推拿對(duì)壓力性尿失禁大鼠恥尾肌肌纖維的影響*

吳致力王 鉦易 錦陳 默王 虹

（1.北京按摩醫(yī)院治未病門(mén)診部，北京 100010；2.北京中醫(yī)藥大學(xué)針推學(xué)院，北京 100010；3.北京百奧易康科技有限公司，北京 100010）

·實(shí)驗(yàn)報(bào)告·

推拿對(duì)壓力性尿失禁大鼠恥尾肌肌纖維的影響*

吳致力1王 鉦1易 錦1陳 默2王 虹3

（1.北京按摩醫(yī)院治未病門(mén)診部，北京 100010；2.北京中醫(yī)藥大學(xué)針推學(xué)院，北京 100010；3.北京百奧易康科技有限公司，北京 100010）

目的觀察推拿對(duì)壓力性尿失禁大鼠恥尾肌肌纖維的影響，探討推拿治療女性壓力性尿失禁的機(jī)理。方法將產(chǎn)后SD大鼠40只隨機(jī)分為推拿治療組、模型對(duì)照組，另設(shè)健康未生育大鼠20只為空白對(duì)照組。選用陰道球囊擴(kuò)張術(shù)加雙側(cè)卵巢切除術(shù)進(jìn)行造模，對(duì)推拿組施以腰骶部和腹部手法治療，每日1次，共30次。然后處死所有大鼠，取恥尾肌組織，經(jīng)HE染色，在光鏡下采集并分析圖像，比較各組恥尾肌肌纖維的差異。結(jié)果推拿治療組恥尾肌肌纖維寬度、面積、直徑更接近空白對(duì)照組，與模型對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001），推拿治療組及空白對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異（P>0.05）。結(jié)論推拿治療組可使恥尾肌肌肉纖維增粗，從而使控尿能力有所提高，這為推拿治療SUI提供了理論依據(jù)。

推拿 壓力性尿失禁 大鼠 恥尾肌

壓力性尿失禁（SUI）［1］是女性常見(jiàn)疾病，在中老年女性中發(fā)病率較高，根據(jù)國(guó)際控尿協(xié)會(huì)（ICS）的定義，女性SUI是指腹壓大于最大尿道壓時(shí)，在沒(méi)有膀胱逼尿肌節(jié)律收縮的狀態(tài)下，尿液不自主地由尿道外口漏出，并常在腹壓增高如（咳嗽、打噴嚏、大笑或運(yùn)動(dòng)）時(shí)發(fā)生。有很多學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)SUI存在盆底神經(jīng)損傷和肌肉的改變［2-3］。當(dāng)盆底神經(jīng)損傷后，周?chē)虻兰∪饨M織逐漸出現(xiàn)失神經(jīng)支配狀態(tài)，盆底肌群逐漸變得薄弱，并出現(xiàn)了肌纖維數(shù)量、密度和直徑的下降［4-5］，隨之支持力也下降，不能維持膀胱頸傾角，當(dāng)腹壓增加時(shí)無(wú)法有效地傳遞壓力，使尿液溢出。中醫(yī)推拿治療SUI時(shí)對(duì)漏尿量和漏尿次數(shù)均有明顯的改善，但缺乏相應(yīng)的機(jī)理研究［6］。在此基礎(chǔ)上筆者對(duì)壓力性尿失禁進(jìn)行了初步的動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)研究，觀察推拿手法對(duì)大鼠盆底恥尾肌形態(tài)產(chǎn)生的影響，并為推拿治療本病提供新的可能的理論依據(jù)?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供健康成年雌性SD大鼠60只，飼養(yǎng)于北京中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物中心（SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)室）。動(dòng)物自由飲水進(jìn)食，統(tǒng)一常規(guī)飼養(yǎng)。

