血紅素氧化酶1啟動(dòng)因子基因多態(tài)性與冠心病及其患者支架術(shù)后生存質(zhì)量的相關(guān)性研究

張映喜++++++陳俊禹++++++陳榮松++++++陳宋明++++++楊寶軍

[摘要]目的 研究血紅素氧化酶1（HO-1）啟動(dòng)因子基因多態(tài)性與冠心病患者支架術(shù)后生存質(zhì)量的相關(guān)性。方法 臨床納入58例我院2015年8月～2016年8月收治的冠心病患者作為冠心病組，所有患者均行支架手術(shù)干預(yù)治療。另選取58例同期來(lái)我院進(jìn)行健康體檢的志愿者作為對(duì)照組。對(duì)兩組研究對(duì)象進(jìn)行HO-1啟動(dòng)因子基因多態(tài)性檢測(cè)，觀察兩組HO-1啟動(dòng)因子基因多態(tài)性分布情況。對(duì)兩組生存質(zhì)量進(jìn)行觀察，分析HO-1啟動(dòng)因子基因多態(tài)性與冠心病患者的相關(guān)性。結(jié)果 冠心病組患者與對(duì)照組在SS、SL、LL基因型以及S、L等位基因分布上差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；而在長(zhǎng)、短基因型上分布差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。冠心病組患者生存質(zhì)量評(píng)分（QOL）、日常生活質(zhì)量評(píng)分（ADL）評(píng)分均明顯低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。SS、SL基因型及S等位基因與冠心病患者生存質(zhì)量成明顯負(fù)相關(guān)，P<0.05；LL基因型及L等位基因與冠心病患者生存質(zhì)量成正相關(guān)，P<0.05。結(jié)論 冠心病患者支架術(shù)后生存質(zhì)量與患者HO-1啟動(dòng)因子基因多態(tài)性密切相關(guān)，攜帶SS、SL基因型及S等位基因的患者一般生存質(zhì)量較好，而LL基因型及L等位基因的患者生存質(zhì)量較差。

[關(guān)鍵詞]血紅素氧化酶1；基因多態(tài)性；冠心??；生存質(zhì)量；相關(guān)性

[中圖分類號(hào)] R541.1 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-4721（2017）07（a）-0033-03

Study on the correlation between the gene polymorphism of heme oxygenase-1 promoter and the coronary heart disease and the quality of life after stenting

ZHANG Ying-xi1 CHEN Jun-yu2 CHEN Rong-song2 CHEN Song-ming2 YANG Bao-jun2

1.Department of Critical Medicine，the First Affiliated Hospital of Shantou University Medical College，Shantou 515041，China；2.Department of Cardiology，the First Affiliated Hospital of Shantou University Medical College，Shantou 515041，China

[Abstract]Objective To study the correlation between the gene polymorphism of heme oxygenase-1（HO-1） promoter and the quality of life after stenting in the patients with coronary heart disease.Methods 58 patients with coronary heart disease who were admitted to our hospital from August 2015 to August 2016 were clinically enrolled.They were assigned to the coronary heart disease group.All patients were given the intervention of stenting.Another 58 volunteers who were given physical examination in our hospital during the same period of time were selected as the control group.The distribution of HO-1 promoter gene polymorphism was observed in the two groups of subjects.The quality of life was observed in both groups，and the correlation between gene polymorphism of HO-1 promoter and the patients with coronary heart disease was analyzed.Results There were significant differences in the distribution of SS，SL，LL genotypes and S，L alleles between the patients in the coronary heart disease group and the control group（P<0.05）；while the distribution of long and short genotypes was not different（P>0.05）.The scores of QOL and ADL in the coronary heart disease group were significantly lower than those in the control group（P<0.05）.SS，SL genotypes and S allele were significantly negatively correlated with the quality of life of patients with coronary heart disease（P<0.05）；LL genotype and L allele were positively correlated with the quality of life of patients with coronary heart disease（P<0.05）.Conclusion The quality of life of patients with coronary heart disease after stenting is closely correlated to the HO-1 promoter gene polymorphism.Patients carrying with SS，SL genotypes and S allele generally have a better quality of life，while the patients carrying with LL genotype and L allele have a poorer quality of life.

