萊克多巴胺檢測(cè)方法研究進(jìn)展

朱楠楠++師忠義

摘要：總結(jié)萊克多巴胺的主要檢測(cè)方法，分析儀器檢測(cè)方法及免疫檢測(cè)方法的優(yōu)缺點(diǎn)、檢出限及效率，展望萊克多巴胺檢測(cè)方法的未來(lái)發(fā)展方向，為提高萊克多巴胺檢測(cè)的準(zhǔn)確性及效率提供參考。

關(guān)鍵詞：萊克多巴胺；檢測(cè)方法；儀器檢測(cè)；免疫檢測(cè)

中圖分類(lèi)號(hào)：S816.17 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1674-1161（2017）05-0073-02

萊克多巴胺是一種β-腎上腺受體激動(dòng)劑，可治療充血性心力衰竭癥、肌肉萎縮癥等疾病。因其具有營(yíng)養(yǎng)再分配作用，可促進(jìn)脂肪分解、提高瘦肉率，被作為新型飼料添加劑應(yīng)用于動(dòng)物生產(chǎn)。人們?cè)谑秤萌R克多巴胺殘留過(guò)多的動(dòng)物產(chǎn)品后，可能出現(xiàn)頭暈、嘔吐、心悸、四肢麻木等癥狀?；加懈哐獕?、甲狀腺功能亢進(jìn)、糖尿病等疾病的患者可能會(huì)有更嚴(yán)重的不良反應(yīng)，嚴(yán)重的甚至危及生命。我國(guó)工信部、農(nóng)業(yè)部、商務(wù)部、衛(wèi)生部、國(guó)家工商行政管理總局、國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局聯(lián)合發(fā)布公告，自2011年12月5日起在我國(guó)境內(nèi)禁止生產(chǎn)和銷(xiāo)售萊克多巴胺。但受利益驅(qū)使，有些不法商販仍在畜產(chǎn)品生產(chǎn)過(guò)程中非法使用萊克多巴胺，導(dǎo)致食品安全事件時(shí)有發(fā)生。為此，國(guó)內(nèi)外不僅增強(qiáng)對(duì)萊克多巴胺的監(jiān)控，還建立多種檢測(cè)萊克多巴胺的方法。

1 儀器檢測(cè)方法

目前，用于檢測(cè)萊克多巴胺的儀器檢測(cè)方法主要有高效液相色譜法、氣相色譜-質(zhì)譜法和液相色譜-質(zhì)譜法等。

1.1 高效液相色譜法

國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 20189-2006中規(guī)定了用高效液相色譜法檢測(cè)動(dòng)物飼料中萊克多巴胺的方法。黃怡等利用分子印跡技術(shù)和固相萃取技術(shù)與高效液相色譜法聯(lián)用測(cè)定飼料中的萊克多巴胺，檢出限達(dá)到

0.1 mg/kg，回收率大于80%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于10%。程盛華等用甲醇-磷酸二氫鉀溶液作為流動(dòng)相，用高效液相色譜法檢測(cè)動(dòng)物組織中的萊克多巴胺，檢出限達(dá)到10 ug/kg，回收率為78.1%～90.8%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于5%。

高效液相色譜法檢測(cè)的結(jié)果較準(zhǔn)確，重復(fù)性好，但只適合做定量分析，操作過(guò)程比較繁瑣，檢測(cè)時(shí)間較長(zhǎng)。

1.2 氣相色譜-質(zhì)譜法

農(nóng)業(yè)部958號(hào)公告-4-2007規(guī)定了用氣相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定豬肌肉、豬肝、豬尿和牛尿中萊克多巴胺殘留量的方法。李勝等用氣相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定飼料中的萊克多巴胺，方法檢出限達(dá)5 μg/kg，回收率為67.5%～92.3%。王培龍等利用分子印跡技術(shù)與固相萃取技術(shù)結(jié)合氣相色譜-質(zhì)譜同時(shí)測(cè)定豬尿中萊克多巴胺、克倫特羅、氯丙那林、馬步特羅，檢出限低于0.5 μg/L，回收率為75.1%～97.5%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于10%。

與高效液相色譜法相比，這種方法的分離效率和靈敏度更高，分析結(jié)果準(zhǔn)確，是萊克多巴胺定量和確證性方法。缺點(diǎn)是檢測(cè)前需要對(duì)樣品進(jìn)行前期衍生化處理，過(guò)程特別繁瑣、復(fù)雜，在實(shí)際應(yīng)用中受到一定限制。

