注射用亞葉酸鈣與葡萄糖注射液、氯化鈉注射液的配伍穩(wěn)定性考察Δ

安 靜，李嬋藝，李 倩，白萬軍，董占軍#（.河北省人民醫(yī)院藥學(xué)部，石家莊 05005；.廣東藥科大學(xué)中心實驗室，廣州 50000；.河北醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)院，石家莊 05007）

·臨床藥學(xué)與研究·

注射用亞葉酸鈣與葡萄糖注射液、氯化鈉注射液的配伍穩(wěn)定性考察Δ

安 靜1＊，李嬋藝2，李 倩3，白萬軍1，董占軍1#（1.河北省人民醫(yī)院藥學(xué)部，石家莊 050051；2.廣東藥科大學(xué)中心實驗室，廣州 510000；3.河北醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)院，石家莊 050017）

目的：考察注射用亞葉酸鈣與葡萄糖注射液、氯化鈉注射液的配伍穩(wěn)定性。方法：參照臨床常用質(zhì)量濃度，取注射用亞葉酸鈣各3支（每支相當(dāng)于亞葉酸鈣100 mg），分別與葡萄糖注射液250 mL、氯化鈉注射液250 mL配伍，在室溫光照或避光條件下，分別于0、1、2、3、4、6、8、12、24、36、48 h考察各配伍液的外觀，檢測其pH值和不溶性微粒數(shù)，并采用高效液相色譜法測定各配伍液中亞葉酸鈣的含量。結(jié)果：在上述條件下，各配伍液均未見顏色變化，也無氣體、沉淀、渾濁等現(xiàn)象出現(xiàn)；pH值無明顯變化（RSD＜2%，n＝11）。配制后0 h時，各配伍液中 10 μm的微粒數(shù)較多，但隨著時間的延長，其數(shù)量有所下降，且48 h內(nèi)各配伍液中 10 μm和25 μm的微粒數(shù)均符合2015年版《中國藥典》的規(guī)定。在避光條件下，各配伍液中亞葉酸鈣的相對百分含量變化不大（RSD＜2%，n＝11）；而在光照條件下，各配伍液中亞葉酸鈣的相對百分含量明顯降低，分別降至94.5%（與葡萄糖注射液配伍）和88.4%（與氯化鈉注射液配伍）。結(jié)論：注射用亞葉酸鈣在葡萄糖注射液中更穩(wěn)定，且光照條件可影響其配伍穩(wěn)定性。注射用亞葉酸鈣與葡萄糖注射液、氯化鈉注射液配伍后，應(yīng)避光保存，并盡快使用。

注射用亞葉酸鈣；葡萄糖注射液；氯化鈉注射液；配伍穩(wěn)定性

《醫(yī)療機(jī)構(gòu)藥事管理暫行規(guī)定》[1]明確指出，醫(yī)療機(jī)構(gòu)要根據(jù)臨床需要逐步建立全腸外營養(yǎng)和腫瘤化療藥物等靜脈藥物調(diào)配中心（PIVAS），實行集中調(diào)配和供應(yīng)。因此，越來越多的醫(yī)院建立了PIVAS。通過實踐表明，藥物集中調(diào)配大大降低了藥液被污染的幾率，避免了開放式配制帶來的微粒、熱原等致害物的污染，從而避免了部分輸液反應(yīng)及不溶性微粒污染所致的潛在危害[2]。由于PIVAS的集中調(diào)配，配制后的成品輸液由PIVAS配送至各病區(qū)需要一定的時間，且對于距離較遠(yuǎn)的科室，甚至可能需要數(shù)小時。在此過程中，由于藥物分散至溶劑中，在溶劑、光照、溫度等條件的影響下，藥物形態(tài)、不溶性微粒等的變化情況均可影響輸液的質(zhì)量[3-10]。亞葉酸鈣作為一種抗腫瘤輔助藥物，主要用于大劑量甲氨蝶呤的解毒治療，同時還可增強(qiáng)氟尿嘧啶的治療效果。目前，關(guān)于亞葉酸鈣與溶劑的配伍穩(wěn)定性研究較少，且配伍后不溶性微粒數(shù)、pH值等的變化均未見相關(guān)報道[11]。因此，本研究在室溫（25℃）光照或避光條件下，以配伍液外觀、pH值、不溶性微粒數(shù)、含量變化等為指標(biāo)，分別考察了注射用亞葉酸鈣與葡萄糖注射液和氯化鈉注射液配伍后48 h內(nèi)的穩(wěn)定性，以期為臨床合理用藥提供參考。