1.2 分組與造模 1）分組。將實(shí)驗(yàn)健康未生育雌性SD大鼠隨機(jī)分為3組。Ⅰ組為空白對(duì)照組（20只），體質(zhì)量（346.44±34.15）g；Ⅱ組為模型對(duì)照組（17只），體質(zhì)量（346.38±51.55）g；Ⅲ組為推拿治療組（18只），體質(zhì)量（330.70±21.02）g。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中受大鼠Y型子宮影響，造成造模術(shù)后流產(chǎn)共死亡5只（其中Ⅰ組2只，Ⅱ組2只，Ⅲ組1只）。以上為存活并完成實(shí)驗(yàn)觀察大鼠數(shù)量情況。2）動(dòng)物模型建立方法。除Ⅰ組外，其他兩組按以下步驟進(jìn)行造模［7］。（1）陰道球囊擴(kuò)張：雌鼠產(chǎn)后1～3 d，以10%水合氯醛（上海江萊生物科技有限公司，規(guī)格100mL）腹腔注射（0.3mg/kg）將大鼠麻醉，取仰臥位，并將大鼠四肢固定，將8 Fr弗萊氏尿管插入大鼠陰道2～3 cm，氣囊中注入5mL無(wú)菌生理鹽水，8 h后取出水囊導(dǎo)尿管，局部消毒。（2）雙側(cè)卵巢切除：球囊擴(kuò)張2周后，行雙側(cè)卵巢切除術(shù)。先以10%水合氯醛腹腔注射（0.3 mg/kg）麻醉，將大鼠俯臥位固定，備皮，消毒取腰部（L3水平）后正中線皮膚切口，分離肌肉及周?chē)M織，暴露坐骨直腸窩，分別找到雙側(cè)卵巢后結(jié)扎并剪除，縫合，消毒。（3）術(shù)后處置：注射用青霉素鉀（重慶市先鋒動(dòng)物藥業(yè)有限公司，規(guī)格2.5 g/400萬(wàn)單位），每次8萬(wàn)U腹腔注射，每日1次，連續(xù)注射7 d，并常規(guī)飼養(yǎng)1個(gè)月。（4）動(dòng)物模型：噴嚏試驗(yàn)［8］。先排空大鼠膀胱，將硬膜外導(dǎo)管經(jīng)尿道插入大鼠膀胱，用微泵（購(gòu)自長(zhǎng)沙健源醫(yī)療科技有限公司）向膀胱內(nèi)注入最大膀胱容量一半的美藍(lán)生理鹽水。將胡椒粉撒入大鼠鼻孔內(nèi)，刺激出現(xiàn)噴嚏反射。仔細(xì)觀察噴嚏時(shí)有無(wú)藍(lán)色液體從尿道口流出，有尿液溢出為陽(yáng)性，無(wú)則為陰性。Ⅱ組和Ⅲ組大鼠均為噴嚏試驗(yàn)陽(yáng)性，Ⅰ組大鼠為陰性。

1.3 干預(yù)方法 Ⅲ組予推拿治療：1）大鼠取俯臥位，施術(shù)者的左手輕輕放至在大鼠后背部，以起到固定作用，右手持棉簽置于大鼠下腹關(guān)元穴行震顫手法3 min，然后用右手的中指和無(wú)名指順時(shí)針?lè)较虬慈嘞赂共? min。2）施術(shù)者右手食指和中指順時(shí)針?lè)较虬慈嘌静? min，用棉簽點(diǎn)按雙側(cè)次髎穴各1 min，最后用食指、中指和無(wú)名指3指并攏在腰骶部做橫行擦法3min。每日治療1次，共治療30次。Ⅰ組和Ⅱ組均進(jìn)行普通飼料喂養(yǎng)，不予推拿治療。

1.4 觀察指標(biāo) 取材與切片制備 Ⅲ組治療30次結(jié)束后，將3組大鼠處死取材。取恥尾肌組織（0.5 cm× 0.5 cm）放置于10.0%中性甲醛中固定12 h，進(jìn)行脫水，石蠟包埋，將3μm厚切片裱于涂有多聚賴(lài)氨酸的清潔玻片上，并放置80℃烤箱內(nèi)1 h，隨后將其低溫保存?zhèn)溆?。HE染色切片進(jìn)行脫蠟至水，蘇木素浸染1min，然后用鹽酸酒精脫去多余的蘇木素，并在飽和碳酸鋰溶液浸泡1 min，伊紅染色2 min；在50%、75%、95%、 100%的酒精中分別浸泡1min脫水，二甲苯兩次脫水總共10 min，再用中性樹(shù)脂封片，在光鏡下進(jìn)行觀察。切片及染色由北京百奧易康科技有限公司協(xié)助。圖像采集與分析：利用OLYMPUS-DP72顯微鏡數(shù)碼成像系統(tǒng)，分別在10×40倍光鏡下觀察恥尾肌組織切片，采集圖像，在縱切面測(cè)量恥尾肌肌纖維寬度，在橫切面測(cè)量恥尾肌肌纖維橫截面積和直徑。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS15.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以（±s）表示，均數(shù)間采用單因素方差分析判定組間差異性。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組大鼠恥尾肌肌纖維寬度比較 見(jiàn)表1，圖1。通過(guò)觀察Ⅲ組與Ⅰ組恥尾肌肌纖維組織更接近，鏡下可見(jiàn)肌纖維平行排列較均勻，肌纖維緊密相連，染色較均勻，與Ⅰ組比較，肌纖維寬度差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P> 0.05）；而Ⅱ組鏡下可見(jiàn)恥尾肌肌纖維排列紊亂，寬度變窄，萎縮，著色不均，并可見(jiàn)部分肌原纖維走行有彎曲甚至斷裂，Ⅲ組肌纖維寬度與Ⅱ組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）；Ⅲ組與Ⅰ組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