1.3 液相色譜-質(zhì)譜法

農(nóng)業(yè)部958號(hào)公告-3-2007規(guī)定了用液相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定動(dòng)物源食品中萊克多巴胺殘留量的方法。國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 22147-2008規(guī)定了用液相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定飼料中萊克多巴胺的方法。臧勇軍等用液相色譜-電噴霧質(zhì)譜法同時(shí)檢測(cè)肉類(lèi)中的萊克多巴胺和克倫特羅，萊克多巴胺的定量檢出限為0.2 μg/kg，回收率為82.0%～87.5%，批內(nèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于7.1%。曾紹東等優(yōu)化提取豬肉中9種β-受體激動(dòng)劑的酶解條件，同時(shí)測(cè)定豬肉中的9種β-受體激動(dòng)劑，此法檢出限為0.2 μg/kg，回收率為80.4%～110.3%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差不大于6.7%。

這種方法具有靈敏度高和分析結(jié)果準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)，樣品不需要進(jìn)行復(fù)雜的前期衍生化處理，缺點(diǎn)是儀器價(jià)格昂貴、需要專(zhuān)業(yè)操作技能，檢測(cè)花費(fèi)時(shí)間較長(zhǎng)，一般用作對(duì)陽(yáng)性結(jié)果進(jìn)行確認(rèn)。

2 免疫檢測(cè)方法

與儀器檢測(cè)方法相比，免疫檢測(cè)方法具有前處理相對(duì)簡(jiǎn)單、操作簡(jiǎn)便、檢測(cè)快速、無(wú)需昂貴儀器等優(yōu)點(diǎn)，但該方法得出的測(cè)定結(jié)果易出現(xiàn)假陽(yáng)性或假陰性。目前，常用于檢測(cè)萊克多巴胺免疫檢測(cè)的方法主要有酶聯(lián)免疫法、膠體金免疫法和化學(xué)發(fā)光免疫法等。

2.1 酶聯(lián)免疫法

農(nóng)業(yè)部1025號(hào)公告-6-2008規(guī)定了用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)動(dòng)物性食品中萊克多巴胺殘留量的方法。賈濤等應(yīng)用酶聯(lián)免疫法檢測(cè)飼料中的萊克多巴胺，最低檢出限達(dá)0.5 ng/mL，回收率為75%～95%，相關(guān)系數(shù)超過(guò)0.99。鄭海松等建立一種檢測(cè)肉及肉制品中萊克多巴胺的酶聯(lián)免疫分析方法，出口豬肉罐頭的檢出限為0.28±0.30 μg/kg，牛肉的檢出限為0.26±0.21 μg/kg，回收率為82.9%～91.1%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為4.3%～8.7%。

2.2 膠體金免疫法

蔣蔚等采用檸檬酸鈉還原法制備膠體金顆粒，標(biāo)記萊克多巴胺單克隆抗體，研制出一種試紙條來(lái)檢測(cè)豬尿中的萊克多巴胺藥物殘留，8～10 min即可完成測(cè)試，檢出限為5 ng/mL，并可以用肉眼判斷檢測(cè)結(jié)果。王森等應(yīng)用膠體金免疫技術(shù)研制一種瘦肉精三合一免疫膠體金快速檢測(cè)板，可以同時(shí)檢測(cè)畜肉中的萊克多巴胺、鹽酸克倫特羅、沙丁胺醇藥物殘留。將樣品進(jìn)行粗提處理，檢測(cè)板的檢出限為5.0 μg/kg，檢測(cè)時(shí)間約20 min；將樣品進(jìn)行精提處理，檢測(cè)板的檢出下限為1.0 μg/kg，檢測(cè)時(shí)間約35 min。

2.3 化學(xué)發(fā)光免疫法

陳旭基于β-受體激動(dòng)劑對(duì)魯米諾-高碘酸鉀化學(xué)發(fā)光體系的抑制作用，設(shè)計(jì)基于玻璃芯片的檢測(cè)方法。玻璃芯片可以重復(fù)使用，豬毛中萊克多巴胺的檢測(cè)限為2.0×10-8 mol/L。刁雅潔建立流動(dòng)注射-Ni（IV）-魯米諾化學(xué)發(fā)光體系，飼料中萊克多巴胺含量的檢出限為1.0×10-10 mol/L，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.65%。

3 結(jié)語(yǔ)

儀器檢測(cè)方法和免疫檢測(cè)方法各有優(yōu)缺點(diǎn)，是不可完全互相取代的，這就需要在實(shí)際檢測(cè)活動(dòng)中，多用免疫檢測(cè)方法進(jìn)行大量樣品的初步篩查，再用氣相色譜-質(zhì)譜法或液相色譜-質(zhì)譜法對(duì)結(jié)果進(jìn)行確證。儀器檢測(cè)方法的研究應(yīng)集中在增加樣品預(yù)處理效率、縮短檢測(cè)時(shí)間、開(kāi)發(fā)更小更簡(jiǎn)便設(shè)備、建立更好的檢測(cè)方法等方面，免疫檢驗(yàn)方法則可以考慮和其他技術(shù)聯(lián)用，進(jìn)一步提高準(zhǔn)確度和靈敏度。

參考文獻(xiàn)

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