1 材料

1.1 儀器

2695型高效液相色譜（HPLC）儀、2487型紫外檢測器（美國Waters公司）；GWF-8JD型微粒分析儀（天津天河分析儀器有限公司）；PHS-30型酸度計（上海雷磁儀器廠）。

1.2 藥品與試劑

注射用亞葉酸鈣（江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司，批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字H32022391，批號：15121617，規(guī)格：按C20H23N7O7計算100 mg）；葡萄糖注射液（華潤雙鶴藥業(yè)股份有限公司，批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字H11020621，批號：H201511022，規(guī)格：250 mL∶12.5 g）；氯化鈉注射液（石家莊四藥有限公司，批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字H13023201，批號：1510063702，規(guī)格：250 mL∶2.25 g）。

亞葉酸鈣對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：100252-201204，純度：99.9%）；磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)緩沖液（瑞士梅特勒托利多公司，pH為7.00）；甲醇為色譜純，水為純凈水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

參照2015年版《中國藥典》（二部）[12]，采用HPLC法測定配伍液中亞葉酸鈣的含量。色譜柱：Hypersil ODS2（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：含0.1%四丁基氫氧化銨的磷酸氫二鈉緩沖液（取10%四丁基氫氧化銨水溶液8.0 mL和磷酸氫二鈉2.2 g，加水溶解并稀釋至780 mL，并用磷酸調(diào)節(jié)pH值至7.8）-甲醇（78∶22，V/V）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：280 nm；進(jìn)樣量：20 μL。

2.2 溶液的配制

2.2.1 對照品貯備液 精密稱取亞葉酸鈣對照品適量，置于10 mL量瓶中，用水溶解并定容，得質(zhì)量濃度約為1.0 mg/mL的對照品貯備液，備用。

2.2.2 供試品溶液 模擬臨床常用質(zhì)量濃度配制。精密稱取注射用亞葉酸鈣31.2 mg，置于25 mL量瓶中，用葡萄糖注射液溶解并定容，得質(zhì)量濃度約為1.25 mg/mL的混合溶液。精密量取上述混合溶液1 mL，置于10 mL量瓶中，用水稀釋至刻度，得亞葉酸鈣質(zhì)量濃度為125 μg/mL的供試品溶液（Ⅰ）。以氯化鈉注射液為溶劑，同法配制得亞葉酸鈣質(zhì)量濃度為125 μg/mL的供試品溶液（Ⅱ）。

2.3 專屬性考察

按“2.1”項下色譜條件，分別取水、葡萄糖注射液、氯化鈉注射液、供試品溶液（Ⅰ）、供試品溶液（Ⅱ）各適量，進(jìn)樣分析，記錄色譜圖。結(jié)果表明，該方法專屬性良好，注射液中的其他成分不干擾亞葉酸鈣的測定，詳見圖1。

圖1 高效液相色譜圖Fig 1 HPLC chromatograms

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密量取對照品貯備液適量，用水依次稀釋得質(zhì)量濃度為15、30、60、120、160、200 μg/mL的對照品溶液，按“2.1”項下色譜條件進(jìn)樣分析，記錄色譜圖。以峰面積（A）為縱坐標(biāo)、待測物質(zhì)量濃度（c）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得到回歸方程為A＝98 770.0c+505 461.8（r＝0.999 3，n＝5）。結(jié)果顯示，亞葉酸鈣質(zhì)量濃度在15～200 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗

分別配制低、中、高質(zhì)量濃度（30、120、160 μg/mL）的亞葉酸鈣對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄峰面積，考察日內(nèi)精密度；連續(xù)測定3 d，根據(jù)當(dāng)日標(biāo)準(zhǔn)曲線計算其實測質(zhì)量濃度，考察日間精密度。結(jié)果顯示，日內(nèi)RSD分別為0.6%、0.7%、1.0%（n＝5），日間RSD分別為1.5%、0.2%、1.2%（n＝3），表明精密度良好。