表1 各組大鼠恥尾肌肌纖維寬度、橫截面積和直徑組織數(shù)據(jù)比較（±s）

表1 各組大鼠恥尾肌肌纖維寬度、橫截面積和直徑組織數(shù)據(jù)比較（±s）

與Ⅲ組比較，*P＜0.001。

組 別 n 肌纖維寬度（μm） 肌纖維橫截面積（μm2） 肌纖維直徑（μm）Ⅰ組 20 209.81±69.84Ⅱ組 17 116.03±20.05*51.63±9.08 2346.90±1224.49 42.24±6.52*693.23±264.53*Ⅲ組 18 215.36±47.02 51.19±9.77 2458.84±866.26

圖1 各組大鼠恥尾肌肌纖維比較（HE染色，400倍）

2.2 恥尾肌肌纖維橫截面積和直徑 見(jiàn)表1，圖2。Ⅲ組與Ⅰ組肌肉組織的形態(tài)接近，鏡下可見(jiàn)肌纖維為染色均勻的粉紅色，細(xì)胞核位于肌纖維的周邊，肌纖維橫截面積及直徑差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；Ⅱ組鏡下可見(jiàn)恥尾肌肌纖維排列稀疏，著色不均勻，而且可見(jiàn)有很多的核中心移位，橫截面積變小，Ⅲ組與Ⅱ組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）；Ⅰ組與Ⅱ組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）。

3 討 論

女性控尿機(jī)制包括主動(dòng)機(jī)制、尿道黏膜閉合機(jī)制和盆底解剖結(jié)構(gòu)支持。被多數(shù)專(zhuān)家認(rèn)可的關(guān)于SUI發(fā)病機(jī)制“完整理論［9］”和“吊床假說(shuō)［10］”都說(shuō)明了盆底肌群在維持控尿過(guò)程中的重要作用。組成盆底肌群的重要部分為肛提肌，肛提肌收縮，向上牽拉“吊床結(jié)構(gòu)”關(guān)閉了膀胱頸，而恥尾肌又是肛提肌的重要組成部分，所以當(dāng)恥尾肌變得薄弱或出現(xiàn)萎縮時(shí)則會(huì)導(dǎo)致SUI的發(fā)生［3］。

中醫(yī)推拿手法，對(duì)SUI患者癥狀有很好的改善［6］，但理論研究匱乏。因此，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)模擬分娩以及卵巢去勢(shì)等女性SUI的發(fā)生機(jī)制，選用SUI大鼠模型恥尾肌作為觀察對(duì)象，觀察腰腹部推拿手法的干預(yù)對(duì)尿道組織形態(tài)變化的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，腰腹部推拿治療后的SUI模型大鼠與SUI模型大鼠對(duì)照組相比，HE染色表現(xiàn)為恥尾肌肌纖維排列較齊，染色也較均勻，寬度、橫截面積及直徑指標(biāo)更接近空白對(duì)照組，而未進(jìn)行治療的SUI模型大鼠對(duì)照組恥尾肌肌纖維排列紊亂，寬度變窄，著色不均，較多的核中心移位，橫截面積及直徑變小，提示推拿治療對(duì)SUI大鼠恥尾肌組織形態(tài)有其改善作用。

