雙氯芬酸鈉注射液對仔豬腹腔注射內(nèi)毒素(LPS)的臨床解熱藥效試驗(yàn)

尹洪習(xí) ， 孫傳熙 ， 劉哲林 ， 呂淑榮 ， 萬仁忠

(1.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，山東泰安271018; 2. 煙臺(tái)綠葉動(dòng)物保健品有限公司, 山東煙臺(tái)264003)

雙氯芬酸鈉注射液對仔豬腹腔注射內(nèi)毒素(LPS)的臨床解熱藥效試驗(yàn)

尹洪習(xí)1,2， 孫傳熙1， 劉哲林2， 呂淑榮2， 萬仁忠1

(1.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，山東泰安271018; 2. 煙臺(tái)綠葉動(dòng)物保健品有限公司, 山東煙臺(tái)264003)

雙氯芬酸鈉注射液在人藥領(lǐng)域應(yīng)用廣泛，在臨床上有很好的解熱、鎮(zhèn)痛效果。本試驗(yàn)?zāi)康氖球?yàn)證雙氯芬酸鈉注射液在靶動(dòng)物豬上的解熱效果。結(jié)果表明：(1)雙氯芬酸鈉注射液低劑量組在治療豬發(fā)熱方面具有一定的臨床效果，但其效果稍差于對乙酰氨基酚組；(2)雙氯芬酸鈉注射液中、高劑量組的臨床解熱綜合效果優(yōu)于對乙酰氨基酚組；(3)從臨床使用及經(jīng)濟(jì)角度考慮，選用中劑量作為解熱的推薦劑量，即雙氯芬酸鈉臨床肌肉注射給藥劑量為0.05 mL/kg體重。

雙氯芬酸鈉注射液;腹腔;內(nèi)毒素;解熱;仔豬

獸醫(yī)臨床實(shí)踐證明，體溫反常是豬生理機(jī)能被擾亂的重要癥狀之一，引起體溫升高的因素很多[1]，臨床上分為感染性與非感染性發(fā)熱，以感染性發(fā)熱最為常見，在豬的許多疾病中，尤其是患某些傳染疾病時(shí)，體溫升高比其他癥狀出現(xiàn)得早，合理有效地控制發(fā)熱癥狀，是治療某些疾病的重要手段之一。

雙氯芬酸鈉注射液在人藥領(lǐng)域應(yīng)用廣泛，在臨床上有很好的解熱、鎮(zhèn)痛效果，二十世紀(jì)八十年代起就有應(yīng)用，目前國內(nèi)有20多家人用藥廠商有正規(guī)批準(zhǔn)文號(hào)。本試驗(yàn)?zāi)康氖球?yàn)證雙氯芬酸鈉注射液在靶動(dòng)物豬上的解熱效果。

經(jīng)查閱相關(guān)文獻(xiàn)資料[2-3]，以及前期預(yù)試驗(yàn)，我們采用對2月齡仔豬腹腔注射內(nèi)毒素(LPS)1μg/kg體重后的發(fā)熱模型為研究對象，測定機(jī)體內(nèi)致熱中樞介質(zhì)PGE2等指標(biāo)的變化，測定發(fā)熱豬體溫及觀察臨床癥狀變化，評(píng)價(jià)雙氯芬酸鈉注射液對內(nèi)毒素誘導(dǎo)豬發(fā)熱的臨床解熱藥效。

1 試驗(yàn)材料

1.1 試驗(yàn)藥品 雙氯芬酸鈉注射液，規(guī)格：100 mL: 5 g，批號(hào)：121012，由煙臺(tái)綠葉動(dòng)物保健品有限公司提供；對乙酰氨基酚注射液，規(guī)格：10 mL, 1 g，批號(hào)：130114，江西金康佳生化藥業(yè)有限公司。

1.2 試驗(yàn)試劑 精制大腸桿菌內(nèi)毒素(LPS)，批號(hào):L2880，美國Sigma公司；豬前列腺素E2(PGE2)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒，批號(hào)：201309，上海邦奕生物科技有限公司；依諾肝素鈉，批號(hào):130506，煙臺(tái)東誠生化股份有限公司。

1.3 試驗(yàn)儀器 WAT-101獸用體溫計(jì)；酶標(biāo)儀，美國Molecular Devices(MD)公司，型號(hào)：SpectraMaxplus384等。

1.4 試驗(yàn)動(dòng)物 60頭健康長白豬，雌雄各半，2月齡，體重16～18 kg，按常規(guī)喂養(yǎng)，自由飲水。

2 試驗(yàn)方法

2.1 劑量設(shè)計(jì) 雙氯芬酸鈉注射液臨床藥效試驗(yàn)中劑量擬定為0.05 mL/kg體重，對照藥物對乙酰氨基酚注射液劑量擬定為0.05 mL/kg體重。

2.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 60頭2月齡仔豬，雌雄各半，稱重、按日齡和體重相近的原則隨機(jī)分為6組，以耳號(hào)標(biāo)記，每組10頭，試驗(yàn)分組及處理情況見表1。