2.6 回收率試驗

2.6.1 亞葉酸鈣在葡萄糖注射液中的回收率 精密量取質(zhì)量濃度分別為30、120、200 μg/mL的亞葉酸鈣對照品溶液各2.5 mL，分別置于5 mL量瓶中，各加入供試品溶液（Ⅰ）2.5 mL，用水定容，搖勻，各質(zhì)量濃度平行配制3份，進(jìn)樣測定，計算回收率。結(jié)果顯示，各樣品的平均回收率分別為101.6%、101.1%、104.0%，RSD分別為1.2%、1.4%、1.2%（n＝3）。

2.6.2 亞葉酸鈣在氯化鈉注射液中的回收率 精密量取質(zhì)量濃度分別為30、120、200 μg/mL的亞葉酸鈣對照品溶液各2.5 mL，分別置于5 mL量瓶中，各加入供試品溶液（Ⅱ）2.5 mL，用水定容，搖勻，各質(zhì)量濃度平行配制3份，進(jìn)樣測定，計算回收率。結(jié)果顯示，各樣品的平均回收率分別為99.7%、104.8%、97.6%，RSD分別為1.5%、1.7%、2.5%（n＝3）。

2.7 穩(wěn)定性試驗

分別配制低、中、高質(zhì)量濃度（30、120、160 μg/mL）的亞葉酸鈣對照品溶液，置于進(jìn)樣器中（4℃），于48 h內(nèi)每間隔2 h進(jìn)樣分析，記錄峰面積。結(jié)果顯示，亞葉酸鈣峰面積的RSD分別為1.4%、0.3%、0.5%（n＝25），表明其在48 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 配伍穩(wěn)定性考察

按照臨床常用質(zhì)量濃度，在PIVAS配制。取注射用亞葉酸鈣各3支，分別加入至葡萄糖注射液250 mL和氯化鈉注射液250 mL中，得亞葉酸鈣-葡萄糖配伍液和亞葉酸鈣-氯化鈉配伍液（亞葉酸鈣質(zhì)量濃度約為1.2 mg/mL）各2份，在室溫光照或避光條件下，分別于配制后0、1、2、3、4、6、8、12、24、36、48 h考察各配伍液的外觀、pH值、不溶性微粒數(shù)和亞葉酸鈣的含量。

2.8.1 外觀和pH值 分別于上述時間點在白色背景下觀察各配伍液的外觀，采用酸度計測定其pH值（玻璃電極為指示電極、飽和甘汞電極為參比電極。測定前，采用磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)緩沖液校正儀器；測定時，應(yīng)先用純化水充分洗滌電極，然后將水吸盡后，再用供試品溶液充分洗滌，直至pH值的讀數(shù)在1 min內(nèi)變化不超過0.1為止）。結(jié)果顯示，在室溫光照或避光條件下，配制后48 h內(nèi)各配伍液均未見顏色變化，也無氣體、沉淀、渾濁等現(xiàn)象產(chǎn)生；pH值亦無明顯變化，RSD＜2%（n＝11），詳見表1。

表1 各配伍液的pH值Tab 1 pH value of mixtures

2.8.2 不溶性微粒 參照2015年版《中國藥典》（四部）通則中的“不溶性微粒檢查法”，采用光阻法于上述各時間點檢測各配伍液中的不溶性微粒數(shù)[標(biāo)示裝量為100 mL以下的靜脈用注射液、靜脈注射用無菌粉末、注射用濃溶液及供注射用無菌原料藥，除另有規(guī)定外，每個供試品容器（份）中含10 μm及10 μm以上（ 10 μm）的微粒數(shù)不得超過6 000粒，含25 μm及25 μm以上（25 μm）的微粒數(shù)不得超過600粒][13]。用純凈水將供試品容器（250 mL）的外壁洗凈，取配伍液各20 mL，采用微粒分析儀檢測。各樣品連續(xù)測定3次，棄去第一次測得的數(shù)據(jù)，取后續(xù)測定數(shù)據(jù)的平均值作為檢測結(jié)果。結(jié)果顯示，配制后0 h時，各配伍液中 10 μm的微粒數(shù)較多，但隨著時間的延長，其數(shù)量有所下降；配制后48 h內(nèi)，各配伍液中 10 μm和 25 μm的微粒數(shù)均符合藥典規(guī)定，詳見表2。

