稀土離子熒光探針測(cè)定牛奶中環(huán)丙沙星的含量

劉榮利+李亮+葛維娟+韓寧娟

環(huán)丙沙星作為喹諾酮類的第三代產(chǎn)品，抗菌活性較強(qiáng)，對(duì)革蘭陽(yáng)性菌與革蘭陰性菌具有良好作用，但也具有一定的副作用。近年來(lái)，人類對(duì)氟喹諾酮類藥物抗生素的不合理使用問(wèn)題日益突出，這將引起氟喹諾酮類抗生素殘留量在動(dòng)物性食品中的超標(biāo)，如果人體長(zhǎng)時(shí)間低劑量的攝入該類食物，不僅會(huì)導(dǎo)致人體對(duì)氟喹諾酮類藥物產(chǎn)生耐藥性，而且其藥物殘留量通過(guò)食物對(duì)人的中樞神經(jīng)系統(tǒng)，胃腸道等器官危害較大，威脅人類的健康。因此，對(duì)于研究食品中環(huán)丙沙星的含量檢測(cè)方法具有重要的實(shí)際意義和應(yīng)用價(jià)值。

實(shí)驗(yàn)部分

儀器與試劑。F-180熒光分光光度計(jì)；UV-2102紫外分光光度計(jì)；TGL-16G臺(tái)式離心機(jī)；PHS-3E酸度計(jì)；離子交換純水器。

環(huán)丙沙星（中國(guó)食品藥品檢定研究院）標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取一定量環(huán)丙沙星，用適當(dāng)濃度的鹽酸溶解，用水配制成2.00×10-3mol/L的儲(chǔ)備液。

Y3+儲(chǔ)備液：稱取一定量Y2O3（純度99.99%），逐滴加入50%鹽酸溶解，緩慢加熱使其溶解，待揮發(fā)近干，用水制成4.0×10-2mol/L的儲(chǔ)備液。

BR緩沖溶液：用0.02 mol/L H3PO4、H3BO3、CH3COOH與0.2 mol/L NaOH溶液按一定比例混合，配成不同pH值的緩沖溶液，經(jīng)酸度計(jì)準(zhǔn)確測(cè)定其pH值，冰箱4℃左右保存。以上儲(chǔ)備液與工作溶液均放在冰箱中4℃保存，使用時(shí)適當(dāng)稀釋。所有試劑均為分析純，實(shí)驗(yàn)用水均為離子交換純水機(jī)所純化。

實(shí)驗(yàn)方法。于10mL比色管依次加入一定量環(huán)丙沙星標(biāo)準(zhǔn)溶液，一定量 6.0×10-4mol/L

Y3+和0.4mLPH=4的BR緩沖溶液，用蒸餾水定容，室溫放置5min后，分別用石英比色皿進(jìn)行熒光激發(fā)和發(fā)射光譜掃描，發(fā)射光譜的強(qiáng)度為I。另取10mL比色管作為試劑空白，除不加環(huán)丙沙星標(biāo)準(zhǔn)品外，其他都加，靜置5min后，在相同的激發(fā)波長(zhǎng)下，用石英比色皿進(jìn)行熒光掃描，發(fā)射光譜的強(qiáng)度為I0，計(jì)算△IRRS，△IRRS=I-I0。

結(jié)果與討論

適宜的反應(yīng)條件。（1）緩沖溶液濃度對(duì)配合物體系熒光強(qiáng)度的影響

取5只10mL比色管，固定其他試劑用量，按照實(shí)驗(yàn)方法，分別測(cè)定了緩沖液pH=3、4、5、6、7時(shí)，環(huán)丙沙星-釔離子配合物體系及試劑空白的熒光強(qiáng)度，計(jì)算△IRRS 結(jié)果如表1所示。

（2）Y3+離子濃度對(duì)配合物體系熒光強(qiáng)度的影響

取5只10 mL比色管，固定其他試劑用量，通過(guò)改變Y3+濃度，測(cè)定了不同濃度下環(huán)丙沙星-釔離子配合物體系及試劑空白的熒光強(qiáng)度，計(jì)算ΔIRRS，結(jié)果如表2所示。

工作曲線。在確定的最佳反應(yīng)條件下，測(cè)定不同濃度環(huán)丙沙星及試劑空白的熒光強(qiáng)度，計(jì)算ΔIRRS，以ΔIRRS對(duì)c環(huán)丙沙星（mol/L）繪制工作曲線。環(huán)丙沙星濃度在1.0×10-5mol/L～6.1×10-6mol/L范圍內(nèi)與體系ΔIRRS呈線性關(guān)系，線性回歸方程為：ΔI= 0.6c+4203，相關(guān)系數(shù)r為 0.9976；以測(cè)定十一次空白值的標(biāo)準(zhǔn)偏差計(jì)算相應(yīng)的檢出限（3σ/k）6.5×10-7mol/L。

共存離子對(duì)配合物體系的影響。按照試驗(yàn)方法測(cè)定了共存物質(zhì)對(duì)環(huán)丙沙星-氧化釔體系的影響，當(dāng)相對(duì)誤差≤5%時(shí)，一定量的葡萄糖和常見(jiàn)的金屬離子（Na+、Ca2+、Cu2+、K+）等不干擾測(cè)定。

樣品分析

取純牛奶（蒙牛）10ml，40ml酸化乙腈（pH=4），振蕩搖勻，以4000r/min離心，取上清液并加入20ml石油醚，振蕩搖勻，轉(zhuǎn)移至100ml容量瓶中定容，得樣品液。

取5支10ml比色管，每只比色管中分別加入0.5mL 2×10-5mol/L的環(huán)丙沙星、1.2ml 6.0×10-4mol/L Y3+、0.4ml pH=4 的BR緩沖溶液，分別用牛奶提取液定容至刻度。按照實(shí)驗(yàn)方法用標(biāo)準(zhǔn)加入法測(cè)定回收率。結(jié)果見(jiàn)表4。

結(jié)論

研究結(jié)果表明，在BR緩沖溶液中，質(zhì)子化的環(huán)丙沙星與稀土離子釔形成二元絡(luò)合物，可以產(chǎn)生較明顯的共振瑞利散射光譜。研究表明，在10mL比色管中，依次加入一定量環(huán)丙沙星標(biāo)準(zhǔn)溶液，1.2mL 6.0×10-4 mol/L Y3+溶液，0.4 mL pH=4 BR緩沖溶液稀釋至刻度，室溫下反應(yīng)5 min后，反應(yīng)產(chǎn)物的共振瑞利散射強(qiáng)度（IRRS）在432 nm處達(dá)到最大。環(huán)丙沙星濃度在1.0×10-6mol/L～6.1×10-5mol/L范圍內(nèi)具有線性關(guān)系，用該方法測(cè)量牛奶中的環(huán)丙沙星結(jié)果較為滿意。