進(jìn)行腹部推拿治療SUI時(shí)手法重點(diǎn)作用于關(guān)元穴及下腹部。關(guān)元穴及下腹部均為任脈所過(guò)之處。任脈為陰脈之海，稟受全身陰氣，且主干循行于腹部，故在下腹部采用補(bǔ)益類(lèi)手法振法和順時(shí)針揉法，從而起到溫腎壯陽(yáng)、補(bǔ)虛固攝之功用。進(jìn)行腰骶部推拿時(shí)重點(diǎn)施術(shù)區(qū)域位于足太陽(yáng)膀胱經(jīng)，足太陽(yáng)膀胱經(jīng)與膀胱的生理、病理密切相關(guān)。因?yàn)楸静∈前螂讱饣δ苁д{(diào)所致，而這些膀胱之氣輸注于相應(yīng)的膀胱經(jīng)背俞穴，通過(guò)對(duì)腰骶部手法治療可調(diào)節(jié)膀胱的氣化功能，振奮膀胱經(jīng)陽(yáng)氣，通調(diào)下焦水道，從而使得膀胱得以開(kāi)闔有制。從現(xiàn)代醫(yī)學(xué)神經(jīng)肌肉組織解剖學(xué)來(lái)看，Barber等［11］認(rèn)為肛提肌神經(jīng)支配來(lái)源于骶3～5的骶神經(jīng)分支?，F(xiàn)代研究也表明，通過(guò)對(duì)骶部穴位的刺激可以興奮骶神經(jīng)分支的陰部神經(jīng)，改善控尿能力［12］。與儲(chǔ)尿有關(guān)的交感神經(jīng)發(fā)出的神經(jīng)沖動(dòng)下傳至腹下神經(jīng)叢［13-14］，當(dāng)對(duì)下腹部進(jìn)行有效刺激后，交感神經(jīng)傳出纖維通過(guò)下腹神經(jīng)和盆腔內(nèi)臟神經(jīng)傳至膀胱和尿道，并釋放去甲腎上腺素，興奮α腎上腺能受體，使得盆底肌群肌肉節(jié)律性收縮，尿道阻力隨之增加，從而改善控尿能力［15］。所以推測(cè)對(duì)腰骶部和腹部推拿治療的SUI大鼠是通過(guò)改善恥尾肌纖維形態(tài)和功能從而增強(qiáng)了其控尿能力。

本研究分析了腰骶部及腹部推拿治療對(duì)SUI組織形態(tài)學(xué)的影響，但肌肉取材標(biāo)本例數(shù)有限，需進(jìn)一步積累樣本量進(jìn)行論證，同時(shí)應(yīng)設(shè)立尿動(dòng)力學(xué)檢測(cè)進(jìn)行研究對(duì)比，進(jìn)一步研究推拿對(duì)女性SUI的作用。

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Effect of M assage on Pubococcygeus M uscle Fibers of Stress Urinary Incontinence Rats

WU Zhili，WANGZheng，YIJin，et al. Outpatient Department for Preventive Treatment of Diseases，Beijing Massage Hospital，Beijing 100010，China.

Objective：To observe the effect ofmassage on pubococcygeusmuscle fiber of stress urinary incontinence rats，and to explore themechanism ofmassage on female stress urinary incontinence.M ethods：40 postpartum SD ratswere random ly divided into themassage treatment group and themodel group，and 20 healthy rats without birth were used as the blank group.Themodels weremade with the vaginal balloon dilatation plus bilateral oophorectomy.Themassage treatment group was treated withmanipulation of the lumbosacral region and abdomen，once a day，30 times.Then all the ratswere killed；the pubococcygalmuscle tissue was taken.Pubococcygalmuscle sections were stained with HE，and under the lightmicroscope image collected and analyzed，and the differences of the pubococcygeusmuscle fibers in all groupswere compared.Results：The width，area and diameter of pubococcygeusmuscle fiber of themassage treatment group were close to those of the blank group and compared withmodel group，the differencewas statistically significant（P<0.001）.There was no significant difference between themassage treatmentgroup and the blank group（P>0.05）.Conclusion：Massage can make the pubococcygeusmuscle fiber thickening，so as to improve the urine control ability，and provide a theoretical basis for themassage treatmenton SUI.

Massage；Stress urinary incontinence；Rats；Pubococcygeusmuscle

R244.1

A

1004-745X（2017）07-1215-03

10.3969/j.issn.1004-745X.2017.07.027

2017-03-27）

北京市自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（7143187）