[Key words]Heme oxygenase-1；Gene polymorphism；Cor？鄄onary heart disease；Quality of life；Correlation

冠心病是臨床常見(jiàn)的心血管疾病之一，近年來(lái)隨著我國(guó)人口老齡化的加劇，人們飲食習(xí)慣和生活習(xí)慣的改變，冠心病發(fā)生率呈明顯上升趨勢(shì)[1]。冠心病的主要病理特征是冠狀動(dòng)脈粥樣硬化，而引起冠狀動(dòng)脈粥樣硬化的因素較多，其中基因表達(dá)的改變及促進(jìn)作用是目前研究的熱點(diǎn)[2]。近年來(lái)研究顯示[3-4]，血紅素氧化酶1（HO-1）在抗氧化平衡方面具有重要作用，可催化游離血紅素降解，起到抗炎、抗氧化作用。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)[5]，HO-1含量與冠心病發(fā)病率有密切關(guān)系，因此提出HO-1基因的表達(dá)可能對(duì)冠心病患者預(yù)后情況具有密切關(guān)系。本文對(duì)我院冠心病支架術(shù)后患者進(jìn)行研究，探討HO-1啟動(dòng)子區(qū)（GT）n基因多態(tài)性與冠心病支架術(shù)后患者生存質(zhì)量的關(guān)系，為臨床預(yù)防性干預(yù)冠心病患者提供理論依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1一般資料

選取58例我院2015年8月～2016年8月收治的冠心病患者作為冠心病組。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)冠狀動(dòng)脈造影檢查和診斷符合冠心病診斷標(biāo)準(zhǔn)的患者[6]；②符合支架術(shù)治療手術(shù)指征的患者；③自愿參加本研究并簽字同意的患者；④預(yù)計(jì)生存期超過(guò)1年的患者。排除標(biāo)準(zhǔn)：①介入治療（PCI）手術(shù)失敗的患者；②合并其他嚴(yán)重疾?。ㄈ缦忍煨孕呐K病、心包疾病、腎功能不全等）對(duì)研究有影響的患者；③認(rèn)知功能障礙、精神異常等無(wú)法配合研究的患者。另選取58例同期來(lái)我院進(jìn)行健康體檢的志愿者作為對(duì)照組。冠心病組男性31例，女性27例；年齡38～86歲，平均（61.2±4.5）歲；合并癥：高血壓26例，糖尿病18例，高血脂9例。對(duì)照組男性30例，女性28例；年齡35～85歲，平均（61.4±4.2）歲；合并癥：高血壓25例，糖尿病16例，高血脂10例。兩組患者上述資料（性別、年齡以及合并癥等）差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

1.2方法

1.2.1 HO-1啟動(dòng)子區(qū)（GT）n基因多肽檢測(cè)

1.2.1.1單核細(xì)胞分離 取研究對(duì)象晨靜脈血5 ml，肝素抗凝，混合Hank′s稀釋液稀釋1倍，加5 ml單個(gè)核細(xì)胞分離液，離心機(jī)離心旋轉(zhuǎn)，重復(fù)3次稀釋、離心、洗滌后沉淀物為單核細(xì)胞，DMEM冰凍液-80℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.1.2 DNA提取 采用Qiagen公司提供的基因組抽提試劑盒進(jìn)行DNA提取，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，采用鹽析法對(duì)所分離出的單個(gè)核細(xì)胞進(jìn)行基因組DNA提取。

1.2.1.3反應(yīng)引物設(shè)計(jì) 下載HO-1基因啟動(dòng)子全長(zhǎng)序列，利用primer5.0軟件合成HO-1基因PCR反應(yīng)產(chǎn)物，并校對(duì)引物。正向序列：5'-GGATTCCAGCAGGTGACATT-3'；反向序列：5'-ACAGCTGATGCCCACTTTCT-3'。

1.2.1.4熒光標(biāo)記引物 采用PCR反應(yīng)體系進(jìn)行標(biāo)記，4 μl體系進(jìn)行PCR反應(yīng)，反應(yīng)條件：95℃預(yù)變5 min，分別在95℃、55℃以及72℃下各進(jìn)行30 s預(yù)變，進(jìn)行10個(gè)循環(huán)；在89℃、55℃以及72℃下各進(jìn)行30 s預(yù)變，進(jìn)行25個(gè)循環(huán)；72℃下延伸10 min。

1.2.1.5毛細(xì)管電泳 PCR純化后采用美國(guó)ABI公司生產(chǎn)的ABI 3730XL進(jìn)行毛細(xì)管電泳，收集毛細(xì)管電泳熒光信號(hào)，將原始電泳信號(hào)變?yōu)榉鍒D文件進(jìn)行分析。

1.2.1.6基因分型 對(duì)所得到的峰圖文件進(jìn)行基因分型，根據(jù)每個(gè)樣本在HO-1啟動(dòng)子區(qū)（GT）位點(diǎn)的重復(fù)次數(shù)進(jìn)行基因型的劃分。