表2 各配伍液中的不溶性微粒數(shù)（粒/mL）Tab 2 The number of insoluble particles in mixtures（grain/mL）

2.8.3 相對百分含量 于上述各時間點取配伍液各適量，用純凈水稀釋10倍，配制成質(zhì)量濃度約為120 μg/mL的樣品溶液，精密吸取20 μL，按“2.1”項下色譜條件進(jìn)樣分析，測定各配伍液中亞葉酸鈣的質(zhì)量濃度。以0 h時的質(zhì)量濃度為100%，計算其他各個時間點的相對百分含量。結(jié)果顯示，在室溫避光條件下，48 h內(nèi)各配伍液中亞葉酸鈣的相對百分含量變化不大，RSD＜2%（n＝11）；而在室溫光照條件下，各配伍液中亞葉酸鈣的相對百分含量明顯降低，分別降至94.5%（與葡萄糖注射液配伍）和88.4%（與氯化鈉注射液配伍），詳見表3。

表3 各配伍液中亞葉酸鈣的相對百分含量（%%）Tab 3 Relative contents of calcium folinate in mixtures（%%）

3 討論

3.1 色譜條件的選擇

亞葉酸鈣的分子結(jié)構(gòu)中含有氨基和羧基，為兩性化合物，流動相的酸堿性對其峰形影響較大。前期研究中，本課題組參照文獻(xiàn)[14]的方法，采用乙腈-10 mmol/L醋酸鈉與三乙胺緩沖液的混合溶液（冰醋酸調(diào)pH值至5.5）（4∶96，V/V）為流動相，在286 nm檢測波長下進(jìn)行測定，但所得色譜峰峰形較差。最后，本課題組參照了2015年版《中國藥典》（二部）的方法，在水相中加入了離子對試劑四丁基氫氧化銨，該離子對試劑可與亞葉酸鈣形成離子對，大大改善了后者的峰形，且重現(xiàn)性良好。

3.2 不溶性微粒檢測的注意事項

不溶性微粒的檢測結(jié)果顯示，在配伍液配制完成初期（配制后0 h），各配伍液中 10 μm的微粒數(shù)較多，但經(jīng)長時間放置后其數(shù)量有所減少?？赡苁怯捎趧偱渲仆瓿蓵r，配伍液中存在大量的氣泡，微粒分析儀在檢測時會將氣泡誤讀為微粒，使得微粒檢測結(jié)果偏高。因此，在測定前應(yīng)靜置2 min消除氣泡。

本研究在PIVAS潔凈臺上進(jìn)行，盡可能減少了環(huán)境污染對檢測結(jié)果的影響。若條件有限，無法到達(dá)潔凈度要求，在試驗過程中則應(yīng)注意關(guān)閉空調(diào)、通風(fēng)系統(tǒng)，避免人員隨意進(jìn)出，避免交談；在將配伍液轉(zhuǎn)移至供試品容器（測試杯）之前，還應(yīng)用純凈水將容器外壁和注射器洗凈，以免器具污染導(dǎo)致檢測結(jié)果的不準(zhǔn)確。除此之外，不適當(dāng)?shù)乃幬锱湮?、過多的藥物聯(lián)用、針頭穿刺膠塞、安瓿切割等因素也會影響配伍液中的不溶性微粒數(shù)[15]。

