巴細(xì)胞在淋巴細(xì)胞中所占比例，服用百令片組患者T淋巴細(xì)胞比例顯著高于未服用百令片組[未服用百令片組T細(xì)胞占比為（62.74±3.45）%；百令片組為（72.34±2.86）%，t=2.376，P<0.05]。見圖2。

2.4 兩組T淋巴細(xì)胞亞群比較

兩組患者T淋巴細(xì)胞亞群CD3+CD4+T/CD3+CD8+T比例屬于正常范圍，但服用百令片組其比例略高于未服用百令片組，但無統(tǒng)計學(xué)差異[未服用百令片組為（2.63±0.22）；百令片組為（2.39±0.19），t=2.763，P=0.39]。見圖3。

兩組近一年內(nèi)住院情況比較

服用百令片組近1年因呼吸道感染平均住院人次，平均住院天數(shù)顯著低于未服用百令片組（P<0.05）。見表2。

3 討論

根據(jù)本研究采用的血細(xì)胞分析儀，健康成年人外周血淋巴細(xì)胞計數(shù)范圍為1.2～2.4G/L。尿毒癥毒素蓄積致淋巴細(xì)胞凋亡增加及增值受抑制，維持性透析患者存在淋巴細(xì)胞減少癥[10-11]。正常人群淋巴細(xì)胞中T細(xì)胞比例為70%～80%，本試驗觀察到相對于對照組，服用百令片組患者外周血淋巴細(xì)胞計數(shù)、T細(xì)胞表達(dá)頻率均顯著升高，趨于正常，表明百令片能改善患者的低淋巴細(xì)胞血癥，其中T細(xì)胞比例增高明顯。且其亞群CD3+CD4+/CD3+CD8+比例亦較對稍高，但無顯著性差異。臨床回顧性統(tǒng)計兩組患者因肺部感染住院率、平均住院時間，服用百令片組均顯著少于對照組，支持百令片能減少維持性血透患者肺部感染的住院率，縮短住院時間。以上試驗表明，口服百令片，能改善維持性血透患者的低淋巴細(xì)胞血癥，提高患者外周血T細(xì)胞數(shù)量，并減少患者肺部感染的發(fā)生幾率。據(jù)以上數(shù)據(jù)推測口服百令片能部分改善維持性透析患者的抗感染能力，可能與其改善患者淋巴細(xì)胞數(shù)量、亞群比例相關(guān)。

國外研究顯示尿毒癥患者毒素蓄積（如氮質(zhì)血癥、氧化應(yīng)激、糖基化終末產(chǎn)物、鐵的超負(fù)荷、炎癥）所致幼稚T細(xì)胞、記憶T細(xì)胞凋亡、耗損增加。本試驗中印證了維持性透析患者外周血淋巴細(xì)胞、T細(xì)胞表達(dá)頻率的下降[10-12]。百令片可改善患者的低淋巴細(xì)胞血癥，具體機(jī)制本研究未涉及。尿毒癥患者毒素的蓄積可導(dǎo)致患者內(nèi)環(huán)境的紊亂，引起各種炎癥介質(zhì)、細(xì)胞因子的分泌異常，抑制骨髓的功能，引起細(xì)胞的凋亡增加。血液凈化技術(shù)的改善，從根源上改善了尿毒癥患者毒素的蓄積，挽救了無數(shù)人的生命，但不能徹底糾正毒素對機(jī)體的影響，這是尿毒癥患者死亡率升高的根本原因所在[13]。百令片的作用機(jī)制可能是減少了毒素刺激所致致病性細(xì)胞因子的分泌，或是改善骨髓造血系統(tǒng)的抑制狀態(tài)，具體的機(jī)制尚需進(jìn)一步研究探討[14]。尿毒癥患者除了免疫力的下降，同時存在炎癥反應(yīng)增加，嚴(yán)重的心腦血管事件事，外周血管的粥樣硬化、鈣化均與之相關(guān)[15]。冬蟲夏草菌粉肺減輕氣道炎癥反應(yīng)，使非透析呼吸道疾患者群獲益，同時對透析人群有效，其機(jī)制可能是抑制了促炎癥細(xì)胞炎癥因子的表達(dá)[16]。冬蟲夏草菌粉能否抑制尿毒癥患者的炎癥反應(yīng)，亦需要進(jìn)一步驗證。

本試驗通過回顧性分析的方法，遺憾之處在于樣本量偏少，因經(jīng)費(fèi)等原因未檢測患者各種炎癥因子的表達(dá)，未做未服用百令片組縱向自身對照研究。維持性透析患者患存在單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)、中性粒細(xì)胞系統(tǒng)等在兩組患者中的變化，故未能提供更全面的證據(jù)表明冬蟲夏草菌粉制劑對維持性血液透析患者免疫力的提高，尚需進(jìn)一步研究證實。

綜上所述，冬蟲夏草菌粉制劑能有效改善維持性血液透析患者低淋巴細(xì)胞血癥，改善T淋巴細(xì)胞亞群比例的失調(diào)，在臨床上減少患者呼吸道疾病的發(fā)生率。

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（收稿日期：2017-03-09）