表1 試驗(yàn)仔豬分組及處理

注：發(fā)熱模型的建立：用滅菌生理鹽水將精制大腸桿菌內(nèi)毒素稀釋成10 μg/mL，仔豬腹腔注射內(nèi)毒素1 μg/kg體重，攻毒后4 h，攻毒組的平均體溫高于陰性對照組0.5 ℃，即為造模成功[2-3]

2.3 檢測指標(biāo)樣品采集、處理和測定方法 攻毒前7 d，記錄各試驗(yàn)仔豬每天的臨床癥狀，攻毒前3 d，每天早、中、晚測定仔豬體溫，取平均值作為仔豬的基礎(chǔ)體溫，除陰性對照組外，各組均1次性腹腔注射內(nèi)毒素1 μg/kg體重攻毒，建立試驗(yàn)豬發(fā)熱模型[4-6]，4 h后各組體溫均高于陰性對照組0.5 ℃，即造模成功，各組均按劑量肌肉注射給藥，采集攻毒后0、2.5、4.0、4.5、5.0、6.0、12.0、24.0 h時(shí)間點(diǎn)的血樣1 mL，采用肝素鈉抗凝劑抗凝，4 500 r/min離心10 min，取上清液，-20 ℃保存?zhèn)溆?，采用豬前列腺素PGE2 ELISA試劑盒檢測血漿中的PGE2濃度，并同步測定仔豬體溫，觀察臨床癥狀以此來評(píng)價(jià)受試藥物的臨床解熱藥效。

2.4 臨床觀察指標(biāo) 觀察并記錄各組試驗(yàn)仔豬給藥后的精神狀態(tài)，活動(dòng)情況，以及嘔吐、腹瀉情況，按照表2評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)綜合打分；記錄每組的采食情況，統(tǒng)計(jì)各組間的差異。

2.5 數(shù)據(jù)處理 數(shù)據(jù)用Excel軟件進(jìn)行處理后，采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)分析軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行One-Way ANOVA分析及LSD法多重比較。

3 結(jié)果與分析

3.1 各組動(dòng)物血漿PGE2的變化 本試驗(yàn)各組仔豬攻毒后血漿中PGE2的含量見表3，PGE2含量柱形圖見圖1。

表2 臨床癥狀綜合評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

圖1 各組仔豬攻毒后血漿中PGE2含量柱形圖

組別時(shí)間點(diǎn)/h025445561224陰性對照組510±245082±275067±215102±19a5095±23a5126±27a5105±22a509±17a陽性對照組5123±316895±278678±237825±17b770±21b7422±35b5506±27b510±21a對乙酰氨基酚對照組5076±226904±138617±255306±21c4701±14c4316±22c485±25c495±15a雙氯芬酸鈉低劑量組5083±216835±188595±245895±23d543±27d490±18d501±23d510±19a雙氯芬酸鈉中劑量組5103±146897±228701±195235±23c461±25c428±14c480±23c495±22a雙氯芬酸鈉高劑量組5126±176837±238657±185206±27c4596±15c4268±23c475±17c498±15a

注：每一個(gè)時(shí)間點(diǎn)內(nèi)，標(biāo)著不同字母的兩組數(shù)據(jù)差異顯著，標(biāo)著相同字母的兩組數(shù)據(jù)差異不顯著,下表同

從表3及圖1可以看出：(1)陰性對照組仔豬血漿中PGE2的含量變化基本維持穩(wěn)定，在腹腔攻毒后12 h內(nèi)與其余各組均存在顯著性差異(P<0.05)；陽性對照組仔豬血漿中PGE2的含量在攻毒后顯著增高；(2)各給藥組仔豬血漿中PGE2的含量與陽性對照組經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析均存在顯著性差異(P<0.05)；(3)腹腔攻毒4 h后，雙氯芬酸鈉低劑量組血漿中PGE2的含量比對乙酰氨基酚對照組高，二者存在顯著性差異(P<0.05)；(4)腹腔攻毒4 h后，雙氯芬酸鈉中、高劑量組血漿中PGE2的含量與對乙酰氨基酚對照組無顯著性差異(P>0.05)；(5)各給藥組血漿中PGE2的含量在24 h時(shí)趨于穩(wěn)定，與陰性對照組無顯著性差異(P>0.05)。

結(jié)果表明，仔豬給藥后對PGE2均具有抑制作用，中、高劑量雙氯芬酸鈉對PGE2的抑制效果與對乙酰氨基酚相當(dāng)。

3.2 各組仔豬直腸溫度的變化 本試驗(yàn)各組仔豬攻毒后直腸溫度變化見表4，直腸溫度變化趨勢見圖2。

圖2 各組試驗(yàn)仔豬攻毒后直腸溫度變化趨勢圖

表4 各組試驗(yàn)仔豬攻毒后直腸溫度變化 ℃

從表4及圖2可以看出：(1)陰性對照組體溫較為平穩(wěn)，其余各組體溫均有不同程度的波動(dòng)，攻毒后陽性對照組體溫波動(dòng)最大；(2)腹腔注射內(nèi)毒素后12 h內(nèi)，各給藥組與陽性對照組體溫經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析有顯著性差異(P<0.05)；(3)雙氯芬酸鈉低劑量組體溫下降較對乙酰氨基酚對照組慢，在攻毒4.5 h前者的平均體溫顯著高于后者(P<0.05)，攻毒5 h后則無顯著性差異；(4)雙氯芬酸鈉中、高劑量組體溫下降較對乙酰氨基酚對照組快，在攻毒 5～6 h，二者存在顯著性差異(P<0.05)，在攻毒5 h(即給藥后1 h)體溫就已經(jīng)回復(fù)到正?；A(chǔ)體溫；