1.2.2生存質(zhì)量評(píng)估方法

采用生存質(zhì)量評(píng)分（QOL）[7]以及日常生活質(zhì)量評(píng)分（ADL）[8]評(píng)估兩組對(duì)象生存質(zhì)量情況，QOL滿分60分，ADL滿分100分，分值越高，兩組患者生存質(zhì)量越高。

1.3觀察指標(biāo)

觀察兩組患者HO-1啟動(dòng)子區(qū)（GT）n基因型多態(tài)性分布情況，觀察兩組患者支架術(shù)后生存質(zhì)量情況，分析HO-1啟動(dòng)因子基因多態(tài)性與術(shù)后生存質(zhì)量的相關(guān)性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用百分比表示，采用χ2檢驗(yàn)，采用Spearman進(jìn)行相關(guān)性分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 HO-1啟動(dòng)子區(qū)（GT）n基因型多態(tài)性分布情況

冠心病組患者與對(duì)照組在SS、SL、LL基因型以及S、L等位基因分布上差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；而在長(zhǎng)、短基因型上分布差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）（表1）。

2.2兩組生存質(zhì)量的比較

冠心病組患者QOL、ADL評(píng)分均明顯低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）（表2）。

2.3 HO-1啟動(dòng)子區(qū)（GT）n基因多態(tài)性與冠心病患者生存質(zhì)量的相關(guān)性分析

SS、SL基因型及S等位基因與冠心病患者生存質(zhì)量呈明顯負(fù)相關(guān)，P<0.05；LL基因型及L等位基因與冠心病患者生存質(zhì)量呈正相關(guān)，P<0.05（表3）。

3討論

隨著醫(yī)學(xué)模式的轉(zhuǎn)變，醫(yī)學(xué)學(xué)者已經(jīng)不僅僅關(guān)注患者生存、死亡等問(wèn)題，更多學(xué)者開(kāi)始關(guān)注患者的生存質(zhì)量問(wèn)題[9]。目前生存質(zhì)量已經(jīng)成為眾多疾病預(yù)后的重要指標(biāo)，有效反映了疾病預(yù)后的治療效果[10]。既往研究顯示[11-13]，冠心病是由眾多因素引起的心血管疾病，而眾多因素對(duì)患者預(yù)后影響也較大。近年來(lái)人們不僅僅關(guān)注吸煙、飲酒等表面上的影響因素，對(duì)于基因?qū)谛牟』颊叩挠绊懗蔀楫?dāng)下研究的熱門話題。

HO-1是HO的一種同工酶，可有效起到抗氧化、抗應(yīng)激以及抗炎的作用。目前研究發(fā)現(xiàn)[14]，先天性缺乏HO-1的人群容易發(fā)生冠狀動(dòng)脈粥樣硬化，因此認(rèn)為HO-1的表達(dá)對(duì)冠狀動(dòng)脈發(fā)病率及預(yù)后有一定影響。HO-1基因啟動(dòng)子區(qū)（GT）n存在基因多態(tài)性，因此不同基因型HO-1表達(dá)從而對(duì)冠心病患者預(yù)后的影響成為人們關(guān)注的重點(diǎn)[15]。本文結(jié)果顯示，HO-1基因型存在SS、SL以及LL三種，等位基因?yàn)镾和L。在冠心病患者中SS、SL基因型以及S等位基因表達(dá)低于正常人群，而LL基因型以及L等位基因表達(dá)明顯高于正常人群。在生存質(zhì)量上發(fā)現(xiàn)，冠心病患者QOL、ADL評(píng)分均低于正常人。分析HO-1基因多態(tài)性與生存質(zhì)量的關(guān)系發(fā)現(xiàn)，SS、SL基因型及S等位基因與冠心病患者生存質(zhì)量成明顯負(fù)相關(guān)，P<0.05；LL基因型及L等位基因與冠心病患者生存質(zhì)量成正相關(guān)，P<0.05。提示S等位基因可能是冠心病患者支架術(shù)后生存質(zhì)量的保護(hù)基因，而L可能為危險(xiǎn)基因。

綜上所述，冠心病患者支架術(shù)后生存質(zhì)量與患者HO-1啟動(dòng)因子基因多態(tài)性密切相關(guān)，攜帶SS、SL基因型及S等位基因的患者一般生存質(zhì)量較好，而LL基因型及L等位基因的患者生存質(zhì)量較差。

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（收稿日期：2017-04-14 本文編輯：崔建中）