3.3 光照對亞葉酸鈣配伍穩(wěn)定性的影響

相對百分含量測定結(jié)果顯示，在避光條件下，注射用亞葉酸鈣與葡萄糖注射液、氯化鈉注射液配伍后，在48 h內(nèi)保持穩(wěn)定。而在光照條件下，注射用亞葉酸鈣與葡萄糖注射液配伍后，在12 h內(nèi)保持穩(wěn)定，24 h時相對百分含量降至95%以下；注射用亞葉酸鈣與氯化鈉注射液配伍后，在24 h內(nèi)保持穩(wěn)定，36 h時相對百分含量降至90%以下，提示注射用亞葉酸鈣在避光條件下較光照條件更為穩(wěn)定?？赡苁且驗閬喨~酸鈣在水溶液環(huán)境中，在多種離子的共同作用下，會發(fā)生緩慢的降解，而光照可加速其降解過程[16]；此外，由于亞葉酸鈣是非典型的兩性化合物，陰離子結(jié)構(gòu)中含有1個氨基和2個羧基，當(dāng)其與溶劑配伍時，溶劑的酸堿性可影響亞葉酸鈣的分子形態(tài)，弱酸性溶液有利于抑制亞葉酸鈣分子的解離，提高其分子形式的比例[14]，故與氯化鈉注射液比較，亞葉酸鈣在葡萄糖注射液中更為穩(wěn)定。本研究結(jié)果表明，光照條件對注射用亞葉酸鈣與2種溶劑的配伍穩(wěn)定性有所影響。因此，在實際工作中，注射用亞葉酸鈣與葡萄糖注射液、氯化鈉注射液配伍后，應(yīng)避光保存，并盡快使用。

本研究分別在室溫光照或避光條件下，以外觀、pH值、不溶性微粒、亞葉酸鈣含量作為參考指標(biāo)，對注射用亞葉酸鈣與葡萄糖注射液、氯化鈉注射液的配伍穩(wěn)定性進(jìn)行了考察，但溫度、微生物、其他溶劑、不同輸液袋材質(zhì)等因素也可能影響其配伍穩(wěn)定性，故有待于進(jìn)一步的研究。

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Study on Compatible Stability of Calcium Folinate for Injection Mixed with Glucose Injection and Sodium Chloride Injection

AN Jing1，LI Chanyi2，LI Qian3，BAI Wanjun1，DONG Zhanjun1（1.Dept.of Pharmacy，Hebei Provincial People’s Hospital，Shijiazhuang 050051，China；2.Central Laboratory，Guandong Pharmaceutical University，Guangzhou 510000，China；3.Graduate School，Hebei Medical University，Shijiazhuang 050017，China）

OBJECTIVE：To investigate the compatible stability of Calcium folinate for injection mixed with Glucose injection and Sodium chloride injection.METHODS：Referring to clinical common concentration，each 3 Calcium folinate for injection（each injection was equal to calcium folinate 100 mg）were respectively mixed with Glucose injection 250 mL or Sodium chloride injection 250 mL.At room temperature，under light or dark condition，the appearance of mixtures，pH value and the number of insoluble particles were investigated 0，1，2，3，4，6，8，12，24，36，48 h.The contents of calcium folinate in mixtures were determined by HPLC.RESULTS：Under above condition，the color of the mixtures had no change，and no gas，precipitation and turbidity was found；there was no evident change in pH values（RSD＜2%，n＝11）.0 h after mixing，there was large number of particles 10 μm in mixtures，but the number of particle was decreased as time；within 48 h，the number of particles 10 μm and 25 μm in mixtures were all in line with the standard of Chinese Pharmacopeia（2015 edition）.Under the protection from light condition，relative contents of calcium folinate in mixtures had no significant change（RSD＜2%，n＝11）.Under light condition，relative contents of calcium folinate in mixtures decreased significantly，decreasing to 94.5%（mixed with Glucose injection）and 88.4%（mixed with Sodium chloride injection）.CONCLUSIONS：Calcium folinate for injection is more stable in Glucose injection，and the stability of compatibility can be affected by light conditions.After mixed with Glucose injection and Sodium chloride injection，Calcium folinate for injection should be kept away from light and used as soon as possible

Calcium folinate for injection；Glucose injection；Sodium chloride injection；Compatible stability

R917；R969.3

A

1001-0408（2017）20-2764-04

2016-07-29

2017-05-17）

（編輯：張元媛）

河北省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究重點課題計劃（No.20160062）；河北省政府資助臨床醫(yī)學(xué)優(yōu)秀人才培養(yǎng)項目（No.361003）

＊主管藥師。研究方向：臨床藥學(xué)。電話：0311-85988998。E-mail：anjingyaofen@163.com

#通信作者：主任藥師，碩士生導(dǎo)師。研究方向：醫(yī)院藥學(xué)。電話：0311-85988604。E-mail：13313213656@126.com

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2017.20.08