由此可見，雙氯芬酸鈉中、高劑量組解熱效果優(yōu)于對乙酰氨基酚組，具有起效快，解熱持續(xù)時(shí)間長的特點(diǎn)。

3.3 臨床觀察結(jié)果 本試驗(yàn)仔豬臨床綜合癥狀見表5。

表5 各組試驗(yàn)仔豬攻毒后臨床癥狀綜合評(píng)分 ±SD, n=10)

從表5可以看出： (1)除陰性對照組外，其余各組在腹腔注射內(nèi)毒素后均出現(xiàn)精神低迷、嗜睡、嘔吐、腹瀉等臨床癥狀，耳朵均發(fā)紅，產(chǎn)生明顯發(fā)熱癥狀，給藥后均有好轉(zhuǎn)，陽性對照組則持續(xù)發(fā)熱；(2)各給藥組與陽性對照組綜合評(píng)分經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析存在顯著性差異(P<0.05)；(3)雙氯芬酸鈉低劑量組評(píng)分高于對乙酰氨基酚對照組，存在顯著性差異(P<0.05)；(4)雙氯芬酸鈉中、高劑量組評(píng)分低于對乙酰氨基酚對照組，存在顯著性差異(P<0.05)，從臨床表現(xiàn)來看，雙氯芬酸鈉注射液中、高劑量組要優(yōu)于對乙酰氨基酚對照組。

4 結(jié)論

由豬血漿中PGE2濃度的變化顯示，雙氯芬酸鈉對靶動(dòng)物豬PGE2濃度的影響與對乙酰氨基酚無顯著性差異，查閱相關(guān)國內(nèi)外文獻(xiàn)[7]，非甾體抗炎藥對豬內(nèi)毒素(LPS)致熱血漿中PGE2濃度的影響靈敏度不高，但溫度變化與前期進(jìn)行的家兔致熱藥效試驗(yàn)一致，雙氯芬酸鈉解熱效果優(yōu)于對乙酰氨基酚，結(jié)合體溫及臨床觀測結(jié)果，我們得出以下結(jié)論：

(1) 雙氯芬酸鈉注射液低劑量組在治療豬發(fā)熱方面具有一定的臨床效果，但其效果稍差于對乙酰氨基酚組；(2) 雙氯芬酸鈉注射液中、高劑量組的臨床解熱綜合效果優(yōu)于對乙酰氨基酚組，并且雙氯芬酸鈉注射液中、高劑量組的臨床藥效無顯著性差異；(3) 從臨床使用及經(jīng)濟(jì)角度考慮，選用中劑量作為解熱的推薦劑量，即雙氯芬酸鈉臨床肌肉注射給藥劑量為0.05 mL/kg體重。

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Diclofenac Sodium Injection on Piglet Intraperitoneal Injection of Endotoxin (LPS) Clinical Efficacy of Antipyretic Test

YIN Hong-xi1,2, SUN Chuan-xi1, LIU Zhe-lin1, LV Shu-rong1, WAN Ren-zhong1

(1.College of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Agricultural University, Taian 271018, China; 2.Yantai LUYE Animal Health Products Co., Ltd.,Yantai 264003, China)

Diclofenac Sodium Injection is widely used in medicine, and has good antipyretic analgesic effect in clinic. The purpose of this study was to verify the effect of antipyretic in the target animal pigs on Diclofenac Sodium Injection. The results showed that: 1. Diclofenac Sodium Injection low dose group had a clinical effect in the treatment of swine fever, but the effect was slightly worse than the acetaminophen group; 2. Diclofenac Sodium Injection in the high dose group of comprehensive clinical effect of antipyretic was better than that of the acetaminophen group; 3. Considering the clinical use and from the economic point of view, the selection of the recommended dose as antipyretic, namely diclofenac sodium clinical dosage for intramuscular injection was 0.05 ml/kg body weight.

diclofenac sodium injection; intraperitoneal; endotoxin; antipyretic; piglets

WAN Ren-zhong

2017-03-15

煙臺(tái)市科技發(fā)展計(jì)劃(2014NC150)

尹洪習(xí)(1972-)，男，碩士，工程師，從事新獸藥研發(fā)工作，E-mail: yinhongxi@luye.cn

孫傳熙(1992-)，男，碩士生，研究方向?yàn)楂F醫(yī)藥理毒理學(xué)，E-mail: yinhongxi@luye.cn

萬仁忠，E-mail:wrzh63@163.com

S859.79

A

0529-6005(2017)07-0097-04

注：孫傳熙與尹洪習(xí)對本文具有同等貢獻(xiàn)